1.一種植物病害接種用帶菌牙簽的繁殖方法,包括如下步驟:
(1)準(zhǔn)備菌種 無菌條件下將植物病源菌接種在PDA平板培養(yǎng)基上,25℃恒溫培養(yǎng)7~8d,菌種長(zhǎng)滿平板后冷藏待用;
(2)浸泡麥粒 將麥粒放三角瓶中,用清水沖洗干凈后,浸泡12~24 h,中間沖洗一次,待麥粒吸足水后,再用清水沖洗2~3次,然后篦去三角瓶中的水,蓋上棉塞,待用;
(3)清洗牙簽 將牙簽在清水中浸泡12~24 h,用清水沖洗后在鍋中用清水煮10~15min,倒掉煮水再用清水沖洗2~3次,待用;
(4)牙簽滲入營(yíng)養(yǎng) 將(3)處理后的牙簽放在容器中,加足量清水淹過牙簽,根據(jù)水量,按(1)中培養(yǎng)基制作的原料成份配比加入相應(yīng)量營(yíng)養(yǎng)成份即去皮馬鈴薯小塊和葡萄糖,一起煮20~30min,待用;
(5)粘拌面粉 將小麥面粉加1%的瓊脂粉放在干燥的容器中拌勻,然后將(4)處理后表面濕潤(rùn)的牙簽放入面粉中攪拌,使牙簽表面均勻地粘滿面粉,待用;
(6)裝袋滅菌 將(5)準(zhǔn)備的牙簽輕放在菌袋中,使牙簽之間保持一定的空隙,裝滿后扎住菌袋口,與(2)準(zhǔn)備的麥粒一起高壓滅菌20 min,待用;
(7)麥粒拌菌 無菌條件下,先用接種針或接種環(huán)將(1)準(zhǔn)備的菌種和培養(yǎng)基一起劃碎,再將其放入(6)處理后的裝麥粒的三角瓶中,攪拌麥粒,搖動(dòng)三角瓶,使菌種混勻并粘附在麥粒上,待用;
(8)牙簽接種 無菌條件下,將經(jīng)(7)處理的帶菌麥粒倒入經(jīng)(6)滅菌的牙簽袋中,輕輕扎住袋口,緩緩地轉(zhuǎn)動(dòng)并左右上下翻動(dòng)袋子,以便使麥粒上的菌種充分粘著到牙簽上,使麥粒均勻地分散在牙簽之間的縫隙中,待用;
(9)培養(yǎng)與保存 將(8)準(zhǔn)備的接種后牙簽袋放20~30℃溫度下培養(yǎng)7~10d,待牙簽表面長(zhǎng)滿了菌,即完成帶菌牙簽的培養(yǎng),對(duì)暫時(shí)不用的帶菌牙簽先將菌袋放4℃條件下冷藏保存,使用時(shí),將帶菌牙簽從菌袋取出,把連成一團(tuán)的牙簽輕輕分開即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物病害接種用帶菌牙簽的繁殖方法,所述PDA培養(yǎng)基制作的原料成份配比是:馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂15~20g,自來水1000ml。