本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2013年06月04日、申請(qǐng)?zhí)枮?01380041609.7、發(fā)明名稱(chēng)為“含有馬鞭草烯酮衍生物的神經(jīng)退行性疾病治療或者預(yù)防用藥物組合物”的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

本發(fā)明涉及一種馬鞭草烯酮衍生物的新用途，即治療神經(jīng)退行性疾病的用途，更具體地說(shuō)，涉及一種神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或者治療用藥物組合物以及利用上述組合物的神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或者治療方法，上述藥物組合物含有具有興奮細(xì)胞毒性引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制活性、氧化應(yīng)激(oxidativestress)抑制活性以及血管內(nèi)炎癥細(xì)胞(巨噬細(xì)胞(macrophages)和嗜中性粒細(xì)胞(neutrophil))等細(xì)胞向腦損傷部位遷移(移動(dòng)、遷移(migration)或者滲入(infiltration))的抑制活性的馬鞭草烯酮衍生物或者及其鹽。

背景技術(shù)：

神經(jīng)退行性疾病(degenerativebraindisease)是一種腦神經(jīng)細(xì)胞無(wú)法發(fā)揮自身功能而引發(fā)的衰老相關(guān)疾病，隨著老齡化人口的急劇增加，社會(huì)對(duì)神經(jīng)退行性疾病的關(guān)注不斷增加。神經(jīng)退行性疾病基于臨床上表現(xiàn)的主要癥狀和被侵襲的腦部位進(jìn)行分類(lèi)，包括：阿爾茨海默病(alzheimer'sdisease)，帕金森病(parkinson'sdisease)、亨廷頓氏舞蹈癥(huntington'sdisease)、多發(fā)性硬化癥以及肌萎縮側(cè)索硬化癥(amyotrophiclateralsclerosis)等。

已知神經(jīng)退行性疾病的引發(fā)原因有：對(duì)于腦神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳達(dá)非常重要的腦神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、傳達(dá)腦神經(jīng)細(xì)胞和腦神經(jīng)細(xì)胞之間信息的突觸的形成或功能上的問(wèn)題、腦神經(jīng)的電活動(dòng)的異常癥狀或減少等，但神經(jīng)退行性疾病仍處于難以根源性治療且病因尚不明確的狀態(tài)。

最近，細(xì)胞分子學(xué)技術(shù)水平的提高使得神經(jīng)退行性疾病的致病研究以及治療劑開(kāi)發(fā)活躍，并基于如下多種機(jī)理開(kāi)發(fā)研究神經(jīng)退行性疾病治療劑：①膽堿作用的抑制、②nmda(n-甲基-d-天冬氨酸：n-methyl-d-aspartate)受體拮抗機(jī)理、③β-淀粉樣蛋白(β-amyloid)或者tau蛋白代謝過(guò)程的分子-細(xì)胞生物學(xué)研究，β-淀粉樣蛋白(β-amyloid)的致病蛋白質(zhì)為抗原的疫苗開(kāi)發(fā)和治療抗體開(kāi)發(fā)、④神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophicfactor)的表達(dá)誘導(dǎo)、⑤能夠抑制致病蛋白質(zhì)引發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞的氧化性損傷的抗氧化劑開(kāi)發(fā)、以及⑥能夠抑制炎癥細(xì)胞的過(guò)度引入以及活性引發(fā)的炎癥反應(yīng)的抗炎劑開(kāi)發(fā)等(sonkusareetal.，pharmacologicalresearch，51(1)，1-17，2005；stanaioneetal.，ann1stsupersanita，47(1)，49-54，2011；halperinetal.，neurotherapeutics，6(1)，128-140，2009)。

作為膽堿作用的抑制劑的ache抑制劑，通過(guò)抑制ach的分解使得膽堿性神經(jīng)傳遞物質(zhì)的活性恢復(fù)，目前他克林(tarcrien)、多奈哌齊(donepezil)、利凡斯的明(rivastig分鐘e)、加蘭他敏(galanthamine)已得到fda認(rèn)可而處于市售中。

已確認(rèn)氧化應(yīng)激是阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓氏舞蹈癥等的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)退行性疾病的重要因素(jindqetal，biochemicalandbiophysicalresearchcommunications，331，1264-1269，2005；limcsetal，biologicalandpharmaceuticalbulletin，29，1212-1216，2006)。

2007年時(shí)，全世界有2500萬(wàn)名缺血性血管疾病患者(心肌梗死、腦中風(fēng)、血栓癥)，預(yù)計(jì)2017年時(shí)增加至2800萬(wàn)名(datamonitor公司，2007)，大部分的oecd成員國(guó)中缺血性血管疾病(每10萬(wàn)名有226.6名，2004年)導(dǎo)致的死亡人數(shù)最多，癌疾病(165.6名)處于其次。腦中風(fēng)分為以腦血管破裂引起的腦組織損傷為特征的出血性腦中風(fēng)和供給于腦的血流流動(dòng)被阻斷而誘發(fā)腦梗死的缺血性腦中風(fēng)。腦中風(fēng)是與癌癥爭(zhēng)奪每年國(guó)內(nèi)死亡原因中第一、第二位的發(fā)病率非常高的疾病(統(tǒng)計(jì)廳2002至2008年的資料)，腦中風(fēng)導(dǎo)致的國(guó)內(nèi)死亡率已達(dá)到了oecd國(guó)家中的第二位。據(jù)2008年美國(guó)心臟協(xié)會(huì)(aha)的報(bào)告，其為了治療和控制缺血性血管疾病每年對(duì)腦中風(fēng)支出了655億美元的巨大費(fèi)用，但實(shí)際情況是，腦中風(fēng)治療劑市場(chǎng)僅占居13億美元。若幾年內(nèi)已證實(shí)效果的腦中風(fēng)治療藥物上市，其將具有220億美元以上的潛在的市場(chǎng)價(jià)值，因此，正積極地研究開(kāi)發(fā)缺血性腦中風(fēng)治療劑。

在韓國(guó)，腦中風(fēng)作為單一疾病占據(jù)死亡原因的第一位，相比于美國(guó)、加拿大、澳大利亞等先進(jìn)國(guó)家顯示出高的排名。腦中風(fēng)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)功能的損傷以及記憶、學(xué)習(xí)、運(yùn)算、推理等高層次功能的阻礙，從而會(huì)破壞生活質(zhì)量，直至患者死亡對(duì)患者本人和家屬帶來(lái)很大的精神上、身體上的痛苦，并且，對(duì)于現(xiàn)代社會(huì)的老齡化趨勢(shì)帶來(lái)的老齡人口急速增加的最近狀況而言，腦中風(fēng)的發(fā)生和腦中風(fēng)發(fā)生后生存期間的增加成為了社會(huì)性大問(wèn)題。因此，需要開(kāi)發(fā)出用于腦中風(fēng)的癥狀減輕藥物以及治療藥物。

但是，如上所述，盡管腦中風(fēng)治療存在臨床重要性以及市場(chǎng)潛在價(jià)值等，但是，對(duì)于腦中風(fēng)的治療劑開(kāi)發(fā)仍處于較弱水平，實(shí)際情況是，臨床上許可的腦中風(fēng)的治療劑除了組織型纖溶酶原激活劑(tissueplasminogenactivator：t-pa)以外沒(méi)有其它治療劑。腦中風(fēng)由各種原因引發(fā)，包括腦梗死、腦出血、蛛網(wǎng)膜下出血等的致病原因各不相同的各種疾病。另外，腦中風(fēng)由動(dòng)脈硬化、腦淀粉樣血管病、動(dòng)脈夾層等各種腦血管疾病引發(fā)，心律失?；蚬跔顒?dòng)脈疾病引起的心源性栓塞癥也會(huì)引發(fā)腦中風(fēng)。雖然原因有多種，但是，在細(xì)胞生物學(xué)上認(rèn)為是血液供給的降低以及其誘發(fā)的細(xì)胞凋亡等的相同機(jī)理，因此，作為開(kāi)發(fā)腦中風(fēng)的預(yù)防、調(diào)整以及治療方法的基礎(chǔ)的核心技術(shù)，在于理解缺血引起的腦細(xì)胞的凋亡機(jī)理。

為了防止腦疾病，國(guó)內(nèi)外諸多研究者一直努力對(duì)這樣的神經(jīng)細(xì)胞的凋亡機(jī)理進(jìn)行研究。腦中風(fēng)的情況下，至今為止還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出療效顯著的治療劑，對(duì)于臨床上使用的用于溶解腦血管中生成的血栓的唯一治療劑即t-pa，很多臨床醫(yī)生擔(dān)心其引發(fā)的腦出血等副作而用對(duì)其慎用。至今為止，很多研究者試圖將針對(duì)興奮性神經(jīng)傳遞物質(zhì)的谷氨酸受體的拮抗劑或抗氧化劑開(kāi)發(fā)為缺血性腦中風(fēng)治療劑，但是，由于藥效微弱或藥物的毒性，全部以失敗告終。

通常，患者發(fā)作腦中風(fēng)之后到達(dá)醫(yī)院急救室為止需要花費(fèi)幾小時(shí)，腦中風(fēng)發(fā)作后幾分種至幾小時(shí)之內(nèi)，過(guò)度的谷氨酸的游離引起的興奮性神經(jīng)毒性對(duì)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生一次損傷，隨著時(shí)間推移，露出在氧以及氮自由基的過(guò)度生成環(huán)境中，由此會(huì)受到二次損傷。經(jīng)過(guò)幾十小時(shí)之后，因炎癥反應(yīng)帶來(lái)持續(xù)且嚴(yán)重的損傷，由此，事實(shí)上難以使用興奮性神經(jīng)毒性阻斷物質(zhì)，其使用臨床上來(lái)說(shuō)沒(méi)有意義。

如上述所述，腦中風(fēng)并不是單一原因造成的疾病，其是基于各種細(xì)胞凋亡的途徑和機(jī)理而引發(fā)腦損傷的疾病。最近，試圖通過(guò)使用具有相互不同機(jī)理的藥物的復(fù)合處方來(lái)獲得腦中風(fēng)治療的協(xié)同作用。例如，將阿司匹林和雙嘧達(dá)莫(dipyridamole)同時(shí)給藥時(shí)，相比于單獨(dú)給藥阿司匹林，能夠使腦中風(fēng)治療的預(yù)后(prognosis)更好(chatuvedis.，clintherap，30(7)，1196-205，2008)，另外，17β-雌二醇(17β-estradiol)和tpa的復(fù)合處方中，17β-雌二醇(17β-estradiol)減少tpa給藥引起的尿激酶(urokinase)、mmp2以及mmp9的表達(dá)增加產(chǎn)生的腦出血的副作用，由此在缺血性腦中風(fēng)患者中顯示出延長(zhǎng)治療時(shí)間段的效果(liur.etal.，jpharmacolexpther，332(3)，1006-12，2010)。作為nmda受體阻斷物質(zhì)的美金剛(memantine)和作為β腎上腺素β2(beta2)受體激動(dòng)劑的克倫特羅(clenbuterol)的復(fù)合給藥在永久性局部缺血模型中顯示出抑制缺血性腦損傷的協(xié)同效果(culmseec.etal.，stroke，35(5)，1197-202，2004)，另外，美金剛(memantine)和作為鈣離子阻斷物質(zhì)的托吡酯(topiramate)的復(fù)合給藥在新生大鼠中協(xié)同抑制低氧血癥引發(fā)的腦損傷(liec.etal.，brainres，1282，173-82，2009)。但是，這些研究結(jié)果大部分是以緩和癥狀為目的，并未獲得基于腦組織保護(hù)機(jī)理的協(xié)同效果。

為了理解缺血引起的腦組織的損傷并開(kāi)發(fā)用于抑制其的藥物，需要理解缺血后腦組織的損傷機(jī)理和途徑。通常，缺血后腦細(xì)胞的損傷或凋亡由各種原因引起。例如，興奮細(xì)胞毒性(excitotoxicity)、周邊埂塞去極化(peri-infractdepolarization)、氧化應(yīng)激以及炎癥等與缺血引起的腦損傷發(fā)作相關(guān)聯(lián)(dirnagletal.，trendsneurosci.，22，391-397，1999)。因此，需要理解缺血性腦損傷的復(fù)雜因素的各種狀態(tài)及臨時(shí)狀態(tài)(例如，發(fā)病以及疾病程度)，并需要適當(dāng)阻斷病理生理學(xué)上的瀑布(cascade)。

興奮性細(xì)胞毒性引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡可由谷氨酸受體拮抗劑抑制，谷氨酸起到作用的離子性受體是ampa(α-氨基-3-羥基-5-甲基異惡唑-4-丙酸：α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-iso-xazolepropionicacid)、卡因酸(kainate)、nmda(n-甲基-d-天冬氨酸：n-methyl-d-aspartate)的受體，特別是，針對(duì)細(xì)胞凋亡的nmda受體活性研究較多(standridgej.b.，clin.ther.，26(5)，615-630，2004)。但是，相比于這些努力，nmda受體阻斷劑的藥效微弱或有毒性，由此沒(méi)有在臨床試驗(yàn)上成功的例子。作為nmda受體阻斷劑的mk-801顯著減少了缺血性腦損傷，但具有治療時(shí)間窗(therapeutictimewindow)很短的大缺點(diǎn)，只有在大鼠以及沙土鼠(gerbils)中誘發(fā)的局部性缺血癥發(fā)病之后的一小時(shí)之內(nèi)施用mk-801時(shí)才會(huì)顯示出保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的效果(margailletal.，jcerebbloodflowmetab，16，107-113，1996；hatfieldrhetal.，eurjpharmacol，216，1-7，1992)。另外，雖然mk-801在缺血癥發(fā)作之后延遲了神經(jīng)細(xì)胞凋亡，但是，并未改善治療數(shù)周后神經(jīng)恢復(fù)或者最終存活率(valtyssonj.etal.，actaneurochir(wien)，129，58-63，1994；vonlubitzdketal.，eurjpharmacol，233，95-100，1993)。作為興奮性神經(jīng)傳遞物質(zhì)的谷氨酸的受體之中，與nmda受體一起同時(shí)存在ampa受體，針對(duì)該ampa受體的拮抗劑在mcao28天之后也沒(méi)有顯示出神經(jīng)功能缺損的顯著保護(hù)效果(colbournefetal.，stroke，30，662-668，1999)。nmda或者ampa受體拮抗劑等的短治療范圍以及短期治療效果意味著這些受體僅在初期缺血癥瀑布中起到短暫性作用，而不受拮抗劑影響的其它的病理生理過(guò)程被視為對(duì)后續(xù)腦缺血損傷帶來(lái)影響。

與其它的各種退行性疾病相同，缺血性腦中風(fēng)中氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞凋亡和功能喪失帶來(lái)很大影響。由此，對(duì)利用抗氧化劑的缺血性腦中風(fēng)治療效果進(jìn)行了積極的研究(salamam.etal.，co-enzymeq10totreatneurologicaldisorders：basicmechanisms，clinicaloutcomes，andfutureresearchdirection.cnsneuroldisorddrugtargets.2013；rodrigor.etal.，oxidativestressandpathophysiologyofischemicstroke：noveltherapeuticopportunities.cnsneuroldisorddrugtargets.2013)。在日本，作為腦中風(fēng)治療劑市售的有以抗氧化效果為主機(jī)理的依達(dá)拉奉(edaravone)(firuzioetal.，currmedchem.，18(25)，3871-88，2011；yoshidah.etal.，cnsdrugrev.，12(1)，9-20.2006)。

缺血后興奮性細(xì)胞毒性開(kāi)始發(fā)作，經(jīng)過(guò)幾小時(shí)后，在腦損傷部位中開(kāi)始引起炎癥反應(yīng)，其持續(xù)數(shù)日～數(shù)周使得腦損傷更加惡化。由此，最近試圖利用抗炎劑來(lái)治療缺血性腦中風(fēng)(pricecjetal.，jneurolneurosurgpsychiatry，74，1476-1484，2003；salamam，co-enzymeq10totreatneurologicaldisorders：basicmechanisms，clinicaloutcomes，andfutureresearchdirection.cnsneuroldisorddrugtargets.2013；rodrigor.etal.，oxidativestressandpathophysiologyofischemicstroke：noveltherapeuticopportunities.cnsneuroldisorddrugtargets.2013)。另外，最近有報(bào)告稱(chēng)，由血管流入的炎癥細(xì)胞在缺血性腦中風(fēng)中對(duì)腦損傷增大起到主要作用(kangghetal.，jneurolsci.，15，318(1-2)，25-30，2012；choiiyetal.，amjpathol，179(4)，2042-52，2012；choiyketal.，freeradicres.，44(8)，925-35，2010；choiiyetal.，freeradicres.，44(5)，541-51，2010；leejcetal.，glia，50(2)，168-81，2005)。另外，還有報(bào)告稱(chēng)，大麻素(cannabinoid)b2受體介導(dǎo)抗炎癥反應(yīng)抑制缺血性腦組織的損傷(choiiyetal.，amjpathol，182(3)，928-39，2013)。

由此，可認(rèn)為，為了腦中風(fēng)的完全治療，必須開(kāi)發(fā)出具有各種細(xì)胞保護(hù)作用的藥物。為了達(dá)到這樣的目的，即，為了開(kāi)發(fā)具有各種細(xì)胞保護(hù)機(jī)理的物質(zhì)(多向治療藥物：pleiotrophictherapeuticdrug)，本發(fā)明人開(kāi)發(fā)了(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone)的衍生物。(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone)是，通過(guò)小蠹蟲(chóng)(barkbeetles)從寄主樹(shù)樹(shù)脂前體即a-蒎烯(pinene)生成出的天然抗-聚集信息素(anti-aggregationpheromone)。有報(bào)告稱(chēng)，含有(1s)-(-)-馬鞭草烯酮的精油顯示出抗菌作用、驅(qū)蟲(chóng)作用等生理活性(bernardewa，znaturforschc，65，588-93，2010；martinez-velazquezm.，jmedentomol，48，822-827，2011)。另外，wo2000/63159公開(kāi)了馬鞭草烯酮[(1s，5s)-4，6，6-三甲基二環(huán)[3.3.3]庚-3-烯-2-酮：(1s，5s)-4，6，6-trimethylbicyclo[3.3.3]hept-3-en-2one)]及其衍生物具有氣道的抗炎癥效果。

但是，上述文獻(xiàn)的任意一處都沒(méi)有公開(kāi)或啟示馬鞭草烯酮衍生物的神經(jīng)細(xì)胞凋亡降低效果、氧化應(yīng)激降低效果、缺血性腦損傷抑制效果以及炎癥細(xì)胞遷移抑制效果。

為此，本發(fā)明人等為了確認(rèn)馬鞭草烯酮衍生物對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡降低、氧化應(yīng)激降低、缺血性腦損傷(ischemicbraindamage)以及炎癥反應(yīng)起到作用的效果，使用低氧性-缺血性大鼠模型測(cè)定了nmda-誘導(dǎo)興奮細(xì)胞毒性以及細(xì)胞死亡，并實(shí)施針對(duì)抗氧化活性的試驗(yàn)，由此最先確認(rèn)到馬鞭草烯酮衍生物具有神經(jīng)退行性疾病治療效果的事實(shí)。更加具體地說(shuō)，本發(fā)明的馬鞭草烯酮衍生物使神經(jīng)細(xì)胞凋亡(neuronalcelldeath)以及氧化應(yīng)激降低，并且實(shí)施體內(nèi)(invivo)試驗(yàn)的結(jié)果，確認(rèn)到其顯示出了優(yōu)異的針對(duì)缺血性腦損傷以及炎癥反應(yīng)的抑制效果，以此完成了本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于，提供一種具有神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防以及治療效果的馬鞭草烯酮衍生物的新用途。

為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明提供一種作為有效成分含有具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽的用于預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物組合物。

化學(xué)式1

所述式中，r1、r2、r3、r4以及r5分別獨(dú)立地表示選自于由氫原子、鹵素原子、羥基、c1～c3烷基、c1～c3烷氧基、氨基、c1～c3烷基胺基、c1～c3烷基二胺基、c5～c8芳香環(huán)、c5～c8循環(huán)環(huán)(cyclicring)以及c5～c8雜芳環(huán)(heteroaromaticring)所組成的組中的一個(gè)以上的取代基，所述鹵素原子選自f、cl、br和i中，

x、y以及z分別獨(dú)立地表示碳原子或者選自于由n、o或s原子所組成的組中的一個(gè)以上的雜原子。

是指雙鍵或者單鍵。

本發(fā)明的特征在于，上述馬鞭草烯酮衍生物能夠減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡以及氧化應(yīng)激，抑制缺血性腦損傷并且抑制炎癥細(xì)胞的遷移。

本發(fā)明的特征在于，上述神經(jīng)退行性疾病包括腦中風(fēng)、癱瘓、癡呆、阿爾茨海默疾病、帕金森疾病或者亨廷頓氏舞蹈疾病，具體包括腦中風(fēng)、血管性癡呆以及阿爾茨海默癡呆，優(yōu)選包括腦中風(fēng)，更加優(yōu)選包括缺血性腦中風(fēng)疾病。

本發(fā)明的特征在于，上述組合物還包括通常用于藥物組合物的制造中的適宜的載體、賦形劑或者稀釋劑。

本發(fā)明的特征在于，上述組合物可以與選自于鈣通道阻斷劑、抗氧化劑、谷氨酸拮抗劑、抗凝劑、抗高血壓劑、抗血栓劑、抗組胺劑、消炎鎮(zhèn)痛劑、消癌劑以及抗生素所組成的組中的一個(gè)以上的藥劑同時(shí)制劑化使用或聯(lián)合使用。

本發(fā)明提供一種具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽在預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病中的用途。

本發(fā)明提供一種神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或治療方法，其利用具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明提供一種神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或治療方法，其包括對(duì)所需對(duì)象處理(給藥)具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟。

本發(fā)明還提供一種用于預(yù)防或者改善神經(jīng)退行性疾病的功能性食品，其作為有效成分含有具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物。

附圖說(shuō)明

圖1是表示本發(fā)明的化合物衍生物對(duì)大鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用的圖。

圖2是表示本發(fā)明的化合物衍生物對(duì)nmda-誘導(dǎo)興奮毒性的效果的圖。

圖3是表示本發(fā)明的化合物衍生物抑制細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的效果的圖。

圖4是表示本發(fā)明的化合物衍生物降低活體內(nèi)局部腦缺血癥模型中的缺血性損傷、腦水腫以及神經(jīng)功能缺損的效果的圖。

圖5是表示本發(fā)明的化合物衍生物在活體內(nèi)局部腦缺血癥模型中的缺血性損傷腦組織中提高抗氧化活性的效果的圖。

圖6是表示本發(fā)明的化合物衍生物在活體內(nèi)局部腦缺血癥模型中抑制炎癥細(xì)胞向缺血性損傷腦組織遷移以及侵襲的效果的圖。

圖7是表示本發(fā)明的化合物衍生物在體內(nèi)局部腦缺血癥模型中的缺血性損傷腦組織中抑制細(xì)胞因子(cytokine)表達(dá)的效果的圖。

圖8是表示本發(fā)明的化合物衍生物在體內(nèi)局部腦缺血癥模型中的缺血性損傷腦組織周邊中抑制血-腦屏障通透性增加的效果的圖。

圖9是表示本發(fā)明的化合物衍生物在體內(nèi)局部腦缺血癥模型中提高受到缺血性損傷的老鼠的長(zhǎng)期存活率以及神經(jīng)功能缺損恢復(fù)率的效果的圖。

圖10是表示本發(fā)明的化合物衍生物未使體內(nèi)出血性腦中風(fēng)模型中的自體血液誘導(dǎo)的血腫顯著提高的圖。

具體實(shí)施方式

一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物的新用途，

化學(xué)式1

所述式中，r1、r2、r3、r4和r5分別獨(dú)立地表示選自于由氫原子、鹵素原子、羥基、c1～c3低級(jí)烷基、c1～c3低級(jí)烷氧基、氨基、c1～c3低級(jí)烷基胺基、c1～c3低級(jí)烷基二胺基、c5～c8芳香環(huán)、c5～c8循環(huán)環(huán)(cyclicring)以及c5～c8雜芳環(huán)所組成的組中的一個(gè)以上的取代基，所述鹵素原子選自f、cl、br和i中，

x、y以及z分別獨(dú)立地表示碳原子、或者選自于由n、o和s原子所組成的組中的一個(gè)以上的雜原子。

是指雙鍵或者單鍵。

屬于上述化學(xué)式1的化合物組中，優(yōu)選r1、r2、r3、r4和r5分別獨(dú)立地表示選自于由氫原子、鹵素原子、羥基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、氨基、c5～c6芳香環(huán)、c5～c6循環(huán)環(huán)以及c5～c6的雜芳環(huán)所組成的組中的一個(gè)以上的取代基；更加優(yōu)選選自于由氫原子、鹵素原子、羥基、甲基、甲氧基、苯基、吡咯基、吡啶基所組成的組中的一個(gè)以上的取代基；上述中，所述鹵素原子選自f、cl、br和i中，

x、y以及z分別獨(dú)立地表示碳原子、或者選自于由n、o和s原子所組成的組中的一個(gè)以上的雜原子；更加優(yōu)選選自于由碳原子和n原子所組成的組中的一個(gè)以上的原子。

屬于上述化學(xué)式1的化合物組中，最優(yōu)選的化合物為：

(1s，5r)-4-(4-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3a)((1s,5r)-4-(4-hydroxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3a))；

(1s，5r)-4-(4-羥基-2-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3b)((1s,5r)-4-(4-hydroxy-2-methoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3b))；

(1s，5r)-4-(3，4-二羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3c)((1s,5r)-4-(3,4-dihydroxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3c))；

(1s，5r)-4-(3-溴-4-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3d)((1s,5r)-4-(3-bromo-4-hydroxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3d))；

(1s，5r)-4-(4-羥基-2，6-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3e)((1s,5r)-4-(4-hydroxy-2,6-dimethoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3e))；

(1s，5r)-4-(3，4-二羥基-5-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3f)((1s,5r)-4-(3,4-dihydroxy-5-methoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3f))；

(1s，5r)-4-(3-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3g)((1s,5r)-4-(3-hydroxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3g))；

(1s，5r)-4-(2-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3h)((1s,5r)-4-(2-hydroxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3h))；

(1s，5r)-4-(2-羥基-4-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3i)((1s,5r)-4-(2-hydroxy-4-methoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3i))；

(1s，5r)-6，6-二甲基-4-苯乙烯基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4a)((1s,5r)-6,6-dimethyl-4-styryl-bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4a))；

(1s，5r)-4-(4-氟苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4b)((1s,5r)-4-(4-fluorostyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4b))；

(1s，5r)-4-(4-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4c)((1s,5r)-4-(4-methoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4c))；

(1s，5r)-4-(2-(聯(lián)苯-4-基)乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4d)((1s,5r)-4-(2-(biphenyl-4-yl)vinyl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4d))；

(1s，5r)-4-(4-(1h-吡咯-1-基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4e)((1s,5r)-4-(4-(1h-pyrrol-1-yl)styryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4e))；

(1s,5r)-4-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4f)((1s,5r)-4-(3,4-dimethoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4f))；

(1s，5r)-4-(3，5-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4g)((1s,5r)-4-(3,5-dimethoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4g))；

(1s，5r)-4-(2，5-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4h)((1s,5r)-4-(2,5-dimethoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4h))；

(1s，5r)-4-(5-溴-2-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4i)((1s,5r)-4-(5-bromo-2-methoxystyryl)-6,6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4i))；

(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-2-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5a)((1s,5r)-6,6-dimethyl-4-((e)-2-(pyridin-2-yl)vinyl)-bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(5a))；

(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-3-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5b)((1s,5r)-6,6-dimethyl-4-((e)-2-(pyridin-3-yl)vinyl)-bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(5b))；以及

(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-4-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5c)((1s,5r)-6,6-dimethyl-4-((e)-2-(pyridin-4-yl)-vinyl)-bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(5c))。

以上述化學(xué)式1表示的本發(fā)明的化合物可根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)的方法制造成藥學(xué)上可接受的鹽以及溶劑化物。

藥學(xué)上可接受的鹽可通過(guò)藥學(xué)上可接受的游離酸(freeacid)形成為酸加成鹽。酸加成鹽通過(guò)通常的方法來(lái)制造，例如，將化合物溶解于過(guò)量的酸水溶液，使用水溶性有機(jī)溶劑，例如使用甲醇、乙醇、丙酮或者乙腈使該鹽沉淀而制造。加熱等摩爾量的化合物以及水中的酸或者醇(例如，乙二醇單甲醚)，接著蒸發(fā)上述混合物而進(jìn)行干燥或吸濾所析出的鹽。

此時(shí)，作為游離酸可以使用有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸，作為無(wú)機(jī)酸可以使用鹽酸、磷酸、硫酸、硝酸或錫酸等，作為有機(jī)酸可以使用甲基磺酸、對(duì)甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來(lái)酸(maleicacid)、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富馬酸、扁桃酸、丙酸(propionicacid)、檸檬酸(citricacid)、乳酸(lacticacid)、乙醇酸(glycollicacid)、葡萄糖酸(gluconicacid)、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸(glutaricacid)、葡萄糖醛酸(glucuronicacid)、天冬氨酸、抗壞血酸、羧酸、香草酸或氫碘酸等。

另外，可以使用堿來(lái)制備藥學(xué)上可接受的金屬鹽。堿金屬鹽或者堿土金屬鹽是，例如，將化合物溶解于過(guò)量的堿金屬氫氧化物或者堿土金屬氫氧化物溶液中，過(guò)濾非(不)溶解化合物鹽后蒸發(fā)濾液，并加以干燥而獲得。此時(shí)，作為金屬鹽，特別是在制藥方面上適合制造出鈉、鉀或者鈣鹽。另外，相應(yīng)的銀鹽是，將堿金屬鹽或者堿土金屬鹽與適量的銀鹽(例如，硝酸銀)進(jìn)行反應(yīng)而獲得。

除另有說(shuō)明以外，具有上述化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，包括能夠存在于具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的化合物中的酸性基團(tuán)或者堿性基團(tuán)的鹽。例如，作為藥學(xué)上可接受的鹽，包括羥基鈉鹽、羥基鈣鹽以及羥基鉀鹽，作為氨基的其它藥學(xué)上可接受的鹽，有氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、醋酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、扁桃酸鹽、甲烷磺酸鹽(甲磺酸鹽)以及對(duì)甲苯磺酸鹽(甲苯磺酸鹽)，可通過(guò)本領(lǐng)域已知的鹽的制造方法或制造過(guò)程來(lái)制造出。

上述化學(xué)式1的化合物，可通過(guò)本領(lǐng)域公知的合成方法制造，可通過(guò)下述的反應(yīng)式示出的方法化學(xué)合成，但并非限定于此。

反應(yīng)式1

^a反應(yīng)條件：a)koh，meoh，60℃，6小時(shí)；b)10％hcl，meoh，室溫(rt)，24小時(shí)

在堿性條件下，使商業(yè)上可購(gòu)買(mǎi)到的(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(1)與具有羥基-苯乙烯基的苯甲醛衍生物(2a-i)進(jìn)行縮合反應(yīng)，之后用酸進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，由此可制造具有烷氧基、溴取代基或者酚類(lèi)官能團(tuán)的各種馬鞭草烯酮衍生物(3a-i)。

反應(yīng)式2

^a反應(yīng)條件：a)koh，meoh，60℃，6小時(shí)

反應(yīng)式3

^a反應(yīng)條件：a)naome，meoh，60℃，6小時(shí)

作為另一鐘衍生物的合成法，對(duì)商業(yè)上可購(gòu)買(mǎi)到的(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(1)實(shí)施與上述反應(yīng)式1類(lèi)似的方法，從而對(duì)具有各鐘官能團(tuán)的衍生物導(dǎo)入苯乙烯基(styryl)而制造出具有芳香環(huán)的各種馬鞭草烯酮衍生物(4a-i，5a-c)。

本發(fā)明中，為了對(duì)作為馬鞭草烯酮衍生物的新效果的神經(jīng)退行性疾病治療效果進(jìn)行分析，確認(rèn)了抑制nmda-誘導(dǎo)興奮細(xì)胞毒性以及細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激、提高抗氧化活性、抑制炎癥細(xì)胞的遷移和侵襲且抑制細(xì)胞因子表達(dá)的效果。下述實(shí)施例等中對(duì)上述確認(rèn)結(jié)果詳細(xì)說(shuō)明。

本發(fā)明的另一實(shí)施方式涉及一種具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽在預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病中的用途。

本發(fā)明涉及一種用于預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物組合物，其作為有效成分含有具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽，提供一種神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或治療方法，其利用上述具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。作為一具體例，涉及一種神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或治療方法，其包括對(duì)所需對(duì)象處理(給藥)上述具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟。其中，上述處理或者給藥可通過(guò)體內(nèi)(invivo)或者體外(invitro)實(shí)施。

本發(fā)明中，神經(jīng)退行性疾病包括腦中風(fēng)、癱瘓、癡呆、阿爾茨海默疾病(alzheimer'sdisease)、帕金森疾病(parkinson'sdisease)、亨廷頓氏舞蹈疾病(huntington'sdisease)、多發(fā)性硬化癥以及肌萎縮側(cè)索硬化癥(amyotrophiclateralsclerosis)等，腦疾病是指，因腦神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳達(dá)中非常重要的腦神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、傳遞腦神經(jīng)細(xì)胞與腦神經(jīng)細(xì)胞之間信息的突觸的形成或功能上的問(wèn)題、或者腦神經(jīng)的電活動(dòng)性的異常癥狀或減少引發(fā)的疾病。

本發(fā)明的特征在于，神經(jīng)退行性疾病優(yōu)選包括腦中風(fēng)，更加優(yōu)選包括缺血性腦中風(fēng)疾病。

本發(fā)明的藥物組合物的給藥途徑包括口腔、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、骨髓內(nèi)、硬膜內(nèi)、心臟內(nèi)、透皮、皮下、腹腔內(nèi)、鼻腔內(nèi)、胃腸、局部、舌下或者直腸，但并非限定于此。優(yōu)選口服或者非口服給藥。本申請(qǐng)所使用的用語(yǔ)“非口服”包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、硬膜內(nèi)、病灶內(nèi)以及顱內(nèi)注射或者注入技術(shù)。本發(fā)明的藥物組合物還可以以栓劑的方式給藥以便直腸給藥。

本發(fā)明的藥物組合物可制成膠囊、片劑、水懸浮液以及溶液，但并非限定于此，以口服方式接受的任何劑型均可口服給藥。口服用片劑時(shí)，作為常用的載體，包括乳糖以及玉米淀粉。通常還加入硬脂酸鎂等的潤(rùn)滑劑。以膠囊型口服給藥時(shí)，作為可用的稀釋劑，包括乳糖以及干燥的玉米淀粉?？诜o藥水懸浮液時(shí)，活性成分與乳化劑以及助懸劑相配合。必要時(shí)，還可以添加甜味劑和/或風(fēng)味劑和/或著色劑。

本發(fā)明的藥物組合物可根據(jù)各種因素進(jìn)行各種變化，該因素包括所使用的特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、排泄率、藥物配合以及需要預(yù)防或治療的特定疾病的重癥狀況。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以制成丸劑、糖衣片、膠囊、液體制劑、凝膠劑、糖漿劑、膏劑(slurry)或懸浮劑。

本發(fā)明中，上述藥物組合物可以與選自于鈣通道阻斷劑、抗氧化劑、谷氨酸拮抗劑、抗凝劑、抗高血壓劑、抗血栓劑、抗組胺劑、消炎鎮(zhèn)痛劑、抗癌劑以及抗生素所組成的組中的一個(gè)以上的藥劑同時(shí)制劑化使用或聯(lián)合使用。

另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或治療方法，其給藥用于預(yù)防或者治療神經(jīng)退行性疾病的藥物組合物，該藥物組合物作為有效成分含有具有化學(xué)式1的結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者其藥學(xué)上可接受的鹽。

由于本發(fā)明的藥物組合物以及預(yù)防或者治療方法，使用了神經(jīng)細(xì)胞凋亡以及氧化應(yīng)激降低活性優(yōu)異、毒性以及副作用少的源于天然的馬鞭草烯酮衍生物，因此能夠有效利用。

另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種食品或者食品添加劑，其作為有效成分含有具有神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防以及改善效果的、具有化學(xué)式1結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者該馬鞭草烯酮衍生物的藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明的功能性食品可以以藥劑、食品以及飲料等各種形式利用以預(yù)防炎癥。本發(fā)明中，作為功能性食品，例如有：各種食品類(lèi)、糖、巧克力、飲料、口香糖、茶、維生素復(fù)合劑、保健補(bǔ)助食品類(lèi)等，其可以以粉末、顆粒、片劑、膠囊或者飲料的形式使用。

對(duì)于本發(fā)明的功能性食品中以有效成分含有的馬鞭草烯酮衍生物，分析如下記載的生物學(xué)機(jī)制的結(jié)果可知，其神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用、氧化應(yīng)激抑制以及細(xì)胞因子表達(dá)抑制活性顯著，因此，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，其用于食品時(shí)可顯示出顯著的效果是顯而易見(jiàn)的。

包含本發(fā)明的化合物的組合物，根據(jù)常用方法，可分別制成散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、懸浮液、乳劑、糖漿劑、氣溶膠等的口服型劑型，外用劑，栓劑以及滅菌注射溶液等形式，作為可包含于其的載體、賦形劑以及稀釋劑，可例舉：乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、海藻酸鈉、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、丙基羥苯酸酯、硬脂酸鎂以及礦物油。制劑化時(shí)，可以添加通常使用的填充劑、增量劑、結(jié)合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、表面活性劑等的稀釋劑或者賦形劑進(jìn)行制造。用于口服給藥的固體制劑包括片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等，這些固體制劑通過(guò)在上述化合物中混合至少一個(gè)以上的賦形劑，如至少混合面、淀粉、碳酸鈣(calciumcarbonate)、蔗糖(sucrose)或者乳糖(lactose)、明膠等而制造。另外，除了單純的賦形劑以外，還可以使用硬脂酸鎂、滑石粉等的潤(rùn)滑劑。作為用于口服的液體狀制劑，相應(yīng)的有：懸浮劑、口服液、乳劑、糖漿制劑等，除了常用的單純稀釋劑的水、液體石蠟以外，還可以包含各種賦形劑，例如，潤(rùn)濕劑、甜味劑、芳香劑、保存劑等。用于非口服給藥的制劑包括：滅菌水溶液、非水溶液、懸浮劑、乳劑、凍干制劑或栓劑。作為非水溶液、懸浮劑，可以使用丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇、橄欖油等的植物油、油酸乙酯等的可注射的酯等。作為栓劑的基質(zhì)，可以使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐溫(tween)61、可可脂、甘油三月桂酸酯(laurinfat)、甘油明膠等。

本發(fā)明的化合物的優(yōu)選的給藥量根據(jù)患者的狀態(tài)和體重、疾病的程度、藥物形式、給藥途徑以及期間而有所不同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適當(dāng)選擇使用。為了優(yōu)選的效果，化合物一天的給藥量為0.01mg/kg～10g/kg，優(yōu)選為1mg/kg～1g/kg。一天可以給藥一次，也可以分成幾次給藥。因此，無(wú)論從任何方面考慮，上述給藥量并不限定本發(fā)明的范圍。

另外，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防和改善神經(jīng)退行性疾病的保健功能食品，其作為有效成分含有具有化學(xué)式1結(jié)構(gòu)的馬鞭草烯酮衍生物或者該馬鞭草烯酮衍生物的藥學(xué)上可接受的鹽。

另外，在另一實(shí)施形態(tài)中，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防和改善神經(jīng)退行性疾病的保健功能食品的用途，所述保健功能食品作為有效成分含有化學(xué)式1表示的馬鞭草烯酮衍生物或者該馬鞭草烯酮衍生物的藥學(xué)上可接受的鹽。

包含本發(fā)明的化合物的保健功能食品可以以藥劑、食品以及飲料等各種形式利用以預(yù)防和改善神經(jīng)退行性疾病。作為能夠添加本發(fā)明的化合物的食品，例如有：各種食品類(lèi)、飲料、口香糖、茶、維生素復(fù)合劑、保健補(bǔ)助食品類(lèi)等，可以以粉末、顆粒、片劑、膠囊或者飲料的形式使用。

能夠添加本發(fā)明化合物的食品形式，包括糖類(lèi)的各種食品類(lèi)、飲料、口香糖、茶、維生素復(fù)合劑或者保健補(bǔ)助食品類(lèi)的食品等。

本發(fā)明的化合物能夠以預(yù)防和改善神經(jīng)退行性疾病為目的而添加于食品或者飲料中。此時(shí)，食品或者飲料中的上述化合物的量通常是，本發(fā)明的保健食品組合物的情況下以食品總重量的0.01～15重量％添加，保健飲料組合物的情況下100ml為基準(zhǔn)以0.02～10g的比率添加，優(yōu)選以0.3～1g的比率添加。

本發(fā)明的保健飲料組合物，除了作為必須成分以指定的比率含有上述化合物的混合物以外，對(duì)于液體成分沒(méi)有特別的限定，可以與常規(guī)的飲料相同地，作為追加成分可含有各種香味劑或者天然碳水化合物等。作為所述的天然碳水化合物的例，可舉出：葡萄糖、果糖等單糖；麥芽糖、蔗糖等多糖；糊精、環(huán)糊精等常規(guī)的糖的，以及木糖醇、山梨糖醇、赤蘚糖醇等糖醇。除了上述以外，作為香味劑可以有效利用天然香味劑(索嗎甜、甜葉菊化合物(例如，甜菊糖甙a，甘草酸苷等)以及合成香味劑(糖精、阿斯巴甜等)。上述天然碳水化合物的比率通常是，本發(fā)明的組合物每100ml含有約1～20g，優(yōu)選含有約5～12g的比率。

除上述以外，本發(fā)明的組合物可以含有各種營(yíng)養(yǎng)劑、維生素、礦物(電解質(zhì))、合成風(fēng)味劑和天然風(fēng)味劑等的風(fēng)味劑、著色劑和增質(zhì)劑(奶酪、巧克力等)、果膠酸及其鹽、褐藻酸及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)型膠體增稠劑，ph調(diào)節(jié)劑，穩(wěn)定劑，防腐劑，甘油，乙醇，用于碳酸飲料的碳酸化劑等。除此之外，本發(fā)明的組合物可以含有果肉以便制造天然果汁和果汁飲料以及蔬菜飲料。上述成分可以獨(dú)立地使用或者組合使用。上述添加劑的比率并不重要，但是，通常在本發(fā)明的組合物每100重量份中為0～約20重量份的比率范圍內(nèi)選擇。

本發(fā)明的組合物相對(duì)于組合物總重量含有0.01～99重量％的上述化合物。但是，如上所述的組成并不限定于此，可以根據(jù)患者的狀態(tài)、疾病種類(lèi)以及疾病程度進(jìn)行變化。

包含本發(fā)明化合物的組合物還可以包含藥物組合物的制造中通常使用的適宜的載體、賦形劑以及稀釋劑。

下面，通過(guò)實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。但這些實(shí)施例僅用于更加詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的范圍并不限定于這些實(shí)施例，其對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)。

實(shí)施例1：馬鞭草烯酮衍生物的制造方法

試劑以及儀器

購(gòu)買(mǎi)市售的試劑級(jí)(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone)、乙醛(aldehydes)、氯甲基甲醚(methylchloromethylether；mom-cl)、二異丙基乙胺(diisopropylethylamine；dipea)、氫氧化鉀(potassiumhydroxide；koh)，以及甲醇鈉(sodiummethoxide；naoch3)，所購(gòu)買(mǎi)的試劑以及溶劑均為高純度，除了用氫氧化鈣蒸餾的二氯甲烷以外，其余未經(jīng)追加的提純過(guò)程而直接使用。除另有說(shuō)明以外，在真空處理的干燥玻璃容器(vacuum-flamedriedglassware)中，干燥氮環(huán)境下進(jìn)行反應(yīng)。薄層色譜法(thin-layerchromatography；tlc)使用可用uv識(shí)別的硅膠(merck硅膠(silicagel)60f254)，柱色譜使用硅膠(e.merck硅膠(silicagel)，70-230，230-400目(mesh))。¹h-nmr譜以及¹³c-nmr譜是，使用儀器(varian公司)在500mhz下進(jìn)行測(cè)定。化學(xué)位移(chemicalshift)是以ppm記錄從作為內(nèi)標(biāo)試劑(cdcl3：d7.26ppm)使用的tms(四甲基硅烷：tetramethysilane)的位移(chemicalshiftswerereportedinppmfromtetramethysilane(tms)asaninternalstandard(cdcl3:d7.26ppm))，并以赫茲(hertz)為單位記錄耦合常數(shù)(couplingconstant)。多重度(multiplicity)使用了如下的簡(jiǎn)稱(chēng)：?jiǎn)畏?singlet(s)、雙峰-doublet(d)、雙二重峰-doubletofdoublet(dd)、雙雙二重峰-doubletofdoubletofdoublet(ddd)、三重峰-triplet(t)、三二重峰-tripletofdoublet(td)、雙三重峰-doubletoftriplet(dt)、四重峰-quartet(q)、多重峰-multiplet(m)以及寬峰-broad(br)。高分辨質(zhì)譜(high-resolutionmassspectra；hrms)是用儀器(watersq-tof微型質(zhì)譜儀(micromassspectrometer))記錄，旋光度(opticalrotation)是用儀器(jasco旋光計(jì)模式(polarimetermode)lp-2000)在589nm下進(jìn)行測(cè)定。所有化合物的純度是，用下述條件的反相(reverse-phase)hplc進(jìn)行測(cè)定，其純度是>95％。方法1(溶劑a(solventa)：水(water)，溶劑b(solventb)：乙腈(acetonitrile))-流速：0.2ml/分鐘：20分鐘內(nèi)90％b(90％ofbin20min)；方法2(溶劑a(solventa)：水(water)，溶劑b(solventb)：乙腈(acetonitrile))流速：1.0ml/分鐘：40分鐘內(nèi)從40％的b至100％(from40％ofbto100％in40min)。胎牛血清(fetalbovineserum；fbs)是從公司(hyclone公司，logan，ut)購(gòu)買(mǎi)而使用，培養(yǎng)液(培養(yǎng)基：neurobasalmedium，nbm)以及補(bǔ)充劑(b27supplement)是從公司(invitrogen公司，carlsbad，ca)購(gòu)買(mǎi)而使用。所有化學(xué)物質(zhì)以及試劑是從公司(sigmaaldrich公司，st.louis，mo)購(gòu)買(mǎi)而使用。

實(shí)施例1-1.(1s，5r)-4-(4-(甲氧基甲氧基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(2a)化合物的制造

為了通過(guò)羥醛縮合反應(yīng)(aldolcondensation)從(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone)獲得二烯烴(diene)，將(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone1200mg，1.33mmol)在4-(甲氧基甲氧基)苯甲醛(4-(methoxymethoxy)benzaldehyde)(332mg，2.00mmol)和meoh(7ml)中進(jìn)行攪拌，并用koh(149mg，2.66mmol)進(jìn)行處理。在60℃溫度條件下將反應(yīng)混合物攪拌6小時(shí)，冷卻至室溫。添加少量的水，在室溫下將混合物放置24小時(shí)。減壓濃縮上述混合物而獲得黃色產(chǎn)物，并用硅膠柱層析進(jìn)行提純而獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(4-(甲氧基甲氧基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(2a)[(1s，5r)-4-(4-(methoxymethoxy)styryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(2a)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(353mg，收率89％)。

mp88-90℃；

[a]²⁰d-211.6°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)：d7.45(d，j＝8.80hz，2h)，7.04(d，j＝8.80hz，2h)，6.81-6.92(m，2h)，5.90(s，1h)，5.20(s，2h)，3.48(s，3h)，3.03-3.17(m，1h)，2.91(dt，j＝9.48，5.53hz，1h)，2.72(t，j＝5.62hz，1h)，2.12(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.01(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.25，164.57，158.00，134.51，129.75，128.73，125.62，121.83，116.44，94.171，58.09，56.09，52.78，43.59，39.98，26.72，22.10

hrms：計(jì)算值c17h18o2(m-h)253.1229，測(cè)定值253.1221

hplc分析結(jié)果：(方法1)100.0％(tr＝3.67分鐘)。

實(shí)施例1-2.(1s，5r)-4-(3-甲氧基-4，5-雙(甲氧基甲氧基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(2f)化合物的制造

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的(1s，5r)-4-(3-甲氧基-4，5-雙(甲氧基甲氧基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(2f)[(1s，5r)-4-(3-methoxy-4，5-bis(methoxymethoxy)styryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(2f)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率90％)。

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d6.94(d，j＝1.96hz，1h)，6.84(s，2h)，6.78(d，j＝1.71hz，1h)，5.92(s，1h)，5.22(s，2h)，5.15(s，2h)，3.89(s，3h)，3.60(s，3h)，3.52(s，3h)，3.09(t，j＝5.75hz，1h)，2.90(dt，j＝9.48，5.53hz，1h)，2.72(td，j＝5.75，1.47hz，1h)，2.10(d，j＝9.29hz，1h)，1.57(s，3h)，1.00(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d203.92，164.02，153.63，151.19，136.64，134.76，132.10，126.91，122.43，108.91，104.88，98.37，95.33，58.19，57.11，56.07，52.70，43.78，39.93，26.70，22.11.

實(shí)施例1-3.(1s，5r)-4-(4-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3a)化合物的制造

為了通過(guò)羥醛縮合反應(yīng)(aldolcondensation)從(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone)獲得二烯烴(diene)，在meoh(3ml)中攪拌2a化合物(200mg，0.67mmol)的溶液中，滴加10％hcl，將反應(yīng)混合物放置一夜直至反應(yīng)結(jié)束。添加飽和nahco3，用乙酸乙酯提取上述反應(yīng)混合物，并用無(wú)水mgso4進(jìn)行干燥。用柱層析提純分離最終化合物，由此獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(4-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3a).[(1s，5r)-4-(4-hydroxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3a).]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(162mg，收率95％)。

mp88-90℃.

[a]²⁰d-211.6°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.40(d，j＝8.56hz，2h)，6.78-6.92(m，4h)，6.45(br.s.，1h)，5.91(s，1h)，3.12(t，j＝5.75hz，1h)，2.88-2.95(m，1h)，2.74(t，j＝5.62hz，1h)，2.13(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d205.14，165.56，157.32，135.24，129.13，128.51，124.89，121.29，116.00，58.10，53.22，43.86，40.23，26.79，22.15；

hrms計(jì)算值c17h18o2(m-h)253.1229，測(cè)定值253.1221；

hplc分析結(jié)果：(方法1)100.0％(tr＝3.67分鐘)。

實(shí)施例1-4.(1s，5r)-4-(4-羥基-2-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3b)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(4-羥基-2-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3b)[(1s，5r)-4-(4-hydroxy-2-methoxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3b)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率97％)。

mp78-80℃；

[a]²⁰d-140.0°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.45(d，j＝8.07hz，1h)，7.24(d，j＝16.63hz，1h)，6.88(d，j＝16.38hz，1h)，6.42-6.48(m，2h)，5.88(s，1h)，3.86(s，3h)5.64(br.s.，1h)，3.16(t，j＝5.75hz，1h)，2.91(dt，j＝9.35，5.59hz，1h)，2.72(td，j＝5.60hz，1h)，2.12(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d205.53，166.76，159.17，158.94，130.48，128.48，124.75，120.62，117.50，108.19，99.19，58.10，55.53，53.25，43.87，40.33，26.80，22.16；

hrms計(jì)算值c18h20o3(m+h)285.1491，測(cè)定值285.1480；

hplc分析結(jié)果：(方法1)99.4％(tr＝3.80分鐘)。

實(shí)施例1-5.(1s，5r)-4-(3，4-二羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3c)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(3，4-二羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3c)[(1s，5r)-4-(3，4-dihydroxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3c)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率84％)。

mp68-70℃；

[a]²⁰d-208.6°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.13(s，1h)，6.70-6.96(m，4h)，5.92(s，1h)，3.12(t，j＝5.50hz，1h)，2.86-2.95(m，1h)，2.71-2.81(m，1h)，2.14(d，j＝9.54hz，1h)，1.58(s，3h)，1.00(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d206.39，166.93，146.23，144.51，136.47，128.75，124.62，121.91，120.72，115.38，113.17，60.55，58.04，53.84，44.01，40.55，26.78，22.12；

hrms計(jì)算值c17h18o3(m-h)269.1178，測(cè)定值269.1169；

hplc分析結(jié)果：(方法1)100％(tr＝3.47分鐘)。

實(shí)施例1-6.(1s，5r)-4-(3-溴-4-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3d)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(3-溴-4-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3d)[(1s，5r)-4-(3-bromo-4-hydroxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3d)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率95％)。

mp238-240℃；

[a]²⁰d-181.4°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cd3od，500mhz)；d7.75(d，j＝2.20hz，1h)，7.45(dd，j＝1.96，8.56hz，1h)，7.02(d，j＝16.50hz，1h)，6.97(d，j＝16.50hz，1h)，6.92(d，j＝8.56hz，1h)，5.90(s，1h)，3.24(t，j＝5.99hz，1h)，2.97(td，j＝5.59，9.35hz，1h)，2.62(dt，j＝1.50，6.00hz，1h)，2.05(d，j＝9.54hz，1h)，1.60(s，3h)，0.98(s，3h)；

¹³c-nmr(cd3od，75mhz)：d203.02，165.13，155.42，134.47，132.29，129.42，128.79，125.75，121.59，117.11，110.36，58.16，52.33，43.30，26.83，22.43；

hrms計(jì)算值c17h17bro2(m+h)333.0490，測(cè)定值333.0479；

hplc分析結(jié)果：(方法1)98.9％(tr＝3.91分鐘)。

實(shí)施例1-7.(1s，5r)-4-(4-羥基-2，6-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3e)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(4-羥基-2，6-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3e)[(1s，5r)-4-(4-hydroxy-2，6-dimethoxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3e)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率94％)。

mp216-218℃；

[a]²⁰d-175.4°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(dmso-d6，500mhz)；d7.28(d，j＝16.50hz，1h)，7.23(d，j＝16.50hz，1h)，6.12(s，2h)，5.73(s，1h)，3.80(s，6h)，3.10(t，j＝5.38hz，1h)，2.89(td，j＝5.50，9.05hz，1h)，2.53(t，j＝5.50hz，1h)，1.93(d，j＝9.29hz，1h)，1.53(s，3h)，0.91(s，3h)；

¹³c-nmr(dmso-d6，75mhz)；d202.56，166.66，160.48，160.27，126.68，126.11，119.22，104.67，92.17，57.50，55.71，55.67，51.67，42.59，26.42，21.96；

hrms計(jì)算值c19h22o4(m+h)315.1596，測(cè)定值315.1583；

hplc分析結(jié)果：(方法1)99.3％(tr＝3.70分鐘)。

實(shí)施例1-8.(1s，5r)-4-(3，4-二羥基-5-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3f)化合物的制造

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(3，4-二羥基-5-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3f)[(1s，5r)-4-(3，4-dihydroxy-5-methoxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3f)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率92％)：

mp168-170℃；

[a]²⁰d-158.8000°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)d6.78-6.82(m，3h)，6.64(d，j＝1.47hz，1h)，5.82-6.01(m，3h)，3.92(s，3h)，3.10(t，j＝5.62hz，1h)，2.91(dt，j＝9.35，5.59hz，1h)，2.74(td，j＝5.69，1.59hz，1h)，2.12(d，j＝9.29hz，1h)，2.04(s，2h)，1.58(s，3h)，1.01(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.92，165.07，147.23，144.24，135.54，134.13，128.07，125.50，121.62，108.63，58.08，56.25，53.12，43.75，40.18，26.78，22.16；

hrms計(jì)算值c18h20o4(m+h)301.1440，測(cè)定值301.1453；

hplc分析結(jié)果：(方法1)100％(tr＝3.46分鐘)。

實(shí)施例1-9.(1s，5r)-4-(3-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3g)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(3-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3g)[(1s，5r)-4-(3-hydroxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3g)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率98％)。

mp106-108℃；

[a]²⁰d-176.6°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.21-7.26(m，1h)，7.01-7.05(m，2h)，6.92(d，j＝16.50hz，1h)，6.88(d，j＝16.50hz，1h)，6.83-6.86(m，1h)，6.46(s，1h)，5.96(s，1h)，3.11(t，j＝5.75hz，1h)，2.93(td，j＝5.53，9.48hz，1h)，2.77(dt，j＝1.59，5.69hz，1h)，2.14(d，j＝9.29hz，1h)，1.59(s，3h)，1.01(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d205.19，165.18，156.53，137.42，135.36，130.03，127.44，122.37，120.19，116.68，113.65，58.17，53.39，43.89，40.28，26.77，22.14；

hrms計(jì)算值c17h18o2(m-h)253.1229，測(cè)定值253.1228；

hplc分析結(jié)果：(方法2)99.3％(tr＝3.73分鐘)。

實(shí)施例1-10.(1s，5r)-4-(2-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3h)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(2-羥基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3h)[(1s，5r)-4-(2-hydroxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3h)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率100％)。

mp140-142℃；

[a]²⁰d-296.6°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cd3od，500mhz)；d7.56(dd，j＝1.59，7.70hz，1h)，7.42(d，j＝16.14hz，1h)，7.15(dd，j＝1.59，15.53hz，1h)，7.13(d，j＝16.38hz，1h)，6.80-6.87(m，2h)，5.89(s，1h)，3.25(t，j＝5.87hz，1h)，2.99(dt，j＝5.53，9.48hz，1h)，2.65(td，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.08(d，j＝9.29hz，1h)，1.61(s，3h)，1.01(s，3h)；

¹³c-nmr(cd3od，75mhz)；d207.46，169.09，157.56，133.10，131.67，128.67，127.63，124.55，122.03，121.07，117.05，59.62，54.52，45.29，41.45，27.19，22.58；

hrms計(jì)算值c17h18o2(m-h)253.1229，分析值253.1218；

hplc分析結(jié)果：(方法1)99.4％(tr＝3.80分鐘)。

實(shí)施例1-11.(1s，5r)-4-(2-羥基-4-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3i)化合物的制造；

采用與3a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-4-(2-羥基-4-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(3i)[(1s，5r)-4-(2-hydroxy-4-methoxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(3i)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率96％)。

[a]²⁰d-91.8°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d8.46(br.s.，1h)，7.37(d，j＝8.56hz，1h)，7.23(d，j＝16.50hz，1h)，7.17(d，j＝16.00hz，1h)，6.42-6.55(m，2h)，6.04(s，1h)，3.78(s，3h)，3.20(t，j＝5.38hz，1h)，2.88-2.98(m，1h)，2.76(t，j＝5.14hz，1h)，2.17(d，j＝9.54hz，1h)，1.59(s，3h)，1.05(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d206.56，167.94，161.72，156.99，132.26，130.09，125.37，119.93，116.29，106.90，101.73，57.96，55.28，53.74，43.85，40.60，26.76，22.13；

hrms計(jì)算值c18h20o3(m+h)285.1491，測(cè)定值285.1494；

hplc分析結(jié)果：(方法1)99.2％(tr＝3.75分鐘)。

實(shí)施例1-12.(1s，5r)-6，6-二甲基-4-苯乙烯基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4a)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-6，6-二甲基-4-苯乙烯基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4a)[(1s，5r)-6，6-dimethyl-4-styrylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4a)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率92％)。

[a]²⁰d-91.8°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.50(d，j＝7.09hz，2h)，7.35-7.40(m，2h)，7.33(d，j＝7.34hz，1h)，6.97(d，j＝16.00hz，1h)，6.92(d，j＝16.00hz，1h)，5.94(s，1h)，3.12(td，j＝1.47，5.87hz，1h)，2.93(dt，j＝5.62，9.54hz，1h)，2.74(td，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.13(d，j＝9.29hz，1h)，1.59(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.13，164.23，135.99，134.96，129.15，128.88，127.42，127.35，122.66，58.23，52.87，43.76，40.03，26.78，22.16；

hrms計(jì)算值c17h18o(m+h)239.1436，測(cè)定值239.1426；

hplc分析結(jié)果：(方法1)95.0％(tr＝4.82分鐘)。

實(shí)施例1-13.(1s，5r)-4-(4-氟苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4b)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-4-(4-氟苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4b)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率92％)。

[a]²⁰d-33.2°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.46-7.51(m，2h)，7.04-7.09(m，2h)，6.90(d，j＝17.00hz，1h)，6.86(d，j＝16.50hz，1h)，5.93(s，1h)，3.10(td，j＝1.35，5.81hz，1h)，2.92(dt，j＝5.62，9.29hz，1h)，2.74(td，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.12(d，j＝9.29hz，1h)，1.59(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.04，164.03，162.13，133.62，132.21，129.04，127.15，122.61，116.02，58.17，52.83，43.72，39.99，26.73，22.12；

hrms計(jì)算值c17h17fo(m+h)257.1342，測(cè)定值257.1343；

hplc分析結(jié)果：(方法1)90.6％(tr＝4.52分鐘)。

實(shí)施例1-14.(1s，5r)-4-(4-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4c)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(4-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4c)[(1s，5r)-4-(4-methoxystyryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4c)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率90％)。

mp138-140℃；

[a]²⁰d-172.0°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.46(d，j＝8.80hz，2h)，6.91(d，j＝9.05hz，2h)，6.90(d，j＝15.90hz，1h)，6.84(d，j＝16.50hz，1h)，5.90(s，1h)，3.85(s，3h)，3.12(td，j＝1.35，5.81hz，1h)，2.92(dt，j＝5.53，9.48hz，1h)，2.73(td，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.13(d，j＝9.54hz，1h)，1.59(s，3h)，1.03(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.17，164.63，160.50，134.64，128.83，128.78，125.25，121.66，114.35，58.17，55.34，52.74，43.76，39.99，26.76，22.15；

hrms計(jì)算值c18h20o2(m+h)269.1542，測(cè)定值269.1549；

hplc分析結(jié)果：(方法1)100％(tr＝4.58分鐘)。

實(shí)施例1-15.(1s，5r)-4-(2-(聯(lián)苯-4-基)乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4d)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(2-(聯(lián)苯-4-基)乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4d)[(1s，5r)-4-(2-(biphenyl-4-yl)vinyl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4d)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率92％)。

mp148-150℃；

[a]²⁰d-152.4°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.55-7.65(m，6h)，7.45(t，j＝7.58hz，2h)，7.34-7.39(m，1h)，7.01(d，j＝16.50hz，1h)，6.96(d，j＝16.50hz，1h)，5.95(s，1h)，3.14(t，j＝5.75hz，1h)，2.94(dt，j＝5.50，9.54hz，1h)，2.75(t，j＝5.62hz，1h)，2.14(d，j＝9.29hz，1h)，1.60(s，3h)，1.03(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.12，164.23，141.86，140.23，134.99，134.50，128.87，127.84，127.69，127.51，127.38，126.94，122.65，58.24，52.86，43.77，40.02，26.79，22.18；

hrms計(jì)算值c23h22o(m+h)315.1749，測(cè)定值315.1737；

hplc分析結(jié)果：(方法1)100％(tr＝6.35分鐘)。

實(shí)施例1-16.(1s，5r)-4-(4-(1h-吡咯-1-基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4e)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-4-(4-(1h-吡咯-1-基)苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4e)[(1s，5r)-4-(4-(1h-pyrrol-1-yl)styryl)-6，6-dimethylbicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(4e)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率41％)。

mp146-148℃；

[a]²⁰d-142.4°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.55(d，j＝8.56hz，2h)，7.39(d，j＝8.56hz，2h)，7.12(t，j＝2.20hz，2h)，6.95(d，j＝16.00hz，1h)，6.91(d，j＝16.00hz，1h)，6.36(t，j＝2.20hz，2h)，5.94(s，1h)，3.12(t，j＝5.75hz，1h)，2.93(td，j＝5.59，9.35hz，1h)，2.74(dt，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.13(d，j＝9.29hz，1h)，1.59(s，3h)，1.03(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d203.97，164.03，140.92，133.78，133.21，128.57，127.14，122.61，120.25，118.95，110.94，58.19，25.79，43.72，39.97，26.75，22.14；

hrms計(jì)算值c21h21no(m+h)304.1701，測(cè)定值304.1691；

hplc分析結(jié)果：(方法1)94.7％(tr＝5.10分鐘)。

實(shí)施例1-17.(1s，5r)-4-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4f)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-4-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4f)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率92％)。

[a]²⁰d-111.2°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.02-7.09(m，2h)，6.89(d，j＝16.00hz，1h)，6.86(d，j＝7.00hz，1h)，6.83(d，j＝16.50hz，1h)，5.91(s，1h)，3.93(s，3h)，3.91(s，3h)，3.11(t，j＝5.75hz，1h)，2.91(dtd，j＝1.47，5.56，9.41hz，1h)，2.72(tt，j＝1.74，5.72hz，1h)，2.11(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.03，164.46，150.28，149.30，134.89，129.10，125.42，121.75，111.24，109.29，58.19，55.94，52.69，43.82，39.96，26.76，22.15；

hrms計(jì)算值c19h22o3(m+h)299.1647，測(cè)定值299.1657；

hplc分析結(jié)果：(方法2)97.9％(tr＝9.19分鐘)。

實(shí)施例1-18.(1s，5r)-4-(3，5-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4g)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-4-(3，5-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4g)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率90％)。

[a]²⁰d-94.2°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d6.93(d，j＝16.00hz，1h)，6.85(d，j＝16.00hz，1h)，6.65(d，j＝2.20hz，2h)，6.45(t，j＝2.20hz，1h)，5.94(s，1h)，3.82(s，6h)，3.10(t，j＝5.75hz，1h)，2.92(dt，j＝5.62，9.54hz，1h)，2.74(td，j＝1.59，5.69hz，1h)，2.12(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.04，163.03，161.03，137.88，134.93，127.83，122.81，105.32，101.51，58.19，55.40，52.82，43.73，39.99，26.73，22.12；

hrms計(jì)算值c19h22o3(m+h)299.1647，測(cè)定值299.1662；

hplc分析方法：(方法1)100％(tr＝4.58分鐘)。

實(shí)施例1-19.(1s，5r)-4-(2，5-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4h)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-4-(2，5-二甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4h)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率93％)。

[a]²⁰d-94.8°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.29(d，j＝16.38hz，1h)，7.11(d，j＝2.69hz，1h)，6.95(d，j＝16.14hz，1h)，6.81-6.88(m，2h)，5.92(s，1h)，3.84(s，3h)，3.81(s，3h)，3.16(dt，j＝1.50，6.00hz，1h)，2.91(td，j＝5.62，9.29hz，1h)，2.72(dt，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.11(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d204.16，164.83，153.74，152.04，129.50，127.74，125.62，122.37，115.85，112.34，111.85，58.24，56.13，52.76，43.76，40.03，26.76，22.15；

hrms計(jì)算值c19h22o3(m+h)299.1647，測(cè)定值299.1650；

hplc分析結(jié)果：(方法1)96.4％(tr＝4.69分鐘)。

實(shí)施例1-20.(1s，5r)-4-(5-溴-2-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4i)化合物的制造；

采用與2a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-4-(5-溴-2-甲氧基苯乙烯基)-6，6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(4i)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率97％)

[a]²⁰d-71.6°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d7.66(s，1h)，7.36(dd，j＝2.45，8.80hz，1h)，7.20(d，j＝16.38hz，1h)，6.95(d，j＝16.14hz，1h)，6.77(d，j＝8.80hz，1h)，5.93(s，1h)，3.87(s，3h)，3.12(t，j＝5.62hz，1h)，2.91(dt，j＝5.35，9.60hz，1h)，2.73(t，j＝5.14hz，1h)，2.11(d，j＝9.29hz，1h)，1.58(s，3h)，1.01(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d203.97，164.31，156.40，132.53，129.53，128.69，128.09，127.04，122.89，113.28，112.75，58.22，55.77，52.76，43.71，39.98，26.73，22.11；

hrms計(jì)算值c18h19bro2(m+h)347.0647，測(cè)定值347.0651；

hplc分析結(jié)果：(方法1)99.0％(tr＝6.23分鐘)。

實(shí)施例1-21.(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-2-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5a)化合物的制造

為了通過(guò)羥醛縮合反應(yīng)(aldolcondensation)從(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone)獲得二烯烴(diene)，在2-吡啶甲醛(171mg，1.60mmol)和meoh(7ml)中攪拌(1s)-(-)-馬鞭草烯酮(verbenone1200mg，1.33mmol)，并用naoch3(meoh中25wt.％溶液，108mg，2.00mmol)進(jìn)行處理。在60℃溫度條件下將反應(yīng)混合物攪拌6小時(shí)，冷卻至室溫。添加少量的水，在室溫下將混合物放置24小時(shí)。減壓濃縮上述混合物而獲得褐色產(chǎn)物，并用硅膠柱層析進(jìn)行提純而獲得顯示下述物性值的黃色糖漿狀的化合物(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-2-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5a).[(1s，5r)-6，6-dimethyl-4-((e)-2-(pyridin-2-yl)vinyl)bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one(5a)]，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(258mg，收率81％)。

[a]²⁰d-102.0000°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d8.60(dd，j＝4.77，0.61hz，1h)，7.67(td，j＝7.70，1.71hz，1h)，7.45(d，j＝15.90hz，1h)，7.39(d，j＝7.83hz，1h)，7.19(ddd，j＝7.52，4.83，0.86hz，1h)，6.96(d，j＝15.89hz，1h)，6.02(s，1h)，3.08-3.14(m，1h)，2.87-2.95(m，1h)，2.73(td，j＝5.69，1.59hz，1h)，2.11(d，j＝9.29hz，1h)，1.57(s，3h)，1.00(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d203.92，163.51，154.33，149.96，136.65，133.90，131.15，124.29，123.13，58.27，52.90，43.86，39.97，26.71，22.12；

hrms計(jì)算值c16h17no(m+h)240.1388，測(cè)定值240.1392；

hplc分析結(jié)果：(方法1)98.4％(tr＝4.28分鐘)。

實(shí)施例1-22.(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-3-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5b)化合物的制造；

采用與5a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色固體狀化合物(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-3-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5b)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率77％)。

mp102-104℃；

[a]²⁰d-204.0°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d8.70(d，j＝1.96hz，1h)，8.54(dd，j＝1.22，4.65hz，1h)，7.85(td，j＝1.86，8.01hz，1h)，7.31(dd，j＝4.77，7.95hz，1h)，7.02(d，j＝16.00hz，1h)，6.91(d，j＝16.00hz，1h)，5.97(s，1h)，3.12(dt，j＝1.10，5.81hz，1h)，2.94(td，j＝5.62，9.54hz，1h)，2.76(dt，j＝1.71，5.75hz，1h)，2.13(d，j＝9.54hz，1h)，1.60(s，3h)，1.03(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d203.72，163.28，149.82，149.35，133.12，131.73，130.98，129.34，123.61，58.23，52.84，43.64，39.96，26.72，22.13；

hrms計(jì)算值c16h17no(m+h)240.1388，測(cè)定值240.1397；

hplc分析結(jié)果：(方法1)98.7％(tr＝3.89分鐘)。

實(shí)施例1-23.(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-4-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5c)化合物的制造；

采用與5a化合物的制造方法類(lèi)似的方法，獲得顯示下述物性值的黃色凝膠狀化合物(1s，5r)-6，6-二甲基-4-((e)-2-(吡啶-4-基)乙烯基)二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-酮(5c)，將其作為下述試驗(yàn)例的試料使用(收率80％)。

[a]²⁰d-152.0°(c1.0，meoh)；

¹h-nmr(cdcl3，500mhz)；d8.62(d，j＝5.87hz，2h)，7.35(d，j＝5.87hz，2h)，7.13(d，j＝16.14hz，1h)，6.84(d，j＝16.14hz，1h)，6.01(s，1h)，3.10(t，j＝5.87hz，1h)，2.95(td，j＝5.62，9.54hz，1h)，2.77(dt，j＝1.59，5.69hz，1h)，2.13(d，j＝9.54hz，1h)，1.60(s，3h)，1.02(s，3h)；

¹³c-nmr(cdcl3，75mhz)；d203.57，162.78，150.42，143.12，131.89，131.57，124.62，121.23，58.24，52.90，43.68，39.95，26.70，22.11；

hrms計(jì)算值c16h17no(m+h)240.1338，測(cè)定值240.1378；

hplc分析結(jié)果：(方法1)98.4％(tr＝4.29分鐘)。

實(shí)施例2.針對(duì)興奮細(xì)胞毒性、抗氧化活性以及局部腦缺血癥的馬鞭草烯酮衍生物的效果

試驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備

將公司(charlesriverlaboratories公司，首爾(seoul)，韓國(guó)(korea))供給的sd大鼠(260-270g，雄性)，在維持12小時(shí)的明暗/循環(huán)周期并可自由接近飲用水的情況下，使其順應(yīng)在試驗(yàn)前環(huán)境后使用。該試驗(yàn)在nih基準(zhǔn)(美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的試驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南：nihguideforthecareanduseoflaboratoryanimals)以及委員會(huì)(高麗大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)：koreauniversityinstitutionalanimalcare&usecommittee)批準(zhǔn)下實(shí)施。

統(tǒng)計(jì)處理

以平均數(shù)(means)±s.e.m.的形式處理數(shù)據(jù)(data)，并實(shí)施單向方差分析(one-wayanalysisofvariance：anova)而鑒定統(tǒng)計(jì)顯著性，采用事后邦弗朗尼檢驗(yàn)(post-hocbonferronitest)實(shí)施多重比較，p值<0.05判斷為具有顯著性。anova分析之間，確認(rèn)試驗(yàn)方法(levene'stest)對(duì)方差齊性(equalityofvariances)的p值(p>0.05)。必要時(shí)，對(duì)上述數(shù)據(jù)實(shí)施克魯斯凱-沃利斯檢驗(yàn)(kruskal-wallistest)之后，通過(guò)曼-惠特尼檢驗(yàn)(mann-whitneytest)進(jìn)一步分析。

實(shí)施例2-1.馬鞭草烯酮衍生物對(duì)興奮細(xì)胞毒性的影響

為了確認(rèn)上述實(shí)施例中獲得的試料對(duì)興奮細(xì)胞毒性帶來(lái)的效果，應(yīng)用文獻(xiàn)中記載的方法實(shí)施如下試驗(yàn)(juc.etal.，bbrc，431(3)，484-489，2013)。

(1)皮層神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)

從胚胎16～17天sd大鼠中獲得皮層神經(jīng)細(xì)胞(neuron)(5x10⁵細(xì)胞/ml)。即，切除腦皮層，使用移液管(巴氏吸管：pasteurpipette)在緩沖液(漢克斯平衡鹽溶液：hanks’balancedsaltsolution，hbss)中反復(fù)實(shí)施滴定(trituration)，由此分離細(xì)胞。將細(xì)胞懸浮液(1.8x10³細(xì)胞/mm²)分配于板(多聚賴氨酸(poly-d-lysine)(100mg/ml)/層粘蛋白(laminin)(4mg/ml)-預(yù)處理板)上。初期，將細(xì)胞置于10％fbs-添加nbm培養(yǎng)基中，并維持在37℃溫度、加濕的96％空氣/5％co2環(huán)境中。培養(yǎng)上述培養(yǎng)物15～16天之后實(shí)施試驗(yàn)。

(2)ogd(缺氧缺糖：oxygen-glucosedeprivation)后再氧化

為了誘導(dǎo)試驗(yàn)管低氧性-缺血性癥狀，將培養(yǎng)的細(xì)胞置于缺氧室(氧分壓<2mmhg)，為了去除上述培養(yǎng)物的殘余氧，換成以缺氧性氣體混合物(95％n2，5％co2)充滿(bubbling)的葡萄糖-去除培養(yǎng)基(glucose-freedmem)并培養(yǎng)30分鐘，為了缺氧(oxygendeprivation)，在37℃溫度下培養(yǎng)90分鐘。90分鐘后，將上述露出溶液換成含有氧化25mmol/l葡萄糖的dmem培養(yǎng)基，中斷ogd反應(yīng)，使細(xì)胞恢復(fù)成正常氧條件。在提供好氧性混合氣體(95％空氣，5％co2)的葡萄糖(25mmol/l)-含有dmem培養(yǎng)基中保持未露出于ogd的對(duì)照細(xì)胞。從ogd/再氧化(re-oxygenation)30分鐘之前開(kāi)始用試料處理細(xì)胞并維持在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間。

(3)nmda(n-甲基-d-天冬氨酸：n-methyl-d-aspartate)-誘導(dǎo)興奮細(xì)胞毒性測(cè)定

在板上培養(yǎng)15-18天之后，在nmda(100mm)的溶液(mg²⁺-去除earle’平衡鹽溶液(earle’sbalancedsaltsolution：ebss)；含有1.8mmcacl2以及10mm甘氨酸(glycine))中將皮層神經(jīng)細(xì)胞露出10分鐘。進(jìn)行上述露出之后，用含有mgso4的ebss溶液洗滌細(xì)胞，在37℃溫度、5％co2條件下，在培養(yǎng)器中的25mmol/l葡萄糖含有dmem培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。從nmda處理30分鐘之前開(kāi)始用試料(10mm)處理細(xì)胞。

(4)細(xì)胞損傷或者細(xì)胞死亡的測(cè)定

細(xì)胞損傷或者細(xì)胞凋亡是利用細(xì)胞存活率測(cè)定試劑盒(sigma-aldrich公司，st.louis，mo)測(cè)定從培養(yǎng)基中分泌的ldh量，細(xì)胞存活率是相對(duì)于總細(xì)胞ldh水平的ldh的百分率來(lái)表示，其中，所述總細(xì)胞ldh是冷凍并實(shí)驗(yàn)后溶解的姐妹培養(yǎng)物(sistercultures)中測(cè)定。

興奮細(xì)胞毒性是缺血癥-誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的主要因素，特別是初期階段腦缺血癥中的主要因素之一。ogd是利用培養(yǎng)的皮層神經(jīng)細(xì)胞模仿缺血癥中的急劇破壞血流供給以及能量耗費(fèi)的現(xiàn)象的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過(guò)ogd誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，促進(jìn)如ldh那樣的蛋白質(zhì)向培養(yǎng)液中的分泌，并測(cè)定其來(lái)測(cè)定細(xì)胞膜損傷以及神經(jīng)細(xì)胞損傷。試驗(yàn)結(jié)果，可確認(rèn)化合物(3a，3c以及3f)能夠顯著降低神經(jīng)細(xì)胞損傷，所降低程度達(dá)到了已知曉的作為nmda受體拮抗劑的mk801的程度，并確認(rèn)到未顯示細(xì)胞毒性(圖1)。

nmda受體的過(guò)度刺激引發(fā)的興奮性毒性(excitotoxicity)，是ogd/r期間的神經(jīng)損傷以及自由基以及緊接的氧化應(yīng)激的同時(shí)多發(fā)性引起的腦缺血性損傷相關(guān)主要因素。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物(3a，3c，3f，3i以及5a)，其雖未達(dá)到mk-801的抗-興奮細(xì)胞毒性活性(anti-excitotoxicactivities)程度，但其顯著減少了培養(yǎng)的皮層神經(jīng)細(xì)胞中的nmda-誘發(fā)神經(jīng)損傷(圖2)。其意味著，本發(fā)明化合物對(duì)nmda-誘發(fā)神經(jīng)興奮細(xì)胞毒性起到的抑制作用有助于抗-缺血活性。

實(shí)施例2-2.馬鞭草烯酮衍生物的抗氧化活性效果

為了確認(rèn)上述實(shí)施例中獲得的試料的直接抗氧化活性，利用文獻(xiàn)中記載的方法實(shí)施如下實(shí)驗(yàn)(juc.etal.，bbrc，431(3)，484-489，2013；huangd.etal.，j.agric.foodchem.，53，1841-1856，2005.)。

(1)活性氧(ros)的細(xì)胞內(nèi)水平測(cè)定(dcf熒光度)

為了確認(rèn)試料的自由基直接消除活性，利用廣泛用于再氧化(reoxygenation)1小時(shí)之后測(cè)定細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的h2dcf-da(2，7-二氫二氯熒光素二乙酸酯：2，7-dihydroichlorofluoresceindiacetate)熒光指示劑進(jìn)行染色，2小時(shí)之后在25mm葡萄糖(glucose)，1.8mmcacal2，1.2mmmgso4以及2.5mm丙磺舒(probenecid)(ph7.4)含有ebss緩沖液中洗滌細(xì)胞，用讀取儀器(熒光酶標(biāo)儀：fluorescencemicroplatereader，spectramaxgeminiem；ex＝485nm，em＝530nm)或者數(shù)碼相機(jī)(dfc420c，leica，wetzlargermany公司)、顯微鏡(熒光顯微鏡：fluorescencemicroscope；dmilhcfluo，leica，wetzlar，germany公司)測(cè)定dcf的熒光度。熒光強(qiáng)度補(bǔ)正成自動(dòng)熒光度(即，未搭載h2dcf-da的細(xì)胞的熒光度)。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)到，化合物3c以及3f能夠減少ogd-誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激(圖3)。

(2)氮自由基去除能力測(cè)定(dpph分析法)

將上述各試料，用dpph(23.6μg/ml，在乙醇)混合試料，在37℃溫度條件下，在暗處培養(yǎng)30分鐘。在517nm下測(cè)定通過(guò)試料減少的dpph吸光度。將維生素c(vit.c；sigmaaldrich公司，st.louis，mo)作為對(duì)照群使用，通過(guò)下述數(shù)學(xué)式1計(jì)算dpph％抑制率(inhibitionvalue)。

數(shù)學(xué)式1

消除活性(％)＝[absmax(vit.c)-abssample]/[absmax(vit.c)-absmin(vit.c)]x100.

(3)氧自由基吸收能力(orac；oxygenradicalabsorbancecapacity)測(cè)定

如下所述，通過(guò)文獻(xiàn)記載的實(shí)驗(yàn)方式實(shí)施orac分析方法(huang，d.etal.，j.agric.foodchem.，53，1841-56，2005)。

準(zhǔn)備緩沖液(75mm磷酸鹽緩沖液(phosphatebuffer)，ph7.4)中的aaph(60mm)以及熒光素(fluorescein)(50nm)，其中不存在試料或者標(biāo)準(zhǔn)液(水溶性維生素e：trolox)。用50％丙酮中溶解的7％rmcd(randomlymethylatedbeta-cyclodextrin)懸浮上述試料以及標(biāo)準(zhǔn)液來(lái)做準(zhǔn)備。準(zhǔn)備rmcd以用于提高脂溶性試料的溶解度。將熒光溶液(fluoresceinsolution，66nm，190μl)與試料振蕩5秒鐘，從而使其充分混合。在37℃溫度下培養(yǎng)10分鐘后，迅速添加aaph(500mm，30μl)，對(duì)于熒光度的減少水平，利用讀取機(jī)(熒光酶標(biāo)儀：fluorescencemicroplatereader，ex＝485nm，em＝530nm；spectramaxgeminiem，moleculardevices，sunnyvale，ca)，并通過(guò)37℃條件下9小時(shí)內(nèi)每5分鐘測(cè)定的方式進(jìn)行測(cè)定。為了過(guò)氧化氫自由基(peroxylradical)消除作用的定量化，對(duì)于消除活性而言，根據(jù)下述數(shù)學(xué)式2計(jì)算出auc(曲線下面積：area-under-the-curve)，根據(jù)數(shù)學(xué)式3計(jì)算出純(net)auc，根據(jù)trolox濃度增加制作出純auc的標(biāo)準(zhǔn)曲線(standardcurve)，并根據(jù)下述數(shù)學(xué)式4計(jì)算出試料的troloxe當(dāng)量(te；troloxequivalents)。

數(shù)學(xué)式2

auc＝(0.5+f1/f0+f2/f0+f3/f0+…+fn-2/f0+fn-1/f0+fn/f0)x5，

(其中，f0是0分鐘時(shí)間(time)i下的最初熒光度。)

數(shù)學(xué)式3

純(net)auc＝aucsample-aucblank.

數(shù)學(xué)式4

試料的trolox當(dāng)量(te；troloxequivalents)＝[netaucsampleat25mm]/[netauctroloxat25mm]

通過(guò)實(shí)施下述兩種不同形式的化學(xué)反應(yīng)測(cè)定本發(fā)明的馬鞭草烯酮衍生物的抗氧化活性：(1)單電子轉(zhuǎn)移分析法(singleelectrontransfer-basedassay)，即，對(duì)于自由基引發(fā)劑以及作為最終指示劑起到作用的dpph減少進(jìn)行測(cè)定的dpph分析法(2,2-二(4-叔辛基苯基)-1-苦肼基自由基分析法：2，2-di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl[dpph]assay)，以及(2)氫原子轉(zhuǎn)移分析法(hydrogenatomtransferassay)，即，氧自由基吸收能力分析法(oxygenradicalabsorbancecapacity[orac]assay)，測(cè)定稱(chēng)為aaph(2,2'-偶氮雙(2-甲基丙脒)二鹽酸鹽：2，2'-azobis-(2-methylpropionamide)-dihydrochloride)的過(guò)氧化氫自由基引發(fā)劑(peroxylradicalgenerator)和作為抗氧化劑起到作用的試料對(duì)于氧化性熒光指示劑(oxidizablefluorescentprobe，fluorescein)起到的競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)動(dòng)力學(xué)作用。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)到，dpph分析法中，大部分的具有酚基的苯乙烯基衍生物(3a-f，3h-i)對(duì)于從dpph轉(zhuǎn)變至有機(jī)氮自由基(organicnitrogenfreeradicals)的變化顯示出強(qiáng)烈且直接的消除活性(參考表1)。其中，化合物3c以及3f在相同濃度下顯示出比維生素c更強(qiáng)的消除活性，orac分析法中，具有吡咯基的衍生物(4e)以及具有酚基的所有化合物(3a-i)顯示出比trolox更強(qiáng)的過(guò)氧化氫自由基消除活性(表1以及表2)。苯基的間位(meta)以及對(duì)位(para)中導(dǎo)入羥基的化合物能夠提高自由基消除活性。

表1

化學(xué)式2

表2

化學(xué)式3

實(shí)施例2-3.局部腦缺血癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

為了確認(rèn)上述實(shí)施例中獲得的試料在局部腦缺血癥實(shí)驗(yàn)中的效果，應(yīng)用文獻(xiàn)中記載的方法實(shí)施如下實(shí)驗(yàn)(belayevl.etal.，stroke，27，1616-1622，1996；discussion1623)。

(1)局部腦缺血癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

利用面罩(mask)使n2o和o2(70：30v/v)混合物中以3.0％異氟烷(isoflurane)為起始維持2％異氟烷，以此對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，直至從麻醉充分恢復(fù)的期間包括手術(shù)后期間內(nèi)，利用直腸用溫度計(jì)以及加熱墊使體溫調(diào)整和維持在37℃±0.3℃溫度。用左側(cè)血管內(nèi)mcao誘導(dǎo)局部腦缺血癥，簡(jiǎn)單地說(shuō)，將3-0熱鈍化(heat-blunted)單絲尼龍線(monofilamentnylonsuture；ethicon，johnson-johnson，brussels，belgium)插入于右側(cè)外部頸動(dòng)脈切除部分內(nèi)腔并向內(nèi)測(cè)頸動(dòng)脈插入17.5mm，以閉塞mca小孔。1.5小時(shí)后去除上述縫合使動(dòng)物恢復(fù)。對(duì)于手術(shù)-對(duì)照群，除了mcao以外，實(shí)施相同的手術(shù)方法。在mcao15分鐘前以及再灌注15分鐘之后測(cè)定生理學(xué)數(shù)值，對(duì)平均血壓，用血壓計(jì)(micromed，lousville，ky)測(cè)定5分鐘。用分析儀(cibacorningdiagnostics公司，medfield，ma)測(cè)定血中ph、pao2、paco2以及血糖數(shù)值。用dmso溶解并用10％聚氧乙烯蓖麻油甘油醚(cremophore)以及滅菌鹽水稀釋的(5％)試料(3f衍生物)，則mcao誘導(dǎo)后2小時(shí)開(kāi)始向大鼠腹腔內(nèi)給藥(100mg/kg)。

(2)埂塞體積的測(cè)定

再灌注后，用水合氯醛(3.5％chloralhydrate，5ml/kg，腹腔注射)麻醉大鼠之后處死。對(duì)于利用切片模具(大鼠腦切片模具：ratbrainmatrix，tedpella，redding，ca)切斷的腦動(dòng)脈切片(2mm)，用試劑(2％三苯基氯化四氮唑，sigma-aldrich公司，st.louis，mo)在37℃溫度下染色30分鐘。用4％多聚甲醛(paraformaldehyde)(ph7.4)進(jìn)行固定，在30％蔗糖(sucroseat)4℃溫度下，連續(xù)兩天在30％蔗糖(sucrose)中進(jìn)行冷凍保護(hù)。對(duì)于前囟的+4mm(前部)以及-6mm(后部)之間的埂塞切片，用分析程序(optimas5.1圖像分析程序：imageanalysisprogram，bioscaninc公司.edmonds，wa)進(jìn)行測(cè)定。用于測(cè)定腦梗死大小的埂塞區(qū)域的外部周長(zhǎng)是用手動(dòng)實(shí)測(cè)。腦梗死總體積(mm³)，是通過(guò)記載于文獻(xiàn)(jneuroscimethods(1998)84：9-16；jcerebbloodflowmetab(1990)10：290-293)中的方法，并根據(jù)下述數(shù)學(xué)式5補(bǔ)正為腦水腫而計(jì)算出。如下述數(shù)學(xué)式6所示，腦水腫是以同側(cè)/反側(cè)半球區(qū)域(ipsilateral(v1)/contralateralhemispherearea(vc))的百分率增加率進(jìn)行計(jì)算。全部用雙盲試驗(yàn)法進(jìn)行測(cè)定。

數(shù)學(xué)式5

腦梗死總體積(mm³)＝用直接測(cè)定法測(cè)定的同側(cè)性體積(ivd)x[(反側(cè)性體積(vc))/反側(cè)性體積(vc)](totalinfractionvolume(mm³)＝ipsilateralvolume(ivd)obtainedbydirectmeasurementx[(contralateralvolume(vc))/ipsilateralvolume(vi)])

數(shù)學(xué)式6

水腫體積(％)＝[(同側(cè)性體積(v1)反側(cè)性體積(vc))/反側(cè)性體積(vc)]×100(edemavolume)(％)＝[(ipsilateralvolume(vi)–contralateralvolume(vc))/contralateralvolume(vc)]×100.

之后凍結(jié)組織，用切斷器(leica3050；leica，nussloch，germany)切斷成10或者30mm頸動(dòng)脈切片，并在-20℃溫度下進(jìn)行保存。

(3)神經(jīng)功能缺損的測(cè)定

缺血后24小時(shí)后測(cè)定神經(jīng)功能缺損，通過(guò)文獻(xiàn)(stroke，17，472-476，1986)中記載的方法，以4點(diǎn)評(píng)定(4-pointscale)方式進(jìn)行測(cè)定(0：沒(méi)有神經(jīng)功能缺損，1：彎曲前腳，2：彎曲前腳以及對(duì)于側(cè)面推壓力表現(xiàn)抵抗力減少，不轉(zhuǎn)動(dòng)，3：與2相同，但轉(zhuǎn)動(dòng))。

(4)腦組織免疫組織學(xué)染色

為了抑制非特異性抗體結(jié)合，對(duì)通過(guò)上述方法準(zhǔn)備好的腦組織切片，用含有5％血清的緩沖液在常溫下處理一小時(shí)。加入稀釋成適當(dāng)濃度的一次抗體(mpo抗體以及ed-1-抗體，各自1：100；硝基酪氨酸(nitrotyrosine)抗體，1：50；il-1a、il-1b、tnf-a抗體各自1：100)，在4℃溫度下染色一晚。洗滌去除未結(jié)合的一次抗體之后，用結(jié)合有熒光標(biāo)記的二次抗體在常溫下染色一小時(shí)。洗滌去除未結(jié)合的二次抗體之后，用hoechst33258染色液對(duì)核進(jìn)行20分鐘染色，洗滌之后置于載玻片，使用共焦熒光顯微鏡(zeisslsm510；zeiss，oberkochen，德國(guó))進(jìn)行觀察。

(5)血-腦屏障通透性實(shí)驗(yàn)

靜脈內(nèi)注射時(shí)，染色液(伊文思藍(lán)染色液，2％)即刻結(jié)合于血清內(nèi)白蛋白，轉(zhuǎn)變成無(wú)法透過(guò)正常血腦屏障的高分子物質(zhì)，但在誘導(dǎo)了腦缺血癥的老鼠腦組織中，血-腦屏障被損傷，伊文思藍(lán)的通透性提高，由此染色量會(huì)增加。用200ml的生理鹽水對(duì)上述的誘發(fā)局部腦缺血癥的老鼠實(shí)施心臟灌注。摘取腦組織，稱(chēng)重后浸漬于試劑(三氯乙酸，60％)，在4℃溫度下處理24小時(shí)。粉碎組織之后，在10000rpm下離心分離15分鐘，取上清液，在610nm下測(cè)定腦組織內(nèi)殘存的伊文思藍(lán)染色液的吸光度并定量，計(jì)算成每克組織的染色液量。

(6)長(zhǎng)期存活率實(shí)驗(yàn)

對(duì)于上述的誘發(fā)局部腦缺血癥的老鼠，手術(shù)后在與手術(shù)前相同條件下經(jīng)過(guò)3周測(cè)定存活率以及神經(jīng)功能缺損。

(7)栓塞性缺血腦中風(fēng)動(dòng)物模型

使用70％n2o和30％o2(v/v)的混合氣體中混合的3％異氟烷(isoflurane)氣體，吸入麻醉老鼠(體重270-300g之間)之后，利用3％異氟烷(isoflurane)維持。插入直腸溫度計(jì)，使用連接于其的自動(dòng)加熱墊使手術(shù)期間老鼠的體溫維持在37.0-37.9℃。頸部中切開(kāi)正中線之后，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(commoncarotidartery：cca)和右側(cè)頸外動(dòng)脈(externalcarotidartery：eca)以及右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈(internalcarotidartery：ica)，捆住頸外動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈。使用彎曲的微血管夾暫時(shí)夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈。將頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈的分支起始部分切開(kāi)小口，為了便于進(jìn)行血管注入，使用注入口外徑縮小成0.3mm的外徑0.58mm的pe-50導(dǎo)管，用裝有生理鹽水的100ulhamilton注射器向頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)注入35mm栓塞物。除去微血管夾，將導(dǎo)管小心地向頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)推進(jìn)16-17mm，移動(dòng)至距中腦大動(dòng)脈的起始點(diǎn)約2mm的位置。將導(dǎo)管的栓塞物注入至頸內(nèi)動(dòng)脈(10ul)。注入栓塞物5分鐘之后，除去導(dǎo)管。在頸內(nèi)動(dòng)脈分支點(diǎn)中進(jìn)行捆扎，縫合切除部位后，等老鼠從麻醉中清醒。實(shí)驗(yàn)中使用的栓塞物是，向pe-50管中迅速注入從老鼠中采取大腿動(dòng)脈血，在常溫下放置2小時(shí)、4℃溫度下放置22小時(shí)而生成血栓。實(shí)驗(yàn)前切斷管，使用裝有生理鹽水的附有23g注射針的1ml注射器，由pe-10管轉(zhuǎn)移至變形pe-50導(dǎo)管。

上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，確認(rèn)在暫時(shí)性缺血誘導(dǎo)大鼠模型試驗(yàn)中，通過(guò)試料(3f，50mg/kg)的缺血后處理(post-ischemictreatment；腹腔注射；腦梗死后2小時(shí)以及7小時(shí)時(shí)給藥，總共給藥兩次)方法，顯著減少了缺血性損傷、腦水腫以及神經(jīng)功能缺損(圖4)。另外，通過(guò)在施用試料的老鼠獲得的腦組織切片中對(duì)硝基酪氨酸實(shí)施免疫組織學(xué)染色，測(cè)定組織內(nèi)抗氧化活性，其結(jié)果，確認(rèn)了試料給藥群中腦組織內(nèi)抗氧化活性顯著增加(圖5)。

一方面，通過(guò)免疫組織學(xué)染色觀察炎癥細(xì)胞向腦梗死部位以及半陰影部位侵襲的情況，其結(jié)果，確認(rèn)了能夠顯著抑制被mpo抗體染色的中性粒細(xì)胞/單核細(xì)胞和被ed-1抗體染色的活性化的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的遷移(圖6)。除此之外，確認(rèn)了如il-1α(alpha)、il-1β(beta)、tnf-α(alpha)等已知在缺血性損傷中承擔(dān)重要作用的細(xì)胞因子的組織內(nèi)表達(dá)量在試料給藥群中顯著減少(圖7)。另外，還確認(rèn)了顯著減小了因缺血性損傷增加的血-腦屏障通透性(圖8)。誘導(dǎo)暫時(shí)性缺血的老鼠模型中施用試料后，觀察對(duì)長(zhǎng)期存活率和神經(jīng)功能缺損恢復(fù)率帶來(lái)的影響3周的結(jié)果，確認(rèn)了施用試料的老鼠的長(zhǎng)期存活率以及神經(jīng)功能缺損恢復(fù)率得到了顯著提高(圖9)。缺血性腦中風(fēng)時(shí)，常有藥物引起的出血增加的情況(例，tpa)，其在臨床上可能會(huì)增加患者的副作用(例，死亡或預(yù)后(prognosis)的惡化)，因此需要注意。但是，本試料在由自體血液注入誘導(dǎo)缺血性腦中風(fēng)的體內(nèi)動(dòng)物模型中，對(duì)腦損傷大小沒(méi)有帶來(lái)顯著的影響，由此可視為發(fā)生上述副作用的可能性小(圖10)。

下面，說(shuō)明含有本發(fā)明化合物的組合物的制劑例，但是，本發(fā)明僅以詳細(xì)說(shuō)明為目的，并不限定于此。

制劑例1.散劑的制造

化合物3f200mg

乳糖100mg

滑石粉10mg

混合上述的成分，填裝至氣密小袋，由此制造散劑。

制劑例2.片劑的制造

化合物3c200mg

玉米淀粉100mg

乳糖100mg

硬脂酸鎂2mg

混合上述的成分之后，通過(guò)常用的片劑制造方法進(jìn)行壓片，由此制造片劑。

制劑例3.膠囊制劑的制造

rw200mg

結(jié)晶纖維素3mg

乳糖14.8mg

硬脂酸鎂0.2mg

通過(guò)常規(guī)的膠囊制劑制造方法混合上述的成分，填充于明膠膠囊中，由此制造膠囊制劑。

制劑例4.注射劑的制造

化合物4e200mg

甘露醇180mg

注射用滅菌蒸餾水2974mg

na2hpo4，12h2o26mg

通過(guò)常規(guī)的注射劑的制造方法，制造出每1安瓿(2ml)含有上述成分含量。

制劑例5.液體制劑的制造

化合物5a200mg

異構(gòu)化糖10g

甘露醇5g

純凈水適量

通過(guò)常規(guī)的液體制劑的制造方法，純凈水中加入各自成分并使其溶解，適量加入檸檬香料之后，混合上述的成分，之后加入純凈水調(diào)整成總量100ml，之后填充至褐色瓶進(jìn)行滅菌，由此制造液體制劑。

制劑例6.保健食品的制造

化合物3a1000mg

維生素混合物適量

維生素a乙酸酯70μg

維生素e1.0mg

維生素b10.13mg

維生素b20.15mg

維生素b60.5mg

維生素b120.2μg

維生素c10mg

生物素10μg

煙酰胺(nicotinicacidamide)1.7mg

葉酸50μg

泛酸鈣0.5mg

礦物混合物(mineralmixture)適量

硫酸亞鐵1.75mg

氧化鋅0.82mg

碳酸鎂25.3mg

磷酸二氫鉀15mg

磷酸氫鈣55mg

檸檬酸鉀90mg

碳酸鈣100mg

氯化鎂24.8mg

上述維生素以及礦物混合物的組成比是，將較適合于保健食品的成分以優(yōu)選的實(shí)施例混合的比率，但是，也可以對(duì)配合比進(jìn)行任意變更，通過(guò)常規(guī)的保健食品制造方法混合上述成分之后，制造顆粒，并通過(guò)常規(guī)的方法適用于保健食品組合物制造中。

制劑例7.保健飲料的制造

化合物3f1000mg

檸檬酸1000mg

寡糖100g

梅濃縮液2g

?；撬?g

加入純凈水使總體積達(dá)到900ml

通過(guò)常規(guī)的保健飲料制造方法混合上述的成分之后，在85℃下攪拌加熱約一小時(shí)，然后過(guò)濾所制作的溶液，放入滅菌的2l容器中密封滅菌后冷藏保存，用于本發(fā)明的保健飲料組合物的制造中。

上述組成比是，將較適合于喜好飲料的成分以優(yōu)選的實(shí)施例混合的組成比，但是，也可根據(jù)需要階層、需要國(guó)家、使用用途等地域性、民族嗜好，對(duì)其配合比進(jìn)行任意變更。

以上，詳細(xì)敘述了本發(fā)明的特征部分，但對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)講，這種具體的記述僅僅是優(yōu)選的實(shí)施方式而已，本發(fā)明的范圍并不限定于此。因此，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍，是依照權(quán)利要求書(shū)及其等價(jià)物來(lái)定義。

工業(yè)實(shí)用性

本發(fā)明的作為有效成分含有馬鞭草烯酮衍生物的藥物組合物相比于以往的藥物組合物，顯示出顯著的神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用、nmda-誘導(dǎo)興奮細(xì)胞毒性抑制效果、細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激抑制效果以及炎癥細(xì)胞的遷移抑制效果，具有治療神經(jīng)退行性疾病的效果，更具體地，具有治療腦缺血性損傷的效果，由此能夠用于功能性食品等中。