本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)及其基因。

背景技術(shù)：

植物對(duì)病原物侵染的抗性表現(xiàn)在非寄主和寄主抗性兩個(gè)方面。革蘭氏陰性植物病原細(xì)菌在非寄主植物上產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)(Hypersensitive response,HR)是由病原菌中的某些激發(fā)子決定的。這種HR是一種抗病免疫反應(yīng)，相應(yīng)激發(fā)產(chǎn)生HR的蛋白質(zhì)稱為harpin類蛋白。目前已從革蘭氏陰性植物病原細(xì)菌中鑒定的harpin類蛋白種類有HrpZ,HrpN,HrpW,PopA1,Hpa1,HopAK1和HopP1，并且明確植物病原黃單胞菌中HrpW和Hpa1這兩個(gè)激發(fā)非寄主植物產(chǎn)生HR的harpin類蛋白。這些harpin蛋白具有共同的特點(diǎn)：具親水性、富含甘氨酸、對(duì)熱穩(wěn)定、對(duì)蛋白酶敏感、酸性蛋白。

Harpin類蛋白具有重要的生物學(xué)功能。harpin類蛋白在植物上產(chǎn)生的HR是一種細(xì)胞編程死亡形式，在這個(gè)過(guò)程中伴隨著活性氧迸發(fā)、水楊酸積累、病程相關(guān)蛋白產(chǎn)生和胼胝質(zhì)增加等，從而增加植物的抗病免疫性。Harpin類蛋白施用于植物上，可促進(jìn)植物生長(zhǎng)、增加作物產(chǎn)量和誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性等。植物病原黃單胞菌harpin類蛋白及其編碼基因具有植物抗病育種價(jià)值和生防價(jià)值，而且具有分離和鑒別植物抗病免疫基因的功能，發(fā)掘可使植物產(chǎn)生抗病免疫反應(yīng)的植物病原黃單胞菌中的harpin類蛋白及其編碼基因具有重要的科學(xué)價(jià)值和實(shí)踐價(jià)值。

經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)植物病原黃單胞菌中可激發(fā)植物產(chǎn)生抗病免疫反應(yīng)的XopP蛋白以及相應(yīng)編碼基因xopP的有關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足而提供激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)及其編碼基因。本發(fā)明XopP蛋白能夠使病原黃單胞菌的非寄主植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。

本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明涉及的激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)，其對(duì)應(yīng)基因在黃單胞菌基因組上具有兩個(gè)拷貝，氨基酸的同源性達(dá)到70％左右，根據(jù)其蛋白質(zhì)序列號(hào)先后順序分別命名為XopP1和XopP2。

本發(fā)明是以稻黃單胞菌水稻條斑病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzicola(Xoc)作為研究的模式菌株。

本發(fā)明提供的第一種激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)，命名為XopP1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，共有713個(gè)氨基酸。蛋白質(zhì)XopP1對(duì)應(yīng)的編碼基因命名為xopP1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1，序列長(zhǎng)度為2142bp。

本發(fā)明提供的第二種激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)，命名為XopP2，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，共有710個(gè)氨基酸。蛋白質(zhì)XopP2對(duì)應(yīng)的編碼基因命名為xopP2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3，序列長(zhǎng)度為2133bp。

本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)XopP1和蛋白質(zhì)XopP2，其氨基酸序列中半胱氨酸含量均低于1％，蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為8.8，呈弱堿性，富含丙氨酸和亮氨酸等脂肪族氨基酸以及絲氨酸和精氨酸等堿性氨基酸，分子量77.9kD左右，其中丙氨酸和亮氨酸的總含量達(dá)25.7％。本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)XopP1和蛋白質(zhì)XopP2都可以使煙草產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。過(guò)敏反應(yīng)是植物抗病性被激活的結(jié)果。

本發(fā)明還提供兩種基因的構(gòu)建方法。

基因xopP1的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

利用序列如SEQ ID NO.5所示的引物Xopp1-F和序列如SEQ ID NO.6所示的引物Xopp1-R，通過(guò)PCR擴(kuò)增，可從水稻條斑病菌Xoc RS105菌株、水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株基因組DNA中擴(kuò)增得到xopP1基因。

基因xopP2的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

利用序列如SEQ ID NO.7所示的引物Xopp2-F和序列如SEQ ID NO.8所示的引物Xopp2-R，通過(guò)PCR擴(kuò)增，可從水稻條斑病菌Xoc RS105菌株、水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株基因組DNA中擴(kuò)增得到xopP2基因。

本發(fā)明還提供了兩種XopP表達(dá)工程菌株。

XopP1表達(dá)工程菌株，采用以下方法得到：

將基因xopP1，通過(guò)Hind III和XbaⅠ限制性酶切位點(diǎn)克隆到pHB載體上，轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌EH105株中，并篩選具有利福平和卡那霉素抗性的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，該轉(zhuǎn)化子為XopP1表達(dá)工程菌株；其中，基因xopP1核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，蛋白質(zhì)XopP1氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

XopP2表達(dá)工程菌株，采用以下方法得到：

將基因xopP2，通過(guò)Hind III和XbaⅠ限制性酶切位點(diǎn)克隆到pHB載體上，轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌EH105株中，并篩選具有利福平和卡那霉素抗性的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，該轉(zhuǎn)化子為XopP2表達(dá)工程菌株；其中，基因xopP2核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，蛋白質(zhì)XopP2氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

以上兩種農(nóng)桿菌工程菌株經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)，注射三生煙，發(fā)現(xiàn)能夠使煙草產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。

本發(fā)明中所涉及的水稻條斑病菌Xoc RS105和水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株已在文獻(xiàn)《Wu Xiaomin,Li Yurong,Zou Lifang,and Chen Gongyou.2007.Gene-for-gene relationships between rice and diverse avrBs3/pthA avirulence genes in Xanthomonas oryzae pv.oryzae.Plant Pathology,56(1):26-34》中公開；涉及的柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株已在文獻(xiàn)《Zhou,T.,Rou,W.,Song,X.,et al.2015.Molecular study on the carAB operon reveals that carB gene is required for swimming and biofilm formation in the Xanthomanas citri subsp.citri.BMC Microbiology(2015)15:255》中公開。這些菌株均為常用的工程菌株。

本發(fā)明中所涉及的農(nóng)桿菌EH105菌株為公知公用菌株，特征見文獻(xiàn)：TAKARA公司產(chǎn)品說(shuō)明書。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

本發(fā)明獲得的激發(fā)子蛋白XopP1和XopP2具有harpin類蛋白的特性，能激發(fā)煙草產(chǎn)生HR反應(yīng)和系統(tǒng)獲得抗病性，這為設(shè)計(jì)誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗病性的基因工程藥劑以及轉(zhuǎn)基因植物提供了重要的基因資源，具有重要的實(shí)踐價(jià)值。

附圖說(shuō)明

圖1、不同來(lái)源的xopP1和xopP2基因片段PCR擴(kuò)增(A)和酶切驗(yàn)證圖(B)。

圖2、XopP1和XopP2通過(guò)農(nóng)桿菌在煙草上激發(fā)過(guò)敏反應(yīng)的最低濃度測(cè)試圖。

圖3、不同植物病原黃單胞菌來(lái)源的XopP1和XopP2蛋白在煙草上激發(fā)過(guò)敏反應(yīng)圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。

實(shí)施例1、植物病原黃單胞菌xopP基因原核表達(dá)載體構(gòu)建

本實(shí)施例從水稻條斑病菌Xoc RS105菌株、水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株DNA中xopP基因?yàn)槟０?，設(shè)計(jì)引物xopP1-F/R(SEQ ID NO.3和NO.4)和xopP2-F/R(SEQ ID NO.5和NO.6)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增條件為：94℃/4min+(94℃/30sec+55℃/30sec+72℃/2min)×32循環(huán)+72℃/10min。

利用序列如SEQ ID NO.5所示的引物Xopp1-F和序列如SEQ ID NO.6所示的引物Xopp1-R，通過(guò)PCR擴(kuò)增，可從水稻條斑病菌Xoc RS105菌株、水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株基因組DNA中擴(kuò)增得到xopP1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1，序列長(zhǎng)度為2142bp。并且得到第一種激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)，命名為XopP1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，共有713個(gè)氨基酸。

利用序列如SEQ ID NO.7所示的引物Xopp2-F和序列如SEQ ID NO.8所示的引物Xopp2-R，通過(guò)PCR擴(kuò)增，可從水稻條斑病菌Xoc RS105菌株、水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株基因組DNA中擴(kuò)增得到xopP2基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3，序列長(zhǎng)度為2133bp。并且得到第二種激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)，命名為XopP2，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，共有710個(gè)氨基酸。

蛋白質(zhì)XopP1和蛋白質(zhì)XopP2，其氨基酸序列中半胱氨酸含量均低于1％，蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為8.8，呈弱堿性，富含丙氨酸和亮氨酸等脂肪族氨基酸以及絲氨酸和精氨酸等堿性氨基酸，分子量77.9kD左右，其中丙氨酸和亮氨酸的總含量達(dá)25.7％。本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)XopP1和蛋白質(zhì)XopP2都可以使煙草產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。過(guò)敏反應(yīng)是植物抗病性被激活的結(jié)果。

不同來(lái)源的xopP1和xopP2基因片段PCR擴(kuò)增見圖1(A)，酶切驗(yàn)證圖見如1(B)。

最終PCR產(chǎn)物連接在pMD18-T載體，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5α，篩選具有Amp抗性的重組轉(zhuǎn)化子TxopP1和TxopP2。重組轉(zhuǎn)化子經(jīng)Hind III和XbaⅠ雙酶切回收xopP片段，連接經(jīng)過(guò)相同酶切處理的表達(dá)載體pHB載體上，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α，獲得正確的重組質(zhì)粒PxopP1和PxopP2，將驗(yàn)證正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌EH105菌株中，得到重組菌株EH105(XopP1)和EH105(XopP2)。

所涉及的水稻條斑病菌Xoc RS105和水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株已在文獻(xiàn)《Wu Xiaomin,Li Yurong,Zou Lifang,and Chen Gongyou.2007.Gene-for-gene relationships between rice and diverse avrBs3/pthA avirulence genes in Xanthomonas oryzae pv.oryzae.Plant Pathology,56(1):26-34》中公開；涉及的柑橘潰瘍病菌Xac29-1菌株已在文獻(xiàn)《Zhou,T.,Rou,W.,Song,X.,et al.2015.Molecular study on the carAB operon reveals that carB gene is required for swimming and biofilm formation in the Xanthomanas citri subsp.citri.BMC Microbiology(2015)15:255》中公開。這些菌株均為常用的工程菌株。pMD18-T和pHB載體為公知公用載體，農(nóng)桿菌EH105菌株為公用公知菌株，特征見文獻(xiàn)：TAKARA公司產(chǎn)品說(shuō)明書。所用內(nèi)切酶為Hind III和XbaⅠ。

實(shí)施例2、XopP通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草上過(guò)敏反應(yīng)的觀察

將待測(cè)定的農(nóng)桿菌菌株EH105(XopP1)和EH105(XopP2)在新鮮的平板上活化，EH105(EV)作為陰性對(duì)照，EH105(Hpa1)作為陽(yáng)性對(duì)照，分別轉(zhuǎn)接到的LB的液體培養(yǎng)基中，突變體或接合子要添加相對(duì)應(yīng)的抗生素，28℃振蕩培養(yǎng)大約12～16h，菌量濃度達(dá)到10⁸CFU/mL；低速離心(<6,000rpm)收集菌體，丟棄上清。超純水洗滌菌體1～2次，定容至所需濃度，一般為OD₆₀₀＝0.6。選取生長(zhǎng)適中煙草從溫室移出常溫下放置24h，在葉片背面用無(wú)菌針頭輕輕戳出接種口(注意不要挑破葉片)，無(wú)針頭的無(wú)菌注射器吸取菌液注射，并在葉片上標(biāo)注好注射范圍，過(guò)48h左右觀察表型、并拍照。本實(shí)施例三生煙為HR測(cè)定最常用的煙草品種Nicotiana tabacum cv.xanthi，公知公用。

實(shí)施例3、XopP激發(fā)煙草過(guò)敏反應(yīng)的最小濃度的測(cè)定

本實(shí)施例XopP通過(guò)調(diào)整不同的濃度值，分別接種三生煙，確定最小HR激發(fā)濃度，同時(shí)用相同濃度的Hpa1注射煙草作為陽(yáng)性對(duì)照，帶有空質(zhì)粒的農(nóng)桿菌作為陰性對(duì)照，48h后觀察煙草葉片過(guò)敏反應(yīng)。經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)XopP激發(fā)HR的最小濃度為0.1mg/ml(見圖2)。

實(shí)施例4、不同來(lái)源的植物病原黃單胞菌的XopP蛋白激發(fā)煙草過(guò)敏反應(yīng)的測(cè)定

本實(shí)施例從水稻條斑病菌Xoc RS105菌株、水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株等黃單胞菌中克隆出XopP基因，構(gòu)建在pHB載體上，然后轉(zhuǎn)化進(jìn)入EH105農(nóng)桿菌中，調(diào)整終濃度OD600＝0.6，用相同濃度的XopP_Xoc菌株為陽(yáng)性對(duì)照，48h后觀察煙草葉片過(guò)敏反應(yīng)。發(fā)現(xiàn)來(lái)自水稻白葉枯病菌Xoo PXO99^A菌株以及柑橘潰瘍病菌Xac 29-1菌株的XopP蛋白均能夠激發(fā)煙草產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)(見圖3)。

關(guān)于RS105：陳功友、潘小玫、王金生，水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)化學(xué)誘變hrp基因突變體及相關(guān)性狀的研究，植物病理學(xué)報(bào)，2001,31(3):199～207；

關(guān)于基因重組分子操作：Sambrook J,Russell D.W.,Molelcular cloning,A Laboratory Manual(3^rd ed),2001,Spring Harbor Laboratory Press；

關(guān)于克隆harpin相關(guān)基因的方法：Wen W.G,Wang J.S,Defense response in plants induced by Harpin_xoo,an elicitor of Hypersensitive response from Xanthomonas oryzae pv.oryzae,2003,Journal of Agricultural Biotechnology；

關(guān)于克隆載體pMD18-T和pHB：TAKARA載體說(shuō)明書。

上述的對(duì)實(shí)施例的描述是為便于該技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能理解和使用發(fā)明。熟悉本領(lǐng)域技術(shù)的人員顯然可以容易地對(duì)這些實(shí)施例做出各種修改，并把在此說(shuō)明的一般原理應(yīng)用到其他實(shí)施例中而不必經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性的勞動(dòng)。因此，本發(fā)明不限于上述實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

<110>上海交通大學(xué)

<120>激發(fā)植物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的蛋白質(zhì)及其編碼基因

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2142

<212> DNA

<213> 水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(2142)

<400> 1

gtgcctaaaa ttgaatcgac caagcaggcc ccccctgatc ccgcgcaatt ggttcaaact 60

gcaccgacac catcgggctc ggcatcagtg gcaagcacgt ctgccgacag tgcggtgccc 120

tcagcgcaac tcggcgggct ttccatcagg ccgcggctgt tgggccgagc ctccacagcc 180

aatccctcag cggcatcgtc cagcaacgca aagaacgtca gggcggcgct ctttgccgcg 240

cagtcagttt cgcaagggcc agatcctgcc gaagtattgg tcaaggcctc atccaggctg 300

aaacgcttca acgacttggc acaaaaagta gtgccgacag aaccgtcgga tatcaaagcc 360

ctggaagcaa gactccggtc cggaacgtct gcgctcgaat ccgctcgaca ggcctttcag 420

gcgcttgccg agttgaatat caaaaaacgc attccggtcg acaatatcga agaacacgag 480

aatttcctgg tgccgcagtt cgcaatcgcc gcatccctgc acttcggcgc atgccagaag 540

atgatcgatc agaaaatggc caccgaattg ggccatgtgc ccacccaaag ggtcgagatg 600

gtgacgttgt ccgttgacgc cacccgtctg cagcaaccgg aatcatggct tgcgttacgc 660

gctcatattc tgaattccct tgcagcgatg gaggaggttt gccagcgcat caggtcgccg 720

atgacgggtc aggggccgcg tgactcgctc aaggccaatc tccccgtcgt cagggcgatg 780

atcgcatcgt gccatgaacg catgcagacc gtccgcggaa tgctcgtcga aatatattca 840

aggagactta gcgatcaggc caccgattgc ggcctgctcc aggtgcttga cagactgagg 900

gagctcgaag aaatcgacag ccttagccat gctgaggtga gcgaagcgct caatcatgtg 960

atccaggtcc atatcgaacg tctgtcctca accgagcatt cgctcacacc ggaggcgctg 1020

gccctgtgca aaaggctact cgtcgaatac gccgaggtgc gcggccgagc ggggatgcag 1080

ctgtgtgtag atgccgccgc gctcatcgaa caaggtgagc atgccagaga tcatctatgg 1140

ccaacgatgc tccatcttgc acaggcactt gccgaccaac gtcaggcaat tcttgacatg 1200

tgtgagttcg ccgtccagga cagacagctg attggcacgg cggcggcttc gcccgagcaa 1260

gcaccggcat cgataacacc gagcgtgccg acaacgacag caggcaaatc gagcaggtca 1320

cgcaaggcac gcatgcgcac ctctgatgct tccagctcgg cagcgcccgc gcagcgggtc 1380

attgacgagc gcaacgcagc gcaaaagcag gccgacgaga tactgaaaag cacgcgtctg 1440

gagtcgttgc cggtggcaga actcggcggc gatttcatcg cgctcgccaa gcgccttggc 1500

aaggacacca ccgacataga gcgcctgatc ggcgactcca ggcgtgacgc ggcgacggct 1560

ttcgattttg ccaggacctc catgcaggac tggttcggat cgagtgagcg tctgctgcag 1620

ctcaaaagca agctccgtgc gggagatccg cgtatcgcac aactcgacac gcggctgcgt 1680

cttctgcaga ggatcgagca ggagtttgaa cggcgcgaag ccgatgcgct caagatcgat 1740

ccgcaaccgc gtgcgccgca tctgcagcgc ctgttggcga tgcatgcact ggcacgcgtc 1800

acggcgccga accgccttcc ctcggaggac gaccgtggcg gccgtggcag gctatttgaa 1860

gtgcgtatcg accacacgcc gcagtcaaat ggcgacattc ccgcgccctg gttcgtccac 1920

gtacataccg aaaaaccggt aacgcccacc gggctgcgcg cgctccacta caaggacttg 1980

gccgccgtcc acctgaagac ggccagggag gtcaacctgg gcccacgctg ggaagagatg 2040

atgcgcgccc tcggaaacac cgaggccaag gtgcaccggg caaccatcgg ctcgaagctg 2100

ctgggccagc tttgggcggc tggcgctggt gggcagcgat aa 2142

<210>2

<211>713

<212>PRT

<213> 水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）

<400>2

Met Pro Lys Ile Glu Ser Thr Lys Gln Ala Pro Pro Asp Pro Ala

5 10 15

Gln Leu Val Gln Thr Ala Pro Thr Pro Ser Gly Ser Ala Ser Val

20 25 30

Ala Ser Thr Ser Ala Asp Ser Ala Val Pro Ser Ala Gln Leu Gly

35 40 45

Gly Leu Ser Ile Arg Pro Arg Leu Leu Gly Arg Ala Ser Thr Ala

50 55 60

Asn Pro Ser Ala Ala Ser Ser Ser Asn Ala Lys Asn Val Arg Ala

65 70 75

Ala Leu Phe Ala Ala Gln Ser Val Ser Gln Gly Pro Asp Pro Ala

80 85 90

Glu Val Leu Val Lys Ala Ser Ser Arg Leu Lys Arg Phe Asn Asp

95 100 105

Leu Ala Gln Lys Val Val Pro Thr Glu Pro Ser Asp Ile Lys Ala

110 115 120

Leu Glu Ala Arg Leu Arg Ser Gly Thr Ser Ala Leu Glu Ser Ala

125 130 135

Arg Gln Ala Phe Gln Ala Leu Ala Glu Leu Asn Ile Lys Lys Arg

140 145 150

Ile Pro Val Asp Asn Ile Glu Glu His Glu Asn Phe Leu Val Pro

155 160 165

Gln Phe Ala Ile Ala Ala Ser Leu His Phe Gly Ala Cys Gln Lys

170 175 180

Met Ile Asp Gln Lys Met Ala Thr Glu Leu Gly His Val Pro Thr

185 190 195

Gln Arg Val Glu Met Val Thr Leu Ser Val Asp Ala Thr Arg Leu

200 205 210

Gln Gln Pro Glu Ser Trp Leu Ala Leu Arg Ala His Ile Leu Asn

215 220 225

Ser Leu Ala Ala Met Glu Glu Val Cys Gln Arg Ile Arg Ser Pro

230 235 240

Met Thr Gly Gln Gly Pro Arg Asp Ser Leu Lys Ala Asn Leu Pro

245 250 255

Val Val Arg Ala Met Ile Ala Ser Cys His Glu Arg Met Gln Thr

260 265 270

Val Arg Gly Met Leu Val Glu Ile Tyr Ser Arg Arg Leu Ser Asp

275 280 285

Gln Ala Thr Asp Cys Gly Leu Leu Gln Val Leu Asp Arg Leu Arg

290 295 300

Glu Leu Glu Glu Ile Asp Ser Leu Ser His Ala Glu Val Ser Glu

305 310 315

Ala Leu Asn His Val Ile Gln Val His Ile Glu Arg Leu Ser Ser

320 325 330

Thr Glu His Ser Leu Thr Pro Glu Ala Leu Ala Leu Cys Lys Arg

335 340 345

Leu Leu Val Glu Tyr Ala Glu Val Arg Gly Arg Ala Gly Met Gln

350 355 360

Leu Cys Val Asp Ala Ala Ala Leu Ile Glu Gln Gly Glu His Ala

365 370 375

Arg Asp His Leu Trp Pro Thr Met Leu His Leu Ala Gln Ala Leu

380 385 390

Ala Asp Gln Arg Gln Ala Ile Leu Asp Met Cys Glu Phe Ala Val

395 400 405

Gln Asp Arg Gln Leu Ile Gly Thr Ala Ala Ala Ser Pro Glu Gln

410 415 420

Ala Pro Ala Ser Ile Thr Pro Ser Val Pro Thr Thr Thr Ala Gly

425 430 435

Lys Ser Ser Arg Ser Arg Lys Ala Arg Met Arg Thr Ser Asp Ala

440 445 450

Ser Ser Ser Ala Ala Pro Ala Gln Arg Val Ile Asp Glu Arg Asn

455 460 465

Ala Ala Gln Lys Gln Ala Asp Glu Ile Leu Lys Ser Thr Arg Leu

470 475 480

Glu Ser Leu Pro Val Ala Glu Leu Gly Gly Asp Phe Ile Ala Leu

485 490 495

Ala Lys Arg Leu Gly Lys Asp Thr Thr Asp Ile Glu Arg Leu Ile

500 505 510

Gly Asp Ser Arg Arg Asp Ala Ala Thr Ala Phe Asp Phe Ala Arg

515 520 525

Thr Ser Met Gln Asp Trp Phe Gly Ser Ser Glu Arg Leu Leu Gln

530 535 540

Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Gly Asp Pro Arg Ile Ala Gln Leu

545 550 555

Asp Thr Arg Leu Arg Leu Leu Gln Arg Ile Glu Gln Glu Phe Glu

560 565 570

Arg Arg Glu Ala Asp Ala Leu Lys Ile Asp Pro Gln Pro Arg Ala

575 580 585

Pro His Leu Gln Arg Leu Leu Ala Met His Ala Leu Ala Arg Val

590 595 600

Thr Ala Pro Asn Arg Leu Pro Ser Glu Asp Asp Arg Gly Gly Arg

605 610 615

Gly Arg Leu Phe Glu Val Arg Ile Asp His Thr Pro Gln Ser Asn

620 625 630

Gly Asp Ile Pro Ala Pro Trp Phe Val His Val His Thr Glu Lys

635 640 645

Pro Val Thr Pro Thr Gly Leu Arg Ala Leu His Tyr Lys Asp Leu

650 655 660

Ala Ala Val His Leu Lys Thr Ala Arg Glu Val Asn Leu Gly Pro

665 670 675

Arg Trp Glu Glu Met Met Arg Ala Leu Gly Asn Thr Glu Ala Lys

680 685 690

Val His Arg Ala Thr Ile Gly Ser Lys Leu Leu Gly Gln Leu Trp

695 700 705

Ala Ala Gly Ala Gly Gly Gln Arg

710

<210> 3

<211> 2133

<212> DNA

<213> 水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(2133)

<400>3

gtgccgagat ttcgagcgac caatcaaacc ccagtggatc ccacgtcatc cactcagcca 60

gcggcggcac cacaggatgc gggggcaagc gcgagcgtgc ctaccagcat ggggcctccc 120

tccgcgcaac tcagcgggct tgccatcaga gcgtcgagtg aggccagggc ttccagagcc 180

agtgcacccg catcatcatc ggccaacgtc agggcgatgc tctttacccc ggcatctgtc 240

tcgggaggac cagatccgtt tgaggtattg aacagggcct cggccaggct gcagctgttc 300

aatcacctgg tcacaaacgt agcgccgagg gattcagggg acgcaaaatc ccttgaagca 360

agactcaggt ccggcgcttc tgcaatcgaa ttcgctcgac aaggcttgca agcgctgagc 420

gagctcaaga ttcaacgtcg catgtcatcc gccgacatcg aagcccatga gaatcgattg 480

gtttcgtctc tcgcacaagc cgcagcaatg aactatgtgt catgcgaaag aatgatcgat 540

cagaaattgg cccagggatt gggttctgcg cttacggaag gcagcgattt tgcgcagctt 600

gatatccaag ccatccgact gcagcagccg gaatcatggc atgcgttacg tgctcatctt 660

cttgatgcca ttgcggcgtt ggaagaggtt ttccgacgta tcaagtcgcc gatgacgact 720

cggacaccgt gcgactcgct gaaggcccag ctgccgatcg tcaggatgac gatggaatct 780

tgtcacacgc ggatgcaaac cgtgcgtgga gtgctgtacg aaatatattc agtaagactc 840

tccgatcaag taagtagttg ccgcatgcca ctggtgcttg atcgactgcg cgagcttgaa 900

gaagtagaca agtgcatgga cgccaaggtc ggaaaagcgg tcacggagct ggccaagatg 960

catattgaac gctttctctc aaccgagcac tcgctgacgc cggagatgct ggccatgcac 1020

aagaatgtgc ttgtcgaata cgccgagatg cgcggccgag cggcaacgca gctgtgtatg 1080

gatgccgccg cgctcattga ggaaggaggg cattccagag atcacatatg gccagcgatg 1140

ctcgatcttg cacaggcact tgccgaccaa cgtcaggcaa ttcttgacat gtgtgagttc 1200

gccgtccagg acagacagct gattggcgca gcggcggctt cgcccgagca agcaccggca 1260

tcgataacac cgagcgtgcc gacaacgaca gcaggtaaat cgagcaggtc acgcaaggca 1320

cgcatgcgca cctctgatgc ttccagctcg gcagcgcccg cgcagcgggt cattgacgag 1380

cgcaacgcag cgcaaaagca ggccgacgag atactgaaaa gcacgcgtct ggagtcgttg 1440

ccggtggcag aactcggcgg cgatttcatc gcgctcgcca agcgccttgg caaggacacc 1500

accgacatag agcgcctgat cggcgactcc aggcgtgacg cggcgacggc tttcgatttt 1560

gccaggacct ccatgcagga ctggttcgga tcgagtgagc gtctgctgca gctcaaaagc 1620

aagctccgtg cgggagatcc gcgcatcgca caactcgaca cgcggctgcg tcttctgcag 1680

aggatcgagc aggagtttga acggcgcgaa gccgatgcgc tcaagatcga tccgcaaccg 1740

cgtgcgccgc atctgcagcg cctgttggcg atgcatgcac tggcacgcgt cacggcgccg 1800

aaccgccttc cctcggagga cgaccgtggc ggccgtggca ggctatttga agtgcgtatc 1860

gaccacacgc cgcagtcaaa tggcgacatt cccgcgccct ggttcgtcca cgtacatacc 1920

gaaaaaccgg taacgcccac cgggctgcgc gcgctccact acaaggactt ggccgccgtc 1980

cacctgaaga cggccaggga ggtcaacctg ggcccacgct gggaagagat gatgcgcgcc 2040

ctcggaaaca ccgaggccaa ggtgcaccgg gcaaccatcg gctcgaagct gctgggccag 2100

ctttgggcgg ctggcgctgg cgggcaacaa taa 2133

<210>4

<211>710

<212>PRT

<213> 水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）

<400>4

Met Pro Arg Phe Arg Ala Thr Asn Gln Thr Pro Val Asp Pro Thr

5 10 15

Ser Ser Thr Gln Pro Ala Ala Ala Pro Gln Asp Ala Gly Ala Ser

20 25 30

Ala Ser Val Pro Thr Ser Met Gly Pro Pro Ser Ala Gln Leu Ser

35 40 45

Gly Leu Ala Ile Arg Ala Ser Ser Glu Ala Arg Ala Ser Arg Ala

50 55 60

Ser Ala Pro Ala Ser Ser Ser Ala Asn Val Arg Ala Met Leu Phe

65 70 75

Thr Pro Ala Ser Val Ser Gly Gly Pro Asp Pro Phe Glu Val Leu

80 85 90

Asn Arg Ala Ser Ala Arg Leu Gln Leu Phe Asn His Leu Val Thr

95 100 105

Asn Val Ala Pro Arg Asp Ser Gly Asp Ala Lys Ser Leu Glu Ala

110 115 120

Arg Leu Arg Ser Gly Ala Ser Ala Ile Glu Phe Ala Arg Gln Gly

125 130 135

Leu Gln Ala Leu Ser Glu Leu Lys Ile Gln Arg Arg Met Ser Ser

140 145 150

Ala Asp Ile Glu Ala His Glu Asn Arg Leu Val Ser Ser Leu Ala

155 160 165

Gln Ala Ala Ala Met Asn Tyr Val Ser Cys Glu Arg Met Ile Asp

170 175 180

Gln Lys Leu Ala Gln Gly Leu Gly Ser Ala Leu Thr Glu Gly Ser

185 190 195

Asp Phe Ala Gln Leu Asp Ile Gln Ala Ile Arg Leu Gln Gln Pro

200 205 210

Glu Ser Trp His Ala Leu Arg Ala His Leu Leu Asp Ala Ile Ala

215 220 225

Ala Leu Glu Glu Val Phe Arg Arg Ile Lys Ser Pro Met Thr Thr

230 235 240

Arg Thr Pro Cys Asp Ser Leu Lys Ala Gln Leu Pro Ile Val Arg

245 250 255

Met Thr Met Glu Ser Cys His Thr Arg Met Gln Thr Val Arg Gly

260 265 270

Val Leu Tyr Glu Ile Tyr Ser Val Arg Leu Ser Asp Gln Val Ser

275 280 285

Ser Cys Arg Met Pro Leu Val Leu Asp Arg Leu Arg Glu Leu Glu

290 295 300

Glu Val Asp Lys Cys Met Asp Ala Lys Val Gly Lys Ala Val Thr

305 310 315

Glu Leu Ala Lys Met His Ile Glu Arg Phe Leu Ser Thr Glu His

320 325 330

Ser Leu Thr Pro Glu Met Leu Ala Met His Lys Asn Val Leu Val

335 340 345

Glu Tyr Ala Glu Met Arg Gly Arg Ala Ala Thr Gln Leu Cys Met

350 355 360

Asp Ala Ala Ala Leu Ile Glu Glu Gly Gly His Ser Arg Asp His

365 370 375

Ile Trp Pro Ala Met Leu Asp Leu Ala Gln Ala Leu Ala Asp Gln

380 385 390

Arg Gln Ala Ile Leu Asp Met Cys Glu Phe Ala Val Gln Asp Arg

395 400 405

Gln Leu Ile Gly Ala Ala Ala Ala Ser Pro Glu Gln Ala Pro Ala

410 415 420

Ser Ile Thr Pro Ser Val Pro Thr Thr Thr Ala Gly Lys Ser Ser

425 430 435

Arg Ser Arg Lys Ala Arg Met Arg Thr Ser Asp Ala Ser Ser Ser

440 445 450

Ala Ala Pro Ala Gln Arg Val Ile Asp Glu Arg Asn Ala Ala Gln

455 460 465

Lys Gln Ala Asp Glu Ile Leu Lys Ser Thr Arg Leu Glu Ser Leu

470 475 480

Pro Val Ala Glu Leu Gly Gly Asp Phe Ile Ala Leu Ala Lys Arg

485 490 495

Leu Gly Lys Asp Thr Thr Asp Ile Glu Arg Leu Ile Gly Asp Ser

500 505 510

Arg Arg Asp Ala Ala Thr Ala Phe Asp Phe Ala Arg Thr Ser Met

515 520 525

Gln Asp Trp Phe Gly Ser Ser Glu Arg Leu Leu Gln Leu Lys Ser

530 535 540

Lys Leu Arg Ala Gly Asp Pro Arg Ile Ala Gln Leu Asp Thr Arg

545 550 555

Leu Arg Leu Leu Gln Arg Ile Glu Gln Glu Phe Glu Arg Arg Glu

560 565 570

Ala Asp Ala Leu Lys Ile Asp Pro Gln Pro Arg Ala Pro His Leu

575 580 585

Gln Arg Leu Leu Ala Met His Ala Leu Ala Arg Val Thr Ala Pro

590 595 600

Asn Arg Leu Pro Ser Glu Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly Arg Leu

605 610 615

Phe Glu Val Arg Ile Asp His Thr Pro Gln Ser Asn Gly Asp Ile

620 625 630

Pro Ala Pro Trp Phe Val His Val His Thr Glu Lys Pro Val Thr

635 640 645

Pro Thr Gly Leu Arg Ala Leu His Tyr Lys Asp Leu Ala Ala Val

650 655 660

His Leu Lys Thr Ala Arg Glu Val Asn Leu Gly Pro Arg Trp Glu

665 670 675

Glu Met Met Arg Ala Leu Gly Asn Thr Glu Ala Lys Val His Arg

680 685 690

Ala Thr Ile Gly Ser Lys Leu Leu Gly Gln Leu Trp Ala Ala Gly

695 700 705

Ala Gly Gly Gln Gln

710

<210>5

<211>32

<212>DNA

<213> 人工序列

<400>5

cccaagcttg tgcctaaaat tgaatcgacc aa 32

<210>6

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<400>6

gctctagatt atcgctgccc accagcgcca gc 32

<210>7

<211>32

<212>DNA

<213> 人工序列

<400>7

cccaagcttg tgccgagatt tcgagcgacc aa 32

<210>8

<211>32

<212>DNA

<213> 人工序列

<400>8

gctctagatt attgttgccc gccagcgcca gc 32