本發(fā)明涉及一種天山堇菜中生物堿類化合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

天山堇菜為堇菜科(violaceae)堇菜屬(viola)植物天山堇菜(violatianshanica)的干燥全草?！侗＝∷巿@》中也稱比乃非謝吉。分布于我國新疆天山、昆侖山、帕米爾高原，云南、四川、西藏，中亞地區(qū)亦有分布，是維吾醫(yī)藥中常用藥物。天山堇菜為多年生草本；其形態(tài)特征：根莖多粗短，主根圓柱狀或倒長圓錐形，黃白或淡棕色；葉基生，葉片卵狀或長圓狀卵形，先端鈍，全緣或具圓齒，具短腺毛；花單生于花梗頂端，花梗稍超出根生葉或等長，花瓣5枚，倒卵形，白色具淡紫色條紋。干燥藥材多皺縮；粗短根莖(2-4mm)具環(huán)紋及葉柄殘基；粗壯主根(0.5-2cm)灰白色至淺黃褐色；花灰藍色。天山堇菜收錄于：《中華本草》、《維吾爾藥志》、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·維吾爾藥分冊》、《維吾爾藥材標準》?！吨腥A本草》中記載的功能與主治：生濕生寒，清熱解毒，消炎退燒，潤肺消腫，潤喉止咳，通利二便；主治干熱性或膽液質(zhì)性疾病，如發(fā)熱發(fā)燒，干熱性頭痛及急性胸膜炎，肺炎，咽干咳嗽，二便不利等?！栋咨珜m殿》中記載用于治療血液性質(zhì)頭痛、眼病，熱性咳嗽，胸膜炎、肺炎，尿少便秘等?！栋莸匾浪帟分杏涊d用于治療體外熱性炎腫，熱性胃炎、肝炎，白喉，小兒癲癇，熱性頭痛，皮膚瘙癢等。

天山堇菜的藥理學(xué)研究較少，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明天山堇菜具有抗炎作用，抗氧化活性，抗菌活性。同屬的其他植物研究比較多，有抗乙型肝炎活性，免疫抑制活性，抗炎活性，抑制哮喘作用，細胞毒活性，抗飲食性肥胖，抗凝血活性，抗瘧原蟲活性，殺菌活性，降壓降脂活性，肌松弛及鎮(zhèn)靜催眠活性，膠原酶抑制活性，促胃腸運動及瀉下作用，退燒及抗驚厥活性，抗氧化活性，改善慢性失眠作用，酪氨酸酶及膽堿酯酶抑制活性等。

天山堇菜的化學(xué)成分研究較少，已報道了4個苯丙素類化合物；同屬其他植物的化學(xué)成分報道較多，有三萜及其皂苷，倍半萜，香豆素，雙香豆素，黃酮，水楊酸衍生物，苯丙素類，醌類，環(huán)多肽等。

本發(fā)明對天山堇菜的生物堿成分進行的充分的分析分離研究，從中分離得到生物堿類新化合物：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于，提供一種天山堇菜中生物堿類化合物及其制備方法，該化合物1為6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮；化合物2為6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮；化合物3為4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；化合物4為8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；化合物5為(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；化合物7為1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；化合物8為4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；化合物9為2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；化合物10為7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮。該方法采用甲醇溶劑進行提取，通過酸溶堿沉法制得總堿，通過兩相溶劑分配法得到上相部位，再利用葡聚糖凝膠色譜法，正反相色譜法分離得到10個生物堿類新化合物。

本發(fā)明所述的一種天山堇菜中生物堿類化合物，該化合物結(jié)構(gòu)式為：

其中：

化合物1名稱為6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮；

化合物2名稱為6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮；

化合物3名稱為4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；

化合物4名稱為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；

化合物5名稱為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

化合物6名稱為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；

化合物7名稱為：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；

化合物8名稱為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；

化合物9名稱為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

化合物10名稱為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮。

所述天山堇菜中生物堿類化合物的制備方法，按下列步驟進行：

a、將天山堇菜全草粉碎，用無水甲醇溶劑冷浸、回流、滲漉、超聲或微波提取2-10次，合并提取液并干燥，得到總提取物；

b、將步驟a中的總提取物用氯仿溶解，加入水進行萃取，收集氯仿層并干燥得氯仿部位，將氯仿部位用0.5n的硫酸溶解過濾，收集濾液，濾液用乙酸乙酯萃取以去除非生物堿雜質(zhì)，去雜質(zhì)的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)ph至10-14，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到總生物堿；

d、將步驟c中的總生物堿用體積比5:5:5:5-1:5:1:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的兩相溶劑系統(tǒng)進行分配，收集上相有機相，干燥得到上相部位，再將上相部位進行硅膠柱層析分段分離，以體積比100:0，85:15，70:30，55:45的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑進行梯度洗脫，得到4個部位為v100，v85，v70和v55；

e、將步驟d中的v55部位用200-300目正相硅膠分離，按體積比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫，得到9個組分為：v551-v559，將v556組分利用反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為36％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，收集并干燥64.5至66分鐘的流份，即得化合物4為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；將v558組分經(jīng)反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為35％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min分離，收集并干燥24.5至26分鐘的流份，即得化合物8為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；將v557組分經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為57％的甲醇水溶液；流速：3.0ml/min分離，收集并干燥14至15分鐘的流份，即得化合物9為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

f、將步驟d中的v70部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到v70-1組分；v70-1組分利用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為34％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥14.5分鐘至16分鐘的流份v70-1-4以及20分鐘至21分鐘的流份v70-1-7；將流份v70-1-4繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為59％的甲醇水溶液；流速：2.8ml/min進行純化，收集18.5至19.5分鐘的流份，干燥即得化合物10為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；將流份v70-1-7繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行純化，收集38至39分鐘的流份，干燥即得化合物5為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

g、將步驟d中的v85部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到4個組分v85-1，v85-2，v85-3，v85-4；將組分v85-1經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：0-35分鐘，濃度為30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥15分鐘至16分鐘的流份v85-1-5以及23分鐘至24.5分鐘的流份v85-1-9；將v85-1-5經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為47％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到化合物7為：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；將v85-1-9經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為64％的乙腈水溶液；流速：3.7ml/min分離，得到化合物3為4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；將組分v85-2經(jīng)反相色譜譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度30％的乙腈水溶液；流速：3.0ml/min分離，分別收集并干燥38.5分鐘至40分鐘的流份，得化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；將組分v85-4經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度65％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到化合物1為：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮和化合物2為：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮。

本發(fā)明所述的一種天山堇菜中生物堿類化合物及其制備方法，其中生物堿類新化合物1，2，3，4，5，6，7，8，9，10的結(jié)構(gòu)鑒定：

化合物1：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)323(3.74)nm，295(3.81)nm，220(4.48)nm，201(4.69)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺368.1131；分子式：c20h17no6；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表1；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物2：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)323(3.35)nm，284(3.34)nm，201(4.43)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺384.1457；分子式：c21h21no6；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表1；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物3：4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；黃色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)357(4.15)nm，251(3.88)nm；hr-esi(+)ms：[m+h-nh3]⁺341.2244；分子式：c21h31n3o2；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表1；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物4：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)305(2.36)nm，205(3.68)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺303.2088；分子式：c18h26n2o2；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表2；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物5：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)265(4.31)nm；hr-esi(+)ms：[m+h-h2o]⁺285.1972；分子式：c18h26n2o2；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表2；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物6：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；黃色片晶，uv(meoh)λmax(logε)345(3.45)nm，332(3.44)nm，282(3.89)nm，250(4.73)nm，211(4.03)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺297.1618；分子式：c18h20n2o2；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表2；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物7：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；微黃色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)287(3.85)nm，249(4.64)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺283.1802；分子式：c18h22n2o；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表2；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物8：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)331(4.35)nm，269(4.52)nm，234(4.56)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺315.1717；分子式：c18h22n2o3；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表3；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物9：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；黃色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)365(3.67)nm，240(3.67)nm，208(3.76)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺319.2010；分子式：c18h26n2o3；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表3；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物10：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；黃色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)394(3.09)nm，245(4.00)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺301.1905；分子式：c18h24n2o2；¹h和¹³c核磁數(shù)據(jù)見表3；經(jīng)hmbc相關(guān)譜解析確定化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

表1.生物堿化合物1，2，3的氫碳核磁數(shù)據(jù)

表2.生物堿化合物4-7的氫碳核磁數(shù)據(jù)

表3.生物堿化合物8-10的氫碳核磁數(shù)據(jù)

附圖說明

圖1為本發(fā)明生物堿類化合物1-10的hmbc相關(guān)結(jié)構(gòu)解析圖。

圖2為本發(fā)明生物堿化合物1的¹h-nmr圖；

圖3為本發(fā)明生物堿化合物1的¹³c-nmr圖；

圖4為本發(fā)明生物堿化合物2的¹h-nmr圖；

圖5為本發(fā)明生物堿化合物2的¹³c-nmr圖；

圖6為本發(fā)明生物堿化合物3的¹h-nmr圖；

圖7為本發(fā)明生物堿化合物3的¹³c-nmr圖；

圖8為本發(fā)明生物堿化合物4的¹h-nmr圖；

圖9為本發(fā)明生物堿化合物4的¹³c-nmr圖；

圖10為本發(fā)明生物堿化合物5的¹h-nmr圖；

圖11為本發(fā)明生物堿化合物5的¹³c-nmr圖；

圖12為本發(fā)明生物堿化合物6的¹h-nmr圖；

圖13為本發(fā)明生物堿化合物6的¹³c-nmr圖；

圖14為本發(fā)明生物堿化合物7的¹h-nmr圖；

圖15為本發(fā)明生物堿化合物7的¹³c-nmr圖；

圖16為本發(fā)明生物堿化合物8的¹h-nmr圖；

圖17為本發(fā)明生物堿化合物8的¹³c-nmr圖；

圖18為本發(fā)明生物堿化合物9的¹h-nmr圖；

圖19為本發(fā)明生物堿化合物9的¹³c-nmr圖；

圖20為本發(fā)明生物堿化合物10的¹h-nmr圖；

圖21為本發(fā)明生物堿化合物10的¹³c-nmr圖。

具體實施方式

實施例1

a、將粉碎的天山堇菜全草粉末9.5kg，加入20升無水甲醇室溫浸泡24小時，重復(fù)提取10次，合并提取液并干燥，得到總提物1.5kg；

b、將步驟a中的總提取物用4升氯仿溶解，加入4升水進行萃取，收集氯仿層并干燥得氯仿部位，將氯仿部位用2升0.5n的硫酸溶解過濾，收集濾液，濾液用乙酸乙酯萃取以去除非生物堿雜質(zhì)，去雜質(zhì)的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)ph至10，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到總生物堿70克；

d、將步驟c中的總生物堿用體積比3:5:3:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的兩相溶劑系統(tǒng)進行分配，收集上相有機相，干燥得到上相部位47克，再將上相部位進行硅膠柱層析分段分離，以體積比100:0，85:15，70:30，55:45的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑進行梯度洗脫，得到4個部位為v100，v85，v70和v55；

e、將步驟d中的v55部位用200-300目正相硅膠分離，按體積比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫，得到9個組分為：v551-v559，將v55-6組分利用反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為36％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，收集并干燥64.5至66分鐘的流份，即得化合物4為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；將v558組分經(jīng)反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為35％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min分離，收集并干燥24.5至26分鐘的流份，即得化合物8為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；將v557組分經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為57％甲醇；流速：3.0ml/min分離，收集并干燥14至15分鐘的流份，即得化合物9為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

f、將步驟d中的v70部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到v70-1組分；將v70-1組分利用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為34％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥14.5分鐘至16分鐘的流份v70-1-4以及20分鐘至21分鐘的流份v70-1-7；將流份v70-1-4繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為59％的甲醇水溶液；流速：2.8ml/min進行純化，收集18.5至19.5分鐘的流份，干燥即得化合物10為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；將流份v70-1-7繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行純化，收集38至39分鐘的流份，干燥即得化合物5為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

g、將步驟d中的v85部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到4個組分v85-1，v85-2，v85-3，v85-4；將組分v85-1經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：0-35分鐘，濃度為30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥15分鐘至16分鐘的流份v85-1-5以及23分鐘至24.5分鐘的流份v85-1-9；將v85-1-5經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為47％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為9.6min的化合物7：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；將v85-1-9經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為64％的乙腈水溶液；流速：3.7ml/min分離，得到保留時間為8.1min的化合物3：4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；將組分v85-2經(jīng)反相色譜譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度30％的乙腈水溶液；流速：3.0ml/min分離，分別收集并干燥38.5分鐘至40分鐘的流份，得化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；將組分v85-4經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度65％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為13.0min的化合物1：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮，以及保留時間為11.2min的化合物2：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮。

實施例2：

a、將粉碎的天山堇菜全草粉末9.5kg，加入20升無水甲醇回流4小時，重復(fù)提取6次，合并提取液并干燥，得到總提物2.0kg；

b、將步驟a中的總提取物用4升氯仿溶解，加入4升水進行萃取，收集氯仿層并干燥得氯仿部位，將氯仿部位用2升0.5n的硫酸溶解過濾，收集濾液，濾液用乙酸乙酯萃取以去除非生物堿雜質(zhì)，去雜質(zhì)的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)ph至11，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到總生物堿77克；

d、將步驟c中的總生物堿用體積比5:5:5:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的兩相溶劑系統(tǒng)進行分配，收集上相有機相，干燥得到上相部位32克，再將上相部位進行正相硅膠(100-200目)柱層析分段分離，以體積比100:0，85:15，70:30，55:45的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑進行梯度洗脫，得到4個部位為v100，v85，v70和v55；

e、將步驟d中的v55部位用200-300目正相硅膠分離，按體積比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫，得到9個組分為：v551-v559，將v55-6組分利用反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為36％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，收集并干燥64.5至66分鐘的流份，即得化合物4為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；將v558組分經(jīng)反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為35％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min分離，收集并干燥24.5至26分鐘的流份，即得化合物8為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；將v557組分經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為57％甲醇；流速：3.0ml/min分離，收集并干燥14至15分鐘的流份，即得化合物9為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

f、將步驟d中的v70部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到v70-1組分；將v70-1組分利用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為34％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥14.5分鐘至16分鐘的流份v70-1-4以及20分鐘至21分鐘的流份v70-1-7；將流份v70-1-4繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為59％的甲醇水溶液；流速：2.8ml/min進行純化，收集18.5至19.5分鐘的流份，干燥即得化合物10為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；將流份v70-1-7繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行純化，收集38至39分鐘的流份，干燥即得化合物5為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

g、將步驟d中的v85部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到4個組分v85-1，v85-2，v85-3，v85-4；將組分v85-1經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：0-35分鐘，濃度為30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥15分鐘至16分鐘的流份v85-1-5以及23分鐘至24.5分鐘的流份v85-1-9；將v85-1-5經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為47％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為9.6min的化合物7：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；將v85-1-9經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為64％的乙腈水溶液；流速：3.7ml/min分離，得到保留時間為8.1min的化合物3：4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；將組分v85-2經(jīng)反相色譜譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度30％的乙腈水溶液；流速：3.0ml/min分離，分別收集并干燥38.5分鐘至40分鐘的流份，得化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；將組分v85-4經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度65％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為13.0min的化合物1：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮，以及保留時間為11.2min的化合物2：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮。

實施例3：

a、將粉碎的天山堇菜全草粉末9.5kg，加入20升無水甲醇滲漉24小時，重復(fù)提取8次，合并提取液并干燥，得到總提物1.7kg；

b、將步驟a中的總提取物用4升氯仿溶解，加入4升水進行萃取，收集氯仿層并干燥得氯仿部位，將氯仿部位用2升0.5n的硫酸溶解過濾，收集濾液，濾液用乙酸乙酯萃取以去除非生物堿雜質(zhì)，去雜質(zhì)的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)ph至12，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到總生物堿72克；

d、將步驟c中的總生物堿用體積比1:5:1:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的兩相溶劑系統(tǒng)進行分配，收集上相有機相，干燥得到上相部位55克，再將上相部位進行硅膠柱層析分段分離，以體積比100:0，85:15，70:30，55:45的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑進行梯度洗脫，得到4個部位為v100，v85，v70和v55；

e、將步驟d中的v55部位用200-300目正相硅膠分離，按體積比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫，得到9個組分為：v551-v559，將v55-6組分利用反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為36％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，收集并干燥64.5至66分鐘的流份，即得化合物4為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；將v558組分經(jīng)反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為35％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min分離，收集并干燥24.5至26分鐘的流份，即得化合物8為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；將v557組分經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為57％甲醇；流速：3.0ml/min分離，收集并干燥14至15分鐘的流份，即得化合物9為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

f、將步驟d中的v70部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到v70-1組分；將v70-1組分利用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為34％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥14.5分鐘至16分鐘的流份v70-1-4以及20分鐘至21分鐘的流份v70-1-7；將流份v70-1-4繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為59％的甲醇水溶液；流速：2.8ml/min進行純化，收集18.5至19.5分鐘的流份，干燥即得化合物10為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；將流份v70-1-7繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行純化，收集38至39分鐘的流份，干燥即得化合物5為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

g、將步驟d中的v85部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到4個組分v85-1，v85-2，v85-3，v85-4；將組分v85-1經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：0-35分鐘，濃度為30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥15分鐘至16分鐘的流份v85-1-5以及23分鐘至24.5分鐘的流份v85-1-9；將v85-1-5經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為47％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為9.6min的化合物7：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；將v85-1-9經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為64％的乙腈水溶液；流速：3.7ml/min分離，得到保留時間為8.1min的化合物3：4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；將組分v85-2經(jīng)反相色譜譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度30％的乙腈水溶液；流速：3.0ml/min分離，分別收集并干燥38.5分鐘至40分鐘的流份，得化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；將組分v85-4經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度65％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為13.0min的化合物1：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮，以及保留時間為11.2min的化合物2：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮。

實施例4

a、將粉碎的天山堇菜全草粉末9.5kg，加入20升無水甲醇超聲3小時，重復(fù)提取4次，合并提取液并干燥，得到總提物1.55kg；

b、將步驟a中的總提取物用4升氯仿溶解，加入水4升進行萃取，收集氯仿層并干燥得氯仿部位，將氯仿部位用2升0.5n的硫酸溶解過濾，收集濾液，濾液用乙酸乙酯萃取以去除非生物堿雜質(zhì)，去雜質(zhì)的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)ph至13，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到總生物堿64克；

d、將步驟c中的總生物堿用體積比2:5:2:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的兩相溶劑系統(tǒng)進行分配，收集上相有機相，干燥得到上相部位49克，再將上相部位進行硅膠柱層析分段分離，以體積比100:0，85:15，70:30，55:45的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑進行梯度洗脫，得到4個部位為v100，v85，v70和v55；

e、將步驟d中的v55部位用200-300目正相硅膠分離，按體積比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫，得到9個組分為：v551-v559，將v55-6組分利用反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為36％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，收集并干燥64.5至66分鐘的流份，即得化合物4為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；將v558組分經(jīng)反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為35％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min分離，收集并干燥24.5至26分鐘的流份，即得化合物8為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；將v557組分經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為57％甲醇；流速：3.0ml/min分離，收集并干燥14至15分鐘的流份，即得化合物9為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

f、將步驟d中的v70部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到v70-1組分；將v70-1組分利用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為34％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥14.5分鐘至16分鐘的流份v70-1-4以及20分鐘至21分鐘的流份v70-1-7；將流份v70-1-4繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為59％的甲醇水溶液；流速：2.8ml/min進行純化，收集18.5至19.5分鐘的流份，干燥即得化合物10為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；將流份v70-1-7繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行純化，收集38至39分鐘的流份，干燥即得化合物5為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

g、將步驟d中的v85部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到4個組分v85-1，v85-2，v85-3，v85-4；將組分v85-1經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：0-35分鐘，濃度為30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥15分鐘至16分鐘的流份v85-1-5以及23分鐘至24.5分鐘的流份v85-1-9；將v85-1-5經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為47％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為9.6min的化合物7：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；將v85-1-9經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為64％的乙腈水溶液；流速：3.7ml/min分離，得到保留時間為8.1min的化合物3：4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；將組分v85-2經(jīng)反相色譜譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度30％的乙腈水溶液；流速：3.0ml/min分離，分別收集并干燥38.5分鐘至40分鐘的流份，得化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；將組分v85-4經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度65％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為13.0min的化合物1：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮，以及保留時間為11.2min的化合物2：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮。

實施例5

a、將粉碎的天山堇菜全草粉末9.5kg，加入20升無水甲醇微波1小時，重復(fù)提取2次，合并提取液并干燥，得到總提物1.1kg。

b、將步驟a中的總提取物用4升氯仿溶解，加入4升水進行萃取，收集氯仿層并干燥得氯仿部位，將氯仿部位用2升0.5n的硫酸溶解過濾，收集濾液，濾液用乙酸乙酯萃取以去除非生物堿雜質(zhì)，去雜質(zhì)的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)ph至14，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到總生物堿48克；

d、將步驟c中的總生物堿用體積比4:5:4:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的兩相溶劑系統(tǒng)進行分配，收集上相有機相，干燥得到上相部位25克，再將上相部位進行硅膠柱層析分段分離，以體積比100:0，85:15，70:30，55:45的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑進行梯度洗脫，得到4個部位為v100，v85，v70和v55；

e、將步驟d中的v55部位用200-300目正相硅膠分離，按體積比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的環(huán)己烷:乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫，得到9個組分為：v551-v559，將v55-6組分利用反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為36％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，收集并干燥64.5至66分鐘的流份，即得化合物4為：8a-羥基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亞甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氫-3h-吡咯并[3,2-g]異喹啉-3-酮；將v558組分經(jīng)反相色譜柱：xselectcshc185μm10×250mm；溶劑：濃度為35％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min分離，收集并干燥24.5至26分鐘的流份，即得化合物8為：4-羥基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氫吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；將v557組分經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為57％甲醇；流速：3.0ml/min分離，收集并干燥14至15分鐘的流份，即得化合物9為：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氫-3h-吡啶并[3,4-b]氮雜卓-3,5(4h)-二酮；

f、將步驟d中的v70部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到v70-1組分；將v70-1組分利用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為34％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥14.5分鐘至16分鐘的流份v70-1-4以及20分鐘至21分鐘的流份v70-1-7；將流份v70-1-4繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為59％的甲醇水溶液；流速：2.8ml/min進行純化，收集18.5至19.5分鐘的流份，干燥即得化合物10為：7-(4-羥基-2,2,4-三甲基-3,4-二氫-2h-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氫喹啉-4(1h)-酮；將流份v70-1-7繼續(xù)用反相色譜柱：ymcpydrospherec185μm10×250mm；溶劑：濃度為52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0ml/min進行純化，收集38至39分鐘的流份，干燥即得化合物5為：(z)-6-(2-羥基-2-甲基亞丙基)-7-亞氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氫異喹啉-4(3h)-酮；

g、將步驟d中的v85部位以無水甲醇為溶劑，經(jīng)葡聚糖凝膠lh-20分離得到4個組分v85-1，v85-2，v85-3，v85-4；將組分v85-1經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：0-35分鐘，濃度為30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0ml/min進行分離，分別收集并干燥15分鐘至16分鐘的流份v85-1-5以及23分鐘至24.5分鐘的流份v85-1-9；將v85-1-5經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為47％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為9.6min的化合物7：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4(3h)-酮；將v85-1-9經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度為64％的乙腈水溶液；流速：3.7ml/min分離，得到保留時間為8.1min的化合物3：4-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-亞氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氫-8h-環(huán)戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；將組分v85-2經(jīng)反相色譜譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度30％的乙腈水溶液；流速：3.0ml/min分離，分別收集并干燥38.5分鐘至40分鐘的流份，得化合物6為：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氫吡啶并[3,4-g]異喹啉-4,9-二酮；將組分v85-4經(jīng)反相色譜柱：ymcpackproc185μm10×250mm；溶劑：濃度65％的乙腈水溶液；流速：3.2ml/min分離，得到保留時間為13.0min的化合物1：6-(6-甲基-5,6,7,8-四氫-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-g]異喹啉-5-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮，以及保留時間為11.2min的化合物2：6-(6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)-[1,3]二氧雜環(huán)戊烯并[4,5-e]異苯并呋喃-8(6h)-酮。