本發(fā)明涉及融合蛋白技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是常見(jiàn)且威脅人們生命和生活質(zhì)量的最為嚴(yán)重疾病，由病毒感染而引起的慢性疾病更是困擾世界的難題。當(dāng)前針對(duì)癌癥的臨床應(yīng)用藥物存在著各種不足，例如化療藥物副作用大，靶向藥物容易產(chǎn)生耐藥性(currpharmdes.2010，16:3-10)，免疫檢查點(diǎn)抑制劑有效率低(nengljmed2012，366:2443-2454)，嵌合抗原受體t(car-t)細(xì)胞療法又有細(xì)胞因子風(fēng)暴和復(fù)發(fā)率高的缺點(diǎn)(curropinpediatr.2017，29:27-33)。中國(guó)hbv(乙肝病毒)感染的人群達(dá)上億人(apjcp,2011，12:1405-1408)，長(zhǎng)期的病毒感染還會(huì)導(dǎo)致肝硬化、aids、子宮頸癌、肝癌等更為嚴(yán)重的疾病(pnas2012，109:1802-1829)，而市場(chǎng)上還缺乏治療由hbv病毒引起疾病的有效藥物(clinicalscience2013，124:77-85)。因此，發(fā)現(xiàn)高效低毒新型治療癌癥與慢性病毒感染的藥物，減少死亡率，提高患者的生活質(zhì)量，是我國(guó)乃至世界醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域最為迫切的課題和需求。

腫瘤的發(fā)生是由于機(jī)體細(xì)胞分裂過(guò)程中發(fā)生基因突變，突變細(xì)胞的生長(zhǎng)失去調(diào)節(jié)控制的結(jié)果。如果腫瘤細(xì)胞不能在短期內(nèi)被清除，會(huì)逐漸造成腫瘤抗原特異性t細(xì)胞的功能性衰竭(naturemedicine1999，5:677-685)，形成對(duì)腫瘤的耐受，免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞不再敏感，造成腫瘤進(jìn)一步的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，形成癌癥(pnas.2002，99:12293-7)。由病毒感染導(dǎo)致的慢性疾病的發(fā)生也是抗原特異性細(xì)胞衰竭的結(jié)果(trendsimmunol.2014，35:51-60；blood2007，109:4671-4678；celldeathanddisease2015，6:e1694)。研究表明，大部分腫瘤侵潤(rùn)性淋巴細(xì)胞(til)和抗病毒特異性t細(xì)胞都表達(dá)免疫抑制性受體(pnas2010，107:7875-7880；ji2007，178:2714-2720)，處于衰竭狀態(tài)，喪失了特異性識(shí)別與殺傷抗原陽(yáng)性靶細(xì)胞的功能。衰竭性t細(xì)胞喪失分泌細(xì)胞因子的能力，如伽馬干擾素(ifn-γ)等(blood2013，121:1367-1376；j.biomed.biotechnol.2011，451694)。即使機(jī)體內(nèi)存在大量的特異性t細(xì)胞，衰竭的免疫細(xì)胞也不能清除抗原陽(yáng)性靶細(xì)胞(jimmunol2005；175:6169-6176)。在表型上，衰竭性t細(xì)胞普遍高表達(dá)免疫抑制檢查點(diǎn)受體，例如程序性死亡受體(pd-1)，程序性死亡配體(pd-l)，t細(xì)胞免疫球蛋白3(tim-3)，細(xì)胞毒t淋巴細(xì)胞抗原4(ctla-4)和淋巴細(xì)胞活化基因3(lag-3)等(natimmunol.2011；12:492-9)。這些信號(hào)通路的激活會(huì)抑制t細(xì)胞的擴(kuò)增，降低效應(yīng)t細(xì)胞的功能，促進(jìn)t細(xì)胞的凋亡，引起免疫耐受(jclininvest.2011，121:2350-2360)。所以，激活這一類(lèi)抗原特異性的免疫細(xì)胞群體，讓他們重新恢復(fù)殺滅抗原陽(yáng)性靶細(xì)胞的功能，才能清除腫瘤或病毒感染細(xì)胞(trendsimmunol.2015；36:265-276)，最終達(dá)到治愈的目的。

抗體可以特異性地識(shí)別靶細(xì)胞表面的蛋白抗原，檢查點(diǎn)抑制性抗體可以阻抑衰竭性細(xì)胞表面的免疫抑制性信號(hào)，例如通過(guò)pd-1抗體pembrolizumab和nivolumab與pd-1的結(jié)合防止抑制性信號(hào)的傳導(dǎo)與激活，恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞的功能，已經(jīng)在臨床上產(chǎn)生治療癌癥的臨床效果，尤其是在部分患者上獲得了腫瘤完全消失(nengljmed2012，366:2455-2465；nengljmed2012，366:2443-2454)。但是，對(duì)缺乏效應(yīng)細(xì)胞的患者臨床效果不理想(nature2014，515:568-571)，而且這種t細(xì)胞的恢復(fù)持續(xù)時(shí)間短(science2016，354:1160-1165)，患者體內(nèi)的特異性免疫細(xì)胞又會(huì)很快回到衰竭狀態(tài)(science2016，354:1165-1169)。同時(shí)，只是阻斷t細(xì)胞抑制信號(hào)不會(huì)導(dǎo)致免疫細(xì)胞數(shù)量的增加，而缺乏t效應(yīng)細(xì)胞的患者基本又不會(huì)產(chǎn)生臨床效果(nature2014，515:568-571)，限制其臨床的治療效果。

利用白細(xì)胞生長(zhǎng)因子的臨床應(yīng)用治療腫瘤具有一定的效果和不同程度的副作用(seminoncol.2015，42:539–548)。白介素2(il-2)的臨床應(yīng)用是第一個(gè)癌癥治療的免疫療法，能徹底清除腫瘤細(xì)胞，在部分癌癥患者達(dá)到完全治愈的效果(cancer2008，113:293–301；jco2005，23:133-141)。但是，細(xì)胞因子對(duì)所有表達(dá)其受體的細(xì)胞都會(huì)產(chǎn)生激活作用，從而可能激活非目的性細(xì)胞，臨床應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生一系列毒副作用，限制它的臨床應(yīng)用(ji2014，192:5451-5458)，所以目前il-2的臨床應(yīng)用范圍和療效有非常大的局限性(immunity2013，38:13-25)。利用激活性4-1bb抗體(oncology2010，37:508-516)和ox-40抗體(cancerscience200899:361-367)激活患者的免疫系統(tǒng)同樣也會(huì)產(chǎn)生副作用。同樣，利用激活性配體4-1bbl和ox-40l也會(huì)激活t細(xì)胞，但這些作用都不能針對(duì)衰竭的特異性細(xì)胞(j.leukoc.biol.21011，89:989–999)

截止目前，還沒(méi)有一種既能針對(duì)性地識(shí)別衰竭的特異性t細(xì)胞，又能恢復(fù)其功能和擴(kuò)增其數(shù)量的蛋白藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白，其既可識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞，又能擴(kuò)增免疫細(xì)胞的數(shù)量，恢復(fù)免疫細(xì)胞的功能。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白，包含識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)和激活擴(kuò)增衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)，兩個(gè)功能區(qū)通過(guò)一定長(zhǎng)度的非功能性氨基酸片段連接，從而使兩個(gè)功能區(qū)的蛋白折疊不存在相互干擾，保證融合蛋白的雙功能特征。

為了進(jìn)一步優(yōu)化上述技術(shù)方案，本發(fā)明所采取的技術(shù)措施還包括：

優(yōu)選地，所述識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)是利用免疫檢查點(diǎn)特異性抗體識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞的表型受體，所述衰竭性免疫細(xì)胞的表型受體是具有共抑制性功能的免疫檢查點(diǎn)。

優(yōu)選地，所述衰竭性免疫細(xì)胞的表型受體包括(但不限于)pd-1、pd-l1、tim-3、ctla-4、lag-3，此類(lèi)受體基因在免疫細(xì)胞表面的過(guò)度表達(dá)，導(dǎo)致免疫細(xì)胞的衰竭和功能缺少。

優(yōu)選地，所述pd-1的氨基酸序列為seqidno：1所示序列，所述pd-l1的氨基酸序列為seqidno：2所示序列，所述tim-3的氨基酸序列為seqidno：3所示序列，所述ctla-4的氨基酸序列為seqidno：4所示序列，所述lag-3的氨基酸序列為seqidno：5所示序列。

優(yōu)選地，所述表型受體的特異性抗體包括(但不限于)pd-1抗體、ctla-4抗體、pd-l1抗體、tim-3抗體、lag-3抗體，通過(guò)抗體與受體的結(jié)合，一方面阻斷受體與其配體的結(jié)合與信號(hào)傳達(dá)，防止腫瘤組織或腫瘤微環(huán)境中檢查點(diǎn)配體對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抑制作用，同時(shí)將融合蛋白的活化功能部分?jǐn)y帶到靶細(xì)胞表面，使激活功能區(qū)更容易發(fā)生效應(yīng)，防止脫靶效應(yīng)產(chǎn)生的副作用。

優(yōu)選地，所述pd-1抗體的氨基酸序列包括seqidno：6～9所示序列，所述ctla-4抗體的氨基酸序列包括seqidno：10～11所示序列，所述pd-l1抗體的氨基酸序列包括seqidno：12～13所示序列。

優(yōu)選地，所述激活擴(kuò)增衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)用于激活衰竭性免疫細(xì)胞，其采用細(xì)胞因子或功能類(lèi)似突變體、或者表型受體的配體或功能類(lèi)似突變體、或者激活性抗體。

優(yōu)選地，所述細(xì)胞因子或功能類(lèi)似突變體包括(但不限于)il-2、il-15、il-21；其受體主要表達(dá)在t細(xì)胞和nk細(xì)胞表面。細(xì)胞因子功能類(lèi)似突變體是指在不改變其基本功能的前提下，通過(guò)氨基酸序列突變或只是利用功能區(qū)多肽，增加其對(duì)目的細(xì)胞的激活反應(yīng)，減少其對(duì)非目的細(xì)胞的作用。例如，通過(guò)il-2上氨基酸序列的改變，突變體可能降低與t調(diào)節(jié)性細(xì)胞的激活，減少對(duì)非靶細(xì)胞及器官的作用，從而減少臨床應(yīng)用的副作用。

優(yōu)選地，所述表型受體的配體或功能類(lèi)似突變體包括(但不限于)4-1bbl、ox-40l。免疫細(xì)胞表面的激活性受體可以與相應(yīng)的配體結(jié)合，通過(guò)激活與信號(hào)傳遞，達(dá)到激活與擴(kuò)增靶細(xì)胞的目的；其功能類(lèi)似突變體可能通過(guò)氨基酸序列突變或只是包含功能區(qū)部分，目的是改變與受體的親和力或者部分功能。

優(yōu)選地，所述激活性抗體包括針對(duì)4-1bb的抗體、xo-40l的抗體、cd28的抗體、cd3的抗體、cd27的抗體。通過(guò)與激活性受體上激活位點(diǎn)的結(jié)合，激活性抗體可以達(dá)到類(lèi)似于配體的功能，刺激靶細(xì)胞上的激活信號(hào)，達(dá)到擴(kuò)增靶細(xì)胞的目的。

優(yōu)選地，所述il-2的氨基酸序列為seqidno：14所示序列，所述il-15的氨基酸序列為seqidno：15所示序列，所述il-21的氨基酸序列為seqidno：16所示序列。

優(yōu)選地，所述4-1bbl的氨基酸序列為seqidno：17所示序列，所述ox-40l的氨基酸序列為seqidno：18所示序列。

優(yōu)選地，所述4-1bb的抗體的氨基酸序列包括seqidno：19～20所示序列，所述xo-40l的抗體的氨基酸序列包括seqidno：21～22所示序列。

優(yōu)選地，識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)是利用pd-1抗體識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞的表型受體pd-1，激活擴(kuò)增衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)采用il-2來(lái)激活衰竭性免疫細(xì)胞。

優(yōu)選地，一種恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白的制備步驟如下：

步驟1)由人pd-1抗體重鏈的c端和白介素2的n端氨基酸序列通過(guò)非功能氨基酸連接，組成融合蛋白重鏈構(gòu)造基因；

步驟2)將步驟1)所述的融合蛋白構(gòu)造基因和合成的pd-1抗體的輕鏈基因共轉(zhuǎn)入表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染至倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞；

步驟3)將步驟2)所述的倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞放置在孵箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，取上清液，純化后制得重組融合蛋白。

優(yōu)選地，所述人pd-1抗體重鏈為seqidno：6所示序列，所述合成的pd-1抗體的輕鏈為seqidno：7所示序列，所述白介素2為seqidno：14所示序列，所述非功能氨基酸的氨基酸序列為sggggsggggsggggsg，所述融合蛋白重鏈構(gòu)造基因?yàn)閟eqidno：23所示序列，所述表達(dá)載體為真核動(dòng)物表達(dá)載體pcdna3.1。

優(yōu)選地，所述衰竭性免疫細(xì)胞為衰竭的特異性t細(xì)胞、衰竭的nk細(xì)胞中的至少一種。

本發(fā)明還提供一種上述恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白的的應(yīng)用，該融合蛋白的醫(yī)藥用途用于非診斷或非治療目的。

優(yōu)選地，所述應(yīng)用為融合蛋白的單獨(dú)應(yīng)用或?yàn)槿诤系鞍着c化療、靶向藥物、抗體藥物、細(xì)胞治療組成的聯(lián)合應(yīng)用，以用于制備治療因免疫細(xì)胞衰竭而引起的疾病的藥物。

優(yōu)選地，所述疾病包括癌癥和慢性病毒感染疾病。

優(yōu)選地，所述癌癥包括腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、淋巴瘤、結(jié)直腸癌，肝癌、軟巢癌、頭頸部鱗癌、膀胱癌、肺癌；所述慢性病毒感染疾病中的病毒包括hiv、hbv、hcv、ebv，hpv、cmv。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明所述的融合蛋白能夠滿(mǎn)足患者免疫恢復(fù)的需要，該重組融合蛋白既能識(shí)別衰竭的免疫細(xì)胞，又能擴(kuò)增其數(shù)量，恢復(fù)其功能；且其臨床應(yīng)用可以增強(qiáng)抑制腫瘤生長(zhǎng)和控制病毒感染的功能，具有很好的臨床前景和廣泛的應(yīng)用范圍。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明一實(shí)施例中制備的重組融合蛋白的凝膠電泳分析圖：a帶為還原狀態(tài)下的蛋白，b帶為原始狀態(tài)下的蛋白，mk為蛋白標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)記。

圖2為本發(fā)明一實(shí)施例中制備的重組融合蛋白人pbmc體外試驗(yàn)cd8+t細(xì)胞的比例的示意圖：其中融合蛋白組為圖2的第1部分，pd-1抗體組為圖2的第2部分，白介素2組為圖2的第3部分。

圖3為本發(fā)明一實(shí)施例中制備的重組融合蛋白人pbmc體外試驗(yàn)pd-1+細(xì)胞在cd8+t細(xì)胞中的比例的示意圖：其中融合蛋白組為圖3的第1部分，pd-1抗體組為圖3的第2部分，白介素2組為圖3的第3部分。

圖4為本發(fā)明一實(shí)施例中的重組融合蛋白小鼠體內(nèi)試驗(yàn)cd8+t細(xì)胞和nk細(xì)胞在外周血淋巴細(xì)胞中的比例的示意圖：其中融合蛋白組為圖4的第3部分，白介素2組為圖4的第2部分，pbs對(duì)照組為圖4的第1部分。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白，包含識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)和激活擴(kuò)增衰竭性免疫細(xì)胞的功能區(qū)，兩個(gè)功能區(qū)通過(guò)一定長(zhǎng)度的非功能性氨基酸片段連接；本發(fā)明還提供了上述融合蛋白在制備治療因免疫細(xì)胞衰竭而引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來(lái)限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

本實(shí)施例為重組融合蛋白的基因構(gòu)建和生產(chǎn)純化。

根據(jù)人pd-1抗體重鏈(seqidno：6)c端和白介素2(seqidno：14)的n端氨基酸序列，通過(guò)基因合成，酶切和進(jìn)一步克隆，將兩部分通過(guò)17個(gè)非功能氨基酸(sggggsggggsggggsg)連接，組成融合蛋白重鏈構(gòu)造基因(seqidno：23)，然后轉(zhuǎn)入真核動(dòng)物表達(dá)載體pcdna3.1。通過(guò)基因合成，酶切和進(jìn)一步克隆，將pd-1抗體的輕鏈(seqidno：7)基因轉(zhuǎn)入真核動(dòng)物表達(dá)載體pcdna3.1。最后將融合蛋白的重鏈表達(dá)載體和輕鏈表達(dá)載體同時(shí)轉(zhuǎn)染到中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(cho)中。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞置于37℃、5％co2孵箱中培養(yǎng)，72小時(shí)后取上清液，進(jìn)一步通過(guò)proteina親和層析純化，最后純化的蛋白為雙功能重組融合蛋白。同時(shí)，根據(jù)pd-1抗體序列(seqidno：6、seqidno：7)和白介素2序列(seqidno：14)用上述方法制作做非融合蛋白，作為試驗(yàn)的對(duì)照。純化的蛋白經(jīng)過(guò)電泳檢測(cè)確認(rèn)分子量(圖1)，證明依據(jù)本發(fā)明設(shè)計(jì)的重組融合蛋白可以通過(guò)cho細(xì)胞生產(chǎn)。最后用分光光度計(jì)測(cè)試蛋白濃度，稀釋在pbs中，用作進(jìn)一步體內(nèi)外的活性測(cè)試及功能研究。

實(shí)施例2

本實(shí)施例為雙功能重組融合蛋白對(duì)人pbmc細(xì)胞體外培養(yǎng)的活性及功能測(cè)定。

人外周血經(jīng)利用淋巴細(xì)胞密度梯度離心法(ficoll)分離純化，在24孔板中用x-vivo15培養(yǎng)基中稀釋細(xì)胞密度到5×10⁶/ml，加入試驗(yàn)蛋白至最終濃度為2μg/ml。37℃孵育30分鐘，離心后更換x-vivo15培養(yǎng)基，至最終細(xì)胞密度為5x10⁵/ml。然后置于37℃、5％co2孵箱中培養(yǎng)72小時(shí)后取出，細(xì)胞收集后用cd8和pd-1抗體染色，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行表型測(cè)定和數(shù)據(jù)分析。圖2中顯示，與未融合的pd-1抗體(圖2的第2部分)和白介素2(圖2的第3部分)相比，融合蛋白處理(圖2的第1部分)能顯著增加培養(yǎng)細(xì)胞中cd8+細(xì)胞的比例(58.8％，52.9％，51.4％)。同時(shí)，如圖3顯示，培養(yǎng)后融合蛋白處理組中pd-1+的細(xì)胞占cd8+t細(xì)胞的比例為3.16％(圖3的第1部分)，而pd-1抗體處理組為1.53％(圖3的第2部分)，白介素2處理組為1.31％(圖3的第3部分)，所以，融合蛋白能顯著加強(qiáng)cd8+t細(xì)胞中衰竭性細(xì)胞(pd-1+)的擴(kuò)增。試驗(yàn)證明，依據(jù)本發(fā)明設(shè)計(jì)的重組融合蛋白不但能選擇性地?cái)U(kuò)增cd8+的t細(xì)胞，還能定向性擴(kuò)增衰竭性的cd8+pd-1+的細(xì)胞，達(dá)到融合蛋白的預(yù)期目的。

實(shí)施例3

本實(shí)施例為雙功能重組融合蛋白對(duì)體內(nèi)效應(yīng)細(xì)胞的影響。

小黑鼠分別通過(guò)腹腔連續(xù)3天注射融合蛋白(4μg/只/天)或白介素2(40μg/只/天)或pbs(對(duì)照組)，第4天從尾部取外周血，用抗小鼠cd8和nk1.1流式抗體染色后檢測(cè)，數(shù)據(jù)分析如圖4。與對(duì)照組(圖4的第1部分，4.0％)和白介素2組(圖4的第2部分，15.3％)相比，重組融合蛋白顯著增加了nk細(xì)胞在淋巴細(xì)胞中的比例(圖4的第3部分，27.0％)。同時(shí)，在cd8+t細(xì)胞部分，與對(duì)照組(圖4的第1部分，15.5％)相比，原生性白介素2沒(méi)有增加cd8+細(xì)胞的比例(圖4的第2部分，15.1％)，而融合蛋白處理的小鼠外周血中cd8+t細(xì)胞比例(圖4的第3部分)達(dá)22.8％。體內(nèi)試驗(yàn)證明，即使只有原生性il-210％的劑量，本發(fā)明合成的融合蛋白免疫學(xué)效應(yīng)可以遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)原生性的非融合蛋白。

實(shí)施例4

本實(shí)施例為雙功能重組融合蛋白在制備治療因免疫細(xì)胞衰竭而引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。上述雙功能重組融合蛋白可單獨(dú)應(yīng)用或與化療，靶向藥物，抗體藥物，細(xì)胞治療組成聯(lián)合應(yīng)用，用于制備治療因免疫細(xì)胞衰竭而引起的疾病的藥物，例如治療癌癥藥物和治療慢性病毒感染的藥物等。

由上述實(shí)施例可知，本發(fā)明所述的恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白，既能識(shí)別衰竭性免疫細(xì)胞，又能激活擴(kuò)增識(shí)別的免疫細(xì)胞，恢復(fù)免疫細(xì)胞殺傷抗原陽(yáng)性細(xì)胞的功能。由于腫瘤的發(fā)生與擴(kuò)散和慢性病毒感染是免疫細(xì)胞衰竭與免疫系統(tǒng)耐受的結(jié)果，而恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞的功能可以增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤和抗慢性病毒感染的能力，因此，上述融合蛋白的臨床應(yīng)用可以增強(qiáng)抑制腫瘤生長(zhǎng)和控制病毒感染的功能，具有很好的臨床前景和廣泛的應(yīng)用范圍。

以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)該實(shí)用進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

<110>上?？漆t(yī)聯(lián)創(chuàng)生物科技有限公司

<120>一種恢復(fù)衰竭性免疫細(xì)胞功能的融合蛋白及其應(yīng)用

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glyglnargleuglyvalhisleuhisthrglualaargalaarghis

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alatrpglnleuthrglnglyalathrvalleuglyleupheargval

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thrprogluileproalaglyleuproserproargserglu

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<211>133

<212>prt

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<220>

<223>ox-40l

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gluphecysvalleu

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145150155160

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165170175

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