本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

結(jié)核病是主要經(jīng)呼吸道傳播的、嚴重危害我國和全世界的重要傳染病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織，全世界有17-20億的結(jié)核分枝桿菌感染者，每年至少200萬人死于本病(謝建平，結(jié)核分枝桿菌功能基因組研究的方法學(xué)，微生物通報.2001.28(5):92-97)。因此，準確篩檢感染者的方法在結(jié)核病的防治甚至最終的消滅中扮演極其重要的作用。

現(xiàn)有的診斷技術(shù)對結(jié)核分枝桿菌感染者的診斷非常難。近幾十年來，臨床上采用結(jié)核菌素試驗(tst)來診斷結(jié)核分枝桿菌感染者。但tst活性成份是純蛋白衍生物(purifiedproteinderivativeoftubercμlin，ppd)，是結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)上清液的粗提物，含有200多種成分，與卡介苗(bacilluscalmette-guerin，bcg)接種和環(huán)境分枝桿菌感染存在交叉反應(yīng)。tst檢測結(jié)果可被現(xiàn)在臨床廣泛使用的疫苗—卡介苗免疫所干擾[p.andersen，etal.lancet356(2000)1099-1104.]。從1921年及明卡介苗到現(xiàn)在為止，全世界已有35億人接種卡介苗。因此tst對感染者的診斷價值受到很大的影響，導(dǎo)致tst診斷的準確性較低，因此，無法根據(jù)其結(jié)果判斷是否真正存在結(jié)核分枝桿菌感染。

對結(jié)核病病人的診斷技術(shù)中，痰涂片抗酸染色或痰菌培養(yǎng)，培養(yǎng)困難，耗時較長；肺部x射線檢查肺部病理改變，也僅在具有典型的臨床癥狀后才能診斷；其他血清學(xué)診斷方法和分子診斷方法缺乏特異性，假陽性率較高。有關(guān)研究人員指出，不同診斷性檢查方法的敏感性和特異性如下：分支桿菌培養(yǎng)(分別為73％和100％)；pcr(分別為42％和100％)；胸部x線(分別為67％～77％和66％～76％)；結(jié)核菌素試驗(分別為94％和20％)；血清學(xué)(分別為33％和87％)。由此可見，現(xiàn)有的結(jié)核分支桿菌檢測方法的敏感性和特異性無法同時達到最優(yōu)。

結(jié)核分枝桿菌感染人體后，首先會被人體的免疫系統(tǒng)識別，激活機體的t細胞免疫應(yīng)答，分泌產(chǎn)生γ干擾素(ifn-γ)，后者發(fā)揮抗結(jié)核感染作用。部分t細胞轉(zhuǎn)化為免疫記憶細胞，當(dāng)再次與結(jié)核分枝桿菌相遇后，會再次分泌產(chǎn)生ifn-γ，發(fā)揮抗結(jié)核感染作用?？乖禺惖拇碳ぎa(chǎn)生ifn-γ及其產(chǎn)生量與機體是否感染或發(fā)病密切相關(guān)。因此，如果采用結(jié)核分枝桿菌特異的抗原在體外刺激感染者和患者的t細胞，可誘導(dǎo)這些t細胞產(chǎn)生高水平的結(jié)核分枝桿菌特異的ifn-γ，而非結(jié)核分枝桿菌感染者或非結(jié)核病患者產(chǎn)生的ifn-γ的量與未用抗原刺激產(chǎn)生的量相近，從而實現(xiàn)診斷的目的。由此可見，尋找并發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原，對發(fā)展新一代的診斷試劑具有重要價值和意義。

1996年，stover等通過減數(shù)雜交的方法確定了bcg在體外傳代過程中丟失的域，定義為缺失區(qū)(regionofdifference，rd)，rd區(qū)域存在于結(jié)核分枝桿菌中，而在bcg和大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌中缺失[程渝,李茂全.結(jié)核分枝桿菌的實驗室診斷進展.國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)和檢驗學(xué)分冊.2002；23(6)：342-343.]。其中，rd1區(qū)域編碼的早期分抗原靶6kd(earlysecretingantigentarget6kd，esat-6)和培養(yǎng)濾液蛋白10kd(cμltufiltrateprotein10kd，cfp-10)是兩種小分子量分泌蛋白，它們是t細胞最主要的抗原之一，可以誘導(dǎo)較強的細胞免疫反應(yīng)。

對于兒童或者免疫低下樣本，有文獻報道，僅以esat-6和cfp-10或其多肽作為刺激原，其靈敏度約為73.5％-88.9％(孫琳，elispot檢測技術(shù)在兒童結(jié)核病診斷中的應(yīng)用，標記免疫分析與臨床.2008.6:349-353；鐘華清，干擾素-γ釋放試驗在兒童結(jié)核感染中的應(yīng)用價值,檢驗醫(yī)學(xué).2016.3:176-179；李海，應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點法快速診斷兒童結(jié)核分枝桿菌感染的研究,中國婦幼保健，2012.11:1703-1706；)。對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本，esat-6和cfp-10多肽及衍生物試劑盒結(jié)核分枝桿菌樣本檢出依然不高，出現(xiàn)假陰性，不能滿足臨床需求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有檢測方法對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染結(jié)核分枝桿菌樣本的檢出率不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該特異性抗原多肽池特異性刺激結(jié)核分枝桿菌感染的新鮮全血能特異性的分泌ifn-γ，增加檢測靈敏度。

一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該抗原多肽池包括含有氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.28中所示的任八條多肽及任八條以上多肽的組合。

如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述多肽是人工合成的或是天然分離的。

如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述抗原多肽池還包括esat-6和cfp-10。

如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述esat-6的氨基酸序列如seqidno.29所示，所述cfp-10的氨基酸序列如seqidno.30所示。

如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述抗原多肽池還包括esat-6-cfp-10。

如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，所述esat-6-cfp-10的氨基酸序列如seqidno.31所示。

如上所述的抗原多肽池，優(yōu)選地，該抗原多肽池包括與所述seqidno.1～seqidno.28中任一所示序列具有85％同源性的多肽。

一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑盒，該試劑盒包括如上所述的抗原多肽池。

一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑盒，優(yōu)選地，該試劑盒還包括ifn-γ的檢測試劑。

如上所述的檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池的應(yīng)用，采用所述抗原多肽池作為刺激劑刺激全血，檢測產(chǎn)生的ifn-γ。

采用本發(fā)明提供的抗原多肽池與ifn-γ的特異性抗原蛋白(esat6和cfp10，esat6-cfp10)，用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染后的全血樣本，具有以下特點：

(1)免疫低下樣本陽性檢出率高，靈敏度高。針對現(xiàn)有檢測方法對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本或潛伏感染者的檢出不足，本發(fā)明提供用于敏感性和特異性高的結(jié)核分支桿菌感染的抗原多肽池，該多肽池合并esat-6和cfp-10可實現(xiàn)對結(jié)核病病人或早期感染者或潛伏感染者(未出現(xiàn)結(jié)核病病癥)的快速、特異的檢測，在阻斷結(jié)核病的傳播和流行，以及對結(jié)核病的控制具有重大意義。

(2)檢測用時短，操作方便，診斷快速。與傳統(tǒng)結(jié)核分枝桿菌檢測相比，利用本發(fā)明提供的多肽池合并ifn-γ的特異性抗原蛋白檢測用時短，診斷快速。傳統(tǒng)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)診斷需時間1-2月，tst檢測需要3天，本發(fā)明全部檢測時間在1-2天內(nèi)可完成。

(3)對感染結(jié)核分支桿菌能進行早期檢測。由于結(jié)核分支桿菌一旦感染人體，首先就被機體的免疫系統(tǒng)所識別，激活體液和細胞免疫應(yīng)答，發(fā)病時間在感染后1-2個月，因此，利用本發(fā)明提供的多肽池合并全血ifn-γ的特異性抗原蛋白的細胞免疫學(xué)檢測方法即可快速做出診斷，診斷出樣本是否感染結(jié)核分枝桿菌。而現(xiàn)有的技術(shù)中，x光片診斷只有在感染者肺部出現(xiàn)明顯的病理改變后才可做出診斷，這通常需要很長的時間?？乖贵w檢測也只有在疾病癥狀處于活動期的情況下檢測，但環(huán)境中分枝桿菌廣泛存在，其與結(jié)核分支桿菌的共同抗原，可干擾實驗的診斷結(jié)果?？梢?，本發(fā)明對結(jié)核分枝桿菌新近感染或免疫低下者的早期檢測有重要意義，對結(jié)核病的控制和消滅具有積極的意義。

本發(fā)明還提供了一種新的可用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測的檢測試劑，實驗證明，本發(fā)明可直接利用外周血進行抗原刺激，無需分離外周血單個核細胞，實驗數(shù)據(jù)顯示用于結(jié)核分枝桿菌感染檢測具有較高的靈敏度和特異性，有效避免假陰性，且操作簡便，成本較低，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

具體實施方式

為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人根據(jù)計算機軟件進行多肽預(yù)測，綜合優(yōu)選合適的多肽，通過大量試驗研究驗證，最終獲得氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.28所示的多肽，其中這些多肽的篩選研究是通過如下技術(shù)手段確定：

1、單多肽刺激有效性篩選：將初步篩得的多肽配制成一定濃度的多肽溶液，刺激新鮮全血，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的多肽。

2、多肽組合刺激效果：將篩選到有效的多肽隨機8-20個配制成混合多肽溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)中進行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。

3、合并esat-6和cfp-10刺激效果：將篩選的有效混合多肽溶液合并esat-6和cfp-10配制成刺激劑溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)中進行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。

4、合并esat-6-cfp-10刺激效果：將篩選的有效混合多肽溶液合并esat-6-cfp-10配制成刺激劑溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)中進行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。

本發(fā)明中篩選的多肽為致病結(jié)核分枝桿菌的特異性蛋白質(zhì)包括：rv3615(seqidno.1～seqidno.7)、rv3873(seqidno.8～seqno.13)、rv3878(seqidno.14～seqidno.20)、rv3879c(seqidno.21～seqidno.25)、tb7.7(seqidno.26～seqidno.28)，這些蛋白質(zhì)均能特異性刺激結(jié)核分枝桿菌感染的病人新鮮全血特異性的分泌ifn-γ。篩選這些蛋白質(zhì)中能針對cd8+淋巴細胞的結(jié)合位點的多肽，通過反復(fù)的臨床驗證實驗，這些多肽合并esat-6和cfp-10能提高檢測靈敏度，該合并刺激劑可特異性作用于結(jié)核分枝桿菌感染樣本的全血中的淋巴細胞表位，通過檢測全血中釋放的細胞因子ifn-γ，從而間接地反應(yīng)機體是否感染過結(jié)核分枝桿菌。該方法提高結(jié)核分枝桿菌感染樣本的檢出率，特別是新近感染樣本、兒童、免疫低下感染結(jié)核分枝桿菌樣本的檢出靈敏度，有效避免現(xiàn)有檢測技術(shù)中易出現(xiàn)的漏檢、錯檢問題。

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法是按常規(guī)實驗方法；試驗試劑如無特別說明均為市售購買產(chǎn)品。

實施例1單多肽刺激有效性篩選

本發(fā)明的多肽，其氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.28所示，這些可通過人工合成的或是天然分離，本實施例及以下實施例中用的多肽是通過人工合成的。

seqidno.1：algsslhtagvdla

seqidno.2：rlgvlashhdnaav

seqidno.3：nvyltahnalgssl

seqidno.4：ithgpycsqfndtl

seqidno.5：shhdnaavdassgv

seqidno.6：riaakiyseadeawr

seqidno.7：nalgsslhtagvdla

seqidno.8：alaavvelgsfdaa

seqidno.9：lmagagpapmlaaa

seqidno.10：aaldaqaveltarl

seqidno.11：lmsqliekpvapsv

seqidno.12：slpeiaanhitqav

seqidno.13：mqataqaaaytqam

seqidno.14：klaglvfpqppapi

seqidno.15：qqaaqsaqggsgpm

seqidno.16：vqmsqnaspiaqti

seqidno.17：sqatqllstpvsqv

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seqidno.19：aelaprvvatvpql

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seqidno.21：msitrptgsyarqm

seqidno.22：lavqawaafhdmtl

seqidno.23：slvtathganvslv

seqidno.24：ylasadhaipvdei

seqidno.25：mlwfelmkpmtsta

seqidno.26：llaaadelvggppv

seqidno.27：alaartllaaadel

seqidno.28：ravaeshgvaavlf。

將制備的多肽用無菌低內(nèi)毒素(內(nèi)毒素應(yīng)小于2.5eu/μg)pbs溶解到濃度為250μg/ml。

取10例臨床確診結(jié)核癥狀人群的新鮮血樣，10例無結(jié)核癥狀健康人群的新鮮血樣，(下同)，用已上市的γ干擾素檢測試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司)檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌。同時取多肽溶液20μl于無菌培養(yǎng)管中(多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。

結(jié)果表明，本發(fā)明所設(shè)計的序列如seqidno.1～seqidno.28所示的多肽的對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本均無非特異性刺激。

實施例2合并刺激效果

將任取8條多肽溶液合并esat-6和cfp-10配制成刺激劑溶液(esat-6和cfp-10由大腸桿菌基因工程菌重組表達獲得，esat-6序列為seqidno.29:mteqqwnfagieaaasaiqgnvtsihslldegkqsltklaaawggsgseayqgvqqkwdatatelnnalqnlartiseagqamastegnvtgmfa；cfp-10序列為seqidno.30:maemktdaatlaqeagnferisgdlktqidqvestagslqgqwrgaagtaaqaavvrfqeaankqkqeldeistnirqagvqysradeeqqqalssqmgf，本實施例中僅列舉部分多肽的實驗結(jié)果，編號為刺激劑1～刺激劑4(刺激劑1：seqidno.1～seqidno.8+esat-6+cfp-10；刺激劑2：seqidno.8～seqidno.15+esat-6+cfp-10；刺激劑3：seqidno.13～seqidno.20+esat-6+cfp-10；刺激劑4：seqidno.21～seqidno.28+esat-6+cfp-10；)，取結(jié)核分枝桿菌感染的陽性和未感染的陰性樣本進行試驗。

取同實施例1中的20例全血樣本，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌。同時取刺激劑1～刺激劑4各20μl于無菌培養(yǎng)管中(各多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。檢測方法同實施例1，檢測結(jié)果見表1。其中，市售試劑盒為武漢海吉力生物科技有限公司的結(jié)核分枝桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法),下同。

表1.混合多肽合并esat-6和cfp-10刺激結(jié)果統(tǒng)計

結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6和cfp-10用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染的全血，提高了檢測靈敏度，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。

實施例3合并刺激效果

將任取8條多肽溶液合并esat-6-cfp-10(esat-6-cfp-10由大腸桿菌基因工程菌重組表達獲得，esat-6-cfp-10序列為seqidno.31：mteqqwnfagieaaasaiqgnvtsihslldegkqsltklaaawggsgseayqgvqqkwdatatelnnalqnlartiseagqamastegnvtgmfanvamaemktdaatlaqeagnferisgdlktqidqvestagslqgqwrgaagtaaqaavvrfqeaankqkqeldeistnirqagvqysradeeqqqalssqmgf，配制成刺激劑溶液，編號為刺激劑5～刺激劑8(刺激劑5：seqidno.1～seqidno.8+esat-6-cfp-10；刺激劑6：seqidno.8～seqidno.15+esat-6-cfp-10；刺激劑7：seqidno.13～seqidno.20+esat-6-cfp-10；刺激劑8：seqidno.21～seqidno.28+esat-6-cfp-10)，取結(jié)核分枝桿菌感染的陽性和未感染的陰性樣本進行試驗，配制成刺激劑溶液，取同實施例1中的20例全血樣本，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結(jié)核分枝桿菌。同時取刺激劑5～刺激劑8各20μl于無菌培養(yǎng)管中(各多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。檢測方法同實施例1，檢測結(jié)果見表2。

表2.混合多肽合并esat-6-cfp-10刺激結(jié)果

結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6-cfp-10用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染的全血，提高了檢測靈敏度，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。

實施例4合并混合多肽檢測靈敏度和特異性

樣本：取20例臨床確診結(jié)核癥狀人群的新鮮血樣，20例無結(jié)核癥狀健康人群的新鮮血樣。

采集上述樣本的全血樣本，分別用刺激劑9(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.13～seqidno.20，各5μg/ml))、刺激劑10(esat-6-cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.13～seqidno.20，各100μg/ml))、刺激劑11(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml))、刺激劑12(esat-6-cfp-10(10μg/ml))和刺激劑13(市售試劑盒：武漢海吉力生物科技有限公司的結(jié)核分枝桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法))各20μl于無菌培養(yǎng)管中，每管加入1ml新鮮采集全血刺激，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。檢測方法同實施例2，結(jié)果見表3。

表3合并混合多肽靈敏度和特異性檢測結(jié)果統(tǒng)計

結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6和cfp-10或esat-6-cfp-10用于檢測結(jié)核分枝桿菌感染的全血，其檢測靈敏度可達95％，靈敏度和特異性較強，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢，提高了檢出率。

實施例5本發(fā)明的靈敏度和特異性檢測

樣本：取100例臨床確診結(jié)核癥狀人群的新鮮血樣，其中65歲年齡及以上樣本34例，6歲以下年齡樣本數(shù)18例，hiv樣本40例，男55例，女45例。50例無結(jié)核癥狀健康人群的新鮮血樣，其中65歲年齡及以上樣本19例，6歲以下年齡樣本數(shù)9例，hiv樣本22例，男30例，女20例。

采集上述樣本的全血樣本，分別用刺激劑(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.16～seqidno.23，各100μg/ml))和市售試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司的結(jié)核分枝桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法))刺激劑各20μl于無菌培養(yǎng)管中，每管加入1ml新鮮采集全血刺激，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用結(jié)核感染t細胞檢測試劑盒進行檢測，市售試劑盒按其說明書進行操作。檢測結(jié)果見表4和表5。

表4.結(jié)核分枝桿菌感染樣本的酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果統(tǒng)計

表5.健康樣本的酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果統(tǒng)計

結(jié)果說明本發(fā)明制備的多肽池結(jié)合esat-6和cfp-10及其衍生物可提高對一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本檢出率，靈敏度和特異性較強，有效避免現(xiàn)有技術(shù)檢測的假陰性和漏檢。本發(fā)明對結(jié)核分枝桿菌新近感染或免疫低下者的早期檢測有重要意義，對結(jié)核病的控制和消滅具有積極的意義。

sequencelisting

<110>武漢海吉力生物科技有限公司

<120>檢測結(jié)核分枝桿菌感染的抗原多肽池及應(yīng)用

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alaleualaalavalvalgluleuglyserpheaspalaala

1510

<210>9

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>9

leumetalaglyalaglyproalaprometleualaalaala

1510

<210>10

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>10

alaalaleuaspalaglnalavalgluleuthralaargleu

1510

<210>11

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>11

leumetserglnleuileglulysprovalalaproserval

1510

<210>12

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>12

serleuprogluilealaalaasnhisilethrglnalaval

1510

<210>13

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>13

metglnalathralaglnalaalaalatyrthrglnalamet

1510

<210>14

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>14

lysleualaglyleuvalpheproglnproproalaproile

1510

<210>15

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>15

glnglnalaalaglnseralaglnglyglyserglypromet

1510

<210>16

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>16

valglnmetserglnasnalaserproilealaglnthrile

1510

<210>17

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>17

serglnalathrglnleuleuserthrprovalserglnval

1510

<210>18

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>18

gluthrmetproserilegluserleuvalseraspglyleu

1510

<210>19

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>19

alagluleualaproargvalvalalathrvalproglnleu

1510

<210>20

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>20

tyralapheglyserserglygluglyleualaglyvalala

1510

<210>21

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>21

metserilethrargprothrglysertyralaargglnmet

1510

<210>22

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>22

leualavalglnalatrpalaalaphehisaspmetthrleu

1510

<210>23

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>23

serleuvalthralathrhisglyalaasnvalserleuval

1510

<210>24

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>24

tyrleualaseralaasphisalaileprovalaspgluile

1510

<210>25

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>25

metleutrpphegluleumetlysprometthrserthrala

1510

<210>26

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>26

leuleualaalaalaaspgluleuvalglyglyproproval

1510

<210>27

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>27

alaleualaalaargthrleuleualaalaalaaspgluleu

1510

<210>28

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>28

argalavalalagluserhisglyvalalaalavalleuphe

1510

<210>29

<211>95

<212>prt

<213>esat-6

<400>29

metthrgluglnglntrpasnphealaglyileglualaalaalaser

151015

alaileglnglyasnvalthrserilehisserleuleuaspglugly

202530

lysglnserleuthrlysleualaalaalatrpglyglyserglyser

354045

glualatyrglnglyvalglnglnlystrpaspalathralathrglu

505560

leuasnasnalaleuglnasnleualaargthrileserglualagly

65707580

glnalametalaserthrgluglyasnvalthrglymetpheala

859095

<210>30

<211>100

<212>prt

<213>cfp-10

<400>30

metalaglumetlysthraspalaalathrleualaglnglualagly

151015

asnphegluargileserglyaspleulysthrglnileaspglnval

202530

gluserthralaglyserleuglnglyglntrpargglyalaalagly

354045

thralaalaglnalaalavalvalargpheglnglualaalaasnlys

505560

glnlysglngluleuaspgluileserthrasnileargglnalagly

65707580

valglntyrserargalaaspglugluglnglnglnalaleuserser

859095

glnmetglyphe

100

<210>31

<211>198

<212>prt

<213>esat-6-cfp-10

<400>31

metthrgluglnglntrpasnphealaglyileglualaalaalaser

151015

alaileglnglyasnvalthrserilehisserleuleuaspglugly

202530

lysglnserleuthrlysleualaalaalatrpglyglyserglyser

354045

glualatyrglnglyvalglnglnlystrpaspalathralathrglu

505560

leuasnasnalaleuglnasnleualaargthrileserglualagly

65707580

glnalametalaserthrgluglyasnvalthrglymetphealaasn

859095

valalametalaglumetlysthraspalaalathrleualaglnglu

100105110

alaglyasnphegluargileserglyaspleulysthrglnileasp

115120125

glnvalgluserthralaglyserleuglnglyglntrpargglyala

130135140

alaglythralaalaglnalaalavalvalargpheglnglualaala

145150155160

asnlysglnlysglngluleuaspgluileserthrasnilearggln

165170175

alaglyvalglntyrserargalaaspglugluglnglnglnalaleu

180185190

serserglnmetglyphe

195