本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體地，涉及一種高效降解油脂的枯草芽孢桿菌及其在餐廚垃圾好氧堆肥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：餐廚垃圾是指日常生活中所產(chǎn)生的食品垃圾，是城鎮(zhèn)生活垃圾重要組成部分之一。根據(jù)清華大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程系固體廢物污染控制及資源化研究所的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，我國(guó)大中城市餐廚垃圾的年產(chǎn)生量不低于6000萬噸。餐廚垃圾以淀粉、食物纖維類、蛋白質(zhì)和油脂等為主要成分，這些物質(zhì)極易腐敗、霉變，而且成分復(fù)雜，其中含有如聚氯、聚苯等不易分解和吸收的化學(xué)物質(zhì)、如亞硝酸鹽等毒素、如細(xì)菌等有毒有害成分和大量的病毒，不但容易傳染沙門氏菌、大腸桿菌等10余種疾病，還會(huì)傳染瘋牛病、口蹄疫、肺結(jié)核、肝炎等惡性傳染病。餐廚垃圾中的高油脂含量給其處理帶來很多麻煩，如果不經(jīng)處置而直接排入市政管網(wǎng)，由于油脂在常溫下不易降解，因此其會(huì)粘附器壁，從而容易造成管路堵塞。而進(jìn)入下水道的油脂也會(huì)帶來一定的安全隱患，例如，進(jìn)入下水道的油脂經(jīng)非法采集后經(jīng)簡(jiǎn)單的加熱、分層、脫水、去渣和沉淀等提煉工藝提取油脂，即形成“地溝油”。由于餐廚垃圾中的大量易腐有機(jī)物屬于資源型廢棄物，極易被微生物降解，因此生物好氧堆肥法是實(shí)現(xiàn)餐廚垃圾資源化處理的有效途徑之一。利用生物技術(shù)對(duì)餐廚垃圾進(jìn)行處理，不僅對(duì)環(huán)境影響小，而且可以產(chǎn)生對(duì)環(huán)境有益的二次產(chǎn)物。我國(guó)餐廚垃圾中干基粗脂肪含量在20～30％之間，根據(jù)各地飲食結(jié)構(gòu)和生活水平的不同而有所差異，例如重慶大量火鍋店使用較多食用油，部分火鍋店餐廚垃圾中的干基粗脂肪含量高達(dá)60％，平均濕基粗脂肪含量為17.2％。含油量對(duì)餐廚垃圾的好氧堆肥具有重要影響。對(duì)于堆肥，微生物最佳的ph范圍為5.5～8.5。油脂會(huì)在堆料表面形成一層膜，阻礙了堆料與氧氣的接觸，導(dǎo)致堆料出現(xiàn)厭氧現(xiàn)象。如果餐廚垃圾含油量過高，堆料由好氧環(huán)境轉(zhuǎn)為厭氧環(huán)境，進(jìn)入水解酸化階段，當(dāng)ph<6.0時(shí)，主要是嗜酸性微生物(真菌、酵母菌等)，其胞外水解酶促進(jìn)了油脂的水解和脂肪酸的形成，而油脂的水解和脂肪酸的形成使得系統(tǒng)進(jìn)一步酸化，其ph值無法升高，始終在4.5～5.0左右波動(dòng)，不利于堆肥微生物的生長(zhǎng)；含油量高使堆料內(nèi)部出現(xiàn)的厭氧環(huán)境會(huì)抑制好氧微生物的生長(zhǎng)，不利于有機(jī)質(zhì)降解，堆料含水率和水溶性碳氮比均隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸下降；溫度是好氧堆肥的一個(gè)重要條件，溫度的作用主要影響微生物的生長(zhǎng)，餐廚垃圾中含油量越高，好氧堆肥反應(yīng)越慢，體系能達(dá)到的最高溫度越低，當(dāng)含油量大于8％時(shí)，堆料最高溫度始終沒有達(dá)到堆肥最適宜的溫度55℃，堆肥效果受到顯著影響；油脂包裹支撐介質(zhì)，干擾微生物生命活動(dòng)，高濃度長(zhǎng)鏈脂肪酸吸附在細(xì)胞膜表面阻止了物質(zhì)的傳遞，未降解的油脂凝聚包裹著微生物，從而抑制餐廚垃圾好氧堆肥中微生物的活性。國(guó)內(nèi)餐廚垃圾的主要特點(diǎn)為含鹽高、含油脂高。在好氧堆肥中，高鹽高油脂會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)，導(dǎo)致堆肥失敗，或者堆肥出來的肥料會(huì)對(duì)植物造成傷害。在餐廚垃圾處理中，通常需要針對(duì)油脂進(jìn)行預(yù)處理再進(jìn)行好氧堆肥。油脂的預(yù)處理會(huì)提高餐廚垃圾的處理復(fù)雜度并增加處理成本。專利申請(qǐng)?zhí)枮閏n201310403853.5的專利《高效油脂降解菌及其應(yīng)用》提供了一種高效降解油脂的不動(dòng)桿菌，并介紹了將其用于清除餐廚垃圾油脂。這種菌的應(yīng)用需要先從發(fā)酵液中提取出生物表面活性劑，然后再將生物表面活性劑用于去除油脂。這項(xiàng)技術(shù)用于餐廚垃圾好氧堆肥領(lǐng)域不夠方便，效益并不比直接使用化學(xué)表面活性劑更有優(yōu)勢(shì)。因此，我們需要一種既能夠高效乳化和降解油脂，又能適應(yīng)餐廚垃圾好氧堆肥環(huán)境，而且不會(huì)產(chǎn)生惡臭和毒素，對(duì)環(huán)境友好的菌種。這種高效除油菌種的應(yīng)用還可以推廣到治理土壤油污、生產(chǎn)生物表面活性劑、制備生物清潔劑等領(lǐng)域。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一株枯草芽孢桿菌6-1oil，該枯草芽孢桿菌6-1oil可以利用油脂為生長(zhǎng)碳源，能在油脂含量較高的環(huán)境下正常生長(zhǎng)，并能高效乳化快速降解油脂，滿足國(guó)內(nèi)餐廚垃圾好氧堆肥的需求。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為：一種高效降解油脂的枯草芽孢桿菌，所述高效降解油脂的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌6-1oil，于2016年12月22日在廣東省微生物菌種保藏中心保藏，保藏編號(hào)為gdmccno.60134，保藏地址為：廣州市先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓；分類學(xué)命名為：bacillussubtilis，其從餐廚垃圾好氧堆肥料中分離而得。本發(fā)明的枯草芽孢桿菌6-1oil的特征如下：菌體長(zhǎng)2～3μm、寬0.7μm；芽孢短桿狀，中生，具體為長(zhǎng)1.5μm、寬0.7μm，其光學(xué)顯微鏡照片如圖1所示；營(yíng)養(yǎng)瓊脂上菌落為純白色，有環(huán)形褶起，邊緣裂葉狀，菌株6-1oil在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖2所示。菌株6-1oil的16srdna序列與枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)具有最高同源性，高達(dá)99.92％，其16srdna序列如序列表seqidno.1所示；構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹如圖3所示，菌株6-1oil與芽孢桿菌屬聚合到一起，說明6-1oil屬于芽孢桿菌屬(bacillus)，因此初步判斷為菌株6-1oil為枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)。根據(jù)枯草芽孢桿菌基因組中β-甘露聚糖酶基因上下游序列設(shè)計(jì)特異引物，菌株6-1oil的枯草芽孢桿菌特異引物擴(kuò)增結(jié)果為陽性，說明其為枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)。其中，特異引物序列為：bsu-man-1f：5’-caggctcacactttgtcttg-3’(seqidno.2)；bsu-man-1r：5’-tgaacacagtcctgggttag-3’(seqidno.3)。本發(fā)明還提供了包含枯草芽孢桿菌6-1oil的餐廚垃圾處理菌劑。本發(fā)明還提供了一種餐廚垃圾處理菌劑，所述餐廚垃圾處理菌劑包含枯草芽孢桿菌6-1oil。優(yōu)選地，所述餐廚垃圾處理菌劑還包含凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母和載體輔料。其中，凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母均可以從廣東省微生物中心獲得，凝結(jié)芽孢桿菌編號(hào)gim1.421，釀酒酵母編號(hào)gim2.135；枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母經(jīng)液態(tài)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)后離心而得。進(jìn)一步優(yōu)選地，枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母的活菌含量分別為(2～9)×108cfu/g、(1～8)×108cfu/g和(3～9)×107cfu/g。優(yōu)選地，所述載體輔料包括以下重量百分比的物料：玉米糠15％～30％、米糠15％～30％、椰糠5％～10％、花生麩30％～50％、紅糖8％～15％。本發(fā)明還提供了上述餐廚垃圾處理菌劑的制備方法，包括以下步驟：1)分別對(duì)枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌和釀酒酵母進(jìn)行斜面菌種活化，活化后再分別經(jīng)液體發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)、高速離心收集菌體，將收集得到的枯草芽孢桿菌體6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌體和釀酒酵母體混合，得到復(fù)合菌體；2)將載體輔料中的各物料按重量百分比混合，得到載體輔料；3)將步驟1)得到的復(fù)合菌體和步驟2)得到的載體輔料按0.8-1.2:0.5-1.5質(zhì)量比混合，在40-60℃烘干至水分含量為10％～15％，得到餐廚垃圾處理菌劑。國(guó)內(nèi)餐廚垃圾普遍狀況為油脂含量高，干基含油量能達(dá)到20％～30％，將本發(fā)明制備的復(fù)合菌劑用于處理餐廚垃圾，能有效降解餐廚垃圾中的油脂，降低油脂含量。本發(fā)明還提供了高效降解油脂的枯草芽孢桿菌的應(yīng)用，所述高效降解油脂的枯草芽孢桿菌可以應(yīng)用于生物降解餐廚垃圾、治理土壤油污、生產(chǎn)生物表面活性劑和制備生物清潔劑等領(lǐng)域中。其中，在降解餐廚垃圾時(shí)，餐廚垃圾處理菌劑中的枯草芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌6-1oil)的含量為(2～9)×108cfu/ml；在治理土壤油污時(shí)，采用的高效降解油脂的枯草芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌6-1oil)的含量不低于108cfu/ml；在生產(chǎn)生物表面活性劑、制備生物清潔劑時(shí)，采用的高效降解油脂的枯草芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌6-1oil)的含量不低于109cfu/ml。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的枯草芽孢桿菌6-1oil可以利用油脂為生長(zhǎng)碳源，能在油脂含量較高的環(huán)境下正常生長(zhǎng)，并具有高效降解油脂的能力，可滿足國(guó)內(nèi)餐廚垃圾好氧堆肥的需求；枯草芽孢桿菌6-1oil可以與其他菌種進(jìn)行復(fù)配而制備餐廚垃圾好氧堆肥菌劑，不影響其它菌種的活性和有效性能，在餐廚垃圾處理中有效降解油脂，降低油脂含量。采用枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母和載體輔料復(fù)配制備的餐廚垃圾好氧堆肥復(fù)合菌劑能適應(yīng)國(guó)內(nèi)餐廚垃圾油脂含量高的情況，從而有效避免了在好氧堆肥中出現(xiàn)油脂包裹微生物導(dǎo)致微生物活性下降而好氧堆肥失敗的情況?？莶菅挎邨U菌6-1oil油脂降解效果主要以餐廚垃圾好氧堆肥中的干基含油量來體現(xiàn)；干基含油量為18.7％的餐廚垃圾在加入由枯草芽孢桿菌6-1oil制備的高效除油復(fù)合菌劑，在好氧堆肥廚余機(jī)內(nèi)運(yùn)作120h后，餐廚垃圾干基含油量下降至4.2％?？莶菅挎邨U菌6-1oil的應(yīng)用還可以推廣到治理土壤油污、生產(chǎn)生物表面活性劑、制備生物清潔劑等領(lǐng)域。附圖說明圖1是枯草芽孢桿菌6-1oil光學(xué)顯微鏡照片；圖2是枯草芽孢桿菌6-1oil在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)；圖3是基于16srdna序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹；圖4是枯草芽孢桿菌6-1oil在含油脂的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況；圖5a是含油液體培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌6-1oil培養(yǎng)前的圖片；圖5b是含油液體培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌6-1oil培養(yǎng)后的圖片；圖6是采用枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌6-1oil處理餐廚垃圾好氧堆肥的效果對(duì)比圖。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本例為枯草芽孢桿菌菌株6-1oil的分離、馴化和鑒定。(1)取好氧發(fā)酵的餐廚垃圾堆肥料1g溶解于20ml無菌水中，充分震蕩溶解后，按5％接種量將上清液接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于搖床上，于37℃、180rpm下培養(yǎng)48h，得到培養(yǎng)液；(2)取步驟(1)中的培養(yǎng)液稀釋至菌液濃度為500～1500cfu/ml涂布于含有1％食用油的培養(yǎng)基中(配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、nacl5g、食用油10ml、吐溫801.5～3ml、瓊脂15～20g，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4)，在溫度為37℃下，培養(yǎng)篩選出生長(zhǎng)的單菌落；(3)取步驟(2)中的單菌落接種于含有5％食用油的液體培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)，5日為一個(gè)馴化周期；馴化25個(gè)周期，每個(gè)馴化周期的培養(yǎng)基中食用油含量依次按5-10％逐漸增加；(4)將步驟(3)中馴化后的培養(yǎng)液稀釋至菌液濃度為500～1500cfu/ml，涂布于中性紅油脂培養(yǎng)基中(配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、nacl5g、食用油10ml、1.6％中性紅水溶液1ml、瓊脂15～20g，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4)，選取菌落周圍變紅明顯且范圍大的單菌落，獲得菌株6-1oil。對(duì)獲得的菌株6-1oil進(jìn)行觀察和鑒定，結(jié)果如下：菌體特征：菌株6-1oil菌體長(zhǎng)2～3μm、寬0.7μm；芽孢短桿狀，中生，長(zhǎng)1.5μm、寬0.7μm；具體如圖1所示。菌落特征：菌株6-1oil在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線分離，觀察菌落特征營(yíng)養(yǎng)瓊脂上菌落純白色，單菌落直徑6mm，有環(huán)形褶起，邊緣裂葉狀，如圖2所示。菌株6-1oil構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹如圖3所示。1％葡萄糖瓊脂穿刺接種試驗(yàn)：深部生長(zhǎng)但不擴(kuò)散，不產(chǎn)氣。o-f試驗(yàn)：有氧時(shí)下面產(chǎn)酸(弱+)，油封不產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，表面菌苔白色、起皺，沿穿刺向深生長(zhǎng)(+)，有氧時(shí)擴(kuò)散(+)，油封時(shí)不擴(kuò)散；因此，該菌株是氧化型產(chǎn)酸，兼性好氧菌；遺傳學(xué)特征：菌株6-1oil的16srdna分析序列與枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)具有最高同源性，高達(dá)99.92％，其枯草芽孢桿菌特異引物擴(kuò)增結(jié)果為陽性，因此鑒定菌株6-1oil為枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis6-1oil)，并將其保存。實(shí)施例2本例為高油脂瓊脂平板分別培養(yǎng)未馴化枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌6-1oil的實(shí)驗(yàn)。配置含有食用油的固體培養(yǎng)基(配方：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂粉15g、食用油50ml、吐溫-802ml，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4)，平板上打孔，分別接種未馴化枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌6-1oil，在37℃下培養(yǎng)，觀察其生長(zhǎng)情況。兩種菌株的生長(zhǎng)情況見圖4，其中圖4中的上下孔接種未馴化枯草芽孢桿菌，左右孔接種枯草芽孢桿菌6-1oil。由圖4可知，枯草芽孢桿菌6-1oil在含有食用油的平板上生長(zhǎng)迅速，菌落面積大，并將未馴化枯草芽孢桿菌的菌落包圍，說明6-1oil能在含油情況下生長(zhǎng)良好。實(shí)施例3本例為高油脂營(yíng)養(yǎng)液發(fā)酵實(shí)驗(yàn)將菌株枯草芽孢桿菌6-1oil接種于已滅菌的含油液體培養(yǎng)基(配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、食用油10ml、吐溫-801.5ml，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4)中，在37℃下?lián)u床培養(yǎng)，培養(yǎng)3日后，觀察結(jié)果。圖5a為含油液體培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌6-1oil培養(yǎng)前的圖片，由圖5a可知，接種菌株枯草芽孢桿菌6-1oil前，含油液體培養(yǎng)基呈黃色，上面浮有一層油，有較明顯的分層現(xiàn)象，瓶壁上具有油脂附著。培養(yǎng)3日后，采用枯草芽孢桿菌6-1oil接種的含油液體培養(yǎng)基的乳化降解情況如圖5b所示。由圖5b可知，經(jīng)過枯草芽孢桿菌6-1oil降解后，含油液體培養(yǎng)基油水混合均勻，由黃色變成乳白色，瓶壁干凈，沒油脂附著，說明食用油被乳化降解。實(shí)施例4本例為餐廚垃圾處理菌劑的制備。制備餐廚垃圾處理菌劑的方法，包括以下步驟：1)將枯草芽孢桿菌6-1oil接種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基，凝結(jié)芽孢桿菌接種在mrs斜面培養(yǎng)基，釀酒酵母接種在pda斜面培養(yǎng)基，進(jìn)行菌種活化；2)將活化后的枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母分別接種于250ml液體培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)，其中，枯草芽孢桿菌6-1oil和凝結(jié)芽孢桿菌在37℃溫度下培養(yǎng)48h，釀酒酵母在28℃溫度下培養(yǎng)48h，得種子液；其中，枯草芽孢桿菌6-1oil液體培養(yǎng)基配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化鈉10g、食用油10ml、吐溫-802ml，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4；凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基配方：乳化胨15g、酵母提取物5g、磷酸二氫鉀2g、葡萄糖10g、番茄汁100ml、吐溫-8010g，補(bǔ)水至1l，ph6.6～7；釀酒酵母液體培養(yǎng)基配方：麥汁80ml、紅糖20g，補(bǔ)水至1l；3)將所得的種子液分別接種到10l發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌在37℃溫度下培養(yǎng)48h，釀酒酵母在28℃溫度下培養(yǎng)48h；其中各發(fā)酵液體培養(yǎng)基配方與步驟2)中的液體培養(yǎng)基配方一致；4)將上述所得發(fā)酵液分別離心得到枯草芽孢桿菌6-1oil菌體、凝結(jié)芽孢桿菌菌體和釀酒酵母菌體，分別將這三種菌體按1:1:1質(zhì)量比混合，得混合菌體；5)將載體輔料按以下重量比混合，玉米糠20％、米糠20％、椰糠8％、花生麩40％、紅糖12％，得到載體輔料；6)將步驟4)得到的混合菌體和步驟5)得到的載體輔料按1:1質(zhì)量比混合，50℃烘干至水分含量為15％，即得到餐廚垃圾處理菌劑。將本例制備的餐廚垃圾處理菌劑用于處理餐廚垃圾：餐廚垃圾為食堂泔水桶內(nèi)的飯菜，初始含油量測(cè)得為20％～28％；將制得的菌劑按與餐廚垃圾重量比為1:6的量投入到餐廚垃圾中，在40℃保溫通風(fēng)條件下不斷攪拌；72h后垃圾減重率65％～75％，降解殘余物的含油量降至10％以下?；?qū)?.5kg菌劑投入到40℃保溫通風(fēng)條件下不斷攪拌的餐廚垃圾處理機(jī)中，每日可投入并降解1.5kg餐廚垃圾，降解24h后垃圾減重率80％～90％，降解殘余物含油量在8％以下。實(shí)施例5本例為枯草芽孢桿菌6-1oil和枯草芽孢桿菌gim1.222用于廚余機(jī)餐廚垃圾除油效果測(cè)試對(duì)比實(shí)驗(yàn)用的廚余機(jī)具有攪拌功能、37～45℃保溫功能和抽風(fēng)換氣功能，提供了一個(gè)微生物好氧堆肥的環(huán)境條件。(1)試驗(yàn)組：菌株：枯草芽孢桿菌6-1oil、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母；輔料：20％玉米糠、20％米糠、8％椰糠、40％花生麩、12％紅糖；枯草芽孢桿菌6-1oil接入lb液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)至活菌濃度為(5～9)×108cfu/ml；凝結(jié)芽孢桿菌接入液體乳酸菌培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)至活菌濃度為(3～7)×108cfu/ml；釀酒酵母接入麥汁紅糖培養(yǎng)液(8％麥汁+2％紅糖)中，28℃搖床培養(yǎng)至活菌濃度為(3～9)×107cfu/ml；將上述各菌株發(fā)酵液150ml接入到2.5kg輔料中，然后投入到含15kg高油脂食物的好氧堆肥餐廚垃圾處理機(jī)中，開始運(yùn)作，24小時(shí)后開始記錄堆肥料中的干基含油量；(2)對(duì)照組：菌株：枯草芽孢桿菌gim1.222、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母輔料：20％玉米糠、20％米糠、8％椰糠、40％花生麩、12％紅糖枯草芽孢桿菌接入lb液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)至活菌濃度為(5～9)×108cfu/ml；凝結(jié)芽孢桿菌接入液體乳酸菌培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)至活菌濃度為(3～7)×108cfu/ml；釀酒酵母接入麥汁紅糖培養(yǎng)液(8％麥汁+2％紅糖)中，28℃搖床培養(yǎng)至活菌濃度為(3～9)×107cfu/ml；將上述各菌株發(fā)酵液150ml接入到2.5kg輔料中，然后投入到含15kg高油脂食物的好氧堆肥餐廚垃圾處理機(jī)中，開始運(yùn)作，24小時(shí)后開始記錄堆肥料中的干基含油量。采用枯草芽孢桿菌gim1.222和枯草芽孢桿菌6-1oil處理餐廚垃圾好氧堆肥的對(duì)比結(jié)果如表1所示。處理的對(duì)比效果圖如圖6所示。其中，左邊的柱狀圖為含有除油菌6-1oil(實(shí)驗(yàn)組)的處理結(jié)果；右邊的柱狀圖為對(duì)照組的處理結(jié)果。表1枯草芽孢桿菌gim1.222和枯草芽孢桿菌6-1oil處理餐廚垃圾好氧堆肥的對(duì)比結(jié)果時(shí)間第1天(初始)第3天第6天試驗(yàn)組干基含油量(％)18.79.94.2對(duì)照組干基含油量(％)16.616.114.5分析表1和圖6可知，本發(fā)明的枯草芽孢桿菌6-1oil能很好地處理餐廚垃圾的油脂成分，降解5天后(即第6天)，對(duì)照組的干基含油量為14.5％，油脂降解率為12.6％，試驗(yàn)組干基含油量降低到了4.2％，油脂降解率高達(dá)77.5％；與含有普通枯草芽孢桿菌的對(duì)照組相比，從油脂降解率得知，枯草芽孢桿菌6-1oil在餐廚垃圾處理中能高效地降低油脂含量。實(shí)施例6本例為枯草芽孢桿菌6-1oil在治理土壤油污中的應(yīng)用，包括以下步驟：1)枯草芽孢桿菌6-1oil接種于油脂固體培養(yǎng)基中活化，37℃培養(yǎng)1日，所述油脂固體培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂粉15g、食用油10ml、吐溫-802ml，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4；2)挑取步驟1)活化后的枯草芽孢桿菌6-1oil接種于lb液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)得種子液，所述lb液體培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4；3)將種子液按5％接種于發(fā)酵培養(yǎng)液中，37℃，震蕩頻率為120rpm～150rpm，培養(yǎng)2日，有效活菌數(shù)≥108cfu/ml，離心干燥，得菌體，發(fā)酵培養(yǎng)液配方為：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，磷酸二氫鈉2g，補(bǔ)水至1l；；4)使用前，將步驟3)中的菌體用0.1％紅糖水按1:100倍稀釋，活化3～8小時(shí)后成為菌液，活菌含量不低于108cfu/ml；5)取潔凈土壤加入柴油，使其濃度為2000mg/kg，將步驟4)中的菌液均勻噴灑于土壤上，噴灑后翻耕土壤，每日噴灑一次，每次噴20ml菌液每1kg土壤。5日后，測(cè)量土壤中的柴油含量，下降至340mg/kg；枯草芽孢桿菌6-1oil對(duì)土壤油污處理有良好效果。實(shí)施例7生物清潔劑由溶質(zhì)、溶劑和枯草芽孢桿菌6-1oil的發(fā)酵液組成，其中溶質(zhì)、溶劑和發(fā)酵液重量配比為5～10:45～60:30～50。本例為枯草芽孢桿菌6-1oil在制備生物清潔劑的應(yīng)用，包括以下步驟：1)枯草芽孢桿菌6-1oil接種于油脂固體培養(yǎng)基中活化，37℃培養(yǎng)1日，所述油脂固體培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂粉15g、食用油10ml、吐溫-802ml，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4；2)挑取步驟1)活化后的枯草芽孢桿菌6-1oil接種于lb液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)得種子液，所述lb液體培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g，補(bǔ)水至1l，ph7.0～7.4；3)將種子液按5％接種于發(fā)酵培養(yǎng)液中，37℃，震蕩頻率為120rpm～150rpm，培養(yǎng)2日，有效活菌數(shù)≥109cfu/ml離心，得發(fā)酵液，發(fā)酵培養(yǎng)液配方為：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，磷酸二氫鈉2g，補(bǔ)水至1l；4)溶質(zhì)為表面活性劑，溶質(zhì)成分為脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸酯鈉，脂肪醇聚氧乙烯醚和烷醇酰胺，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)比為50～65:20～30:15～30；溶劑為蒸餾水，將溶質(zhì)、溶劑和枯草芽孢桿菌6-1oil發(fā)酵液按重量配比5～10:45～60:30～50混合得生物清潔劑。5)制得的生物清潔劑可用于餐具清洗、油污清洗等領(lǐng)域，效果明顯。室溫下，2l自來水中加入5ml生物清潔劑，拌勻。加入含有大量油污跡的餐具，清洗后，餐具壁上光潔沒油污，廢水清澈，且沒有明顯油面，達(dá)到清潔目的。序列表<110>江門市地爾漢宇電器股份有限公司<120>一種高效降解油脂的枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用<130>jq171-6004-d<160>1<170>patentinversion3.5<210>1<211>1292<212>dna<213>枯草芽孢桿菌（bacillussubtilis）<400>1ggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcga60ttccagcttcacgcagtcgagttgcagactgcgatccgaactgagaacagatttgtggga120ttggcttaacctcgcggtttcgctgccctttgttctgtccattgtagcacgtgtgtagcc180caggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccgg240cagtcaccttagagtgcccaactgaatgctggcaactaagatcaagggttgcgctcgttg300cgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtcact360ctgcccccgaaggggacgtcctatctctaggattgtcagaggatgtcaagacctggtaag420gttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaa480ttcctttgagtttcagtcttgcgaccgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttagct540gcagcactaaggggcggaaaccccctaacacttagcactcatcgtttacggcgtggacta600ccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgctcctcagcgtcagttacagacc660agagagtcgccttcgccactggtgttcctccacatctctacgcatttcaccgctacacgt720ggaattccactctcctcttctgcactcaagttccccagtttccaatgaccctccccggtt780gagccgggggctttcacatcagacttaagaaaccgcctgcgagccctttacgcccaataa840ttccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccgtgg900ctttctggttaggtaccgtcaaggtaccgccctattcgaacggtacttgttcttccctaa960caacagagctttacgatccgaaaaccttcatcactcacgcggcgttgctccgtcagactt1020tcgtccattgcggaagattccctactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcag1080tcccagtgtggccgatcaccctctcaggtcggctacgcatcgttgccttggtgagccgtt1140acctcaccaactagctaatgcgccgcgggtccatctgtaagtggtagccgaagccacctt1200ttatgtttgaaccatgcggttcaaacaaccatccggtattagccccggtttcccggagtt1260atcccagtcttacaggcaggttacccacgtgt1292<210>2<211>20<212>dna<213>人工序列<400>2caggctcacactttgtcttg20<210>3<211>20<212>dna<213>人工序列<400>3tgaacacagtcctgggttag20當(dāng)前第1頁12