本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于治療腫瘤的多肽。

背景技術(shù)：

腫瘤治療一直是臨床的熱點和難點問題。手術(shù)、化療、放療、靶向療法、和免疫療法是當(dāng)今癌癥治療的五大支柱。其中靶向療法是目前最有發(fā)展前途的治療手段。盡管如此，尋找腫瘤側(cè)治療靶點，一直是阻撓腫瘤靶向治療的瓶頸。

研究發(fā)現(xiàn)，MYC癌基因與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。MYC癌基因是強致癌基因，可以編碼MYC致癌蛋白。MYC癌基因調(diào)控著細(xì)胞的大約1萬個基因和微RNA的表達。MYC通過影響調(diào)控糖酵解、谷氨酰胺合成、葡萄糖轉(zhuǎn)運、線粒體蛋白合成、核苷酸合成等過程的基因，改變生物能量及代謝，激活原癌基因并抑制抑癌基因，調(diào)控細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤，如肺癌，胃癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，宮頸癌，某些神經(jīng)母細(xì)胞病，粒細(xì)胞性白血病，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，成骨肉瘤，軟骨肉瘤，脊索瘤，脂肪肉瘤，橫紋肌肉瘤，何杰金氏病及頭部腫瘤等都有myc基因的擴增或過度表達。C-myc基因主要通過擴增和染色體易位重排的方式激活，與某些組織腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和演變轉(zhuǎn)歸有重要關(guān)系。

MYC調(diào)控的細(xì)胞生物學(xué)活動包括細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、細(xì)胞生長、蛋白質(zhì)合成與新陳代謝、血管生成等。(1)細(xì)胞周期和細(xì)胞分化：MYC可經(jīng)Cyc lind1、Cyc lind2、Cycline1、Cyc lina2、CDK4、細(xì)胞分裂周期25A(CDC25A)、E2F1和E2F2的激活，啟動細(xì)胞周期演進。細(xì)胞周期的G0/G1向S期演進必需MYC，MYC激活后G1期?？s短。MYC消除細(xì)胞周期檢查點基因(如GADD45和GADD153)的轉(zhuǎn)錄。MYC是細(xì)胞分化與細(xì)胞命運的調(diào)控物異位MYC表達能阻斷多種不同類型細(xì)胞的分化。細(xì)胞退出細(xì)胞周期，發(fā)生分化，需要下調(diào)MYC；但MYC也能刺激細(xì)胞分化。MYC調(diào)控失常阻礙細(xì)胞分化和促進細(xì)胞遷移，這導(dǎo)致癌癥分化降低、侵襲和轉(zhuǎn)移等變化。(2)細(xì)胞生長、基因組不穩(wěn)定性和血管發(fā)生：體內(nèi)和體外實驗研究結(jié)果證明，MYC能增強腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞生長的能力，MYC充分供給細(xì)胞的幾類基本建構(gòu)材料，增加細(xì)胞代謝與蛋白質(zhì)合成。當(dāng)MYC激活時，細(xì)胞生長不再限速。研究報道，MYC調(diào)控失常的細(xì)胞發(fā)生特異性基因高頻率擴增。MYC能促進染色體不穩(wěn)定性，MYC調(diào)控失常伴隨血管生成，MYC表達增加和白介素1β(IL1β)釋放對于啟動血管生成具有決定性作用。(3)MYC對細(xì)胞凋亡的調(diào)控：研究報道，MYC裸細(xì)胞對不同凋亡刺激具抵抗性，這證明MYC在凋亡過程中的決定性作用。MYC失調(diào)使ARF上調(diào)，并通過ARF-MDM2-p53通路誘發(fā)凋亡。在MYC致瘤的小鼠模型，喪失這些腫瘤抑制物可促成腫瘤生成。ARF-MDM2-p53之外的瘤基因或致瘤性調(diào)控物如BM I1，TWIST1和CUL7可與MYC合作從而發(fā)揮致病作用。由此可見，MYC癌基因是腫瘤靶向治療的重要靶點。

針對這些特點，可以對腫瘤進行進一步的靶向治療研究。合成針對C-myc基因抑制劑治療腫瘤具有廣闊的發(fā)展前景。目前，沒有成熟開發(fā)的MYC致癌蛋白制劑問世，用于治療腫瘤。

本發(fā)明人設(shè)計出MYC癌基因抑制多肽，用于治療腫瘤患者，為腫瘤患者的治療找到新的突破口。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有腫瘤患者治療的藥物特點，設(shè)計一種MYC癌基因抑制多肽，能有效治療腫瘤。

技術(shù)方案

一種MYC癌基因抑制多肽，其序列為SEQ ID NO1。所述多肽的治療腫瘤的應(yīng)用。其用途可通過多種給藥方式治療腫瘤，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注等實現(xiàn)。所述MYC癌基因抑制多肽抑制MYC致癌蛋白表達，及蛋白活性。

有益結(jié)果：

本發(fā)明中的MYC癌基因抑制多肽序列SEQ ID NO1，為全新的序列?？梢园邢蛞种芃YC癌基因抑制MYC致癌蛋白表達產(chǎn)生的效應(yīng)，達到治療腫瘤的效果。試驗結(jié)果表明：本發(fā)明能夠抑制體外的多種腫瘤細(xì)胞增殖，促進腫瘤細(xì)胞中MYC蛋白表達，抑制腫瘤細(xì)胞端粒酶活性，抑制腫瘤模型裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長，提高荷瘤小鼠生存率。達到治療腫瘤的效果。

具體實施方式

MYC癌基因抑制多肽由上海生工吉爾合成。

實施例1

MYC癌基因抑制多肽的體外細(xì)胞增殖活性測定

采用MTT比色法。將對數(shù)生長的胃癌細(xì)胞株SGC-7901，以1.0×10⁵加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物MYC癌基因抑制多肽；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶標(biāo)儀570nm處測定吸光度A值，按公式細(xì)胞生長增殖抑制率＝(實驗組吸光值/對照組吸光值-1)×100％。計算出實驗藥物的IC50為31.21nmol/L。

實施例2

用腫瘤模型檢測MYC癌基因抑制多肽的體內(nèi)效應(yīng)。

建立結(jié)腸癌腫瘤模型，將處于對數(shù)生長期的HT29細(xì)胞用胰蛋白酶于37℃消化后，收集培養(yǎng)液，生理鹽水清洗2～3次。用生理鹽水將細(xì)胞濃度調(diào)整為2×10⁷個/mL，接種于C57BL/6裸鼠右前肢腋部皮下，每只0.1mL。1w～2w后裸鼠腫瘤體積長到100～200mm³，剖取其瘤組織在無菌條件下碾磨，制備成1×10⁷個/mL細(xì)胞懸液，接種于C57BL/6裸鼠右前肢腋部皮下，每只0.1mL。1w～2w后裸鼠腫瘤體積長到70～100mm³后，裸鼠隨機分成4組，每組10只。(1)空白組；(2)MYC癌基因抑制多肽低劑量組；(3)MYC癌基因抑制多肽中劑量組；(4)MYC癌基因抑制多肽高劑量組。建立結(jié)腸癌腫瘤模型，方案為：空白組加入相同體積的溶劑，實驗組MYC癌基因抑制多肽(上海生工吉爾合成)設(shè)3個劑量：5、10、20mg/Kg，在腫瘤周圍多點注射。連續(xù)給藥21天后，觀察裸鼠存活數(shù)量，計算存活率。結(jié)果顯示，MYC癌基因抑制多肽可有效地保護裸鼠，提高結(jié)腸癌荷瘤裸鼠的生存率，20mg/Kg時，生存率達到69.3％。

實施例3

MYC癌基因抑制多肽對胃癌細(xì)胞株SGC-7901中MYC蛋白表達的影響：將SGC-7901細(xì)胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)基，在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至90％以上的匯合度時，用0.25％胰蛋白酶消化細(xì)胞，計數(shù)，3000rpm離心5min收集細(xì)胞；加入10％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液(5ml)懸浮細(xì)胞，細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為5*10⁶個/ml，于6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)。實驗設(shè)空白對照組、MYC癌基因抑制多肽各劑量(5、10、20mg/ml)組。各組分別加入SGC-7901細(xì)胞懸液600μl/孔后，空白對照組加入1640培養(yǎng)液600μl，MYC癌基因抑制多肽各劑量組在加入不同濃度的多肽。按20μl/1×10⁵個細(xì)胞加入蛋白質(zhì)提取液，吹吸打散細(xì)胞，4℃放置30min使細(xì)胞裂解，用于檢測細(xì)胞裂解液中MYC蛋白表達量。

結(jié)果顯示，MYC癌基因抑制多肽處理的SGC-7901中MYC蛋白表達明顯升高。SGC-7901細(xì)胞裂解液中MYC蛋白表達(229.71±32.89pg/(mg總蛋白)(p<0.05)，570.19±120.43pg/(mg總蛋白)(p<0.05)，845.62±223.22pg/(mg總蛋白)(p<0.05))，與SGC-7901對照組(29.01±16.87pg/(mg總蛋白))相比有顯著性差異。由此可見，MYC癌基因抑制多肽能促進人胃癌細(xì)胞SGC-7901中MYC蛋白表達。

實施例4

采用端粒酶活性測定，評價MYC癌基因抑制多肽對胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞調(diào)亡的影響：將SGC-7901細(xì)胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)基，在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至90％以上的匯合度時，用0.25％胰蛋白酶消化細(xì)胞，計數(shù)，3000rpm離心5min收集細(xì)胞；加入10％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液(5ml)懸浮細(xì)胞，細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為5*10⁶個/ml，于6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)。實驗設(shè)空白對照組、MYC癌基因抑制多肽各劑量(5、10、20mg/ml)組。各組分別加入SGC-7901細(xì)胞懸液600μl/孔后，空白對照組加入1640培養(yǎng)液600μl，MYC癌基因抑制多肽各劑量組在加入不同濃度的多肽。按20μl/1×10⁵個細(xì)胞加入蛋白質(zhì)提取液，吹吸打散細(xì)胞，4℃放置30min使細(xì)胞裂解，采用端粒酶活性檢測試劑盒(美國promega)檢測細(xì)胞裂解液中端粒酶活性。

結(jié)果顯示，MYC癌基因抑制多肽處理的SGC-7901中端粒酶活性明顯降低。SGC-7901細(xì)胞裂解液中端粒酶活性(54.71±17.07pg/ml(p<0.05)，35.29±18.46pg/ml(p<0.05)，15.62±0.32pg/ml)(p<0.05))，與SGC-7901對照組(121.6501±16.67pg/(mg總蛋白))相比有顯著性差異。由此可見，MYC癌基因抑制多肽能促進人胃癌細(xì)胞SGC-7901中端粒酶活性，促進細(xì)胞調(diào)亡。

SEQUENCE LISTING

<110> 羅瑞雪

<120> MYC癌基因抑制多肽及其應(yīng)用

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 34

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Val Asn Gln Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys

1 5 10 15

Asn Ile Ile Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Leu Val Ser Glu Lys

20 25 30

Leu Ala