本發(fā)明涉及一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置及其制作方法，屬于空氣環(huán)境生物污染預(yù)測領(lǐng)域。

技術(shù)背景

目前室內(nèi)空氣污染狀況不容樂觀，隨著人們生活水平的不斷進(jìn)步，對于室內(nèi)空氣品質(zhì)的要求也越來越高。目前各種生物污染疫情在全球范圍內(nèi)接連出現(xiàn)，空氣微生物污染問題日益成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，在當(dāng)前污染形勢嚴(yán)峻的前提下，預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染顯得十分重要。人們每天大約80%-90%的時間是在室內(nèi)度過的，因此室內(nèi)環(huán)境對于人們身體健康和生活質(zhì)量有著極大的影響。特別是隨著中央空調(diào)系統(tǒng)在大型建筑中的廣泛運(yùn)用，使建筑物密閉程度增加，置換通風(fēng)的次數(shù)減少，室內(nèi)的微生物在適宜的生長環(huán)境下將會大量繁殖，嚴(yán)重影響室內(nèi)環(huán)境，危害人體健康，極易引起呼吸道系統(tǒng)疾病和各種過敏癥狀等。

關(guān)于室內(nèi)空氣微生物檢驗方法，國家“gbt18204.3-2013公共場所衛(wèi)生檢驗方法”規(guī)定了兩種方法，撞擊法與自然沉降法，但無論是使用空氣微生物采樣器采樣，還是使用平板沉積法進(jìn)行采集，采集后均需進(jìn)行實驗室培養(yǎng)采集樣本，且儀器成本高，耗費(fèi)時間長，不適用于有需要的一般家庭使用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決目前預(yù)測空氣微生物污染潛在性缺乏相關(guān)研究應(yīng)用的現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置及其制作方法。該熱濕響應(yīng)裝置結(jié)構(gòu)簡單，制作和使用方便。針對日趨嚴(yán)重的建筑室內(nèi)生物污染問題，在已進(jìn)行熱濕響應(yīng)實驗的基礎(chǔ)上，預(yù)測室內(nèi)環(huán)境中潛在的滋生微生物污染的可能性，為建筑生物安全問題提供污染風(fēng)險預(yù)測。

本發(fā)明的采用技術(shù)方案是：一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置，它包括一個設(shè)有中隔板的盒體和盒蓋，它還包括一個半透膜、真菌菌落和pda培養(yǎng)基，所述pda培養(yǎng)基放在中隔板兩側(cè)的盒體中，在pda培養(yǎng)基上平面的中間位置放置真菌菌落，然后用半透膜封貼在盒體的口部，蓋上盒蓋。

所述的一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置的制作方法步驟如下：

（a）本發(fā)明裝置的兩株菌株購買于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中，凍干管形式的菌種置于4℃溫度條件下保存；

（b）實驗前，使用75%醫(yī)用酒精擦拭安瓿管表面消毒，在對安瓿管封口進(jìn)行燒熱處理時，采用無菌水滴在封口使其破裂；

（c）以移液槍吸取0.5ml液體培養(yǎng)基于安瓿管中將干燥菌體全部溶解，吸出并放入盛有4-5ml液體培養(yǎng)基的試管中，在28℃的最佳溫度下靜置1-2天，培養(yǎng)2-3代以恢復(fù)其活力；

（d）使用八層紗布過濾法，真菌孢子和水分子可以通過紗布濾出，進(jìn)而將液體培養(yǎng)基中菌絲體去除，最終形成均勻分布的真菌孢子懸浮液；

（e）使用血球計數(shù)板等儀器，確保接種的真菌孢子懸浮液濃度為10⁶孢子/ml；

（f）各接種100μl的枝孢屬、青霉屬孢子懸浮液于裝置兩個小室的pda培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂15-20克，自來水1000毫升，自然ph，接種后使用半透膜密封，允許空氣進(jìn)入并防止真菌孢子逸出，并加裝盒蓋進(jìn)行密封，置于4℃溫度條件下保存，最長保存時間為1個月；

（g）在裝置制作過程中，對實驗材料及儀器分別采用了高溫蒸汽滅菌鍋處理、隔離空氣包裹、75%醫(yī)用酒精浸泡、酒精燈外焰灼燒等方法進(jìn)行殺菌，實驗的整個過程均在垂直層流潔凈工作臺中的無菌環(huán)境下操作完成。

本發(fā)明的有益效果是：這種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置包括一個設(shè)有中隔板的盒體、盒蓋、半透膜、真菌菌落和pda培養(yǎng)基，、pda培養(yǎng)基放在中隔板兩側(cè)的盒體中，在pda培養(yǎng)基上平面的中間位置放置真菌菌落，然后用半透膜封貼在盒體的口部，蓋上盒蓋。該裝置針對于建筑室內(nèi)生物污染，使用建筑室內(nèi)優(yōu)勢微生物作為指示菌種，以建筑內(nèi)復(fù)雜多變的環(huán)境因子為影響微生物繁殖的參數(shù)，采用了簡潔高效的發(fā)明裝置，提出了一種預(yù)測微生物污染的新方法，極大地提高了家庭用預(yù)測室內(nèi)空氣生物污染潛在性的可行性，縮短了檢測周期，降低了檢測成本，可進(jìn)行大批量生產(chǎn)，且裝置的設(shè)計避免了二次污染的產(chǎn)生。

附圖說明

圖1是一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)圖。

圖2是20℃、不同相對濕度（rh）下，枝孢屬菌落直徑隨時間的變化圖。

圖3是25℃、不同相對濕度（rh）下，枝孢屬菌落直徑隨時間的變化圖。

圖4是30℃、不同相對濕度（rh）下，枝孢屬菌落直徑隨時間的變化圖。

圖5是20℃、不同相對濕度（rh）下，青霉屬菌落直徑隨時間的變化圖。

圖6是25℃、不同相對濕度（rh）下，青霉屬菌落直徑隨時間的變化圖。

圖7是30℃、不同相對濕度（rh）下，青霉屬菌落直徑隨時間的變化圖。

圖中：1、盒蓋，2、半透膜（允許空氣進(jìn)入，防止真菌孢子逸出）3、隔板，4、盒體，5、真菌菌落，6、pda培養(yǎng)基。

具體實施方式

以下參照附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。

圖1示出么了一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)圖。這種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置包括一個設(shè)有中隔板3的盒體4、盒蓋1、、半透膜2、真菌菌落5和pda培養(yǎng)基6。pda培養(yǎng)基6放在中隔板3兩側(cè)的盒體4中，在pda培養(yǎng)基6上平面的中間位置放置真菌菌落5，然后用半透膜2封貼在盒體4的口部，蓋上盒蓋1。

一種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置的制作方法步驟如下：

（a）本發(fā)明裝置的兩株菌株購買于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中，凍干管形式的菌種置于4℃溫度條件下保存；

（b）實驗前，使用75%醫(yī)用酒精擦拭安瓿管表面消毒，在對安瓿管封口進(jìn)行燒熱處理時，采用無菌水滴在封口使其破裂；

（c）以移液槍吸取0.5ml液體培養(yǎng)基于安瓿管中將干燥菌體全部溶解，吸出并放入盛有4-5ml液體培養(yǎng)基的試管中，在28℃的最佳溫度下靜置1-2天，培養(yǎng)2-3代以恢復(fù)其活力；

（d）使用八層紗布過濾法，真菌孢子和水分子可以通過紗布濾出，進(jìn)而將液體培養(yǎng)基中菌絲體去除，最終形成均勻分布的真菌孢子懸浮液；

（e）使用血球計數(shù)板等儀器，確保接種的真菌孢子懸浮液濃度為10⁶孢子/ml；

（f）各接種100μl的枝孢屬、青霉屬孢子懸浮液于裝置兩個小室的pda培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂15-20克，自來水1000毫升，自然ph，接種后使用半透膜密封，允許空氣進(jìn)入并防止真菌孢子逸出，并加裝盒蓋進(jìn)行密封，置于4℃溫度條件下保存，最長保存時間為1個月；

（g）在裝置制作過程中，對實驗材料及儀器分別采用了高溫蒸汽滅菌鍋處理、隔離空氣包裹、75%醫(yī)用酒精浸泡、酒精燈外焰灼燒等方法進(jìn)行殺菌，實驗的整個過程均在垂直層流潔凈工作臺中的無菌環(huán)境下操作完成。

這種預(yù)測室內(nèi)空氣微生物污染潛在性的熱濕響應(yīng)裝置的使用方法：

該裝置實測布點(diǎn)要求按照國家“gbt18204.3-2013公共場所衛(wèi)生檢驗方法”自然沉降法布點(diǎn)要求進(jìn)行布置。使用時開啟盒蓋，放置于室內(nèi)環(huán)境空間144h后，肉眼觀察或尺規(guī)測量形成的菌落直徑，熱濕響應(yīng)實驗相對最不利生長環(huán)境（20℃，相對濕度45%）下，枝孢屬培養(yǎng)后的菌落直徑為2.1cm，青霉屬菌落培養(yǎng)后的菌落直徑為1cm，以此為界定值。若兩株真菌菌落直徑均沒有超過此數(shù)值，則該建筑室內(nèi)中潛在的滋生微生物的可能性較?。蝗魞芍暾婢渲睆接幸粋€超過此數(shù)值，則該建筑室內(nèi)中存在一定的潛在的滋生微生物的可能性；若兩株真菌菌落直徑均超過此數(shù)值，則該建筑室內(nèi)中存在較高的潛在的滋生微生物的可能性，需要注意是否需要采取相應(yīng)的污染控制措施。

采用上述的技術(shù)方案，以界定建筑室內(nèi)空氣環(huán)境中是否易于滋生微生物污染。該裝置選取了室內(nèi)空氣中常見的真菌微生物——青霉屬、枝孢屬，作為污染潛在性指示菌種，菌株購買于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中（cicc），菌株保藏編號分別為：枝孢屬（2665）、青霉屬（40279）。以青霉屬、枝孢屬熱濕響應(yīng)實驗的菌落數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，由熱濕實驗結(jié)果可知，當(dāng)溫度為20℃，相對濕度為45%，培養(yǎng)時間144h時，實驗條件中相對最不利條件下，枝孢屬培養(yǎng)后的菌落直徑為2.1cm，青霉屬菌落培養(yǎng)后的菌落直徑為1cm。為界定建筑室內(nèi)環(huán)境中是否存在潛在的污染可能性，選擇實驗條件中相對最不利條件下，枝孢屬菌落直徑2.1cm以及青霉屬菌落直徑1cm作為兩個典型值。

確定該裝置中初始接種的真菌量與熱濕響應(yīng)實驗接種的真菌類相同是至關(guān)重要的（10⁶孢子/ml，100μl）。利用八層紗布過濾法配制真菌孢子懸浮液，最終形成可均勻分布的真菌孢子懸浮液，使用血細(xì)胞計數(shù)器等確保濃度與熱濕實驗濃度基本相同。在裝置左右小室中倒入適當(dāng)pda培養(yǎng)基，并各移液100μl枝孢屬、青霉屬真菌孢子懸浮液，用半透膜封住，半透膜只允許空氣進(jìn)入裝置，而阻隔真菌產(chǎn)生的孢子逸出，裝置放置于建筑室內(nèi)中，根據(jù)裝置中真菌的生長情況，界定室內(nèi)環(huán)境中滋生微生物污染的可能性。該裝置可以在家用冰箱冷藏室中儲存一段時間，提高了裝置在家庭中應(yīng)用的便利性。