1.一種通經(jīng)活絡膠囊中微生物限度檢查方法,其特征在于,所述膠囊為孕坤通膠囊,該方法依次包括下述步驟:
1)菌液制備
取經(jīng)33℃培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)液及25℃培養(yǎng)24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)液,用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含菌數(shù)為1000~10000cfu/ml的菌懸液,備用;取經(jīng)25℃培養(yǎng)7天的黑曲霉沙氏葡萄糖瓊脂斜面,加入5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫,用帶有棉花的球形吸管吸出孢子懸液,用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成含孢子數(shù)為1000~10000cfu/ml的孢子懸液,備用;
2)供試液制備
取本品10g,加入預熱至45℃的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至100ml,45℃氣浴振搖20min,混勻,作為1:10供試液;
3)方法建立及回收率試驗
確定采用稀釋法進行需氧菌總數(shù)的測定、采用常規(guī)法進行霉菌和酵母菌總數(shù)的測定;
4)控制菌檢驗方法的建立及驗證
采用常規(guī)法進行大腸埃希菌檢查;
步驟3)所述的常規(guī)法進行霉菌和酵母菌總數(shù)的測定依次包括下述步驟:
試驗組:吸取1:10供試液9.9ml,共5份,每份中加入0.1ml的試驗菌懸液,搖勻,分別從試驗菌試管中吸取1ml至平皿中,傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基;另從真菌試管中分別吸取1ml至平皿中,傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基;每株試驗菌平行制備2個平皿;
菌液對照組:吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基9.9ml,共5份,每份中加入0.1ml的試驗菌懸液,搖勻,分別從試驗菌試管中吸取1ml至平皿中,傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基;另從真菌試管中分別吸取1ml至平皿中,傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基;每株試驗菌平行制備2個平皿;
供試品組:吸取1:10供試液1ml至平皿,平行制備4個平皿,其中2個傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基,另外2個傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基;
稀釋劑組:吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基1ml至平皿,平行制備4個平皿,其中2個傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基,另外2個傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基;
各平皿傾注瓊脂培養(yǎng)基,待凝固后,分別置培養(yǎng)3-5d,測定需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù),計算其回收率。
步驟3)所述的所述的稀釋法依次包括下述步驟:
供試液制備
取本品10g,加入預熱至45℃的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至100ml,45℃氣浴振搖20min,混勻,作為1:10供試液;吸取1:10供試液20ml加入80ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中,搖勻制成1:50供試液;
試驗組:吸取1:50供試液9.9ml,共5份,每份中加入0.1ml的試驗菌懸液,搖勻,分別從試驗菌試管中吸取1ml至平皿中,傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基,每株試驗菌平行制備2個平皿;
菌液對照組:吸取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基9.9ml,共5份,每份中加入0.1ml的試驗菌懸液,搖勻,分別從試驗菌試管中吸取1ml至平皿中,傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基;每株試驗菌平行制備2個平皿;
供試品組:吸取1:50供試液1ml至平皿,平行制備2個平皿,傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基;
各平皿傾注瓊脂培養(yǎng)基,待凝固后,分別置培養(yǎng)3d,測定需氧菌總數(shù),計算其回收率。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種通經(jīng)活絡膠囊中微生物限度檢查方法控制菌檢驗方法的建立及驗證依次包括下述步驟:
1)菌種
取經(jīng)33℃培養(yǎng)24h的大腸埃希菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)液,用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含菌數(shù)為10~100cfu/ml的菌懸液,備用;
2)供試液制備
取本品10g,加入預熱至45℃的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至100ml,45℃氣浴振搖20min,混勻,作為1:10供試液
3)試驗方法:
取供試品組樣品做控制菌檢查法檢查;
陽性對照試驗取供試品組,并加入相應的陽性菌菌液1ml進行培養(yǎng),作相應控制菌檢查法檢查;
取稀釋液10ml代替做控制菌檢查法檢查,作為陰性對照。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種通經(jīng)活絡膠囊中微生物限度檢查方法,其特征在于,所述的大腸埃希菌檢測方法依次包括下述步驟:
取1:10供試液10ml接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中,33℃培養(yǎng)24h;取培養(yǎng)物1.0ml,接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中,44℃培養(yǎng)24h,取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板,33℃培養(yǎng)24h,觀察其菌落形態(tài)。