本發(fā)明涉及一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖及其應(yīng)用方法，屬于生物農(nóng)藥與生物醫(yī)藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌具有多種生理、藥理活性?？僧a(chǎn)生一系列具有生物活性的物質(zhì)，如固氮酶、植物激素、多糖、水解酶類、抗生素等，在包括生物固氮、促進植物生長、開發(fā)新型抗生素、抑制植物病害等方面具有重大的應(yīng)用價值。隨著環(huán)境壓力的增大和人們對健康及食品安全要求的提高，微生物農(nóng)藥受到越來越多的重視。本發(fā)明采用人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌菌株是從人參植株中分離獲得的，該菌株的發(fā)酵液對人參黑斑病菌（alternariapanaxwhetz）、人參銹腐菌（cylindrocarpondestructanszinns）、人參菌核病菌（sclerotiniaschinsengwang）、人參立枯病菌（rhizoctoniasolanikuhn）、人參根腐病菌（fusariumsolaniapp）及人參細(xì)菌性軟腐?。╡rwiniacarotovorasubsp）等病原菌具有明顯的防病效果，表現(xiàn)了良好的生防前景，因此如何尋找一種低成本、高效快捷的多粘類芽孢桿菌及其制劑工業(yè)化放大培養(yǎng)方式已成為研究的熱點。為了進一步較好地開發(fā)利用該菌株進行植物病害的生物防治，本發(fā)明系統(tǒng)研究了cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖及其應(yīng)用方法，旨在高效生產(chǎn)該菌，為該菌株生物農(nóng)藥和制劑的開發(fā)提供依據(jù)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖及其應(yīng)用方法，其特征在于：（1）一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖的培養(yǎng)基，按質(zhì)量體積比計，包括：cu2+離子10-5000mg/l，馬鈴薯200g/l,葡萄糖20g/1l；（2）一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖應(yīng)用方法：無菌條件下，向滅菌的含cu2+離子濃度為10-5000mg/l的pdb培養(yǎng)基中，接種活化的od600值為0.5的多粘類芽孢桿菌菌液，接種量為0.1%，置于28℃、120r/min條件下恒溫震蕩培養(yǎng)72h；（3）一種促進多粘類芽孢桿菌增殖的培養(yǎng)基應(yīng)用方法，可提高多粘類芽孢桿菌增殖的生物量，縮短粘類芽孢桿菌增殖的延遲期，提前粘類芽孢桿菌增殖的對數(shù)期。
本發(fā)明所述多粘類芽孢桿菌(paenibacilluspolymyxa)，已于2013年2月5日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為cgmccn0.7250。
實例1一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖及其應(yīng)用方法
本發(fā)明提供了一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖及其應(yīng)用方法，本發(fā)明領(lǐng)域技術(shù)人員可借助本發(fā)明內(nèi)容，適當(dāng)改進參數(shù)實現(xiàn)，所有的類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，都視為本發(fā)明。本發(fā)明所述的方法已通過較佳實施例進行描述。相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容，精神和范圍內(nèi)對本文所述方法和應(yīng)用進行改動和適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
試驗例1一種cu2+離子促進多粘類芽孢桿菌增殖及其應(yīng)用方法
1.材料與方法
1.1材料
多粘類芽孢桿菌來自本實驗室，已保存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號cgmcc：no.7250；葡萄糖、cuso4·5h2o（北京化工）。純凈水為杭州娃哈哈公司；其余試劑為分析純。
1.2儀器與設(shè)備
cha-s型氣浴往返恒溫震蕩培養(yǎng)箱；tecaninfinite?200pro型多功能酶標(biāo)儀。
1.3方法
無菌條件下，向每個滅菌試管中分別加入5ml含cu2+離子濃度分別為0，10，30，50，100，500，1000和5000mg/l的pdb培養(yǎng)基，每個濃度處理設(shè)3次重復(fù)，再向每個試管中分別接種0.05ml活化的od600值為0.5的多粘類芽孢桿菌菌液，置于28℃、120r/min條件下恒溫震蕩培養(yǎng)。分別于0、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120h取樣測定od600值。
1.4統(tǒng)計分析
所得數(shù)據(jù)應(yīng)用spss23.0軟件進行統(tǒng)計分析。
2.結(jié)果與分析
由表1可見，所測結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計結(jié)果顯著性用字母表示，同一時間不同濃度相比較，用小寫字母表示；同一濃度不同時間相比較，用大寫字母表示。字母相同的為差異不顯著的，字母不同的為差異顯著，p＜0.05。在本實驗設(shè)計范圍內(nèi)，當(dāng)cu2+離子濃度為10，30和50mg/l時，與對照組相比多粘類芽孢桿菌增殖的延遲期縮短，對數(shù)期提前；當(dāng)cu2+離子濃度為30mg/l時，延遲期縮短12h左右，對數(shù)期提前24h左右；適宜濃度的cu2+離子對多粘類芽孢桿菌增殖有一定的促進作用，其中cu2+離子濃度為30mg/l時，對多粘類芽孢桿菌促進作用最強。但當(dāng)cu2+離子濃度大于100mg/l時，對多粘類芽孢桿菌增值有一定的抑制作用，隨著濃度的增加抑制作用增強。
3.結(jié)論
適宜濃度的cu2+離子對多粘類芽孢桿菌增殖有一定的促進作用，其中cu2+離子濃度為30mg/l時，對多粘類芽孢桿菌促進作用最強。但當(dāng)cu2+離子濃度大于100mg/l時，對多粘類芽孢桿菌增值有一定的抑制作用，隨著濃度的增加抑制作用增強。