本發(fā)明涉及酶制劑領(lǐng)域，具體涉及一種用于大腸桿菌破壁的中藥組合物及其方法。
背景技術(shù)：
大腸桿菌產(chǎn)的酶大多為胞內(nèi)酶，如要獲得胞內(nèi)酶，必須要使細(xì)胞破碎把酶釋放出來，破壁的方法較多，比如超聲法、自溶法、高壓均質(zhì)、酶法等，這幾種方法都存在一定的弊端，超聲法破壁能耗較高不適于工業(yè)化放大生產(chǎn)，自溶法破壁需要的時間較長，高壓均質(zhì)破壁產(chǎn)生的熱量較高容易對酶造成傷害，而酶法破壁用的主要是蛋白酶，破壁后釋放出來的酶會被其降解?，F(xiàn)存的破壁方法在成本上或者規(guī)模上都不能達(dá)到最好的效果，所以急需尋找一種成本低又易于工業(yè)化生產(chǎn)的破壁方法。
許多天然中草藥具有抗菌效果，如黃連的有效成分小檗堿，對不同菌的抑制作用不同，對金黃色葡萄球菌的抑制作用機(jī)理為抑制金黃色葡萄球菌代謝的各個環(huán)節(jié)，包括細(xì)菌的呼吸、糖及糖代謝中間產(chǎn)物的氧化和脫氫過程以及蛋白質(zhì)及核酸合成的抑制，小檗堿抑制福氏痢疾桿菌的抗菌機(jī)制為抑制痢疾桿菌的呼吸，特別是抑制天冬氨酸和琥珀酸鈉的氧化過程。大蒜的抗菌作用機(jī)制為大蒜辣素分子中的氧原子與細(xì)菌生長繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巰基結(jié)合，使后者變?yōu)榉腔钚晕镔|(zhì)，干擾了細(xì)菌代謝，而抑制細(xì)菌的生長和繁殖。目前已經(jīng)報道的具有抗菌作用的中草藥很多，但是單個的中藥的破壁效果有限，找到有效的中藥組方成為了關(guān)鍵。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的在于提供一種用于大腸桿菌破壁的中藥組合物及方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中自溶法破壁時間較長、成本高的技術(shù)問題。
一種用于大腸桿菌破壁的中藥組合物，所述中藥組合物為按重量比為1:1的黃蓮和大蒜。
一種產(chǎn)酶大腸桿菌的破壁方法，其方法包括如下步驟：
(1).中藥提取液的制備：準(zhǔn)備黃連和大蒜，加入5～10倍的水煎煮20min～60min，倒出藥液，再加入5～10倍水煎煮20min～60min，合并兩次藥液，過濾、濃縮后定容至生藥濃度為1g/ml，備用；
(2).收集發(fā)酵結(jié)束的大腸桿菌發(fā)酵液；
(3).破壁：按照所述發(fā)酵液重量的0.5～5％的比例添加所述步驟(1)中制備的中藥提取液，攪拌均勻，保持溫度在20℃～50℃，保溫4～12h；
(4).所述步驟(3)破壁結(jié)束后將溶液先絮凝再過濾，即得到粗酶液。
如上所述的破壁方法，優(yōu)選地，所述黃連和大蒜的重量比為1:1。
如上所述的破壁方法，優(yōu)選地，所述步驟(1)制備的中藥提取液在滅菌條件為121℃、30min，后儲藏。
如上所述的破壁方法，優(yōu)選地，所述絮凝為按照發(fā)酵液的重量比添加氯化鈣0.5％，磷酸氫二鉀1％，攪拌均勻后靜置2h。
本發(fā)明提供的用于大腸桿菌破壁的中藥組合物，通過添加該中藥組合物的提取液來減少自溶法破壁的時間，破壁后有效增加酶活回收率，并大大的降低了生產(chǎn)成本，方法操作簡單，生產(chǎn)效率大大提高。
具體實施方式
本發(fā)明通過對多種中藥進(jìn)行單一或多組合進(jìn)行研究，最后確定選用黃連和大蒜的組合作為大腸桿菌破壁的中藥組合物。本發(fā)明是在自溶法的基礎(chǔ)上加入抗菌中草藥組合物的提取液，增加菌體的死亡率，減少自溶破壁的時間，增加破壁的收率。
通過下面給出的本發(fā)明的具體實施例以及比較實施例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明，但它們不是對本發(fā)明的限定。
下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
實施例1
1、中藥提取液制備:準(zhǔn)備黃連和大蒜(其重量比為1:1)，加入10倍的水煎煮30min，倒出藥液，再加入10倍水煎煮30min，合并兩次藥液，過濾、濃縮(加熱蒸發(fā)水分)后用水定容至生藥濃度為1g/ml，備用。為了能有效保存該中藥提取液，將制備的中藥提取液在滅菌條件為121℃、30min，后儲藏。
2、發(fā)酵液的制備：將斜面保存的大腸桿菌shy191(由四川新華揚山野生物有限公司提供)接種到種子培養(yǎng)基(葡萄糖1％，蛋白胨1％，酵母粉0.5％)，37℃培養(yǎng)12h后接種到發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母粉0.5％，七水硫酸鎂0.5％，磷酸氫二鉀0.5％，37℃培養(yǎng)，攪拌300rpm，ph控制在6.5，發(fā)酵45h后放罐，獲得大腸桿菌發(fā)酵液。
3、破壁：收集大腸桿菌發(fā)酵液100kg，按照大腸桿菌發(fā)酵液的重量比添加0.5％步驟1制備的黃連和大蒜的提取液，ph顯示為6.8，不調(diào)ph，保持溫度50℃，時間控制在8h，然后將自溶后的發(fā)酵液加入絮凝劑，即按照發(fā)酵液重量比添加氯化鈣0.5％，磷酸氫二鉀1％，攪拌均勻后靜置2h，絮凝后經(jīng)過板框壓濾，及得到粗酶液。
對比例1
自溶破壁：收集實施例1制備的大腸桿菌發(fā)酵液100kg，不調(diào)ph，保持溫度50℃，時間控制在24h，然后將自溶后的發(fā)酵液加入絮凝劑，即按照發(fā)酵液重量比添加氯化鈣0.5％，磷酸氫二鉀1％，攪拌均勻后靜置2h，絮凝后經(jīng)過板框壓濾，及得到粗酶液。
對比例2
與實施例1中的區(qū)別在于：a、黃連提取液制備：準(zhǔn)備黃連，加入10倍的水煎煮30min，倒出藥液，再加入10倍水煎煮30min，合并兩次藥液，過濾、濃縮(加熱蒸發(fā)水分)后用水定容至生藥濃度為1g/ml，備用。
b、加入黃連的破壁：收集大腸桿菌發(fā)酵液100kg，按照大腸桿菌發(fā)酵液的重量比添加0.5％步驟a制備的黃連的提取液，ph顯示為6.8，不調(diào)ph，保持溫度50℃，時間控制在15h，然后將自溶后的發(fā)酵液加入絮凝劑，即按照發(fā)酵液重量比添加氯化鈣0.5％，磷酸氫二鉀1％，攪拌均勻后靜置2h，絮凝后經(jīng)過板框壓濾，及得到粗酶液。
將以上制備的粗酶液進(jìn)行酶活檢測，結(jié)果見表1：其中，酶活檢測方法見國標(biāo)gbt24401-2009α-淀粉酶制劑，破壁后酶活收率計算公式：收率＝破壁后酶活/破壁前酶活×100％。
表1酶活檢測結(jié)果
上述結(jié)果說明：添加本發(fā)明的中藥組合物可以大大減少破壁時間，降低成本，增加酶活回收率，創(chuàng)造價值，且操作方法簡單、效率也大大提高。