本發(fā)明涉及修復(fù)離子型稀土尾礦的技術(shù)，具體的說是一種以農(nóng)業(yè)廢物豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌制備稀土尾礦改良菌劑的技術(shù)。屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

近年來，對稀土礦資源的非法過度濫采，使礦區(qū)的生態(tài)環(huán)境問題日益突出，在稀土采礦過程中，地表土壤和植被被剝離，土壤遭到強酸的嚴重洗淋，使得土壤中養(yǎng)分顯著降低，一些植被難以長期適應(yīng)強酸和低養(yǎng)分的土壤環(huán)境。土壤中稀土元素的積累也導致土壤肥力下降、土壤沙化、生態(tài)系統(tǒng)脆弱，稀土采礦跡地的植被重建與恢復(fù)顯得尤為重要。

本專利涉及到的保藏編號為：cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47的解淀粉芽孢桿菌有很好的植物促生特性。根際植物促生細菌是能夠定植在植物根系，并對植物生長發(fā)育有利的細菌。市售地衣芽孢桿菌和市售短小芽孢桿菌與bacillusamyloliquefaciensh47組成混合菌劑可協(xié)助bacillusamyloliquefaciensh47促進植物生長。目前培養(yǎng)植物促生細菌的原料成本高昂，不利于植物促生菌劑的大規(guī)模應(yīng)用。因此研究和建立以豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌制備稀土尾礦改良菌劑的技術(shù)有重要意義。

隨著市場需求的增大和人們對食品安全的重視，養(yǎng)豬業(yè)已經(jīng)逐漸從散養(yǎng)向集約化發(fā)展，總體規(guī)模也得到了迅速增大，進而使養(yǎng)豬業(yè)排泄物迅速增長。豬場糞便等已經(jīng)對水體、空氣和環(huán)境健康帶來巨大壓力。豬糞的惡臭氣體主要包括氨氣和硫化氫，其主要因豬對蛋白質(zhì)飼料利用率低引起，殘余的營養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)糞便中微生物的厭氧發(fā)酵而產(chǎn)生氨氣和硫化氫，并可進一步與其他物質(zhì)作用產(chǎn)生苯酚、糞臭素、乙醇、硫醇、乙醛、揮發(fā)性脂肪酸等有害物質(zhì)，降低空氣質(zhì)量，危害人體健康。豬糞和豬場沖刷產(chǎn)生的污水含有n、p、k和大量有機物，含有大量的銅、鋅、砷等的化合物、抗生素藥物、病原微生物等有害物質(zhì)，若直接排放，則易直接污染地表水、也可滲入地下，導致水體富營養(yǎng)化、影響農(nóng)作物、土棲生物生長和生態(tài)安全。豬糞含有一定量的彎曲桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌等病原微生物、寄生蟲卵、孽生的蚊蠅等，若未經(jīng)處理而排放，和使用，可進入生態(tài)環(huán)境，甚至能進入作物體內(nèi)，最終給人類及畜禽帶來更多危害。

已知豬糞對環(huán)境的影響主要因有機物、重金屬離子、蚊蟲卵和病原微生物而起作用。其中許多是根際促生細菌細胞生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，其它污染物則可被促生細菌轉(zhuǎn)化。因此，可以用豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌，用于改良稀土尾礦，既可以清除豬糞污染，又能修復(fù)稀土污染土壤，改善生態(tài)環(huán)境，造福人類。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明以豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌制備稀土尾礦改良菌劑的技術(shù)。以保藏編號為：cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47的解淀粉芽孢桿菌、市售地衣芽孢桿菌和市售短小芽孢桿菌為植物促生菌劑，通過對豬糞預(yù)處理后加入植物促生菌進行擴大培養(yǎng)，即得到大量具有改善土壤理化狀況、促進植物生長的離子型稀土尾礦原位修復(fù)的植物促生菌劑。該方法對植物在離子型尾礦的生長有明顯的促進作用。豬糞得到合理利用，變廢為寶，價格低廉且簡便易行。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

用2013年6月24日保存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏編號為：cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47的解淀粉芽孢桿菌，市售地衣芽孢桿菌，市售短小芽孢桿菌混合植物促生菌劑，以豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌，制備稀土尾礦改良菌劑的技術(shù)。工藝為：

1)將保藏編號為cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47、市售地衣芽孢桿菌、市售短小芽孢桿菌等菌種活化并制備成植物促生菌劑：

(1)在三種菌種斜面分別取一環(huán)在pda平板上劃線接菌絲，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)20小時；

(2)在pda平板上挑取三種菌種單菌落分別接入裝有l(wèi)b液體培養(yǎng)基的三角瓶中，準備若干份，搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速200r/min，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)36小時，即得到植物促生菌劑擴大培養(yǎng)的種子。

2)豬糞預(yù)處理：豬糞加水至含水量40—60％，調(diào)節(jié)ph至7.0，裝在耐高溫的塑料袋中，121℃滅菌30分鐘。

3)將上述發(fā)酵菌液混合后按比例1:10(v/w)接入處理好的豬糞培養(yǎng)基中，保持水分40—60％，在25—30℃條件下增值2—3天，即得擴大培養(yǎng)的植物促生細菌改良菌劑。

本發(fā)明的有益效果：

1)本發(fā)明以豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌制備的稀土尾礦改良菌劑，可以利用植物促生菌解銨增加土壤肥力。還可作為一種保水劑，促進土壤團粒結(jié)構(gòu)形成，防止土壤板結(jié)；破壞土壤毛細現(xiàn)象，防止土壤水分蒸發(fā)。

2)本發(fā)明用豬糞為原料培養(yǎng)植物促生細菌，來源廣泛價格低廉，菌種增殖速度快，而且還可作為肥料，為植物提供各種營養(yǎng)物質(zhì)。

3)本發(fā)明使得豬糞得到合理利用，變廢為寶。

4)本發(fā)明的工藝簡單，生產(chǎn)成本低，易于推廣。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案進行清楚、完善地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

1)將保藏編號為cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47、市售地衣芽孢桿菌、市售短小芽孢桿菌等菌種活化并制備成植物促生菌劑：

(1)在三種菌種斜面分別取一環(huán)在pda平板上劃線接菌絲，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)18小時；

(2)在pda平板上挑取三種菌種單菌落分別接入裝有50mllb液體培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，每個菌接種12個，搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速180r/min，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)30小時，即得到植物促生菌劑擴大培養(yǎng)的種子。

2)豬糞預(yù)處理：稱取3千克豬糞加水至含水量60％，調(diào)節(jié)ph至7.0，裝在耐高溫的塑料袋中，121℃滅菌30分鐘。

3)將上述發(fā)酵菌液按1:1:1混合后按比例1:10(v/w)接入處理好的豬糞培養(yǎng)基中，保持水分55％，在30℃條件下增值2—3天，即得擴大培養(yǎng)的植物促生細菌改良菌劑。

實施例2

1)將保藏編號為cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47、市售地衣芽孢桿菌、市售短小芽孢桿菌等菌種活化并制備成植物促生菌劑：

(1)在三種菌種斜面分別取一環(huán)在pda平板上劃線接菌絲，在培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)20小時；

(2)在pda平板上挑取三種菌種單菌落分別接入裝有50mllb液體培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，每個菌接種12個，搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速200r/min，溫度32℃，恒溫培養(yǎng)48小時，即得到植物促生菌劑擴大培養(yǎng)的種子。

2)豬糞預(yù)處理：稱取3千克豬糞加水至含水量50％，調(diào)節(jié)ph至7.0，裝在耐高溫的塑料袋中，121℃滅菌30分鐘。

3)將上述發(fā)酵菌液按1:2:1混合后按比例1:10(v/w)接入處理好的豬糞培養(yǎng)基中，保持水分45％，在30℃條件下增值2—3天，即得擴大培養(yǎng)的植物促生細菌改良菌劑。

實施例3

1)將保藏編號為cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47、市售地衣芽孢桿菌、市售短小芽孢桿菌等菌種活化并制備成植物促生菌劑：

(1)在三種菌種斜面分別取一環(huán)在pda平板上劃線接菌絲，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24小時；

(2)在pda平板上挑取三種菌種單菌落分別接入裝有50mllb液體培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，每個菌接種12個，搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速240r/min，溫度32℃，恒溫培養(yǎng)28小時，即得到植物促生菌劑擴大培養(yǎng)的種子。

2)豬糞預(yù)處理：稱取3千克豬糞加水至含水量55％，調(diào)節(jié)ph至7.0，裝在耐高溫的塑料袋中，121℃滅菌30分鐘。

3)將上述發(fā)酵菌液按1:1:2混合后按比例1:10(v/w)接入處理好的豬糞培養(yǎng)基中，保持水分50％，在30℃條件下增值2—3天，即得擴大培養(yǎng)的植物促生細菌改良菌劑。

實施例4

1)將保藏編號為cctccm2013283的bacillusamyloliquefaciensh47、市售地衣芽孢桿菌、市售短小芽孢桿菌等菌種活化并制備成植物促生菌劑：

(1)在三種菌種斜面分別取一環(huán)在pda平板上劃線接菌絲，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)16小時；

(2)在pda平板上挑取三種菌種單菌落分別接入裝有50mllb液體培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，每個菌接種12個，搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速200r/min，溫度26℃，恒溫培養(yǎng)38小時，即得到植物促生菌劑擴大培養(yǎng)的種子。

2)豬糞預(yù)處理：稱取3千克豬糞加水至含水量70％，調(diào)節(jié)ph至7.0，裝在耐高溫的塑料袋中，121℃滅菌30分鐘。

3)將上述發(fā)酵菌液按2:1:1混合后按比例1:10(v/w)接入處理好的豬糞培養(yǎng)基中，保持水分60％，在30℃條件下增值2—3天，即得擴大培養(yǎng)的植物促生細菌改良菌劑。

本發(fā)明中，混合菌的比例、接種量、豬糞培養(yǎng)基含水量等等不限于實施例所舉的組合，可根據(jù)實際情況選擇不同的組合。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的思路和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。