本發(fā)明涉及一種具有取代吡嗪并咪唑類衍生物，其制備及其在醫(yī)藥上的應(yīng)用。

本發(fā)明還涉及所述衍生物及其可藥用的鹽或含有其的藥物組合物在bruton酪氨酸激酶抑制劑，和在治療和/或預(yù)防腫瘤與炎癥等疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

bruton酪氨酸激酶(btk)是一種重要的介導(dǎo)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的酶，存在于漿細胞，包括b細胞中。b細胞是通過b細胞受體(bcr)被活化的，而btk在bcr介導(dǎo)的信號通路中起了決定性的作用。b細胞上的bcr被活化后，引起btk的激活，導(dǎo)致下游的磷脂酶c(plc)濃度增加，并激活ip3和dag信號通路。這一信號通路可以促進細胞的增殖、粘附和存活，在b細胞淋巴瘤的發(fā)展過程中起重要的作用。

btk突變體在人群中的存在證明了btk可以成為藥物靶點。性聯(lián)無丙球蛋白血癥(xla)是一種罕見的遺傳疾病，存在于1/250000的男性中。在這種疾病中，btk的功能被抑制，從而導(dǎo)致了b細胞的產(chǎn)生或成熟受阻?；加衳la疾病的男性，體內(nèi)基本沒有b細胞，循環(huán)抗體也很少，容易出現(xiàn)嚴重甚至致命的感染。由此可見，btk在b細胞的生長和分化中起著極其重要的作用。

btk抑制劑通過抑制btk的活性，可以抑制b淋巴瘤細胞的增殖，破壞瘤細胞的粘附，促進瘤細胞的凋亡，是btk在b細胞有關(guān)的癌癥中成為令人注目的藥物靶點，尤其對b細胞淋巴瘤和白血病，比如非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin’slymphoma，nhl)、慢性淋巴細胞白血病(chroniclymphocyticleukemia，cll)、和抗復(fù)發(fā)性或難治性套細胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma，mcl)等。至今為止，市場上還沒有特異性的btk抑制劑類藥物，只有一種非特異性的btk抑制劑，美國bms公司與2006年上市的dasatinib。但目前有幾個正處于臨床試驗階段的btk抑制劑，其中有pharmacyclics公司的ibrutinib/pci-32765，avila/celgene公司的avl-292和ono公司的ono-4059等。pharmacyclics公司的ibrutinib/pci-32765是一種非常可逆的小分子btk抑制劑，已進入臨床iii其治療慢性淋巴細胞白血病和小淋巴細胞淋巴瘤(smalllymphocyticlymphoma，sll)。臨床結(jié)果顯示ibrutinib對兩種淋巴瘤有非常明顯的療效，而且非常安全。在臨床i期/iib期中，81％的原發(fā)或繼發(fā)性淋巴細胞瘤患者有應(yīng)答；在臨床ii期中，67％的既往接受治療的套細胞淋巴瘤或者有應(yīng)答。其引起的不良反應(yīng)主要是1和2級的，包括淋巴細胞增多癥(2月后自愈)、惡心嘔吐、腹瀉、疲乏等，沒有發(fā)現(xiàn)3和4級的不良反應(yīng)以及死亡的案例。avila/celgene公司的avl-292和ono公司的ono-4059也是非可逆的小分子btk抑制劑，目前都處于臨床一期階段，前者針對淋巴瘤及自身免疫性疾病，后者針對非霍奇金淋巴瘤。

btk抑制劑除了可以抗b細胞淋巴瘤和白血病，還可以抑制b細胞自身抗體和細胞因子的產(chǎn)生。在自身免疫性疾病中，b細胞呈遞自身抗原，促進t細胞活化分泌至炎癥因子造成組織損傷，同時又激活b細胞產(chǎn)生大量抗體，觸發(fā)自身免疫反應(yīng)。t和b細胞相互作用形成正反饋調(diào)節(jié)鏈，導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)失控，加重組織病理損傷。研究顯示，體內(nèi)存在著調(diào)節(jié)性b細胞，可以通過分泌白細胞介素10(il-10)或轉(zhuǎn)化生長因子β1(tcf-β1)及其他機制，負向調(diào)控免疫應(yīng)答，抑制免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。所以，b細胞可以作為自身免疫性疾病，比如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，ra)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus，sle)、過敏性疾病(；ishi食道炎、eosoniphilicesophagitis)等藥物靶點。

全球非霍奇金淋巴瘤的市場將從2007年的33億美元增長到2017年的47億美元(年均增長3.7％)。作為基于b細胞抗體的生物制劑，在nhl治療領(lǐng)域的銷售額將從2007年的28億美元增長到2017年的32億美元。但是作為一種生物制劑，和lymphostatb，在大范圍b細胞清除方面都有不足，也沒有合適的口服劑量。針對自身免疫性疾病，如抗類風(fēng)濕類口服藥物的潛在市場更大?，F(xiàn)在基于抗腫瘤壞死因子(tnf)的藥物，市場是50億美元，不過目前基于抗tnf的藥物，例如和是特異性針對t細胞的，都采用皮下注射的方式。針對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療的市場，從2009年到2017年將增長約兩倍，達到134億美元。用于其他疾病治療，如紅斑狼瘡等的潛在市場也非常大。因此btk抑制劑具有十分廣闊的前景。

盡管目前已公開了一系列的btk抑制劑的專利申請，其中包括wo2007087068、wo2010126960、wo2011019780、wo2011090760、wo2012135801、wo2012158764、wo2013060098、wo2013081016、wo2013010869、wo2013113097、wo2013155347、cn103113375，和wo2013118986等，但從中可以看出，btk抑制劑的母核結(jié)構(gòu)具有豐富的多樣性，例如：

根據(jù)所報道的活性數(shù)據(jù)結(jié)果，不同母核化合物可能具有相同或相近的活性。因此，經(jīng)過不斷努力，本發(fā)明設(shè)計并合成了具有通式(i)所示的全新母核結(jié)構(gòu)的化合物，并發(fā)現(xiàn)具有此類結(jié)構(gòu)的化合物表現(xiàn)出優(yōu)異的效果和作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

如通式(i)所述的具有具有取代吡嗪并咪唑類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，

其中：

r¹獨立地選自苯環(huán)，取代苯環(huán)、c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、5-10元雜芳基或c6-10芳基，其中所述c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、5-10元雜芳基或c6-10芳基任選被一個或多個選自鹵素、氰基、c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、-or⁷、-oc(o)nr⁵r⁶、-c(o)or⁷、-c(o)nr⁵r⁶、-c(o)r⁷、-nr⁵r⁶、-nr⁵c(o)nr⁷、-nr⁷c(o)nr⁵r⁶、-s(o)nmr⁷、-nr⁵s(o)mr⁷的取代基所取代；

x獨立地選自c、n；

l獨立地選自-o-，-ch2-；-nh-，-nhc(o)-；

本發(fā)明所述化合物，其中r¹選自苯環(huán)，取代苯環(huán)、5-10元雜芳基或c6-10芳基，其中所述5-10元雜芳基或c6-10芳基任選被一個或多個選自鹵素、氰基、c1-8烷基的取代基所取代；

“雜芳基”是指含有1-4個選自n、s和o的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基或其與苯環(huán)稠合而成的雙環(huán)雜芳基，“芳基”是指芳香族環(huán)烴基；

x獨立地選自c、n；l獨立地選自-o-，-ch2-；-nh-，-nhc(o)-；

本發(fā)明所述化合物，其中5-10元雜芳基選自吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑、吡咯、1，2，4-三氮唑、四氮唑、噻唑、噁唑、噻吩、呋喃、噻二唑、異噁唑、苯并咪唑、苯并呋喃、苯并噻唑、吲哚、苯并噻吩、嘌呤；c6-10芳基選自苯環(huán)、萘環(huán)。

本發(fā)明所述化合物，其中r¹優(yōu)選自苯環(huán)、吡啶、苯并咪唑、苯并呋喃、吲哚，所述苯環(huán)、吡啶、苯并咪唑、苯并呋喃、吲哚任選被鹵素取代，鹵素優(yōu)選氯和氟；x獨立地選自c、n；l獨立地選自-o-，-ch2-；-nh-，-nhc(o)-；

本發(fā)明還提供通式(i)所示的化合物或其互變異構(gòu)體，內(nèi)消旋體，外消旋體，對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體，其混合物形式，及其可藥用的鹽。

優(yōu)選具有如下結(jié)構(gòu)的化合物：

本發(fā)明還提供所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選鹽酸鹽、氫溴酸鹽、三氟乙酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽，水楊酸鹽，乙酰水楊酸鹽等。

本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其特征在于，包含0.01-10g權(quán)利要求1-3任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑，制成適用于臨床的藥物制劑。

本發(fā)明還提供一種藥物組合物，優(yōu)選自片劑，丸劑，顆粒劑，膠囊劑以及注射劑。

本發(fā)明還提供所述化合物及藥物組合物在制備防治癌癥或炎癥類疾病方面的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種以化學(xué)式i為代表的化合物的制備方法，其特征是：溴化取代的苯甲酰乙酸乙酯生成α-溴代-β-羰基酯，隨后與2-氨基-3-溴吡嗪環(huán)合反應(yīng)得到溴代吡嗪并咪唑化合物，在過渡金屬催化條件下與哌嗪和哌啶類化合物偶聯(lián)形成取代吡嗪并咪唑母核，然后氨解形成一級酰胺，脫boc保護，最后與?；噭┡悸?lián)生成式(i)化合物。

通用的化合物合成路線如下：

本發(fā)明所述的制備方法中，所述“溴化”采用有機合成中公知的常用溴化劑，包括但不僅限于，n-溴代丁二酰亞胺、溴水、單質(zhì)溴；所述“堿”采用有機合成中公知的有機堿或無機堿，包括但不僅限于，氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、氟化鉀、吡啶、三乙胺、二乙胺、n，n-二甲基吡啶等；所述“過渡金屬”采用有機合成中公知的過渡金屬催化劑，但不僅限于，鈀、鉑，銠等；所述h⁺為有機合成中公知的脫除boc保護劑的常用有機酸和無機酸，包括但不僅限于，三氟乙酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、甲酸、甲磺酸；所述“氫化還原”包括但不限于金屬催化的加氫反應(yīng)，氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)以及其他還原試劑誘導(dǎo)的反應(yīng)。

所述鹽為藥學(xué)上可接受的有機酸鹽、無機酸鹽，有機堿鹽和無機堿鹽。

優(yōu)選鹽酸鹽、氫溴酸鹽、醋酸鹽、甲酸鹽、甲烷磺酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、苯甲酸鹽、磷酸鹽、酒石酸鹽、對甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽，蘋果酸鹽，枸櫞酸鹽，乙酰水楊酸鹽等。

本發(fā)明所示式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于哺乳動物，例如人類，所用制劑包括但不僅限于口服制劑、注射劑(靜脈、肌肉或皮下)、直腸以及局部給藥制劑(如栓劑、乳膏劑、軟膏、搽劑、透皮制劑和滴劑等)。

本發(fā)明所述口服制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑等。在這些固體制劑中，本發(fā)明式(i)化合物為活性成分，與一種或多種惰性輔料混合，如稀釋劑，包括但不僅限于微晶纖維素102、淀粉、玉米淀粉、甘露醇、乳糖等；粘合劑，包括但不僅限于羥甲基纖維素、明膠、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，包括但不僅限于羧甲基纖維素鈉、瓊脂、淀粉等；潤滑劑，包括但不僅限于滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣等。

本發(fā)明所述注射劑包括生理上可接受的無菌含水或無水溶液，如水針和大輸液，以及可重溶的凍干粉針，所用輔料包括水、甘露醇、多元醇，磷酸氫鈣、磷酸二氫鈣等。

將本發(fā)明所述化合物進行btk激酶抑制實驗，實驗結(jié)果表明本發(fā)明化合物對于防治癌癥或炎癥類相關(guān)疾病有良好的應(yīng)用。

具體實施方式

實施例1：8-(1-丙烯酰基哌嗪-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-01)的制備

步驟1：化合物c-01-a的制備

在250ml三口瓶中加入化合物sm(5.68g，20mmol)和氯仿159毫升，向其中加入nbs(3.92g，22mmol)和催化量的aibn，回流反應(yīng)6小時后冷至室溫，轉(zhuǎn)至分液漏斗中用50毫升飽和nahco3洗滌，無水硫酸鎂干燥后過濾旋干。粗品經(jīng)閃式柱層析(0-10％乙酸乙酯的正己烷溶液為流動相)得淺黃色固體c-01-a(5.8克，產(chǎn)率80％)。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)δ7.55(d，2h)，7.48(d，2h)，7.34(m，1h)，7.10(d，2h)，7.01(d，2h)，5.88(s，1h)，4.23(q，2h)，1.33(t，3h).

步驟2：化合物c-01-b的制備

將化合物c-01-a(0.6g，1.65mmol)溶于10ml無水乙醇中，加入2-氨基-3-溴吡啶(0.575g，3.3mmol)，加熱至回流，反應(yīng)24小時。向反應(yīng)液中加入20ml水，過濾，濾餅用10ml水洗。收集固體，加入10ml醋酸異丙酯和正庚烷(1∶2)的混合溶劑中，室溫打漿3小時。過濾，40℃真空干燥2小時，得c-01-b(0.55g，76％)，淺棕色固體。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)δ8.76(d，1h)，8.61(d，1h)，7.42-7.51(m，4h)，7.18-7.25(m，3h)，7.06(d，2h)，4.25(q，2h)，1.30(t，3h).

lcms(esi)，m/z438.1，440.1(m+1)⁺，溴同位素信號

步驟3：化合物c-01-c的制備

將c-01-b(250mg，0.57mmol)和n-boc-哌嗪(116mg，0.627mmol)加入無水甲苯(10ml)中，加入pd2(dba)3(26mg，0.029mmol)，x-phos(27mg，0.057mmol)，叔丁醇鉀(192mg，1.71mmol)，氮氣置換三次，于80攝氏度反應(yīng)6小時。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)體系溫度降至室溫，過濾。濾液用水洗(10mlx1)，有機相用無水硫酸鈉干燥1小時，過濾，濾液減壓蒸干。粗品用閃式柱層析純化(merck預(yù)制硅膠柱，0-5％甲醇/二氯甲烷溶液為流動相)，得c-01-c(213mg，69％)，淺黃色固體。

lcms(esi)，m/z544.3(m+1)⁺

步驟4：化合物c-01-d的制備

將c-01-c(210mg，0.387mmol)溶于5ml乙醇中，滴入1ml氨水。室溫反應(yīng)2天。蒸干溶劑，所得產(chǎn)品(200mg，收率定量)不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。

步驟5：化合物c-01-e的制備

將c-01-d(200mg，0.387mmol)置于10ml2n的氯化氫甲醇溶液中，室溫攪拌2小時，蒸干溶劑。將粗品固體置于5ml醋酸異丙酯中打漿過夜，過濾，濾餅用醋酸異丙酯洗，室溫干燥，得c-01-e(120mg，75％)，白色固體。

步驟6：化合物c-01的制備

將c-01-e(115mg，0.278mmol)加入10ml二氯甲烷中，加入三乙胺(70mg，0.7mmol)，0度下滴加烯丙酰氯(32mg，0.36mmol)。加畢，室溫反應(yīng)6小時。加水10ml，分液。水相用二氯甲烷萃取2次，每次10ml。合并有機相，用無水硫酸鈉干燥1小時。過濾，濾除干燥劑，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干。粗品用閃式柱層析(0-5％甲醇的二氯甲烷溶液為流動相)純化，得c-01(79mg，61％)，淺黃色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.18(br，2h)，8.03(d，1h)，7.69(d，1h)，7.51(d，2h)，7.42(t，1h)，7.25-7.39(m，2h)，7.06(d，1h)，6.52-6.62(m，1h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.73(m，4h)，3.32(m，4h)

lcms(esi)m/z，469.2(m+1)⁺

實施例2：8-(1-丙烯?；哙?4-基)-2-(4-(吡啶-2-基氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-02)的制備

步驟1：化合物c-02-a的制備

將4-乙?；椒?4.08g，30mmol)溶于dmf(30ml)，0度下加入nah(60％inmineraloil，1.32g，33mmol)，0度攪拌30分鐘，然后加入2-氟吡啶(2.91g，30mmol)的dmf(15ml)溶液，緩慢升至室溫，攪拌2小時。向反應(yīng)體系中加入水(80ml)，乙酸乙酯萃取(80mlx3)。合并有機相，用飽和食鹽水洗兩次(100ml每次)，無水硫酸鈉干燥2小時，過濾，濾除干燥劑，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干。粗品用閃式柱層析純化(0-25％乙酸乙酯的正己烷溶液為流動相)，得c-02-a(4.48g，70％)，淺黃色油狀液體。

lcms(esi)，m/z214.1(m+1)⁺

步驟2：化合物c-02-b的制備

將碳酸二乙酯(7.3g，61.8mmol)、nah(60％inmineraloil，2，47g，61.8mmol)加入甲苯(80ml)中，加熱至90℃，然后加入c-02-a(4.4g，20.6mmol)的甲苯(15ml)溶液。反應(yīng)液繼續(xù)在90℃攪拌30分鐘。冷卻至室溫，加入醋酸(3ml)和水(30ml)，攪拌5分鐘。將甲苯在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸出，向殘留物中加入80ml水，二氯甲烷萃取(100mlx3)。合并有機相，無水硫酸鈉干燥2小時。過濾，濾除干燥劑，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干。殘留物用閃式柱層析純化(0-10％的乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-02-b(4.17g，71％)，淺黃色油狀液體。

lcms(esi)，m/z，286.1(m+1)⁺

步驟3：化合物c-02-c的制備

方法同實施例1步驟1，使用實施例2步驟2的產(chǎn)物c-02-b(1g，3.5mmol)，得c-02-c(840mg，66％)，類白色固體粉末。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)δ8.23(d，1h)，8.02(d，1h)，7.35(d，2h)，7.18(d，2h)，6.72(dd，1h)，6.51(d，1h)，5.98(s，1h)，4.10(q，2h)，1.21(t，3h).

lcms(esi)，m/z，364.1，366.1(m+1)⁺

步驟4：c-02-d的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-02-c(730mg，2mmol)，得c-02-d(631mg，72％)，淺黃色固體粉末。

步驟5：c-02-e的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-02-d(300mg，0.68mmol)，得c-02-e(324mg，87％)。

lcms(esi)，m/z，545.3(m+1)⁺

步驟6：c-02-f的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-02-e(320mg，0.588mmol)，得c-02-f(303mg，收率定量)。

步驟7：c-02-g的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-02-f(303mg，0.588mmol)，得c-02-g(156mg，64％)

步驟8：c-02的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-02-g(150mg，0.33mmol)，得c-02(103mg，67％)，淺黃色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.18(br，2h)，8.03(d，1h)，7.62-7.73(m，2h)，7.38(d，2h)，7.21(d，1h)，7.06(d，2h)，6.41-6.62(m，3h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.85(m，4h)，3.50(m，4h)

lcms(esi)m/z，470.2(m+1)⁺

實施例3：8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)-2-(4-(4-氟苯氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-03)的制備

步驟1：化合物c-03-a的制備

將4-氟苯硼酸(7.7g，55mmol)、4-乙?；椒?6.8g，50mmol)、醋酸銅(11g，55mmol)、4a分子篩(10g)、三乙胺(25.25g，250mmol)加入二氯甲烷(250ml)中，室溫攪拌過夜，過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液減壓蒸干，殘留物用閃式柱層析純化(0-5％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-03-a(3.45g，30％)，淺黃色油狀液體。

步驟2：化合物c-03-b的制備

方法同實施例2步驟2，使用c-03-a(3g，13.04mmol)，得c-03-b(3.03g，77％)，淺黃色固體粉末。

步驟3：化合物c-03-c的制備

方法同實施例1步驟1，使用c-03-b(3g，9.93mmol)，得c-03-c(2.9g，77％)，黃色蠟狀固體。

lcms(esi)m/z，381.2，383.2(m+1)⁺

步驟4：化合物c-03-d的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-03-c(1.52g，4mmol)，得c-03-d(1.27g，70％)，黃棕色固體。

lcms(esi)m/z，456.1，458.1(m+1)⁺，溴同位素信號

步驟5：化合物c-03-e的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-03-d(600mg，1.32mmol)，得c-03-e(562mg，76％)。

lcms(esi)m/z562.1(m+1)⁺

步驟6：化合物c-03-f的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-03-e(560mg，1mmol)，得c-03-f(530mg，收率定量)，產(chǎn)品不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。⁺

步驟7：化合物c-03-g的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-03-f(530mg，1mmol)，得c-03-g(345mg，80％)。

步驟8：化合物c-03的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-03-g(175mg，0.4mmol)，得c-03(150mg，77％)，類白色粉末。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.20(br，2h)，8.05(d，1h)，7.70(d，1h)，7.38-7.51(m，6h)，7.26(d，2h)，6.62(m，1h)，6.06(dd，1h)，5.60(dd，1h)，3.75(m，4h)，3.35(m，4h)

lcms(esi)m/z，487.2(m+1)⁺

實施例4：8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)-2-(4-芐基苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-04)的制備

步驟1：化合物c-04-a的制備

方法同實施例1步驟1，使用sm(2.82g，10mmol)為起始原料，得c-04-a(2.8g，78％)，黃色固體。

lcms(esi)，m/z361.1，363.1(m+1)⁺

步驟2：化合物c-04-b的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-04-a(1.08g，3mmol)，得c-04-b(837mg，64％)，黃色固體。

lcms(esi)，m/z436.1，438.1(m+1)⁺，溴同位素信號

步驟3：化合物c-04-c的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-04-b(830mg，1.9mmol)，得c-04-c(565mg，55％)。

lcms(esi)，m/z542.3(m+1)⁺

步驟4：化合物c-04-d的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-04-c(540mg，1mmol)，得c-04-d(511mg，收率定量)。

步驟5：化合物c-04-e的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-04-d(511mg，1mmol)，得c-04-e(348mg，78％)

步驟6：化合物c-04的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-04-e(148mg，0.33mmol)，得c-04(92mg，60％)，白色固體。

h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.19(br，2h)，8.02(d，1h)，7.63-7.69(m，3h)，7.37(d，2h)，7.20-7.28(m，5h)，6.62(m，1h)，6.02(dd，1h)，5.56(dd，1h)，4.09(s，2h)，3.71(m，4h)，3.31(m，4h)

lcms(esi)m/z，467.3(m+1)⁺

實施例5：8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)-2-(4-(4-氯苯氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-05)的制備

步驟1：化合物c-05-a的制備

將sm2(4.0g，28.96mmol)和k2co3(12.0g，86.88mmol)加入到干燥dmf(40ml)，室溫下磁力攪拌，再加入sm1(5.6g，43.44mmol)。這時將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移到油浴中150度反應(yīng)24小時。室溫冷卻，向反應(yīng)液中加入100ml乙酸乙酯，有機相再分別用水和飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。殘留物用閃式柱層析純化(0-5％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-05-a(6.7g，94％)，淺黃色油狀液體。

¹h-nmr(300mhz，cdcl3)δ7.93(d，2h)，8.05(d，1h)，7.33(d，2h)，7.01-6.96(m，4h)，2.56(s，3h)

lcms(esi)m/z，247.1(m+1)⁺

步驟2：化合物c-05-b的制備

方法同實施例2步驟2，使用c-05-a(6.6g，26.83mmol)，得c-05-b(6.14g，74％)，淺黃色固體粉末。

步驟3：化合物c-05-c的制備

方法同實施例1步驟1，使用c-05-b(6.1g，19.18mmol)，得c-05-c(5.42g，71％)，黃色蠟狀固體。

lcms(esi)m/z，397.1，399.1(m+1)⁺

步驟4：化合物c-05-d的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-05-c(5.4g，13.6mmol)，得c-05-d(4.17g，65％)，黃棕色固體。

lcms(esi)m/z，472.1，474.1(m+1)⁺，溴同位素信號

步驟5：化合物c-05-e的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-05-d(2.0g，4.23mmol)，得c-05-e(900mg，37％)。

lcms(esi)m/z578.2(m+1)⁺

步驟6：化合物c-05-f的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-05-e(880mg，1.52mmol)，得c-05-f(834mg，收率定量)，產(chǎn)品不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。⁺

步驟7：化合物c-05-g的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-05-f(834mg，1.52mmol)，得c-05-g(382mg，52％)。

步驟8：化合物c-05的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-05-g(180mg，0.37mmol)，得c-05(128mg，69％)，類白色粉末。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.18(br，2h)，8.04(d，1h)，7.67-7.71(m，3h)，7.51-7.57(m，4h)，7.26(d，2h)，6.63(m，1h)，6.05(dd，1h)，5.59(dd，1h)，3.74(m，4h)，3.33(m，4h)

lcms(esi)m/z，503.2(m+1)⁺

實施例6：8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)-2-(4-(2-氯苯氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-06)的制備

步驟1：化合物c-06-a的制備

將sm2(4.0g，28.96mmol)和k2co3(12.0g，86.88mmol)加入到干燥dmf(40ml)，室溫下磁力攪拌，再加入sm1(5.6g，43.44mmol)。這時將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移到油浴中150度反應(yīng)24小時。室溫冷卻，向反應(yīng)液中加入100ml乙酸乙酯，有機相再分別用水和飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。殘留物用閃式柱層析純化(0-5％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-05-a(4.77g，67％)，淺黃色油狀液體。

¹h-nmr(300mhz，cdcl3)δ8.13(d，2h)，7.38(d，1h)，7.23-7.17(m，3h)，6.99-6.91(m，2h)，2.50(s，3h)

lcms(esi)m/z，247.1(m+1)⁺

步驟2：化合物c-06-b的制備

方法同實施例2步驟2，使用c-06-a(4.7g，19.1mmol)，得c-06-b(4.55g，75％)，淺黃色固體粉末。

步驟3：化合物c-06-c的制備

方法同實施例1步驟1，使用c-06-b(4.5g，14.15mmol)，得c-06-c(3.87g，69％)，黃色蠟狀固體。

lcms(esi)m/z，397.1，399.1(m+1)⁺

步驟4：化合物c-06-d的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-06-c(3.8g，9.57mmol)，得c-06-d(2.62g，58％)，黃棕色固體。

lcms(esi)m/z，472.1，474.1(m+1)⁺，溴同位素信號

步驟5：化合物c-06-e的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-06-d(2.0g，4.23mmol)，得c-06-e(782mg，32％)。

lcms(esi)m/z578.2(m+1)⁺

步驟6：化合物c-06-f的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-06-e(780mg，1.35mmol)，得c-06-f(740mg，收率定量)，產(chǎn)品不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。⁺

步驟7：化合物c-06-g的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-06-f(740mg，1.35mmol)，得c-06-g(287mg，44％)。

步驟8：化合物c-06的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-06-g(180mg，0.37mmol)，得c-06(120mg，65％)，類白色粉末。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.20(br，2h)，8.05(d，1h)，7.71(d，1h)，7.54(d，2h)，7.38(d，1h)，7.23-7.28(m，3h)，6.94-6.99(m，2h)，6.65(m，1h)，6.07(dd，1h)，5.63(dd，1h)，3.73(m，4h)，3.32(m，4h)

lcms(esi)m/z，503.2(m+1)⁺

實施例7：8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)-2-(4-苯甲酰氨苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-07)的制備

步驟1：c-07-a的制備

將對氨基苯甲酸乙酯(16.5g，100mmol)溶于dcm(250ml)中，加入三乙胺(20g，200mmol)，將反應(yīng)瓶置于冰水浴中，待內(nèi)溫降低至5℃時，滴加苯甲酰氯(16.8g，120mmol)的dcm(50ml)溶液，加畢，混合物于室溫攪拌2小時，tlc確定反應(yīng)完成。向反應(yīng)混合物中加入300ml水，萃取，分液。有機相用無水硫酸鈉干燥2小時，過濾，濾除干燥劑。所得混合物不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。

步驟2：c-07-b的制備

將實施例07步驟1所得產(chǎn)品置于200ml甲醇中，向其中加入1nnaoh水溶液(110ml，110mmol)，室溫攪拌2小時。蒸干甲醇，用200ml乙酸乙酯萃取水相，重復(fù)兩次。用2n鹽酸將剩余水相的ph值調(diào)節(jié)至2-3。用乙酸乙酯萃取(300mlx3)。合并有機相，用無水硫酸鈉干燥2小時。過濾，濾除干燥劑，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干，得類白色固體，所得產(chǎn)物不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。

lcms(esi)m/z，240.0(m-1)^-

步驟3：c-07-c的制備

將實施例07步驟2所得產(chǎn)品加入二氯亞砜(200ml)中，加熱至90攝氏度，反應(yīng)體系溶清，繼續(xù)攪拌1小時。降溫，待反應(yīng)體系降至室溫后，將未反應(yīng)的二氯亞砜減壓蒸干，加入100mldcm，再次蒸干，重復(fù)兩次，除去殘留的二氯亞砜。向殘留物中加入dcm(300ml)和三乙胺(150g，15mmol)，然后加入medrum’sacid(144g，100mmol)，室溫攪拌過夜。向反應(yīng)體系中加水(400ml)，萃取分液，有機相用無水硫酸鈉干燥2小時，過濾，濾除干燥劑。所得濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)至干，向所得殘留物中加入無水乙醇(200ml)和三氟乙酸(1ml)，50攝氏度反應(yīng)8小時。降溫，向反應(yīng)體系中加入50ml飽和碳酸氫鈉溶液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上將乙醇蒸干，向殘留物中加入300ml純化水，乙酸乙酯萃取(300mlx3)。合并有機相，無水硫酸鈉干燥2小時。過濾，濾除干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，殘留油狀液體用閃式柱層析(0-50％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)純化，得c-07-c(14g，45％)，類白色粉末。

lcms(esi)m/z，312.2(m+1)⁺

步驟4：c-07-d的制備

方法同實施例1步驟1，使用c-07-c(1g，3.21mmol)，得c-10-d(802mg，64％)，淺黃色粉末。

lcms(esi)m/z，390.2，392.2(m+1)⁺

步驟5：c-07-e的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-07-d(390mg，1mmol)，得c-07-e(348mg，75％)。

步驟6：c-07-f的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-07-e(300mg，0.65mmol)，得c-07-f(260mg，70％)。

lcms(esi)m/z，571.3(m+1)⁺

步驟7：c-07-g的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-07-f(250mg，0.44mmol)，得c-07-g(240mg，收率定量)。

步驟8：c-07-h的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-07-g(240mg，0.44mmol)，得c-07-h(161mg，77％)。

步驟9：c-07的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-07-h(157mg，0.33mmol)和烯丙酰氯(33mg，0.36mmol)，得c-13(96mg，59％)。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ10.20(br，2h)，8.18(br，1h)，8.03(d，1h)，7.80-7.96(m，6h)，7.54-7.69(m，4h)，6.62(m，1h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.80(m，4h)，3.36(m，4h)

lcms(esi)m/z，496.2(m+1)⁺

實施例8：2-(4-((1h-苯并[d]咪唑并l-2-基)氨基)苯基)-8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-08)的制備

步驟1：c-08-a的制備

將4-氰基苯胺(1.18g，10mmol)溶于50ml二氯甲烷中，加入三乙胺(2.2g，22mmol)降至0℃，向其中加入硫代光氣(1.26g，11mmol)，加畢，室溫反應(yīng)1小時。將溶劑用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至干，所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。

步驟2：c-08-b的制備

將步驟1所得產(chǎn)品溶于甲醇(50ml)，加入鄰苯二胺(1.1g，11mmol)，室溫攪拌過夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將甲醇蒸干，所得粗品直接用于下一步反應(yīng)。

步驟3：c-08-c的制備

將步驟2所得粗品溶于30mlthf中，加入edc鹽酸鹽(1.91g，10mmol)和三乙胺(1.1g，11mol)。室溫攪拌過夜。向反應(yīng)體系中加入5％檸檬酸(100ml)，萃取，分液，有機相用5％碳酸氫鈉水溶液洗(100ml)，飽和食鹽水洗(100ml)，無水硫酸鈉干燥。過濾，濾除干燥劑，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，粗品用閃式柱層析純化(0-10％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-08-c(1.61g，68％)。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)δ11.88(brs，1h)，9.01(brs，1h)，7.56(d，2h)，7.33(d，2h)，7.18-7.01(m，4h)

lcms(esi)m/z，235.1(m+h)⁺

步驟4：c-08-d的制備

將c-08-c(1.6g，6.8mmol)溶于無水四氫呋喃(20ml)中，冷卻至0℃，氮氣保護下，滴加甲基格氏試劑(1minthf，6.8ml，6.8mmol)。加畢，0℃反應(yīng)2小時，室溫反應(yīng)3.5小時。冷卻至0℃，向反應(yīng)體系中加入1nhcl至ph為3-4。繼續(xù)攪拌2小時，用1nnaoh將混合物ph調(diào)節(jié)至7-8。分液，水相用乙酸乙酯萃取(50mlx2)。合并有機相，用飽和食鹽水洗(200mlx1)，無水硫酸鈉干燥。過濾，濾除干燥劑，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干。粗品用閃式柱層析純化(0-25％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-08-d(1.17g，68％)

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)δ12.09(brs，1h)，9.11(brs，1h)，7.66(d，2h)，7.57(d，2h)，7.33-7.09(m，4h)

lcms(esi)m/z，252.2(m+h)⁺

步驟5：c-08-e的制備

方法同實施例2步驟3，使用c-08-d(1.1g，4.38mmol)，得c-08-e(1g，71％)。

lcms(esi)m/z，323.2(m+1)⁺

步驟6：c-08-f的制備

方法同實施例1步驟1，使用c-08-e(1g，3.1mmol)，得c-08-f(0.92g，74％)。

lcms(esi)m/z，402.1，404.1(m+1)⁺

步驟7：c-08-g的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-08-f(800mg，2mmol)，得c-08-g(723mg，76％)

lcms(esi)m/z，477.1，479.1

方法同實施例1步驟3，使用c-08-g(477mg，1mmol)，得c-08-h(332mg，57％)。

lcms(esi)m/z，583.3(m+1)⁺

步驟9：c-08-j的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-08-h(330mg，0.57mmol)，得c-08-j(313mg，定量)。

步驟10：c-08-k的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-08-j(313mg，0.57mmol)，得c-08-k(184mg，66％)。

步驟11：c-08的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-08-k(161mg，0.33mmol)和烯丙酰氯(90mg，1mmol)，得c-08(72mg，43％)。淺粉色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ12.40(s，1h)，9.43(s，1h)，8.23(br，2h)，8.08(d，1h)，7.69-7.73(m，3h)，7.37(d，2h)，7.28-7.22(m，4h)，6.69(m，1h)，6.07(dd，1h)，5.61(dd，1h)，3.77(m，4h)，3.34(m，4h)

lcms(esi)m/z，508.3(m+1)⁺

實施例9：2-(4-((1h-苯并[d]噻唑并l-2-基)氨基)苯基)-8-(4-烯丙基哌嗪-1-基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-09)的制備

步驟1：化合物c-09-a的制備

將sm1(2.0g，13.8mmol)和sm2(1.72g，13.8mmol)加入到20ml水中，室溫下磁力攪拌，再分別加入10ml過氧化氫和碘(0.35g，1.38mmol)。這時將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移到油浴中50度反應(yīng)18小時。室溫冷卻，向反應(yīng)液中加入50ml飽和碳酸鈉溶液和100ml乙酸乙酯，有機相再用飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。殘留物用閃式柱層析純化(0-50％乙酸乙酯正己烷溶液為流動相)，得c-09-a(2.4g，65％)，淺黃色油狀液體。

¹h-nmr(300mhz，cdcl3)δ10.22(s，1h)，8.18(d，1h)，8.05-8.01(m，3h)，7.63(d，2h)，7.56-7.51(m，2h)，2.53(s，3h)

lcms(esi)m/z，269.1(m+1)⁺

步驟2：化合物c-09-b的制備

方法同實施例2步驟2，使用c-09-a(2.4g，8.95mmol)，得c-09-b(2.19g，73％)，淺黃色固體粉末。

步驟3：化合物c-09-c的制備

方法同實施例1步驟1，使用c-09-b(2.1g，6.17mmol)，得c-09-c(1.42g，55％)，黃色蠟狀固體。

lcms(esi)m/z，419.1，421.1(m+1)⁺

步驟4：化合物c-09-d的制備

方法同實施例1步驟2，使用c-09-c(1.4g，3.34mmol)，得c-09-d(1.04g，63％)，黃棕色固體。

lcms(esi)m/z，494.1，496.1(m+1)⁺，溴同位素信號

步驟5：化合物c-09-e的制備

方法同實施例1步驟3，使用c-09-d(0.5g，1mmol)，得c-09-e(390mg，65％)。

lcms(esi)m/z600.3(m+1)⁺

步驟6：化合物c-09-f的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-09-e(380mg，0.63mmol)，得c-09-f(361mg，收率定量)，產(chǎn)品不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。⁺

步驟7：化合物c-09-g的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-09-f(360mg，0.63mmol)，得c-09-g(154mg，48％)。

步驟8：化合物c-09的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-09-g(150mg，0.3mmol)，得c-09(80mg，51％)，類白色粉末。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ10.22(s，1h)，8.17-8.21(m，3h)，8.01-8.04(m，2h)，7.69-7.74(m，3h)，7.51-7.56(m，2h)，7.38(d，2h)，6.62(m，1h)，6.05(dd，1h)，5.60(dd，1h)，3.74(m，4h)，3.32(m，4h)

lcms(esi)m/z，525.2(m+1)⁺

實施例10：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-10)的制備

步驟1：c-10-c的制備

將c-01-b(2.18g，5mmol)和n-boc-1，2，3，6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯(1.7g，5.5mmol)加入甲苯(100ml)中，加入碳酸鉀(2.07g，15mmol)，加入四三苯基膦鈀(300mg，0.25mmol)，氮氣置換三次。加熱至80℃反應(yīng)3小時。反應(yīng)完全后，降溫，向反應(yīng)體系中加水100ml，分液，水相用乙酸乙酯萃取(100mlx2)。合并有機相，無水硫酸鈉干燥2小時。過濾，濾除干燥劑，濾液減壓蒸干。粗品用閃式柱層析純化(merck預(yù)制硅膠柱，0-5％甲醇/二氯甲烷溶液為流動相)，得c-10-c(2.24g，83％)。

lcms(esi)m/z，541.3(m+1)⁺

步驟2：c-10-d的制備

將c-10-c(2.2g，4.07mmol)加入50ml甲醇中，加入245mgpd/c，氫氣置換三次，在1atm氫氣氛下反應(yīng)4小時。反應(yīng)完成后，過濾，濾除催化劑。濾液減壓蒸干，粗品不經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。

lcms(esi)m/z，543.3(m+1)⁺

步驟3：c-10-e的制備

方法同實施例1步驟4，使用上步所得c-10-d，得c-10-e(1.6g，77％)。

步驟4：c-10-f的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-10-e(1.5g，3mmol)，得c-10-f(1.08g，80％)。

步驟5：c-10的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-10-f(150mg，0.33mmol)，得c-10(109mg，71％)，類白色固體

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.36(d，1h)，8.18(br，2h)，7.51(d，2h)，7.42(d，2h)，7.18-7.28(m，4h)，7.06(d，1h)，6.62(m，1h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.49-3.59(m，4h)，2.81-2.85(m，1h)，1.86-1.92(m，2h)，1.61-1.67(m，2h)

lcms(esi)m/z，468.2(m+1)⁺

實施例11：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-(吡啶-2-基氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-11)的制備

步驟1：c-11-e的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-02-d(439mg，1mmol)，得c-11-e(444mg，82％)。

lcms(esi)m/z，542.3(m+1)⁺

步驟2：c-11-f的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-11-e(435mg，0.8mmol)，得c-11-f(384mg，88％)。

lcms(esi)m/z，544.3(m+1)⁺

步驟3：c-11-g的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-11-f(380mg，0.7mmol)，得c-11-g(360mg，定量)

步驟4：c-11-h的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-11-g(360mg，0.7mmol)，得c-11-h(264mg，84％)。

步驟5：c-11的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-11-h(200mg，0.44mmol)，得c-11(158mg，76％)。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.39(d，1h)，8.20(br，2h)，7.68(m，1h)，7.38(d，2h)，7.21-7.28(m，2h)，7.08(d，2h)，6.54-6.62(m，2h)，6.41(t，1h)，6.06(dd，1h)，5.60(dd，1h)，3.50-3.60(m，4h)，2.83-2.87(m，1h)，1.87-1.93(m，2h)，1.60-1.66(m，2h)

lcms(esi)m/z，469.2(m+1)⁺

實施例12：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-(4-氟苯氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-12)的制備

步驟1：c-12-e的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-03-d(455mg，1mmol)，得c-12-e(441mg，79％)。

lcms(esi)m/z，559.3(m+1)⁺

步驟2：c-12-f的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-12-e(435mg，0.78mmol)，得c-12-f(358mg，88％)。

lcms(esi)m/z，561.3(m+1)⁺

步驟3：c-12-g的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-12-f(350mg，0.625mmol)，得c-12-g(332mg，定量)

步驟4：c-12-h的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-12-g(332mg，0.625mmol)，得c-12-h(251mg，82％)。

步驟5：c-12的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-12-h(200mg，0.43mmol)，得c-12(148mg，71％)。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.37(d，1h)，8.19(br，2h)，7.44(d，2h)，7.28-7.28(m，7h)，6.63(m，1h)，6.05(dd，1h)，5.59(dd，1h)，3.53-3.63(m，4h)，2.81-2.85(m，1h)，1.85-1.91(m，2h)，1.59-1.65(m，2h)

lcms(esi)m/z，486.2(m+1)⁺

實施例13：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-芐基苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-13)的制備

步驟1：c-13-c的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-04-b(434mg，1mmol)，得c-13-c(420mg，79％)。

lcms(esi)m/z，539.3(m+1)⁺

步驟2：c-13-d的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-13-c(410mg，0.76mmol)，得c-13-d(362mg，88％)。

lcms(esi)m/z，541.3(m+1)⁺

步驟3：c-13-e的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-13-d(355mg，0.66mmol)，得c-13-e(336mg，定量)

lcms(esi)m/z，512.3(m+1)⁺

步驟4：c-13-f的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-13-e(336mg，0.66mmol)，得c-13-f(247mg，84％)。

lcms(esi)m/z，412.3(m+1)⁺

步驟5：c-13的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-13-f(200mg，0.44mmol)，得c-13(141mg，68％)，類白色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.40(d，1h)，8.23(br，2h)，7.63(d，2h)，7.37(d，2h)，7.20-7.28(m，6h)，6.68(m，1h)，6.07(dd，1h)，5.62(dd，1h)，4.09(s，2h)，3.49-5.59(m，4h)，2.81-2.85(m，1h)，1.86-1.92(m，2h)，1.61-1.67(m，2h)

lcms(esi)m/z，466.3(m+1)⁺

實施例14：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-(4-氯苯氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-14)的制備

步驟1：c-14-e的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-05-d(472mg，1mmol)，得c-14-e(345mg，60％)。

lcms(esi)m/z，575.2(m+1)⁺

步驟2：c-14-f的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-14-e(340mg，0.59mmol)，得c-14-f(181mg，53％)。

lcms(esi)m/z，577.2(m+1)⁺

步驟3：c-14-g的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-14-f(175mg，0.3mmol)，得c-14-g(166mg，定量)

步驟4：c-14-h的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-14-g(166mg，0.3mmol)，得c-14-h(127mg，88％)。

步驟5：c-14的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-14-h(120mg，0.25mmol)，得c-14(91mg，73％)。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.36(d，1h)，8.18(br，2h)，7.67(d，2h)，7.57(d，2h)，7.51(d，2h)，7.25-7.29(m，3h)，6.62(m，1h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.50-3.60(m，4h)，2.83-2.87(m，1h)，1.87-1.93(m，2h)，1.60-1.66(m，2h)

lcms(esi)m/z，502.2(m+1)⁺

實施例15：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-(2-氯苯氧基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-15)的制備

步驟1：c-15-e的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-06-d(472mg，1mmol)，得c-15-e(356mg，62％)。

lcms(esi)m/z，575.2(m+1)⁺

步驟2：c-15-f的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-15-e(340mg，0.59mmol)，得c-15-f(187mg，53％)。

lcms(esi)m/z，577.2(m+1)⁺

步驟3：c-15-g的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-15-f(175mg，0.3mmol)，得c-15-g(166mg，定量)

步驟4：c-15-h的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-15-g(166mg，0.3mmol)，得c-15-h(126mg，87％)。

步驟5：c-15的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-15-h(120mg，0.25mmol)，得c-15(89mg，71％)。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ8.36(d，1h)，8.18(br，2h)，7.51(d，2h)，7.23-7.38(m，5h)，6.94-6.99(m，2h)，6.62(m，1h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.51-3.61(m，4h)，2.85-2.89(m，1h)，1.91-1.97(m，2h)，1.66-1.72(m，2h)

lcms(esi)m/z，502.2(m+1)⁺

實施例16：8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)-2-(4-苯甲酰氨苯基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-16)的制備

步驟1：化合物c-16-f的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-07-e(465mg，1mmol)，得c-16-f(409mg，73％)。

lcms(esi)m/z，568.3(m+1)⁺

步驟2：化合物c-16-g的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-16-f(405mg，0.71mmol)，得c-16-g(350mg，85％)。

lcms(esi)m/z，570.3(m+1)⁺

步驟3：化合物c-16-h的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-16-g(340mg，0.6mmol)，得c-16-h(322mg，定量)。

lcms(esi)m/z，541.3(m+1)⁺

步驟4：化合物c-16-j的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-16-h(322mg，0.6mmol)，得c-16-j(221mg，84％)。

lcms(esi)m/z，441.3(m+1)⁺

步驟5：化合物c-16的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-16-j(200mg，0.45mmol)，得c-16(114mg，51％)，淺灰色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ10.20(s，1h)，8.39(d，1h)，8.21(br，2h)，7.80-7.96(m，6h)，7.54-7.62(m，3h)，7.28(d，1h)，6.66(m，1h)，6.08(dd，1h)，5.61(dd，1h)，3.53-3.63(m，4h)，2.81-2.85(m，1h)，1.85-1.91(m，2h)，1.66-1.72(m，2h)

lcms(esi)m/z，495.3(m+1)⁺

實施例17：2-(4-((1h-苯并[d]咪唑并1-2-基)氨基)苯基)-8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-17)的制備

步驟1：化合物c-17-h的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-08-g(475mg，1mmol)，得c-17-h(418mg，72％)。

lcms(esi)m/z，580.3(m+1)⁺

步驟2：化合物c-17-j的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-17-h(410mg，0.7mmol)，得c-17-j(346mg，85％)。

lcms(esi)m/z，582.3(m+1)⁺

步驟3：化合物c-17-k的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-17-j(340mg，0.59mmol)，得c-17-k(323mg，定量)。

lcms(esi)m/z，553.3(m+1)⁺

步驟4：化合物c-17-l的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-17-k(323mg，0.59mmol)，得c-17-l(231mg，80％)。

lcms(esi)m/z，453.2(m+1)⁺

步驟5：化合物c-17的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-17-l(225mg，0.5mmol)，得c-17(105mg，42％)，淺棕色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ12.40(s，1h)，9.43(s，1h)，8.37(d，1h)，8.17(br，2h)，7.73(d，2h)，7.28-7.37(m，3h)，7.00-7.20(m，4h)，6.60(m，1h)，6.05(dd，1h)，5.83(dd，1h)，3.49-3.59(m，4h)，2.81-2.85(m，1h)，1.87-1.91(m，2h)，1.62-1.68(m，2h)

lcms(esi)m/z，507.3(m+1)⁺

實施例18：(2-(4-((1h-苯并[d]噻唑并l-2-基)氨基)苯基)-8-(1-烯丙酰哌啶-4-基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-酰胺(c-18)的制備

步驟1：化合物c-18-e的制備

方法同實施例10步驟1，使用c-09-d(495mg，1mmol)，得c-18-e(381mg，64％)。

lcms(esi)m/z，597.3(m+1)⁺

步驟2：化合物c-18-f的制備

方法同實施例10步驟2，使用c-18-e(380mg，0.63mmol)，得c-18-f(332mg，87％)。

lcms(esi)m/z，599.3(m+1)⁺

步驟3：化合物c-18-g的制備

方法同實施例1步驟4，使用c-18-f(330mg，0.55mmol)，得c-18-g(314mg，定量)。

lcms(esi)m/z，570.3(m+1)⁺

步驟4：化合物c-18-h的制備

方法同實施例1步驟5，使用c-18-g(314mg，0.55mmol)，得c-18-h(214mg，77％)。

lcms(esi)m/z，470.2(m+1)⁺

步驟5：化合物c-18的制備

方法同實施例1步驟6，使用c-18-h(210mg，0.44mmol)，得c-18(93mg，40％)，淺棕色固體。

¹h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ10.22(s，1h)，8.36(d，1h)，8.18-8.24(m，3h)，8.02(d，1h)，7.73(d，2h)，7.51-7.54(m，2h)，7.37(d，2h)，7.28(d，1h)，6.62(m，1h)，6.04(dd，1h)，5.58(dd，1h)，3.49-3.59(m，4h)，2.83-2.87(m，1h)，1.87-1.93(m，2h)，1.63-1.69(m，2h)

lcms(esi)m/z，524.2(m+1)⁺

實施例19：化合物制劑制備實施例

化合物c-015g

淀粉100g

微晶纖維素30g

照常規(guī)方法，將上述物質(zhì)混合均勻，裝入紅色硬明膠膠囊，得500粒膠囊。

照類似方法，分別制得含其它實施例化合物的膠囊。

實施例20：btk的酶活性抑制測試

使用體外激酶檢測實驗評估本發(fā)明的化合物對bruton酪氨酸激酶(btk)活性的影響。

實驗方法概述如下：

使用promega公司的adp-glo^tm激酶檢測試劑盒，通過檢測激酶反應(yīng)中所產(chǎn)生的adp水平來測定btk的體外活性。在激酶檢測實驗中，激酶消耗atp將底物磷酸化，同時產(chǎn)生adp。adp-glo試劑將終止激酶反應(yīng)并且將剩余的atp完全消耗，最后加入激酶檢測試劑，將adp轉(zhuǎn)化為新的atp。檢測試劑中的熒光素酶在atp和o2參與下能夠催化熒光素，產(chǎn)生氧化性的熒光素、amp并且產(chǎn)生光量子，從而將化學(xué)信號轉(zhuǎn)為光信號(luminecence)。光信號的強度與激酶反應(yīng)中adp產(chǎn)生量呈正相關(guān)，從而能夠定量檢測激酶btk的活性。

所有檢測實驗均在23℃恒溫進行，使用coming3674白色384孔檢測板，激酶btk(全長his-tag)由公司內(nèi)部表達純化，激酶底物為多肽(4∶1glu，tyr)(購自signalchem)和atp(sigma)；使用酶標儀envision(perkinelmer)讀取光信號。檢測緩沖液包括40mmtris-hc(ph7.5)、10mmmgcl2(sigma)、2nmmncl2(sigma)、0.05mmdtt(sigma)和0.01％bsa(sigma)；將激酶btk使用檢測緩沖液配制為1.6ng/μl濃度的激酶反應(yīng)溶液；底物反應(yīng)溶液包括0.2mg/ml多肽底物和50μmatp。

化合物ic50由10個濃度點通過以下公式計算。先將化合物在100％dmso中溶解稀釋至1mm，然后用dmso進行3倍的系列稀釋至最低濃度為0.05μm，每個濃度點再使用檢測緩沖液稀釋40倍。向384孔檢測板中先添加1μl系列濃度的化合物溶液和2μl激酶反應(yīng)溶液，混合均勻后室溫避光孵育30分鐘；隨后加入2μl底物反應(yīng)溶液，反應(yīng)總體積為5μl，將反應(yīng)混合物在室溫避光反應(yīng)60分鐘；隨后加入與反應(yīng)等體積的5μladp-glo^tm試劑終止反應(yīng)，混合均勻后室溫放置40分鐘；最后加入10μl激酶檢測試劑，室溫避光放置30分鐘，然后在envision上讀取數(shù)值。

抑制百分率基于以下公式計算：

抑制％＝[1-(rlu化合物-rlumin)/(rlumax-rlumin)×100

其中rlu化合物為給定化合物濃度下的冷光讀數(shù)，rlumin為不加入激酶的情況下的冷光讀數(shù)，rlumax為不加入化合物的情況下的冷光讀數(shù)。通過使用excel中xlfit程序來計算化合物的ic50。