本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種與腦卒中發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因的用途，具體地該基因為lncrnaloc103611081。

背景技術(shù)：

腦卒中是嚴重危害人類生命安全的難治性疾病，具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率的特點。流行病學(xué)調(diào)查顯示近年來青年腦卒中的發(fā)病率越來越高，其中45歲以下成人發(fā)生的腦卒中，在西方國家及國內(nèi)報道的比例分別為5％和13.44％。腦卒中按其性質(zhì)分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中占卒中病人總數(shù)的75％～85％。缺血性腦卒中又名腦梗塞/死，是指由于腦部血液供應(yīng)障礙，缺血、缺氧引起的局限性腦組織的缺血性壞死或腦軟化。

目前臨床上對于腦卒中的治療主要分為溶栓類藥物治療和神經(jīng)保護類藥物治療兩種方法。其中，溶栓類藥物治療是迄今為止唯一被認為確切有效的方法，但因治療時間窗較短而出血風(fēng)險高，目前僅有約5％患者能獲得有效的溶栓治療。神經(jīng)保護類藥物的研發(fā)則進展緩慢，臨床多用于腦卒中的輔助治療。此外，針對興奮性氨基酸樣神經(jīng)遞質(zhì)、活性氧自由基等病因假說設(shè)計的拮抗劑(如甘氨酸抑制劑gv150526、自由基清除劑nxy059等)治療均尚未取得明顯臨床療效，提示我們需從新的角度和方向?qū)毙阅X缺血的病理機制進行深入探討，以尋求臨床治療的新突破。

隨著生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)基因在腦卒中的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，人們發(fā)現(xiàn)lncrna在dna甲基化、組蛋白修飾、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、rna干擾、印跡基因等多種不同的機制、在多種層面上影響基因的表達水平，調(diào)節(jié)各種細胞過程，如細胞生長、增殖及凋亡。lncrna的異常表達與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，隨著對腦卒中發(fā)病原因和疾病機制研究的深入，我們對治療靶點的認識也逐漸清晰、全面，這為腦卒中治療藥物的研究和臨床使用提供了更多的研究方向?，F(xiàn)有技術(shù)中如專利201510853891.x和201510853894.3已經(jīng)公開了基因在腦卒中臨床診斷中的應(yīng)用，相信隨著對腦卒中基礎(chǔ)研究的不斷深入，研究lncrna與腦卒中發(fā)生發(fā)展的關(guān)系為腦卒中的診斷和治療提供新的可能性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種與腦卒中發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因，為腦卒中的早期診斷提供了一種產(chǎn)品和手段，相比傳統(tǒng)的腦卒中的診斷方法，使用標(biāo)志物來診斷腦卒中具有及時性、靈敏性，從而使患者在疾病早期就能知曉疾病風(fēng)險，從而采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種loc103611081的用途，用于制備診斷缺血性腦卒中的產(chǎn)品。

進一步，所述產(chǎn)品通過測定樣本中通過測定樣本中l(wèi)oc103611081的表達水平與參考水平相比上調(diào)而確定。

進一步，所述產(chǎn)品通過測序技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、核酸擴增技術(shù)的方法檢測loc103611081基因的表達水平。

進一步，所述核酸擴增技術(shù)選自聚合酶鏈式反應(yīng)(pcr)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(rt-pcr)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴增(tma)、連接酶鏈式反應(yīng)(lcr)、鏈置換擴增(sda)和基于核酸序列的擴增(nasba)。其中，pcr需要在擴增前將rna逆轉(zhuǎn)錄成dna(rt-pcr)，tma和nasba直接擴增rna。

進一步，所述loc103611081包括如seqidno.1所示核苷酸序列的多核苷酸或其片段、同系物、變體或衍生物。

本發(fā)明提供了一種體外檢測樣本中l(wèi)oc103611081表達水平的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括制劑、芯片或試劑盒。其中，所述芯片包括固相載體；以及固定在固相載體上的寡核苷酸探針。所述試劑盒包括基因芯片或sybrgreen聚合酶鏈式反應(yīng)體系。

進一步，所述體外檢測樣本中l(wèi)oc103611081表達水平的產(chǎn)品包括：

特異性識別loc103611081的探針；或

特異性擴增loc103611081的引物。

進一步，所述特異性擴增loc103611081的引物序列如seqidno.2和seqidno.3所示。

本發(fā)明提供了體外檢測樣本中l(wèi)oc103611081表達水平的產(chǎn)品在制備診斷腦卒中工具中的用途。

本發(fā)明提供了一種診斷缺血性腦卒中的試劑盒，包括：

檢測loc103611081的一種或多種試劑；和

選自下組的一種或多種物質(zhì)：容器、使用說明書、陽性對照物、陰性對照物、緩沖劑、助劑或溶劑。

進一步，所述試劑盒用于通過下組的方法檢測loc103611081：qrt-pcr、生物芯片檢測法、dna印跡法、或rna印跡法原位雜交法。

附圖說明

圖1是利用芯片篩選缺血性腦卒中患者的差異表達基因圖；

圖2是利用qpcr檢測loc103611081在缺血性腦卒中患者中的表達情況圖。

具體實施方式

本發(fā)明經(jīng)過廣泛而深入的研究，通過高通量方法，采用目前覆蓋數(shù)據(jù)庫最廣的lncrna芯片，檢測lncrna在腦卒中患者和健康人標(biāo)本中的轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)其中具有明顯表達差異的lncrna片段，探討其與腦卒中的發(fā)生之間的關(guān)系，從而為腦卒中的早期檢測尋找更好的途徑和方法。通過篩選，本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了腦卒中患者中l(wèi)oc103611081顯著性上調(diào)，提示loc103611081可作為檢測指標(biāo)應(yīng)用于腦卒中的臨床診斷。

loc103611081基因

loc103611081基因位于人11號染色體長臂2區(qū)4號帶第3亞帶上，一種代表性的loc103611081基因的核苷酸序列如seqidno.1所示。本發(fā)明中l(wèi)oc103611081基因包括如seqidno.1所示核苷酸序列的多核苷酸或其片段、同系物、變體或衍生物。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，本發(fā)明的實用性并不局限于對本發(fā)明的靶標(biāo)基因的任何特定變體的基因表達進行定量。如果當(dāng)核酸或其片段與其它核酸(或其互補鏈)最佳比對時(具有適當(dāng)?shù)暮塑账岵迦牖蛉笔?，在至少大約60％的核苷酸堿基、通常至少大約70％、更通常至少大約80％、優(yōu)選至少大約90％、及更優(yōu)選至少大約95-98％核苷酸堿基中存在核苷酸序列相同性，則這兩個序列是“基本同源的”(或者基本相似的)。

因此，本發(fā)明的多核苷酸與seqidno.1優(yōu)選具有至少75％、更優(yōu)選至少85％、更優(yōu)選至少90％同源性。更優(yōu)選地，存在至少95％、更優(yōu)選至少98％同源性。

本發(fā)明可以利用本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何方法測定基因表達。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，測定基因表達的手段不是本發(fā)明的重要方面?？梢栽谵D(zhuǎn)錄水平上檢測生物標(biāo)志物的表達水平。

檢測技術(shù)

本發(fā)明的lncrna使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的多種核酸技術(shù)進行檢測，這些技術(shù)包括但不限于：核酸測序、核酸雜交和核酸擴增技術(shù)。

本發(fā)明可在檢測前或與檢測同時地對核酸(例如，ncrna)進行擴增。核酸擴增技術(shù)的示例性非限制性實例包括但不限于：聚合酶鏈式反應(yīng)(pcr)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(rt-pcr)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴增(tma)、連接酶鏈式反應(yīng)(lcr)、鏈置換擴增(sda)和基于核酸序列的擴增(nasba)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將認識到，某些擴增技術(shù)(例如，pcr)需要在擴增前將rna逆轉(zhuǎn)錄成dna(例如，rt-pcr)，而其他擴增技術(shù)則直接擴增rna(例如，tma和nasba)。

通常，pcr使用變性、引物對與相反鏈的退火以及引物延伸的多個循環(huán)，以指數(shù)方式增加靶核酸序列的拷貝數(shù)；rt-pcr則將逆轉(zhuǎn)錄酶(rt)用于從mrna制備互補的dna(cdna)，然后將cdna通過pcr擴增以產(chǎn)生dna的多個拷貝；tma在基本上恒定的溫度、離子強度和ph的條件下自身催化地合成靶核酸序列的多個拷貝，其中靶序列的多個rna拷貝自身催化地生成另外的拷貝，tma任選地包括使用阻斷，部分、終止部分和其他修飾部分，以改善tma過程的靈敏度和準確度；lcr使用與靶核酸的相鄰區(qū)域雜交的兩組互補dna寡核苷酸。dna寡核苷酸在熱變性、雜交和連接的重復(fù)多個循環(huán)中通過dna連接酶共價連接，以產(chǎn)生可檢測的雙鏈連接寡核苷酸產(chǎn)物；sda使用以下步驟的多個循環(huán)：引物序列對與靶序列的相反鏈進行退火，在存在dntpαs下進行引物延伸以產(chǎn)生雙鏈半硫代磷酸化的(hemiphosphorothioated)引物延伸產(chǎn)物，半修飾的限制性內(nèi)切酶識別位點進行的核酸內(nèi)切酶介導(dǎo)的切刻，以及從切口3'端進行的聚合酶介導(dǎo)引的物延伸以置換現(xiàn)有鏈并產(chǎn)生供下一輪引物退火、切刻和鏈置換的鏈，從而引起產(chǎn)物的幾何擴增。

本發(fā)明中非擴增或擴增的核酸可通過任何常規(guī)的手段檢測。

本發(fā)明中的核酸雜交技術(shù)包括但不限于原位雜交(ish)、微陣列和southern或northern印跡。原位雜交(ish)是一種使用標(biāo)記的互補dna或rna鏈作為探針以定位組織一部分或切片(原位)或者如果組織足夠小則為整個組織(全組織包埋ish)中的特異性dna或rna序列的雜交。dnaish可用于確定染色體的結(jié)構(gòu)。rnaish用于測量和定位組織切片或全組織包埋內(nèi)的mrna和其他轉(zhuǎn)錄本(例如，ncrna)。通常對樣本細胞和組織進行處理以原位固定靶轉(zhuǎn)錄本，并增加探針的進入。探針在高溫下與靶序列雜交，然后將多余的探針洗掉。分別使用放射自顯影、熒光顯微術(shù)或免疫組織化學(xué)，對組織中用放射、熒光或抗原標(biāo)記的堿基標(biāo)記的探針進行定位和定量。ish也可使用兩種或更多種通過放射性或其他非放射性標(biāo)記物標(biāo)記的探針，以同時檢測兩種或更多種轉(zhuǎn)錄本。

將southern和northern印跡分別用于檢測特異性dna或rna序列。使從樣本中提取的dna或rna斷裂，在基質(zhì)凝膠上通過電泳分離，然后轉(zhuǎn)移到膜濾器上。使濾器結(jié)合的dna或rna與和所關(guān)注的序列互補的標(biāo)記探針雜交。檢測結(jié)合到濾器的雜交探針。該程序的一種變化形式是反向northern印跡，其中固定到膜的底物核酸為分離的dna片段的集合，而探針是從組織提取并進行了標(biāo)記的rna。

芯片、試劑盒

本發(fā)明所述的芯片包括：固相載體；以及有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針特異性地對應(yīng)于loc103611081所示的部分或全部序列。

具體地，可根據(jù)本發(fā)明所述的lncrna，設(shè)計出適合的探針，固定在固相載體上，形成“寡核苷酸陣列”。所述的“寡核苷酸陣列”是指具有可尋址位置(即以區(qū)別性的，可訪問的地址為特征的位置)的陣列，每個可尋址位置均含有一個與其相連的特征性寡核苷酸。根據(jù)需要，可將寡核苷酸陣列分成多個亞陣。

在本發(fā)明中，所述固相載體包括塑料制品、微顆粒、膜載體等。所述塑料制品可通過非共價或物理吸附機制與抗體或蛋白抗原相結(jié)合，最常用的塑料制品為聚苯乙烯制成的小試管、小珠和微量反應(yīng)板；所述微顆粒是由高分子單體聚合成的微球或顆粒，其直徑多為微米，由于帶有能與蛋白質(zhì)結(jié)合的功能團，易與抗體(抗原)形成化學(xué)偶聯(lián)，結(jié)合容量大；所述膜載體包括硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜及尼龍膜等微孔濾膜。

“探針”指能與另一分子的特定序列或亞序列或其它部分結(jié)合的分子。除非另有指出，術(shù)語“探針”通常指能通過互補堿基配對與另一多核苷酸(往往稱為“靶多核苷酸”)結(jié)合的多核苷酸探針。根據(jù)雜交條件的嚴謹性，探針能和與該探針缺乏完全序列互補性的靶多核苷酸結(jié)合。探針可作直接或間接的標(biāo)記，其范圍包括引物。雜交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位雜交測定法。

“探針”指能與另一分子的特定序列或亞序列或其它部分結(jié)合的分子。除非另有指出，術(shù)語“探針”通常指能通過互補堿基配對與另一多核苷酸(往往稱為“靶多核苷酸”)結(jié)合的多核苷酸探針。根據(jù)雜交條件的嚴謹性，探針能和與該探針缺乏完全序列互補性的靶多核苷酸結(jié)合。探針可作直接或間接的標(biāo)記，其范圍包括引物。雜交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位雜交測定法。

所述探針具有與靶點基因的特定的堿基序列互補的堿基序列。這里，所謂“互補”，只要是雜交即可，可以不是完全互補。這些多核苷酸通常相對于該特定的堿基序列具有80％以上、優(yōu)選90％以上、更優(yōu)選95％以上、特別優(yōu)選100％的同源性。這些探針可以是dna，也可以是rna，另外，可以為在其一部分或全部中核苷酸通過pna(polyamidenucleicacid，肽核酸)、lna(注冊商標(biāo)，lockednucleicacid，bridgednucleicacid，交聯(lián)化核酸)、ena(注冊商標(biāo)，2′-o,4′-c-ethylene-bridgednucleicacids)、gna(glycerolnucleicacid，甘油核酸)、tna(threosenucleicacid，蘇糖核酸)等人工核酸置換得到的多核苷酸。

術(shù)語“同源性”是指互補性的程度。可以存在部分同源性或完全同源性(即，同一性)。部分互補的序列是至少部分地抑制完全互補的核酸分子與“基本上同源的”靶核酸雜交的核酸分子。完全互補序列與靶序列的雜交的抑制可通過在低嚴格性條件下使用雜交測定(southern或northern印跡、液相雜交等)進行檢查?；旧贤吹男蛄谢蛱结槍⒏偁幉⒁种仆耆吹暮怂岱肿釉诘蛧栏裥詶l件下與靶標(biāo)的結(jié)合(即，雜交)。這并非是說，低嚴格性條件是使得允許非特異性結(jié)合的條件；低嚴格性條件要求兩個序列彼此之間的結(jié)合為特異性(即，選擇性)的相互作用。非特異性結(jié)合的不存在可通過使用基本上非互補(例如，低于約30％同一性)的第二靶標(biāo)進行測試；在不存在非特異性結(jié)合的情況下，探針將不與第二非互補靶標(biāo)雜交。

本發(fā)明中的術(shù)語“雜交”用于指代互補核酸的配對。雜交和雜交強度(即，核酸之間的締合強度)受諸如以下的因素影響：核酸之間的互補程度、所涉及的條件的嚴格性、形成的雜交體的tm和核酸內(nèi)的g:c比率。在其結(jié)構(gòu)內(nèi)含有互補核酸的配對的單個分子稱為“自我雜交的”。

本發(fā)明針對loc103611081基因的寡核苷酸探針可以是dna、rna、dna-rna嵌合體、pna或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié)合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。

本發(fā)明的試劑盒包括檢測有效量的檢測loc103611081基因的試劑，選自下組的一種或多種物質(zhì)：容器、使用說明書、陽性對照物、陰性對照物、緩沖劑、助劑或溶劑。例如用于混懸或固定細胞的溶液，可檢測的標(biāo)簽或標(biāo)記，使核酸易于雜交的溶液，用于裂解細胞的溶液，或用于核酸純化的溶液。

本發(fā)明的試劑盒中還可附有試劑盒的使用說明書，其中記載了如何采用試劑盒進行檢測，和如何利用檢測結(jié)果對疾病發(fā)展進行判斷。

采用本發(fā)明的試劑盒，可通過選自下組的各種方法(包括但不限于)檢測loc103611081：實時定量反轉(zhuǎn)錄pcr、生物芯片檢測法、dna印跡法、或rna印跡法或原位雜交法。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可根據(jù)實際條件和需要對檢測方式進行調(diào)整和改變。

本發(fā)明的芯片或試劑盒可用于檢測包括loc103611081基因在內(nèi)的多個基因(例如與缺血性腦卒中相關(guān)的多個基因)的表達水平。

樣本

在本發(fā)明中，“樣本”包括(但不限于)，可以是血液、組織、尿液、血清、血漿、羊水、腦脊液、胎盤細胞或者組織、內(nèi)皮細胞、白細胞或單核細胞。樣品可以得自患者或?qū)ο笾苯邮褂?，或者進行預(yù)處理，如通過過濾、蒸餾、提取、濃縮、離心、失活干擾成分、加入試劑等方式處理，以如本文所述或者本領(lǐng)域已知的一些方式修飾樣品的特性。在本發(fā)明的具體實施例中，所述“樣本”為血液。

本發(fā)明中的術(shù)語“診斷”是指通過疾病的體征和癥狀或遺傳分析、病理分析、組織學(xué)分析等識別疾病。

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明。以下實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如sambrook等人，分子克?。簩嶒炇沂謨?newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。

實施例1篩選與缺血性腦卒中相關(guān)的基因標(biāo)志物

1、樣品收集

各收集10例正常人血液和缺血性腦卒中患者的血液，患者均知情同意，上述所有標(biāo)本的取得均通過組織倫理委員會的同意。

2、rna樣品的制備

1)臨床血清樣本收集后12000rpm高速離心10min，重復(fù)2次。

2)吸取250μ1的血清樣本至1.5m1ep管，加750μ1trizollsreagent，吹打混勻，靜置5min。

3)加氯仿(chcl3：trizol250μ1:750μ1)，顛倒混勻，靜置15min，4℃，12000rpm，離心15min。

4)小心吸取上層液體至一新ep管，加適量異丙醇(異丙醇：trizo1500μ1：750μ1)，顛倒混勻，靜置10min；4℃，12000rpm離心10min。

5)棄上層離心液，加75％乙醇(rna酶滅活)；4℃，8000rpm離心5min；

6)保留沉淀，棄上層離心液，室溫靜置5-10min；加入適量depc水溶解沉淀，取適量rna溶液測濃度及觀察rna抽提情況。

3、逆轉(zhuǎn)錄和標(biāo)記

用lowrnainputlinearamplificationkit將mrna逆轉(zhuǎn)錄成cdna，同時用cy3分別標(biāo)記實驗組和對照組。

4、雜交

基因芯片采用康城生物-humanlncrnaarray，按芯片使用說明書的步驟進行雜交。

5、數(shù)據(jù)處理

雜交后芯片用agilent掃描儀掃描,分辨率為5μm，掃描儀自動以100％和10％pmt各掃描1次，2次結(jié)果agilent軟件自動合并。掃描圖像數(shù)據(jù)采用feature

extraction進行處理分析，得到的原始數(shù)據(jù)應(yīng)用bioconductor程序包進行后續(xù)數(shù)據(jù)處理。最后ratio值為實驗組和對照組。差異基因篩選標(biāo)準：ratio≥4為上調(diào)基因，ratio≤0.25為下調(diào)基因。

6、結(jié)果

結(jié)果如圖1所示，與健康人血液相比，loc103611081在缺血性腦卒中患者中的表達水平顯著高于健康人的表達水平。

實施例2qpcr測序驗證loc103611081基因的差異表達

1、對loc103611081基因差異表達進行大樣本qpcr驗證。按照實施例1中的樣本收集方式選擇正常人和缺血性腦卒中患者的血樣樣本各60例。

2、rna提取步驟同實施例1。

3、逆轉(zhuǎn)錄：

(1)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：

配置25μl反應(yīng)體系：depc水，5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液，10mmdntp，0.1mmdtt，30μmoligodt，200u/μlm-mlv，1μg模板rna。

將上述體系吹打混勻，42℃孵育1h，72℃10min，短暫離心。

(2)引物設(shè)計：

loc103611081基因的引物序列為：

正向引物：5’-aactgaagaaccacaagagaag-3’(seqidno.2)

反向引物：5’-ttgctgtccaggagaagg-3’(seqidno.3)

管家基因gapdh的引物序列為：

正向引物：5’-ccgggaaactgtggcgtgatgg-3’(seqidno.4)

反向引物：5’-aggtggaggagtgggtgtcgctgtt-3’(seqidno.5)

(3)qpcr擴增檢驗：

配制以下反應(yīng)體系：sybrgreen聚合酶鏈式反應(yīng)體系12.5μl，正反向引物(5μm)各1μl，模板cdna2.0μl，無酶水8.5μl；每個樣本設(shè)置3個平行管，各項操作均于冰上進行。

擴增程序為：95℃60s，(95℃15s，60℃15s，72℃45s)×40個循環(huán)。

以sybrgreen作為熒光標(biāo)記物，在lightcycler熒光實時定量pcr儀上進行pcr反應(yīng)，通過融解曲線分析和電泳確定目的條帶，δδct法進行相對定量。

3、統(tǒng)計學(xué)方法

實驗都是按照重復(fù)3次來完成的，結(jié)果數(shù)據(jù)都是以平均值±標(biāo)準差的方式來表示，采用spss18.0統(tǒng)計軟件來進行統(tǒng)計分析的，兩者之間的差異采用t檢驗，認為當(dāng)p<0.05時具有統(tǒng)計學(xué)意義。

4、結(jié)果

結(jié)果如圖2所示，與健康人相比，loc103611081基因在缺血性腦卒中患者中表達上調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，同rna-sep結(jié)果一致。

上述實施例的說明只是用于理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也將落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)。

sequencelisting

<110>王思奎劉志國孫長法

<120>一種與腦卒中發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因的用途

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