本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，具體涉及一種4-氨基嘧啶類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、其制備方法、以及它們作為布魯頓酪氨酸激酶抑制劑的用途。
技術(shù)背景
布魯頓酪氨酸激酶(btk)是非受體酪氨酸蛋白激酶tec家族的一員，由659個氨基酸組成，內(nèi)含多個結(jié)構(gòu)域，如pleckstrinhomology(ph)結(jié)構(gòu)域、techomology(th)結(jié)構(gòu)域、srchomology3(sh3)結(jié)構(gòu)域、sh2和sh1結(jié)構(gòu)域(futuremedchem,2014,6(6):675-695)。研究表明，btk作為b細(xì)胞受體(bcr)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的重要組成部分，在b細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化和增殖等諸多生理過程中發(fā)揮極其重要的作用(nature,1993,361(6409):226-233)。
btk的精確調(diào)控對維持b細(xì)胞的正常生理功能至關(guān)重要(anticanceragentsmedchem,2007,7(6):624-632)。btk的過度活化會引起b細(xì)胞凋亡減慢，并且易發(fā)生自體免疫反應(yīng)，從而誘導(dǎo)b細(xì)胞淋巴瘤和炎癥等疾病的發(fā)生和發(fā)展(intrevimmunol,2012,31(2):119-132)。
研究表明，btk在多種b細(xì)胞淋巴瘤中均過度表達(blood,2011,117(23):6287-6296；leukres,2013,37(10):1271-1277；nature,2010,463(7277):88-92；clinpharmacolther,2015,97(5):469-477)。如在慢性淋巴性白血病小鼠模型中，btk的過度表達導(dǎo)致腫瘤發(fā)生率和死亡率增加(amjbloodres,2013,3(1):71-83)；在套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中，btktyr223出現(xiàn)持續(xù)自動磷酸化，從而導(dǎo)致btk過度活化(blood,2013,122(14):2412-2424)。btk功能獲得型突變導(dǎo)致的過度活化也在急性淋巴細(xì)胞白血病(leuklymphoma,2003,44(6):1011-1018)、急性髓性白血病(expertopintherpatents,2010,20(11):1457-1470)和慢性髓性白血病(biochembiophysrescommun,2002,299(3):510-515)中得到確證。通過抑制btk的活性能降低抗凋亡蛋白bcl-2、bcl-xl和mcl-1的水平，從而促進b細(xì)胞淋巴瘤凋亡(leukres,2013,37(10):1271-1277)。
此外，btk與自身免疫性疾病密切相關(guān)。除bcr信號通路外，btk還參與調(diào)控體內(nèi)的其他信號通路，如fcγ受體信號通路(natchembiol,2011,7(1):4-5)和toll樣(tlr)信號通路(jleukocbiol,2014,95(2):243-250)。fcγ受體信號通路的激活最終導(dǎo)致tnfα、il-1β和il-6等炎癥因子的釋放(drugdiscovtoday,2014,19(8):1200-1204)，而tlr信號通路的活化與轉(zhuǎn)錄因子nf-κb的激活、促炎/抗炎細(xì)胞因子的釋放密切相關(guān)(jclinoncol,2014,32(17):1830-1839)。實驗證明，在膠原蛋白誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的小鼠模型中，btk抑制劑可降低自身抗體水平，有效控制疾病的發(fā)生與發(fā)展；在小鼠mrl/lpr系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型中，btk抑制劑可減少抗體的產(chǎn)生，并且能降低腎損害的風(fēng)險；大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞模型經(jīng)小分子干擾核糖核酸(sirna)和lfm-a13處理后，組胺的含量減少了20-25％(procnatlacadsciusa,2010,107(29):13075-13080；natchembiol,2011,7(1):41-50)。
文獻還報道了btk和異種免疫性疾病、血栓栓塞疾病的聯(lián)系(expertopintherpatents,2010,20(11):1457-1470)。在骨髓移植的小鼠模型中，移植物抗宿主病(gvhd)預(yù)防處方添加btk抑制劑可以顯著改善異體骨髓移植的存活率。而x-連鎖無丙種球蛋白血癥(一種由btk突變失活導(dǎo)致的先天性免疫缺陷疾病)患者體內(nèi)，血小板響應(yīng)于膠原或膠原相關(guān)肽的聚集、分泌能力明顯降低。
綜上所述，btk已成為目前b細(xì)胞淋巴瘤和炎性疾病治療領(lǐng)域中的一個有效靶標(biāo)。目前已有多個btk抑制劑(如bms-986142、m-2951、cc-292、gdc-0853)開展治療b細(xì)胞淋巴瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供了一種4-氨基嘧啶類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、其制備方法、藥物組合物及應(yīng)用。本發(fā)明的化合物具有良好的btk抑制活性，可以用于治療和/或預(yù)防btk過度激活所引起的相關(guān)疾病。
本發(fā)明公開通式(i)所示的4-氨基嘧啶類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中：
l代表c(o)或c(o)nh(ch2)m；
m代表0～5的整數(shù)；
各個r1各自獨立地代表鹵素、氰基、硝基、羥基、氨基、三氟甲基、or3、nhr3或(c1-c8)烷基；
n代表0～5的整數(shù)；
r2任選自：nh(c1-c8)烷基nhr4，
r3代表(c1-c8)烷基、(c1-c8)烷氧基(c1-c8)烷基、(c6-c10)芳基或(c1-c10)芳雜環(huán)基；其中所述的芳雜環(huán)基團可任選地包含一個或多個選自o、s或n的其它雜原子；所述的芳基和芳雜環(huán)基可任選地用一個至五個以下基團取代：鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、(c1-c8)烷基、(c1-c8)烷氧基或(c3-c6)環(huán)烷基；
r4代表丙酰基、丙烯?；?-氯乙?；?；
其中，下式(a-d)化合物除外：
進一步地，具有通式(i)的4-氨基嘧啶類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于：
l代表c(o)或c(o)nh(ch2)m；
m代表0～2的整數(shù)；
各個r1各自獨立地代表鹵素、(c1-c5)烷基、(c1-c5)烷氧基或苯氧基；
n為0～2的整數(shù)；
r2任選自：nh(c1-c8)烷基nhr4，
r4代表丙酰基、丙烯?；?-氯乙酰基。
更進一步地，具有通式(i)的4-氨基嘧啶類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于：
l代表c(o)或c(o)nh(ch2)m；
m代表0～2的整數(shù)；
各個r1各自獨立地代表鹵素、(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷氧基或苯氧基；
n為0～2的整數(shù)；
r2任選自：nh(c1-c5)烷基nhr4，
r4代表丙酰基、丙烯?；?-氯乙?；?。
具體來說，通式(i)所示的4-氨基嘧啶類化合物優(yōu)選自下列化合物：
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-1)；
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-2)；
1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-3)；
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-4)；
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-5)；
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-6)；
(r)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-7)；
1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]氮雜環(huán)丁烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-8)；
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-9)；
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-10)；
n-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]乙基]丙烯酰胺(a-11)；
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]丙烷-1-酮(a-12)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-1)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-溴苯基)甲酰胺(b-2)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-異丙基苯基)甲酰胺(b-3)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(b-4)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-5)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-6)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(2-氟苯基)甲酰胺(b-7)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-氟苯基)甲酰胺(b-8)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-氟苯基)甲酰胺(b-9)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-芐基甲酰胺(b-10)；
(r)-[4-[(1-丙烯?；量┩?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-11)；
(s)-[4-[[(1-丙烯?；量┩?2-基)甲基]氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-12)；
(r)-[4-[(1-丙酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-13)。
下面藥理實驗中涉及的化合物代號等同于此處代號所對應(yīng)的化合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供通式(i)所示化合物的制備方法，其特征在于：
a)當(dāng)l為c(o)時，通式(i)所示化合物的制備方法為：以4,6-二羥基嘧啶為原料，經(jīng)vilsmeier-haack反應(yīng)和氯代反應(yīng)制得4,6-二氯-5-嘧啶甲醛1，1經(jīng)亞氯酸鈉氧化制得4,6-二氯-5-嘧啶羧酸2，2與草酰氯反應(yīng)制得酰氯后與芳烴進行friedel-crafts酰基化反應(yīng)制得(4,6-二氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮3，3與氨水反應(yīng)制得(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮4，4與胺類化合物(nh2y-boc或nh2yh)反應(yīng)制得5-1或5-2，5-1脫boc保護基后與酰氯反應(yīng)，或5-2直接與酰氯反應(yīng)制得通式(i)化合物：
其中，r1和r2的定義如前所述。
b)當(dāng)l為c(o)nh(ch2)m時，通式(i)所示化合物的制備方法為：中間體2與草酰氯反應(yīng)制得酰氯后與胺類化合物縮合生成酰胺6，6與氨水反應(yīng)制得中間體7，7與胺類化合物(nh2y-boc)反應(yīng)制得8，8經(jīng)濃鹽酸處理脫boc后制得9，最后9與酰氯反應(yīng)制得通式(i)化合物：
其中，m、n、r1和r2的定義如前所述。
所述通式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的鹽可通過一般的化學(xué)方法合成。
一般情況下，鹽的制備可以通過游離堿或酸與等化學(xué)當(dāng)量或過量酸(無機酸或有機酸)或堿(無機堿或有機堿)在合適的溶劑或溶劑組合物中反應(yīng)制得。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其由治療上有效量的活性組分和藥學(xué)上可接受的輔料組成；所述的活性組分包括通式(i)化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種。所述藥物組合物中，所述的輔料包括藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑。
根據(jù)治療目的可將藥物組合物制成各種類型的給藥單位劑型，如片劑、丸劑、粉劑、液體、懸浮液、乳液、顆粒劑、膠囊、栓劑和針劑(溶液和懸浮液)等，優(yōu)選片劑、膠囊、液體、懸浮液、和針劑(溶液和懸浮液)。
為了使片劑、丸劑或栓劑形式的藥物組合物成形，可使用本領(lǐng)域任何已知并廣泛使用的賦形劑。
為了制備針劑形式的藥物組合物，可將溶液或懸浮液消毒后(最好加入適量的氯化鈉，葡萄糖或甘油)，制成與血液等滲壓的針劑。在制備針劑時，也可以使用本領(lǐng)域內(nèi)任何常用的載體。例如：水、乙醇、丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、聚乙氧基化的異硬脂醇和聚乙烯脫水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，還可以加入通常溶解劑和緩沖劑等。
本發(fā)明所述的組合物在藥物組合物中的含量無特殊限制，可在很寬的范圍內(nèi)進行選擇，通?？蔀橘|(zhì)量百分比的5～95％，優(yōu)先為質(zhì)量百分比的30～85％。
本發(fā)明所述的藥物組合物的給藥方法沒有特殊限制?？筛鶕?jù)患者年齡、性別和其它條件及癥狀，選擇各種劑型的制劑給藥。
本發(fā)明另外提供了所述通式(i)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或所述藥物組合物在制備btk抑制劑中的應(yīng)用。所述的btk抑制劑用于治療血栓栓塞、華氏巨球蛋白血癥、炎性病癥、自身免疫性疾病和b細(xì)胞淋巴瘤。
所述的炎性或自身免疫性疾病包括但不限于：異種免疫性疾病、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫介導(dǎo)的溶血性貧血、免疫復(fù)合體介導(dǎo)的脈管炎和銀屑病中的一種或多種。
所述的b細(xì)胞淋巴瘤包括但不限于：慢性淋巴細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和b細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中的一種或多種。
具體實施方式
為了進一步闡明本發(fā)明，下面給出一系列實施例，這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
實施例1
4,6-二氯-5-嘧啶甲醛(1)的制備
將dmf(5.50ml,71.34mmol)于冰浴下緩慢滴入pocl3(17.00ml,185.71mmol)，攪拌反應(yīng)1h，撤去冰浴，加入4,6-二羥基嘧啶(4.00g,35.68mmol)，升溫回流3h，冷卻至室溫，倒入冰水中，二氯甲烷萃取，減壓濃縮，石油醚-乙酸乙酯(p:e＝4:1(v:v))重結(jié)晶，得黃色固體4.74g，收率75.4％，mp68-70℃。esi-ms:177[m+h]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)：δ(ppm):8.89(s,1h),10.43(s,1h)。
4,6-二氯-5-嘧啶羧酸(2)的制備
1(4.00g,22.72mmol)和nah2po4(9.55g,79.58mmol)溶于60ml叔丁醇和10ml水混合溶劑中，冰浴下加入naclo2(7.66g,84.69mmol)，反應(yīng)1h，減壓蒸去叔丁醇，倒入水中，鹽酸調(diào)ph至5，乙酸乙酯萃取減壓濃縮，得黃色固體3.12g，收率71.5％，mp131-133℃。esi-ms:190.9[m-h]-；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.00(s,1h).
(4,6-二氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮(3)的制備
2(3.00g,15.63mmol)溶于20ml無水thf中，滴加草酰氯(4.00ml,46.87mmol)和2滴dmf，室溫反應(yīng)4h，減壓蒸去溶劑和剩余的草酰氯，無水ch2cl2溶解，移至恒壓滴液漏斗，冰浴下滴加至二苯醚(12.40ml,8.31mmol)和alcl3(3.12g,23.46mmol)的無水ch2cl2中，滴畢，回流反應(yīng)3h，倒入冰水，濃鹽酸調(diào)ph至2，ch2cl2萃取，無水硫酸鎂干燥，柱層析純化[石油醚:乙酸乙酯(p:e)＝5:1(v:v)]，得白色固體3.82g，收率71.1％，mp91-93℃。esi-ms:345[m+h]+；1hnmr(300mhz,cdcl3):δ(ppm):7.07(d,j＝8.97hz,2h),7.13(d,j＝9.72hz,2h),7.26(t,j＝6.27hz,1h),7.44(t,j＝7.53hz,2h),7.80(d,j＝9.72hz,2h),8.91(s,1h).
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮(4)的制備
3(1.0g,2.91mmol)加入25ml乙醇和氨水(8ml,52.0mmol)，室溫反應(yīng)24h，冰浴冷卻，抽濾，干燥，得白色固體0.51g，收率53.9％，mp264-266℃。esi-ms:324[m-h]-；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):7.07(d,j＝8.82hz,2h),7.16(d,j＝7.68hz,2h),7.28(t,j＝7.35hz,1h),7.35(s,2h),7.49(t,j＝7.86hz,2h),7.84(d,j＝8.79hz,2h),8.32(s,1h).
(s)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲?；?嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5a)的制備
4(0.30g,0.92mmol)溶于20ml乙醇中，加入(s)-1-boc-3-氨甲基哌啶(0.26g,1.20mmol)和dipea(0.18ml,1.01mmol)，回流反應(yīng)48h，乙酸乙酯溶解，抽濾，柱層析純化[p:e＝1:1(v:v)]，得淡黃色固體0.24g，收率51.8％。esi-ms:504[m+h]+.
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-1)的制備
5a(0.20g,0.40mmol)溶于20mlch2cl2中，冰浴下加入濃鹽酸(0.33ml,4.0mmol)，滴畢室溫反應(yīng)12h，減壓濃縮后重新溶于四氫呋喃-水(thf:h2o＝5:1(v:v))混合體系，加入nahco3(0.10g,1.20mmol)，冰浴條件下滴加丙烯酰氯(0.04ml,0.46mmol)，室溫反應(yīng)過夜，減壓蒸餾除去thf，剩余反應(yīng)液加入適量水，ch2cl2萃取，無水硫酸鎂干燥，柱層析純化[乙酸乙酯(ea)]，得黃色固體0.04g，收率17.6％。esi-ms:458[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.01(s,1h),7.69(d,j＝8.2hz,2h),7.44(t,j＝7.7hz,2h),7.22(t,j＝7.4hz,1h),7.10-6.99(m,4h),6.79-6.52(m,3h),6.02(d,j＝17.0hz,1h),5.59(t,j＝13.1hz,1h),4.20-3.69(m,3h),3.23(s,2h),3.08-2.95(m,1h),2.79(s,1h),1.61(s,3h),1.20(d,j＝31.9hz,2h).
實施例2
(r)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲?；?嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5b)的制備
參照5a的制備方法，由4和(r)-1-boc-3-氨甲基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率56.2％。esi-ms:504[m+h]+.
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-2)的制備
參照a-1的制備方法，由5b脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率17.2％。esi-ms:458[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):7.97(s,1h),7.65(d,j＝8.2hz,2h),7.39(d,j＝8.7hz,2h),7.19(s,1h),7.09-6.94(m,4h),6.64(s,3h),5.99(d,j＝16.7hz,1h),5.57(s,1h),4.20-3.62(m,3h),3.18(s,2h),2.98(s,1h),2.74(s,1h),1.57(s,3h),1.16(d,j＝24.2hz,2h).
實施例3
[4-氨基-6-[(哌啶-2-甲基)氨基]嘧啶-5-基](4-苯氧苯基)甲酮(5c)的制備
參照5a的制備方法，由4和2-氨甲基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率45.8％。esi-ms:404[m+h]+.
1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-3)的制備
5c(0.23g,0.57mmol)溶于18ml四氫呋喃-水(thf:h2o＝5:1(v:v))混合體系，加入nahco3(0.14g,1.71mmol)，冰浴條件下滴加丙烯酰氯(0.06ml,0.68mmol)，室溫反應(yīng)過夜，減壓蒸餾除去thf，剩余反應(yīng)液加入適量水，ch2cl2萃取，無水硫酸鎂干燥，柱層析純化[乙酸乙酯(ea)]，得黃色固體0.04g，收率16.0％。esi-ms:458[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.04(s,1h),7.65(d,j＝8.3hz,2h),7.45(t,j＝7.9hz,2h),7.25(q,j＝8.6,7.4hz,2h),7.11(d,j＝8.0hz,2h),7.00(d,j＝8.4hz,2h),6.65(dd,j＝16.4,10.6hz,1h),6.50(s,2h),5.92(d,j＝16.3hz,1h),5.46(d,j＝11.0hz,1h),4.33(s,1h),3.62(s,2h),2.72(t,j＝13.1hz,1h),1.64-1.47(m,5h),1.23(s,2h).
實施例4
(r)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5d)的制備
參照5a的制備方法，由4和(r)-1-boc-3-氨基吡咯烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率57.1％。esi-ms:476[m+h]+.
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-4)的制備
參照a-1的制備方法，由5d脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率19.5％。esi-ms:430[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.06(s,1h),7.64(dd,j＝8.8,2.5hz,2h),7.45(t,j＝7.8hz,2h),7.27-7.19(m,1h),7.11(td,j＝7.3,1.3hz,2h),6.99-6.79(m,5h),6.49(ddd,j＝16.8,10.3,3.6hz,1h),6.11(dt,j＝16.8,2.5hz,1h),5.63(ddd,j＝10.3,4.4,2.5hz,1h),4.57(dq,j＝37.8,5.8hz,1h),3.66(ddd,j＝67.6,11.7,6.4hz,2h),3.21(dq,j＝9.5,5.9,5.4hz,1h),2.15-1.91(m,1h),1.75(ddt,j＝33.0,12.9,6.0hz,1h),1.31-1.12(m,1h).
實施例5
(s)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲?；?嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5e)的制備
參照5a的制備方法，由4和(s)-1-boc-3-氨基吡咯烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率52.8％。esi-ms:476[m+h]+.
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-5)的制備
參照a-1的制備方法，由5e脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率13.0％。esi-ms:430[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.59(s,1h),7.82-7.71(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.22-7.05(m,3h),7.05-6.93(m,2h),6.62(dd,j＝10.0,16.8hz,1h),6.28(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.67(dd,j＝13.8,16.7hz,1h),4.09(s,2h),3.88(dd,j＝6.9,9.4hz,1h),3.62-3.37(m,3h),3.30(p,j＝6.9hz,1h),2.24-2.06(m,1h),1.92-1.74(m,1h),0.93(s,1h).
實施例6
(s)-2-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲?；?嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5f)的制備
參照5a的制備方法，由4和(s)-1-boc-2-氨甲基吡咯烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率47.9％。esi-ms:490[m+h]+.
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-6)的制備
參照a-1的制備方法，由5f脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率18.6％。esi-ms:444[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.08(s,1h),7.69(dd,j＝8.7,11.5hz,3h),7.49-7.42(m,3h),7.24(dd,j＝1.5,7.5hz,2h),7.09(dq,j＝1.1,7.5hz,3h),7.05-6.99(m,3h),6.66-6.47(m,3h),6.11(ddd,j＝2.6,16.7,19.1hz,1h),5.65(dt,j＝3.1,10.2hz,1h),4.15(s,1h),1.76(d,j＝13.6hz,2h),1.69(s,2h).
實施例7
(r)-2-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲?；?嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5g)的制備
參照5a的制備方法，由4和(r)-1-boc-2-氨甲基吡咯烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率56.1％。esi-ms:490[m+h]+.
(r)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-7)的制備
參照a-1的制備方法，由5g脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率18.9％。esi-ms:444[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.08(s,1h),7.69(dd,j＝8.5,11.3hz,3h),7.48-7.42(m,3h),7.24(d,j＝6.8hz,2h),7.12-7.08(m,3h),7.02(dd,j＝5.3,8.6hz,3h),6.64-6.47(m,3h),6.18-6.04(m,1h),5.67-5.62(m,1h),4.16(s,1h),1.77(d,j＝14.2hz,2h),1.70(s,2h).
實施例8
3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸叔丁酯(5h)的制備
參照5a的制備方法，由4和1-boc-3-氨甲基氮雜環(huán)丁烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率59.7％。esi-ms:476[m+h]+.
1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]氮雜環(huán)丁烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-8)的制備
參照a-1的制備方法，由5h脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率16.9％。esi-ms:430[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.41(s,1h),7.84-7.73(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.22-7.05(m,3h),7.05-6.93(m,2h),6.62(dd,j＝10.0,16.8hz,1h),6.27(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.69(dd,j＝13.8,16.8hz,1h),5.07(s,1h),4.53(s,2h),3.99(dd,j＝7.0,11.2hz,2h),3.61(dd,j＝7.0,11.2hz,2h),3.24(d,j＝7.0hz,2h),2.88(hept,j＝6.9hz,1h).
實施例9
(r)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲?；?嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5i)的制備
參照5a的制備方法，由4和(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率67.5％，mp68-70℃。esi-ms:512[m+na]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):1.16(t,j＝6.96hz,2h),1.22～1.24(m,2h),1.32(s,9h),1.49～1.51(m,1h),1.70～1.72(m,1h),2.24～2.26(m,1h),4.00～4.02(m,1h),6.76(s,2h),7.01(d,j＝8.70hz,2h),7.16(d,j＝7.68hz,3h),7.22(t,j＝7.41hz,1h),7.44(t,j＝8.19hz,2h),7.65(d,j＝8.64hz,2h),8.02(s,1h).
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-9)的制備
參照a-1的制備方法，由5i脫boc保護基后與氯乙酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率19.7％。esi-ms:466[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.58(s,1h),7.82-7.72(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.18-7.04(m,3h),7.05-6.93(m,2h),4.51(d,j＝12.3hz,1h),4.43-4.23(m,2h),4.05(s,2h),3.86(dd,j＝6.8,12.3hz,1h),3.34-3.08(m,2h),2.89(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),2.13-1.95(m,1h),1.80-1.47(m,3h),1.07(s,1h).
實施例10
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-10)的制備
參照a-1的制備方法，由5f脫boc保護基后與氯乙酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率20.2％。esi-ms:466[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.54(s,1h),7.82-7.71(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.19-7.05(m,3h),7.05-6.93(m,2h),5.07(s,1h),4.74(d,j＝12.4hz,1h),4.17(d,j＝12.4hz,1h),4.16-3.97(m,1h),3.93(s,2h),3.90-3.66(m,3h),3.35(dt,j＝6.8,9.4hz,1h),2.20-1.85(m,3h),1.90-1.69(m,1h).
實施例11
[4-氨基-6-[(2-氨基乙基)氨基]嘧啶-5-基](4-苯氧苯基)甲酮(5j)的制備
參照5a的制備方法，由4和乙二胺反應(yīng)得淡黃色固體，收率49.7％。esi-ms:350[m+h]+.n-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]乙基]丙烯酰胺(a-11)的制備
參照a-3的制備方法，由5j和丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率18.2％。esi-ms:404[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.57(s,1h),7.74-7.63(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.12(ddt,j＝2.1,6.3,8.3hz,3h),7.05-6.93(m,2h),6.62(s,1h),6.48(dd,j＝10.1,16.7hz,1h),6.07(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.79(dd,j＝13.8,16.6hz,1h),5.07(s,1h),3.96-3.82(m,4h),3.51(t,j＝4.9hz,2h).
實施例12
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]丙烷-1-酮(a-12)的制備
參照a-1的制備方法，由5f脫boc保護基后與丙酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率19.8％。esi-ms:446[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.01(d,j＝8.8hz,1h),7.69(dd,j＝8.7,10.2hz,2h),7.50-7.41(m,2h),7.23(t,j＝7.6hz,1h),7.17-7.08(m,2h),7.02(dd,j＝4.3,8.7hz,2h),6.66(s,1h),6.59(s,1h),4.01(d,j＝8.7hz,1h),3.45(dq,j＝6.0,7.0,12.7hz,4h),2.43(dd,j＝5.3,7.5hz,1h),2.23-2.13(m,1h),1.77(s,1h),1.66(s,1h),1.25-1.15(m,2h),1.02-0.88(m,4h).
實施例13
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-苯基甲酰胺(6a)的制備
2(2.0g,10.36mmol)溶于20ml無水thf中，滴加草酰氯(2.65ml,31.09mmol)和2滴dmf，室溫反應(yīng)4h，減壓蒸去溶劑和剩余的草酰氯，無水ch2cl2溶解，移至恒壓滴液漏斗，冰浴下滴加至苯胺(1.04ml,11.39mmol)和三乙胺(3.14g,31.07mmol)的無水ch2cl2中，滴畢，室溫反應(yīng)過夜，反應(yīng)液倒入適量水中，ch2cl2萃取，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，抽濾，少量ch2cl2洗滌，濾餅烘干后得到白色固體1.47g，收率52.9％。esi-ms:268[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-苯基甲酰胺(7a)的制備
6a(1.0g,3.72mmol)加入25ml乙酸乙酯和氨水(10ml,67.1mmol)，室溫反應(yīng)24h，冰浴冷卻，抽濾，干燥，得白色固體0.74g，收率79.8％。esi-ms:249[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-(苯氨基甲?；?嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8a)的制備
參照5a的制備方法，由7a與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率57.9％。esi-ms:413[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-1)的制備
參照a-1的制備方法，由8a脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率18.9％。esi-ms:367[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.93(s,1h),7.98(s,1h),7.70–7.62(m,2h),7.31(t,j＝7.8hz,2h),7.06(t,j＝7.4hz,1h),6.62(s,3h),6.05(dd,j＝2.4,16.8hz,1h),5.62(dd,j＝2.4,10.4hz,1h),4.31–3.75(m,2h),3.15(s,3h),1.91(s,1h),1.75-1.37(m,3h),1.24(s,1h).
實施例14
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(4-溴苯基)甲酰胺(6b)的制備
參照6a的制備方法，由2和4-溴苯胺反應(yīng)得白色固體，收率53.8％。esi-ms:346[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(4-溴苯基)甲酰胺(7b)的制備
參照7a的制備方法，由6b反應(yīng)得白色固體，收率80.1％。esi-ms:327[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(4-溴苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8b)的制備
參照5a的制備方法，由7b與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率53.3％。esi-ms:491[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-溴苯基)甲酰胺(b-2)的制備
參照a-1的制備方法，由8b脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率17.5％。esi-ms:445[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.50(s,1h),8.07(s,1h),7.72-7.61(m,2h),7.55-7.45(m,2h),6.62(dd,j＝10.1,16.8hz,1h),6.17(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.66(dd,j＝13.8,16.8hz,1h),4.50(s,2h),4.28(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),3.69(dd,j＝6.9,12.4hz,1h),3.32(dd,j＝7.0,12.4hz,1h),3.16(p,j＝6.9hz,1h),2.94(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),2.15-1.96(m,1h),1.81-1.46(m,3h),1.23(s,1h).
實施例15
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(4-異丙基苯基)甲酰胺(6c)的制備
參照6a的制備方法，由2和4-異丙基苯胺反應(yīng)得白色固體，收率62.3％。esi-ms:310[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(4-異丙基苯基)甲酰胺(7c)的制備
參照7a的制備方法，由6c反應(yīng)得白色固體，收率83.1％。esi-ms:291[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(4-異丙基苯基)氨基甲?；鵠嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8c)的制備
參照5a的制備方法，由7c與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率66.5％。esi-ms:455[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-異丙基苯基)甲酰胺(b-3)的制備
參照a-1的制備方法，由8c脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率19.2％。esi-ms:409[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.88(d,j＝14.8hz,1h),7.97(s,1h),7.56(d,j＝8.5hz,2h),7.17(d,j＝8.5hz,2h),6.96(d,j＝30.9hz,1h),6.80-6.53(m,3h),6.04(dd,j＝2.4,16.8hz,1h),5.62(dd,j＝2.5,10.5hz,1h),3.91(d,j＝37.9hz,3h),3.14(dt,j＝8.1,19.1hz,2h),2.89-2.80(m,1h),1.91(s,1h),1.59(dd,j＝10.3,18.0hz,2h),1.50-1.40(m,1h),1.18(d,j＝6.9hz,6h).
實施例16
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(6d)的制備
參照6a的制備方法，由2和3-甲氧基-4-甲基苯胺反應(yīng)得白色固體，收率49.9％。esi-ms:312[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(7d)的制備
參照7a的制備方法，由6d反應(yīng)得白色固體，收率81.8％。esi-ms:293[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3-甲氧基-4-甲基苯基)氨基甲?；鵠嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8d)的制備
參照5a的制備方法，由7d與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率53.9％。esi-ms:457[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(b-4)的制備
參照a-1的制備方法，由8d脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率20.1％。esi-ms:411[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.11(s,1h),8.01(s,1h),7.50(d,j＝9.4hz,1h),7.41(d,j＝8.1hz,2h),7.21(d,j＝8.1hz,2h),6.55(dd,j＝10.6,17.0hz,1h),6.16(dd,j＝16.7,43.1hz,1h),5.60(d,j＝10.2hz,1h),5.45(d,j＝12.7hz,2h),4.00(d,j＝14.0hz,1h),3.30-3.13(m,2h),2.88(p,j＝6.9hz,1h),2.02(s,1h),1.61(dq,j＝7.3,8.1,16.6hz,3h),1.23(s,3h),1.21(s,3h).
實施例17
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(6e)的制備
參照6a的制備方法，由2和3,4-二甲氧基苯胺反應(yīng)得白色固體，收率57.4％。esi-ms:328[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(7e)的制備
參照7a的制備方法，由6e反應(yīng)得白色固體，收率81.0％。esi-ms:309[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8e)的制備
參照5a的制備方法，由7e與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率64.2％。esi-ms:473[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-5)的制備
參照a-1的制備方法，由8e脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率17.9％。esi-ms:427[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):9.80(d,j＝18.6hz,1h),7.98(s,1h),7.40(s,1h),7.18-7.13(m,1h),7.04-6.87(m,2h),6.58(s,3h),6.05(dd,j＝2.5,16.7hz,1h),5.63(d,j＝10.3hz,1h),3.90(d,j＝43.9hz,3h),3.73(d,j＝2.0hz,6h),3.18(d,j＝36.3hz,1h),1.95(d,j＝23.7hz,1h),1.66(s,2h),1.46(s,1h),1.21(d,j＝18.8hz,1h).
實施例18
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(6f)的制備
參照6a的制備方法，由2和3,5-二甲氧基苯胺反應(yīng)得白色固體，收率63.0％。esi-ms:328[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(7f)的制備
參照7a的制備方法，由6f反應(yīng)得白色固體，收率78.4％。esi-ms:309[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8f)的制備
參照5a的制備方法，由7f與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率52.3％。esi-ms:473[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-6)的制備
參照a-1的制備方法，由8f脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率19.3％。esi-ms:427[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.43(s,1h),8.22(s,1h),6.82(d,j＝2.0hz,2h),6.62(dd,j＝10.0,16.7hz,1h),6.19(dd,j＝10.0,13.8hz,1h),6.02(t,j＝2.0hz,1h),5.67(dd,j＝13.8,16.7hz,1h),4.84(s,2h),4.39(dt,j＝7.0,12.6hz,1h),3.80(s,6h),3.75(dd,j＝7.0,12.5hz,1h),3.45(dd,j＝7.0,12.5hz,1h),3.16(p,j＝6.9hz,1h),2.90(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),2.15-1.97(m,1h),1.81-1.46(m,3h),1.26(s,1h).
實施例19
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(2-氟苯基)甲酰胺(6g)的制備
參照6a的制備方法，由2和2-氟苯胺反應(yīng)得白色固體，收率68.6％。esi-ms:286[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(2-氟苯基)甲酰胺(7g)的制備
參照7a的制備方法，由6g反應(yīng)得白色固體，收率82.3％。esi-ms:267[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(2-氟苯基)氨基甲?；鵠嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8g)的制備
參照5a的制備方法，由7g與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率52.2％。esi-ms:431[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(2-氟苯基)甲酰胺(b-7)的制備
參照a-1的制備方法，由8g脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率16.9％。esi-ms:385[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.69(s,1h),7.95(d,j＝23.4hz,3h),7.69(s,1h),7.18(s,3h),6.73(s,2h),6.03(d,j＝16.5hz,1h),5.62(s,1h),4.25-4.16(m,1h),3.98(s,1h),3.79(s,1h),1.91(s,1h),1.62(s,2h),1.43(s,1h),1.21(s,1h),0.93-0.85(m,1h).
實施例20
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3-氟苯基)甲酰胺(6h)的制備
參照6a的制備方法，由2和3-氟苯胺反應(yīng)得白色固體，收率66.4％。esi-ms:286[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3-氟苯基)甲酰胺(7h)的制備
參照7a的制備方法，由6h反應(yīng)得白色固體，收率80.2％。esi-ms:267[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3-氟苯基)氨基甲?；鵠嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8h)的制備
參照5a的制備方法，由7h與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率50.7％。esi-ms:431[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-氟苯基)甲酰胺(b-8)的制備
參照a-1的制備方法，由8h脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率18.4％。esi-ms:385[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):7.97(s,1h),7.65(dd,j＝4.8,9.4hz,3h),7.14(t,j＝8.7hz,2h),6.62(d,j＝15.9hz,2h),6.03(d,j＝16.6hz,1h),5.61(d,j＝10.4hz,1h),4.21(t,j＝6.6hz,1h),3.89(d,j＝42.3hz,3h),1.90(s,1h),1.67-1.58(m,2h),1.37(dt,j＝8.6,14.7hz,2h),1.19(d,j＝21.8hz,1h),0.90(t,j＝7.5hz,1h).
實施例21
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(4-氟苯基)甲酰胺(6i)的制備
參照6a的制備方法，由2和4-氟苯胺反應(yīng)得白色固體，收率67.5％。esi-ms:286[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(4-氟苯基)甲酰胺(7i)的制備
參照7a的制備方法，由6i反應(yīng)得白色固體，收率79.6％。esi-ms:267[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(4-氟苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8i)的制備
參照5a的制備方法，由7i與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率60.4％。esi-ms:431[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-氟苯基)甲酰胺(b-9)的制備
參照a-1的制備方法，由8i脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率19.0％。esi-ms:385[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ7.98(s,1h),7.75-7.57(m,2h),7.40-7.26(m,2h),6.87(t,j＝8.3hz,1h),6.65(d,j＝17.0hz,2h),6.04(dd,j＝2.4,16.7hz,1h),5.62(d,j＝10.3hz,1h),4.21(t,j＝6.5hz,1h),4.06-3.75(m,3h),1.90(s,1h),1.64(q,j＝7.1,7.6hz,2h),1.41-1.32(m,1h),1.15(d,j＝7.1hz,2h),0.90(t,j＝7.4hz,1h).
實施例22
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-芐基甲酰胺(6j)的制備
參照6a的制備方法，由2和芐胺反應(yīng)得白色固體，收率54.4％。esi-ms:282[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-芐基甲酰胺(7j)的制備
參照7a的制備方法，由6j反應(yīng)得白色固體，收率80.9％。esi-ms:263[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-(芐氨基甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8j)的制備
參照5a的制備方法，由7j與(r)-1-boc-3-氨基哌啶反應(yīng)得淡黃色固體，收率55.6％。esi-ms:427[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-芐基甲酰胺(b-10)的制備
參照a-1的制備方法，由8j脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率17.7％。esi-ms:381[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.51(s,1h),7.95(s,1h),7.70(d,j＝8.6hz,1h),7.32(d,j＝4.7hz,4h),7.25(s,1h),7.08-6.57(m,2h),6.48(s,1h),6.06(d,j＝16.7hz,1h),5.63(s,1h),4.41-4.38(m,1h),4.23(t,j＝6.5hz,1h),3.94(s,1h),3.75(d,j＝12.9hz,1h),3.24(d,j＝10.6hz,1h),1.89(s,1h),1.65(t,j＝7.4hz,2h),1.43-1.34(m,1h),1.21(d,j＝21.3hz,1h),0.92(t,j＝7.4hz,1h)
實施例23
(r)-3-[[6-氨基-5-(苯氨基甲?；?嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8k)的制備
參照5a的制備方法，由7a與(r)-1-boc-3-氨基吡咯烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率59.8％。esi-ms:399[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯?；量┩?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-11)的制備
參照a-1的制備方法，由8k脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率18.6％。esi-ms:353[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):10.00(s,1h),8.00(s,1h),7.69-7.64(m,2h),7.30(t,j＝7.8hz,2h),7.07(d,j＝7.8hz,1h),6.64(s,2h),6.60-6.47(m,1h),6.12(dt,j＝2.7,16.9hz,1h),4.69-4.51(m,1h),4.23(t,j＝6.5hz,1h),3.68(td,j＝6.4,13.7,15.0hz,1h),2.14(dq,j＝6.7,18.7hz,1h),1.68-1.62(m,1h),1.44-1.33(m,2h),0.91(d,j＝7.4hz,2h).
實施例24
(s)-2-[[6-氨基-5-(苯氨基甲?；?嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8l)的制備
參照5a的制備方法，由7a與(s)-1-boc-2-氨甲基吡咯烷反應(yīng)得淡黃色固體，收率54.1％。esi-ms:413[m+h]+.
(s)-[4-[[(1-丙烯?；量┩?2-基)甲基]氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-12)的制備
參照a-1的制備方法，由8l脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)得黃色固體，收率19.4％。esi-ms:367[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.04(d,j＝6.1hz,1h),7.70(d,j＝7.7hz,2h),7.32(t,j＝7.9hz,3h),7.20(t,j＝5.6hz,1h),7.07(t,j＝7.4hz,1h),6.53(d,j＝5.3hz,2h),6.20-5.99(m,1h),5.71-5.59(m,1h),4.23(t,j＝6.5hz,2h),1.83(s,2h),1.68-1.61(m,1h),1.38(q,j＝6.5,7.4hz,1h),1.21(d,j＝20.9hz,2h),0.92(t,j＝7.4hz,2h).
實施例25
(r)-[4-[(1-丙?；哙?3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-13)的制備
參照a-1的制備方法，由8a脫boc保護基后與丙酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率21.1％。esi-ms:369[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.99(d,j＝3.7hz,1h),7.98(d,j＝9.1hz,1h),7.66(d,j＝8.0hz,2h),7.31(t,j＝7.8hz,2h),7.05(d,j＝7.1hz,1h),6.63(d,j＝19.9hz,2h),4.26-3.54(m,4h),2.86(dt,j＝11.3,48.2hz,1h),2.35-2.24(m,2h),1.90(d,j＝11.2hz,1h),1.68-1.55(m,2h),1.42-1.33(m,1h),1.18(t,j＝7.1hz,1h),1.00-0.94(m,3h).
實施例26
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(b)的制備
參照a-1的制備方法，由5i脫boc保護基后與丙烯酰氯反應(yīng)制得黃色固體，收率23.7％。esi-ms:444[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.04(s,1h),7.64(d,j＝6.21hz,2h),7.45(t,j＝6.48hz,2h),7.22(t,j＝7.08hz,1h),7.09(d,j＝6.75hz,2h),7.00(d,j＝8.34hz,2h),6.76(s,2h),6.55(dd,j＝6.96,15.38hz,1h),6.03(d,j＝16.32hz,1h),5.62(d,j＝9.23hz,1h),4.14-4.15(m,2h),3.74-3.76(m,1h),3.67-3.69(m,1h),1.77-1.79(m,1h),1.43-1.46(m,3h),1.23-1.25(m,2h).
實施例27
btk激酶活性的測試
采用放射性同位素p33-atp標(biāo)記方法檢測本發(fā)明化合物以及(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲?；?-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(化合物b)對btk激酶的抑制活性。放射性同位素檢測方法的靈敏度很高，測試結(jié)果非常準(zhǔn)確，因此被認(rèn)為是蛋白激酶生化活性檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
具體由reactionbiologycorp(malvempa)公司通過hotspot法測試。首先將8nm重組人源btk激酶(invitrogen,cat#pv3363)和0.2mg/ml底物pey在緩沖液中(20mmhepesph7.5,10mmmgcl2,1mmegta,0.02％brij35,0.02mg/mlbsa,0.1mmna3vo4,2mmdtt,1％dmso)室溫下混合，然后化合物溶解于指示劑量的100％dmso中(從10μm不斷稀釋3倍)并通過acoustic技術(shù)(echo550；nanoliterrange)遞送到激酶反應(yīng)的混合液中，接著于室溫下保持20min。隨后加入10μm的33p-atp(specificalactivity10μci/μl)，反應(yīng)開始，監(jiān)測反應(yīng)120min。激酶活性通過filter-binding法測定，ic50值和曲線擬合由prism(graphpadsoftware)實現(xiàn)。實驗結(jié)果如表1所示。
表1本發(fā)明化合物對btk的抑制活性
實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的部分化合物對btk激酶的活性具有顯著的抑制作用。其中，化合物a-1、a-2、a-8、a-9、a-10、b-2、b-9對btk的抑制活性與化合物b相當(dāng)，而化合物a-4、a-6、b-1、b-7、b-8、b-11的活性則優(yōu)于化合物b，尤其是化合物a-6和b-1的活性更是顯著強于化合物b。另外，本發(fā)明化合物不同的立體異構(gòu)體顯示出各自不同的活性。例如，化合物a-1和a-2分別是s構(gòu)型和r構(gòu)型，前者(s構(gòu)型)對btk的抑制活性略強于后者(r構(gòu)型)；對于化合物a-4(r構(gòu)型)和a-5(s構(gòu)型)來說，r構(gòu)型的活性則顯著強于s構(gòu)型235倍；而對于化合物a-6(s構(gòu)型)和a-7(r構(gòu)型)而言，s構(gòu)型的活性比r構(gòu)型強1800倍。此外，化合物b-1的活性顯著比化合物b強150倍，然而化合物b-12的活性卻無法意料地比化合物a-6下降2600倍。