本發(fā)明涉一種快速分離抗凍蛋白的方法，屬分子生物學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
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抗凍蛋白以其獨(dú)特的功能與特性和潛在的商業(yè)價(jià)值引起了廣泛的關(guān)注，抗凍蛋白的異源表達(dá)可以提高動(dòng)植物體的抗凍能力。此外，抗凍蛋白還可以作為食品添加劑提高食品質(zhì)量；作為冰凍保護(hù)劑用于冰凍和低溫貯存生物體、器官、組織和細(xì)胞系；作為化學(xué)佐劑以保護(hù)癌癥冷凍手術(shù)中的目標(biāo)組織以及作為新型的除冰劑，抗凍蛋白均具有廣闊的應(yīng)用前景。發(fā)掘具有更高熱滯活性的抗凍蛋白具有重要的實(shí)際意義。

本技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域主要針對(duì)抗凍蛋白在不同物種間不但抗凍活性差異很大，其序列特征也呈現(xiàn)多樣性，因此，基于序列相似性比對(duì)的抗凍蛋白預(yù)測(cè)經(jīng)常失敗?；诮Y(jié)構(gòu)特征的抗凍蛋白預(yù)測(cè)由于對(duì)已知抗凍蛋白的序列和結(jié)構(gòu)特征依賴較大，并未達(dá)到預(yù)期的效果。目前昆蟲(chóng)抗凍蛋白的分離大多是采用越冬過(guò)程中的昆蟲(chóng)或者是經(jīng)過(guò)低溫馴化的昆蟲(chóng)，進(jìn)行提取純化，然后采用乙醇抽提、凝膠過(guò)濾層析、離子交換柱色譜分析、聚丙烯酰胺凝膠電泳以及高效液相色譜等方法，但是這些方法在實(shí)際操作中存在很多問(wèn)題，對(duì)樣品和技術(shù)的要求較高，很多時(shí)候并不能得到理想的結(jié)果。

為克服抗凍蛋白分離存在的困難，已有人根據(jù)抗凍蛋白冰吸附的原理，采用程控降溫的方法，用降溫的金屬冰手指從溶液中富集抗凍蛋白，但該設(shè)備價(jià)格比較昂貴，操作也比較復(fù)雜。

因此，根據(jù)最近幾年針對(duì)抗凍蛋白作用機(jī)理的研究，抗凍蛋白采用氫鍵和疏水相互作用與冰晶結(jié)合，并能不可逆的吸附在冰晶上，根據(jù)此原理，同時(shí)針對(duì)目前抗凍蛋白分離鑒定困難，相關(guān)設(shè)備價(jià)格昂貴、不易操作的現(xiàn)狀，提供本本發(fā)明。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見(jiàn)與本發(fā)明相同的公開(kāi)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于根據(jù)抗凍蛋白冰吸附的原理，克服現(xiàn)有儀器設(shè)備價(jià)格昂貴、操作不簡(jiǎn)便的不足，而提供一種簡(jiǎn)單、實(shí)用、快速的抗凍蛋白分離方法。

本發(fā)明方法為改進(jìn)的冰吸附方法，具體步驟如下：

a.將漏斗(1)底部封閉，用液氮作為降溫材料倒入將封閉漏斗(1)的底部形成冰手指，并通過(guò)鐵架臺(tái)(2)固定且置于底部放有磁珠(5)的燒杯(3)中,固定高度以離燒杯(3)底部1厘米為宜；燒杯(3)放置在磁力攪拌器(4)上；

b.將要分離的組織勻漿溶液過(guò)濾后倒入200毫升燒杯(3)中，打開(kāi)磁力攪拌器(4)，組織勻漿溶液在燒杯(3)中旋轉(zhuǎn)，在形成冰手指的漏斗管子(1)周?chē)Y(jié)冰并吸附抗凍蛋白；經(jīng)過(guò)3-5分鐘的吸附，將漏斗(1)取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗(1)周?chē)目箖龅鞍兹诨?；再重?fù)吸附一次，經(jīng)兩輪吸附后富集出抗凍蛋白。

本發(fā)明所用儀器為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)和改進(jìn)，所用液氮為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

1、簡(jiǎn)潔快速。本發(fā)明所涉及的操作步驟少、簡(jiǎn)單、便于操作。

2、成本低。所需配件主要為磁力攪拌器、鐵架臺(tái)，消耗少量液氮，設(shè)備成本非常低。

3、效率高。經(jīng)過(guò)兩輪吸附，能夠從溶液中吸附到大量抗凍蛋白，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，能看到一條或以上單一的條帶。

4、適用范圍廣。本裝置對(duì)吸要附抗凍蛋白的來(lái)源沒(méi)有要求，根據(jù)抗凍蛋白結(jié)合冰晶的原理，抗凍蛋白均能吸附在液氮冷卻的冰手指上。

附圖說(shuō)明：

圖1為本發(fā)明所使用裝置的主視結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式：

本發(fā)明所用儀器為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)和改進(jìn)，所用液氮為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。

本發(fā)明方法為改進(jìn)的冰吸附方法，具體步驟如下：

a.將漏斗1底部在酒精燈上灼燒并使其底部末端封閉，用液氮作為降溫材料倒入將封閉漏斗1中形成冰手指，并通過(guò)鐵架臺(tái)2固定且置于底部放有磁珠5的燒杯3中,固定高度以離燒杯3底部1厘米為宜；燒杯3放置在磁力攪拌器4上；

b.將要分離的組織勻漿溶液過(guò)濾后倒入200毫升燒杯3中，打開(kāi)磁力攪拌器4，組織勻漿溶液在燒杯3中旋轉(zhuǎn)，在形成冰手指的漏斗1周?chē)Y(jié)冰并吸附抗凍蛋白；經(jīng)過(guò)3分鐘或5分鐘的吸附，將漏斗1取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗1周?chē)目箖龅鞍兹诨辉僦貜?fù)吸附一次，經(jīng)兩輪吸附后富集出抗凍蛋白。

實(shí)際應(yīng)用表明，本發(fā)明不僅簡(jiǎn)潔快速、成本低、效率高，而且適用范圍非常廣，對(duì)要分離抗凍蛋白的物種來(lái)源沒(méi)有要求。