本發(fā)明屬于新藥候選化合物的研發(fā)領(lǐng)域，涉及一種3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

心房顫動是一種最為常見的心律失常性疾病，目前盡管已有許多藥物可以治療心房顫動，如多非利特、胺碘酮、索他洛爾、普羅帕酮、氟卡尼等。理想的治療心房顫動的藥物應(yīng)具有高度心房肌細(xì)胞選擇性，可終止或延緩心房顫動發(fā)生，而沒有延長q-t間期或負(fù)性肌力的作用，從而具有更為安全的有效性。kv1.5鉀離子通道是一種電壓門控鉀離子通道，目前被認(rèn)為是設(shè)計心房高度選擇性治療心房顫動的安全有效的理想藥物作用靶點。臨床及動物研究證實，kv1.5鉀通道是心房電重構(gòu)的基礎(chǔ)，其阻滯劑可選擇性延長心房有效不應(yīng)期而終止心房顫動。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物，其具有抗kv1.5的生物活性，且對許多靶點表現(xiàn)出選擇性。

本發(fā)明的目的還在于提供所述3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物的制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物，其具有如下結(jié)構(gòu)：

其中，r¹為甲基或鹵素；r²為氫，氯或氟，n＝2或3。

優(yōu)選地，r¹為甲基，氟，氯或溴。

優(yōu)選地，所述3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物為如下化合物中的一種：

所述的3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物的制備方法，包括步驟：

5-取代靛紅類化合物與嗎啉取代芳胺在酸性條件下反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后抽濾得產(chǎn)品；

其中，5-取代靛紅類化合物與嗎啉取代芳胺的摩爾比為1：(0.9～1.1)；

其中，溶劑為醇和酸的混合物；

其中，反應(yīng)溫度為70～90℃，反應(yīng)時間為5～15小時。

優(yōu)選地，所述溶劑為乙醇和醋酸的混合物。

進(jìn)一步優(yōu)選地，醋酸在溶劑中的體積分?jǐn)?shù)為0.5％～1.0％。

優(yōu)選地，反應(yīng)溫度為75～79℃，反應(yīng)時間為8～11小時。

優(yōu)選地，5-取代靛紅類化合物的制備方法包括如下步驟：

1)4-取代n-羥肟基乙酰苯胺的制備：向水合氯醛水溶液中依次加入硫酸鈉、取代苯胺、無機(jī)酸溶液、鹽酸羥氨，反應(yīng)混合物在50～75℃加熱反應(yīng)1～3小時，趁熱過濾得4-取代n-羥肟基乙酰苯胺；其中，按照摩爾比，水合氯醛：取代苯胺：鹽酸羥氨＝1：(0.8～1.1)：(2.5～4.0)；

2)5-取代靛紅類化合物的制備：向濃硫酸中加入4-取代n-羥肟基乙酰苯胺，反應(yīng)完成后，后處理得5-取代靛紅類化合物。

進(jìn)一個優(yōu)選地，在步驟2)中，所述的后處理包括：

2-1)向反應(yīng)混合物中加入碎冰，抽濾后得固體；

2-2)步驟2-1)所得固體溶解在堿性溶液中，調(diào)節(jié)ph至ph＝4，抽濾并保留濾液；

2-3)步驟2-2)所得濾液用酸調(diào)節(jié)ph至ph＝2，抽濾并保留固體，固體干燥，得5-取代靛紅類化合物。

所述的3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物在制備治療心房顫動的藥物中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

本發(fā)明提供的3-(嗎啉取代芳亞胺基)-1h-吲哚類化合物，結(jié)構(gòu)簡單，合成方法簡便，在活性測試中，部分化合物表現(xiàn)出一定的抗kv1.5生物活性，其中化合物t16在100μm水平表現(xiàn)出較高的抑制率(ir＝70.8％)?；衔飔5在100μm水平表現(xiàn)出一定的抑制活性(抑制率ir為：57.5％)。與此同時，對所有目標(biāo)化合物的其他生物活性研究結(jié)果表明：對這些化合物在各種疾病相關(guān)的靶酶水平的活性篩選實驗表明：t1～t16對蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp1b)沒有無明顯抑制效果，同時對逆轉(zhuǎn)錄酶(rt)無明顯抑制效果，對與腫瘤相關(guān)的熱休克蛋白(hsp90)和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(parp)靶標(biāo)也無明顯的結(jié)合和抑制作用。通過上述實驗結(jié)果初步顯示本專利所設(shè)計的化合物對kv1.5通道均表現(xiàn)出一定的靶點專一性和選擇性。

本發(fā)明提供的3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物的制備方法，反應(yīng)簡單，分離純化方便。

本發(fā)明提供的3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物，其具有制備抗kv1.5通道的生物活性，可以在治療心房顫動的藥物的設(shè)計和開發(fā)中得到應(yīng)用。

附圖說明

圖1為含有嗎啉環(huán)的kv1.5的阻斷劑。

圖2為含有吲哚環(huán)的kv1.5阻斷劑。

圖3為基于嗎啉和1h-吲哚及活性結(jié)構(gòu)片段och2ch2n的kv1.5抑制劑的設(shè)計圖。

圖4為目標(biāo)化合物的合成路線。

具體實施方式

下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。

大量文獻(xiàn)表明：一些含有嗎啉環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物(如圖1所示)，如ly2940024，一些含有吲哚環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物(如圖2所示)，包括一些嘧啶吲哚稠環(huán)化合物均分別展現(xiàn)出較好的kv1.5抑制活性。

觀察圖2中化合物cd-140793的化學(xué)結(jié)構(gòu)，不難看出其分子結(jié)構(gòu)中不僅含有嗎啉環(huán)而且含有吲哚環(huán)，而且其中吲哚環(huán)和嗎啉環(huán)之間借嘧啶環(huán)的結(jié)構(gòu)骨架相距一定的空間距離，也就是說嗎啉環(huán)的氮原子n與吲哚環(huán)的3-位碳原子c相距2～3個原子，即3～4化學(xué)鍵的距離。

如圖3所示，臨床用藥乙胺碘呋酮(aminodarone)和決奈達(dá)隆(dromodarone)具有抗心律失常功效，乙胺碘呋酮可延長單向動作電位時間，延長不應(yīng)期。奈達(dá)隆是一種多通道阻滯劑，電生理學(xué)和血液動力學(xué)特性與胺碘酮相似，同樣表現(xiàn)出抗心律失常特性。可預(yù)防心房顫動或恢復(fù)竇性心律，室性心動過速和心室顫動。二者化學(xué)結(jié)構(gòu)中都共同含有一個類似的-n(ch2)no-連接鏈(n＝2～3)，這些結(jié)構(gòu)特征和一些活性kv1.5抑制劑中結(jié)構(gòu)特征非常類似。

基于上述分析，并基于kv1.5的同源模建的結(jié)構(gòu)模型，同時為提高藥物對心律失常的治療效果，本專利設(shè)計合成一系列小分子同時含有嗎啉和吲哚環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，并以-n(ch2)no-連接鏈將二雜環(huán)相連，并測試其抗kv1.5的生物活性。

如圖4所示，本發(fā)明所設(shè)計和合成的3-(嗎啉取代芳亞胺基)-1h-吲哚類化合物的制備方法包括步驟：

1)4-取代n-羥肟基乙酰苯胺的制備：向水合氯醛水溶液中依次加入硫酸鈉、取代苯胺、無機(jī)酸溶液、鹽酸羥氨，反應(yīng)混合物在50～75℃加熱反應(yīng)1～3小時，趁熱過濾得4-取代n-羥肟基乙酰苯胺；其中，按照摩爾比，水合氯醛：取代苯胺：鹽酸羥氨＝1：(0.8～1.1)：(2.5～4.0)；

2)5-取代靛紅類化合物的制備：向濃硫酸中加入4-取代n-羥肟基乙酰苯胺，反應(yīng)得5-取代靛紅類化合物；

3)3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物的制備：5-取代靛紅類化合物與嗎啉取代芳胺在酸性條件下反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后抽濾得3-(嗎啉取代芳亞胺基)吲哚類化合物。

化合物的制備

1.中間體4-取代n-羥肟基乙酰苯胺(2a-2d)的合成

在一干凈的500ml單口瓶中，加入水合氯醛(9.0g,55.0mmol)，水(240ml)，攪拌均勻后依次加入無水硫酸鈉(65.0g)，取代苯胺(1a-1d,50.0mmol)，鹽酸溶液(4.3mlhcl+30.0ml水)，鹽酸羥氨溶液(10.8g+50.0ml水)，加畢，逐漸升溫至65℃，保溫反應(yīng)2小時，停止加熱，趁熱過濾，得相應(yīng)的固體粗品，分別為淡黃色絮狀固體2a-2d，(洗脫液：pe:ea，v/v＝1:2,rf＝0.2～0.4)。產(chǎn)物2a-2d的合成產(chǎn)率和化合物形狀以及熔點數(shù)據(jù)列于表1。

表1.中間體4-取代n-羥肟基乙酰苯胺(2a-2d)的性質(zhì)和產(chǎn)率

2.中間體5-取代靛紅(3a-3d)的合成方法

在一干凈的150ml三口瓶中，加入濃硫酸(24.0ml)，升溫至50℃，慢慢加入上述合成中間體(2a-2d,30.0mmol)，隨著加入原料量的增多，溶液的顏色慢慢加深，變黑，加畢，溫度調(diào)至80℃，反應(yīng)20min，取碎冰(100g)慢慢加入反應(yīng)體系，冰水顏色為紅棕色，靜置，抽濾，水洗至中性，將該固體溶于naoh(10.0％,90ml)中，用濃鹽酸調(diào)節(jié)ph至4，抽濾，濾液繼續(xù)用濃鹽酸調(diào)ph至2，有大量磚紅色固體析出，抽濾干燥得紅棕色固體3a-3d，(洗脫液：pe:ea，v/v＝1:2,rf＝0.4～0.6)。產(chǎn)物3a-3d的合成產(chǎn)率和化合物形狀及熔點數(shù)據(jù)列于表2。

表2.中間體5-取代靛紅(3a-3d)的性質(zhì)和產(chǎn)率

3.3-(取代芳亞胺基)吲哚衍生物的合成方法

實施例1:5-氟-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t1)的制備

將5-氟靛紅(3a,0.340g,2.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)乙基]嗎啉(4a,0.444g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1～2滴)，加熱回流10小時，采用薄層色譜(tlc)檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量黃色固體析出，抽濾，干燥得黃色粉末，即為目標(biāo)化合物5-氟-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t1,0.442g,60％)。m.p.:155-157℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.95(d,j＝8.4hz,1h),7.25(t,j＝8.3hz,2h),7.08(d,j＝8.4hz,1h),7.00(d,j＝8.4hz,1h),6.95～6.82(m,1h),6.34(d,j＝7.4hz,1h),4.18～4.10(m,2h),3.59(s,4h),2.72(d,j＝5.0hz,2h).hrms:369.3898(實驗值),369.3895(計算值).

實施例2:5-氟-3-[(3-氟-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t2)的制備

將5-氟靛紅(3a,0.34g,2.00mmol)與1-[2-(2-氟-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4b,0.508g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流13小時，采用tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，沒有固體析出，向體系中加入適量水有大量紅色固體析出，抽濾，干燥得紅色固體，即為目標(biāo)化合物5-氟-3-[(3-氟-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t2,0.150g,19％)。m.p.:131-133℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.5),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.97(d,j＝8.0hz,1h),7.28(dd,j＝8.4,7.5hz,2h),7.22～7.10(m,1h),7.04(dd,j＝7.0,1.8hz,1h),6.99～6.89(m,1h),6.85(dd,j＝8.3,6.2hz,1h),6.33～6.28(m,1h),4.12(dd,j＝5.4,6.3hz,2h),3.58(s,4h),2.48～2.36(m,6h),1.92(dd,j＝3.1,6.6hz,2h).hrms:401.4066(實驗值),401.4065(計算值).

實施例3:5-氟-3-[(4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(tj3)的制備

將5-氟靛紅(3a,0.340g,2.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4c,0.47g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，沒有固體析出，將體系中加入適量水，析出大量橙黃色固體，抽濾，干燥得橙黃色粉末，即目標(biāo)化合物5-氟-3-[(4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t3,0.389g,51％)。m.p.:163-165℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.01(s,1h),7.24(dd,j＝8.6,6.1,2.7hz,1h),7.06(d,j＝8.8hz,2h),7.00(d,j＝8.8hz,2h),6.91(dd,j＝8.2,4.9hz,1h),6.34(dd,j＝8.5,2.3hz,1h),4.05(dt,j＝2.1,6.2hz,2h),3.59(s,4h),2.48(s,1h),2.47(s,1h),2.42(s,4h),1.91(dd,j＝3.4,6.6hz,2h).hrms:383.4162(實驗值),383.4161(計算值).

實施例4:3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-氟-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t4)的制備

將5-氟靛紅(3a,0.34g,1.00mmol)與1-[2-(2-氯-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4d,0.540g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量暗紅色固體析出，抽濾，干燥得暗紅色固體，即目標(biāo)化合物3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-氟-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t4,0.428g,51％)。m.p.:127-128℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.96(dd,j＝8.3,9.9hz,1h),7.41～7.34(m,1h),7.31～7.19(m,1h),7.17～7.10(m,2h),7.02(dd,j＝1.7,8.8,6.5hz,1h),6.95～6.83(m,1h),6.32(dd,j＝5.2,8.5,2.6hz,1h),4.15(dd,j＝5.4,5.2hz,1h),4.13～4.01(m,1h),3.60(s,4h),2.53(dd,j＝3.1,4.5hz,3h),2.44(s,3h),1.94(dd,j＝3.9,7.1hz,2h).hrms:417.8610(實驗值),417.8611(計算值).

實施例5:5-氯-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t5)的制備

將5-氯靛紅(3b,0.36g,1.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)乙基]嗎啉(4a,0.444g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量橙紅色固體析出，抽濾，干燥得橙紅色固體，即目標(biāo)化合物5-氯-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t5,0.753g,98％)。m.p.:150-152℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.5),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.07(d,j＝8.9hz,1h),7.47～7.37(m,1h),7.26(d,j＝8.7hz,1h),7.09(d,j＝8.7hz,1h),7.01(d,j＝8.7hz,1h),6.90(dd,j＝8.2,8.3hz,2h),6.58(d,j＝1.4hz,1h),4.19～4.08(m,2h),3.59(d,j＝4.1hz,4h),2.72(t,j＝5.5hz,2h).hrms:385.8442(實驗值),385.8441(計算值).

實施例6:5-氯-3-[(3-氟-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t6)的制備

將5-氯靛紅(3b,0.360g,1.00mmol)，與1-[2-(2-氟-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4b,0.508g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流11小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量暗紅色固體析出，抽濾，干燥得暗紅色固體，即目標(biāo)化合物5-氯-3-[(3-氟-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t6,0.357g,64％)。m.p.:148-149℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.09(d,j＝8.4hz,1h),7.46(dd,j＝8.8,8.4,8hz,1h),7.31(t,j＝8.9hz,1h),7.24～7.11(m,1h),7.05(dd,j＝8.0,2.4hz,1h),6.94(d,j＝8.4hz,1h),6.52(d,j＝2.1hz,1h),4.13(dt,j＝8.0,6.3hz,2h),3.58(t,j＝4.5hz,4h),2.44(dd,j＝7.0,6.1hz,2h),2.38(s,4h),1.90(dd,j＝3.0,6.5hz,2h).hrms:417.8612(實驗值),417.8611(計算值).

實施例7:5-氯-3-[(4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t7)的制備

將5-氯靛紅(3b,0.36g,1.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4c,0.470g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流11小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量橙紅色固體析出，抽濾，干燥得橙紅色固體，即目標(biāo)化合物5-氯-3-[(4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t7,0.560g,70％)。m.p.:171-173℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.13(s,1h),7.43(dd,j＝8.7,8.4hz,1h),7.26(d,j＝8.8hz,1h),7.07(d,j＝8.9hz,2h),7.01(d,j＝8.8hz,2h),6.93(d,j＝8.5hz,1h),6.90～6.85(m,1h),6.59(d,j＝2.1hz,1h),4.11～4.00(m,2h),3.58(t,j＝4.5hz,4h),2.51(d,j＝1.6hz,1h),2.43(dd,j＝3.4,6.3hz,2h),2.38(s,4h),1.97～1.83(m,2h).hrms:399.8709(實驗值),399.8707(計算值).

實施例8:3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-氯-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t8)的制備

將5-氯靛紅(3b,0.36g,1.00mmol)，1-[2-(2-氯-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4d,0.54g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流11小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量暗紅色固體析出，抽濾，干燥得暗紅色固體，即目標(biāo)化合物3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-氯-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t8,0.387g,45.0％)。m.p.:134-135℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.10(dd,j＝8.3,10.4hz,1h),7.56～7.36(m,1h),7.32～7.21(m,1h),7.20～7.10(m,1h),7.04(dt,j＝8.9,8.8hz,1h),6.97～6.83(m,1h),6.57(dd,j＝8.4,1.9hz,1h),4.21～4.00(m,2h),3.60(s,4h),2.55～2.49(m,3h),2.46(s,3h),1.95(dd,j＝8.9,8.7hz,2h).hrms:434.3156(實驗值),434.3157(計算值).

實施例9:5-甲基-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t9)的制備

將5-甲基靛紅(3c,0.319g,2.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)乙基]嗎啉(4a,0.444g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有少量暗紅色固體析出，加入適量水，有大量固體析出，抽濾，干燥得暗紅色固體，即目標(biāo)化合物5-甲基-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t9,0.327g,45％)。m.p.:127-129℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.5),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.81(d,j＝8.5hz,1h),7.26～7.13(m,2h),7.06(d,j＝8.8hz,1h),6.98(d,j＝8.8hz,1h),6.90(d,j＝8.9hz,1h),6.80(d,j＝8.0hz,1h),6.49(s,1h),4.13(dt,j＝5.0,5.8hz,2h),3.65～3.52(m,4h),2.73(s,2h),2.01(s,3h).hrms:365.4258(實驗值),365.4256(計算值).

實施例10:5-甲基-3-[(4-(2-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t10)的制備

將5-甲基靛紅(3c,0.319g,2.00mmol)，1-[2-(2-氟-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4b,0.508g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量橙黃色固體析出，抽濾，干燥得橙黃色固體，即目標(biāo)化合物5-甲基-3-[(3-氟-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t10,0.083g,10％)。m.p.:117-120℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.83(d,j＝8.3hz,1h),7.27(t,j＝8.9hz,1h),7.20(d,j＝7.9hz,1h),7.12(dd,j＝9.9,5.3hz,1h),7.00(dd,j＝8.1,1.9hz,1h),6.81(d,j＝7.8hz,1h),6.42(s,1h),4.12(dt,j＝6.8,6.3hz,2h),3.58(s,4h),2.45(d,j＝6.3hz,2h),2.31(t,j＝4.7hz,4h),2.03(s,2h),1.92(dd,j＝3.8,3.6hz,2h).hrms:397.4425(實驗值),397.4427(計算值).

實施例11:5-甲基-3-[(4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t11)的制備

將5-甲基靛紅(3c,0.319g,2.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4c,0.470g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量橙紅色固體析出，抽濾，干燥得橙紅色固體，即為目標(biāo)化合物5-甲基-3-[4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t11,0.476g,50％)。m.p.:178-180℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.80(d,j＝8.2hz,1h),7.24～7.14(m,2h),7.04(d,j＝8.9hz,1h),6.97(d,j＝8.8hz,1h),6.92～6.71(m,2h),6.50(s,1h),4.10～3.98(m,2h),3.61～3.53(m,4h),2.51(d,j＝1.6hz,1h),2.45(t,j＝7.1hz,2h),2.38(s,4h),2.28(s,1h),2.01(s,3h),1.95～1.84(m,2h).hrms:379.4526(實驗值),379.4522(計算值).

實施例12:3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-甲基-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t12)的制備

將5-甲基靛紅(3c,0.319g,2.00mmol)，1-[2-(2-氯-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4d,0.540g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流10小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量橙黃色固體析出，抽濾，干燥得橙黃色固體，即為目標(biāo)化合物3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-甲基-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t12,0.282g,34％)。m.p.:113-114℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.80(d,j＝8.3hz,1h),7.26～7.12(m,1h),7.05(d,j＝8.6hz,1h),6.97(d,j＝8.6hz,1h),6.92～6.71(m,2h),6.50(s,1h),4.10(dt,j＝6.1,5.8hz,2h),2.69(t,j＝5.5hz,2h),2.51(s,1h),2.46(s,3h),2.29(s,1h),2.01(s,2h),1.53～1.47(m,4h),1.39(d,j＝4.7hz,2h).hrms:413.8975(實驗值),413.8973(計算值).

實施例13:5-溴-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t13)的制備

將5-溴靛紅(3d,0.449g,2.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)乙基]嗎啉(4a,0.444g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流13小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量橙紅色固體析出，抽濾，干燥得橙紅色固體，即目標(biāo)化合物5-溴-3-[(4-(2-嗎啉-4-基乙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t13,0.610g,71％)。m.p.:151-153℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.5),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.06(d,j＝6.4hz,1h),7.56(dd,j＝8.7,8.3,2.0hz,1h),7.26(d,j＝8.8hz,1h),7.09(d,j＝8.8hz,1h),7.01(d,j＝8.8hz,1h),6.95～6.80(m,2h),6.72(d,j＝1.7hz,1h),4.20～4.08(m,2h),3.67～3.53(m,4h),2.74(t,j＝5.6hz,2h).hrms:430.2953(實驗值),430.2951(計算值).

實施例14:5-溴-3-[(4(2-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t14)的制備

將5-溴靛紅(3d,0.449g,2.00mmol)，1-[2-(2-氟-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4b,0.508g,2.00mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流9小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量紅色固體析出，抽濾，干燥得紅色固體，即目標(biāo)化合物5-溴-3-[(4-(2-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t14,0.285g,31％)。m.p.:143-144℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.5),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.09(d,j＝8.9hz,1h),7.68～7.52(m,1h),7.35～7.11(m,1h),7.08～6.96(m,1h),6.91～6.81(m,2h),6.66(d,j＝1.7hz,1h),4.19～4.05(m,2h),3.58(t,j＝4.4hz,4h),2.45(dd,j＝2.9,6.1hz,2h),2.39(s,4h),1.92(dd,j＝3.2,6.7hz,2h).hrms:462.3120(實驗值),462.3121(計算值).

實施例15:5-溴-3-[(4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t15)的制備

將化合物5-溴靛紅(3d,0.449g,2.00mmol)，1-[2-(4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4c,0.470g,4.6mmol)加入到50ml茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流13小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量紅色固體析出，抽濾，干燥得紅色固體，即目標(biāo)化合物5-溴-3-[4-(3-嗎啉-4-基丙氧基苯基)亞氨基]-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(0.702g,79％)。m.p.:181-182℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.06(d,j＝8.8hz,1h),7.55(dd,j＝9.4,8.3,1.9hz,1h),7.27(d,j＝8.8hz,1h),7.07(d,j＝8.8hz,1h),7.00(d,j＝8.8hz,1h),6.93～6.88(m,1h),6.87～6.80(m,1h),6.73(d,j＝1.8hz,1h),4.10～4.00(m,2h),3.58(t,j＝4.5hz,4h),2.51(s,1h),2.43(dd,j＝3.4,6.3hz,2h),2.37(s,4h),1.96～1.83(m,2h).hrms:444.3216(實驗值),444.3217(計算值).

實施例16:3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-溴-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(t16)的制備

將5-溴靛紅(3d,0.449g,2.00mmol)，1-[2-(2-氯-4-氨基苯氧基)丙基]嗎啉(4d,0.540g,2.00mmol)加入到50ml單口茄型瓶中，再加入無水乙醇(10.0ml)，室溫攪拌下加入冰醋酸(1-2滴)，加熱回流11小時，tlc檢測反應(yīng)結(jié)束，待體系冷卻到室溫，有大量紅色固體析出，抽濾，干燥得紅色固體，即目標(biāo)化合物3-[(3-氯-4-(3-嗎啉-4-基丙氧基)苯基)亞氨基]-5-溴-1,3-二氫-2h-吲哚-2-酮(0.595g,62％)。m.p.:147-149℃。(展開劑：二氯甲烷/甲醇，v/v＝10:1,rf＝0.4),¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.08(dd,j＝8.7,9.4hz,1h),7.67～7.50(m,1h),7.32～7.20(m,1h),7.20～7.10(m,1h),7.04(dt,j＝9.0,8.7hz,2h),6.94～6.80(m,1h),6.71(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),4.20～4.01(m,2h),3.57(d,j＝2.5hz,4h),2.51(d,j＝1.5hz,3h),2.44(s,3h),2.02～1.80(m,2h).hrms:478.7669(實驗值),478.7667(計算值).

所合成的化合物列舉在表3中：

表3：化合物編號及其取代基

3-(取代芳亞胺基)吲哚類化合物抑制kv1.5活性研究

活性測試方法

采用epc-8膜片鉗儀(heka,lambrecht,germany)進(jìn)行全細(xì)胞電流記錄(方法見hamilletal.,1981)，數(shù)據(jù)經(jīng)1khz低通濾波后，輸入lih-1600模擬/數(shù)字轉(zhuǎn)換器(heka公司出品)并儲存在計算機(jī)中，pulse/pulsefit軟件(heka)處理。測定hkv1.5電流激活時間時，數(shù)據(jù)采集采用10khz濾波，采樣頻率為50khz。充入電極液后電極電阻2.5-3.0mω。電極液成分(mm)：70天冬氨酸鉀，40kcl，10kh2po4，1mgso4，3na2-atp(sigma公司產(chǎn)品)，0.1li2-gtp(rochediagnosticsgmbh公司出品，mannheim,germany)，5egta，5hepes(用1n的koh將ph調(diào)至7.2)。實驗時將帶有貼壁生長細(xì)胞的玻璃蓋玻片移往0.5ml容量的記錄浴槽，浴槽安放在倒置顯微鏡(eclipsete2000-u,nikontokyo,japan)載物臺上，浴槽恒溫25℃，以每分鐘1-2ml的速度連續(xù)灌流臺氏液(mm)：140nacl，5.4kcl，1.8cacl2，0.5mgcl2，0.33nah2po4，5.5葡萄糖，5.0hepes，用1n的naoh將ph調(diào)至7.4。

實驗時選取紫外線激發(fā)下可以發(fā)出綠熒光的細(xì)胞，采用階梯式去極化刺激誘導(dǎo)kv1.5通道電流。刺激波寬300ms，鉗制電壓-80mv，去極化電壓依據(jù)實驗而定。除頻率依賴性實驗外，階梯式去極化每次刺激間隔時間均大于10s，以確保通道從失活狀態(tài)充分復(fù)活。除特別指出外，測定藥物對電流抑制作用時均以30mv去極化電壓、300ms波寬刺激末了時的電流為準(zhǔn)。利用boltzmann公式擬合標(biāo)準(zhǔn)化后的hkv1.5通道尾電流—電壓曲線來分析其電壓依賴性激活關(guān)系，boltzmann方程表示如下：

itail＝1/(1+exp((v1/2～vm)/k))

其中itail是指去極化電壓為50mv時所測得的最大尾電流值為100％，來標(biāo)準(zhǔn)化所測各電流，v1/2為半效激活，vm為測定電壓，k為斜率。

計算kv1.5通道抑制率(inhibitionrate，ir)是基于上述對kv1.5通道尾電流值的測試結(jié)果，即分別測試給藥前后的kv1.5通道尾電流值，給藥后尾電流值與給藥前尾電流值之比就是該藥物在該特定給藥濃度條件下的抑制率。具體計算公式如下：

ir＝用藥后kv1.5通道尾電流值/用藥前kv1.5通道尾電流值

活性測試結(jié)果討論

如表4所示，結(jié)果表明在所測試的16個化合物中有6個化合物表現(xiàn)出一定的kv1.5抑制活性，其活性順序如下：t16>t5>t9>t10>t11>t7。其中化合物t16在100μm水平表現(xiàn)出較高的抑制率(70.8％)?；衔飔5在100μm條件下表現(xiàn)出較高的抑制率(57.5％)?；衔飔9，t10,t11和t7在更低濃度(50μm)的水平下也表現(xiàn)出一定的抑制活性，其抑制率分別為20.8％，15％，11.3％和9.5％。

表4目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)和抑制率

其中，“—”表示，該化合物活性測試結(jié)果為0。

與此同時，對所有目標(biāo)化合物的其他生物活性研究結(jié)果表明：對這些化合物在各種疾病相關(guān)的靶酶水平的活性篩選實驗表明：t1～t16對蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp1b)沒有無明顯抑制效果，同時對逆轉(zhuǎn)錄酶(rt)無明顯抑制效果，對與腫瘤相關(guān)的熱休克蛋白(hsp90)和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(parp)靶標(biāo)也無明顯的結(jié)合和抑制作用。通過上述實驗結(jié)果初步顯示本專利所設(shè)計的化合物對kv1.5通道均表現(xiàn)出一定的靶點專一性和選擇性。

化合物的能量參數(shù)計算

利用chembiodrawultra12.0軟件繪制所有目標(biāo)化合物的化學(xué)機(jī)構(gòu)，另存后為cdx文件后，在chembio3dultra12.0軟件中打開，對所有目標(biāo)化合物命名，之后依次進(jìn)行分子構(gòu)象的能量優(yōu)化，采用半經(jīng)驗算法(mm)計算其分子的伸縮、彎曲、扭轉(zhuǎn)、范德華引力、偶極總能量等參數(shù)，數(shù)據(jù)列于如表5中。

表5.采用chembio3d軟件計算的目標(biāo)化合物分子的各項能量參數(shù)