本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及了具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
視黃醇x受體(retinoidxreceptor，rxr)屬于非類固醇激素受體超家族，是核受體家族中一個(gè)具有多種生物學(xué)功能的獨(dú)特成員，介導(dǎo)著許多激素、維生素a和其它藥物的生物學(xué)功能。rxr參與了機(jī)體從胚胎發(fā)育到器官形成，以及成體各種新陳代謝的生理調(diào)控等過(guò)程。近年來(lái)還發(fā)現(xiàn)，rxr在不同配體調(diào)控下可以進(jìn)行核漿穿梭，執(zhí)行不同的生物學(xué)功能，如細(xì)胞凋亡，增殖和分化等。根據(jù)利用的啟動(dòng)子和剪切方式的不同，rxr包括三種亞型。三個(gè)亞型的表達(dá)部位有很大不同。其中rxrα在肝、腎、脾、胎盤、表皮和各種內(nèi)臟組織中表達(dá)豐富。由于rxr參與許多核受體以及生長(zhǎng)和凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子的功能調(diào)控，該基因被認(rèn)為是核受體超家族中最有開發(fā)前景的重要成員。rxrα作為腫瘤藥物開發(fā)的一個(gè)關(guān)鍵分子靶點(diǎn)，改變它的表達(dá)和功能會(huì)影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。香豆素類化合物具有廣泛的生物活性，而該類化合物作為核受體抑制劑的研究報(bào)道尚不多見。目前也尚未有具有rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物的相關(guān)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之一是：
一類具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物，所述香豆素酯化衍生物為以下通式(ⅰ)所示的4-氯甲基-7-羥基香豆素酯化衍生物：
其中，r為山梨?；?imgfile="bda0001286213220000022.gif"wi="331"he="119"img-content="drawing"img-format="gif"orientation="portrait"inline="no"/>已酰基
即上述4-氯甲基-7-羥基香豆素酯化衍生物為以下結(jié)構(gòu)式所示的化合物k1、k2、k3、k4、k5、k6、k7：
表1化合物k1、k2、k3、k4、k5、k6、k7的r基及物理性質(zhì)
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之二是：
上述具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物的制備方法，包括：
1)將間苯二酚和4-氯乙酰乙酸乙酯按照摩爾比1:1.1～1.3的比例混合，加入無(wú)水氯化鉍作為催化劑，其中無(wú)水氯化鉍的量為間苯二酚的4.5～5.5％；在無(wú)溶劑條件下60～70℃攪拌反應(yīng)4～6h，反應(yīng)結(jié)束后，按照4-氯乙酰乙酸乙酯與45～55％乙醇水溶液的體積比為1:1.8～4的比例加入45～55％乙醇水溶液，繼續(xù)在60～70℃攪拌8～12min進(jìn)行重結(jié)晶，冷卻至室溫，固液分離，固體部分水洗至中性，干燥，得到如式(ⅱ)所示的4-氯甲基-7-羥基香豆素；
2)在-2～5℃下，以滴入了1～2滴dmf的無(wú)水二氯甲烷為溶劑，將有機(jī)酸溶于該溶劑中，加入?；噭?，其中有機(jī)酸與?；噭┑哪柋葹?:1.5～2.5，在-2～5℃下放置25～35min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫(例如為0～25℃)下攪拌反應(yīng)2～4h，反應(yīng)結(jié)束后除去未反應(yīng)的酰化試劑，得到的產(chǎn)物如式(ⅲ)所示；產(chǎn)物用無(wú)水二氯甲烷溶解后加入至含有步驟1)得到的4-氯甲基-7-羥基香豆素與縛酸劑的二氯甲烷混合液中，其中4-氯甲基-7-羥基香豆素與縛酸劑的摩爾比為1:1.1～1.3；在堿性條件下室溫反應(yīng)2～4h；反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，二氯甲烷萃取，有機(jī)相依次用飽和碳酸氫鈉溶液、飽和食鹽水洗滌，然后干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比1～7:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物；所述有機(jī)酸為山梨酸、己酸、煙酸、苯丙酸、苯氧乙酸、呋喃甲酸、苯乙酸時(shí)分別得到k1、k2、k3、k4、k5、k6、k7。
一實(shí)施例中：所述縛酸劑為三乙胺。
一實(shí)施例中：所述?；噭椴蒗Ｂ然蚨葋嗧俊?/p>
上述制備方法的反應(yīng)式如下式所示：
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之三是：
上述具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物在制備抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的藥物和/或抑制劑上的用途。
上述具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物在制備抗腫瘤藥物上的用途。
一實(shí)施例中：所述抗腫瘤是通過(guò)抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。
本技術(shù)方案與背景技術(shù)相比，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：
1.本發(fā)明提供了一類具有抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的香豆素酯化衍生物的結(jié)構(gòu)及其制備方法。
2.本發(fā)明用bicl3作為催化劑合成4-氯甲基-7-羥基香豆素，相比傳統(tǒng)方法合成，雖然產(chǎn)率稍低，但具有廉價(jià)易得，反應(yīng)時(shí)間短，后處理方便，環(huán)境污染少等優(yōu)點(diǎn)。
3.本發(fā)明的化合物具有一定的抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的作用，為開發(fā)以rxrα為靶點(diǎn)的藥物提供了思路。
附圖說(shuō)明
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
圖1為實(shí)施例中得到的化合物k1～k7對(duì)9-cis-ra引起的rxrα轉(zhuǎn)錄活性激活效應(yīng)的抑制作用結(jié)果，其中縱坐標(biāo)為9-cis-ra的熒光素酶相對(duì)活性。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容：
實(shí)施例1：制備4-氯甲基-7-羥基香豆素
將間苯二酚(5.5g,0.05mol)，4-氯乙酰乙酸乙酯(9.9g,0.06mol)，無(wú)水氯化鉍(0.8g，2.5mmol)混于100ml圓底燒瓶中，在無(wú)溶劑條件下65℃加熱攪拌反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束后，加入50％乙醇水溶液16ml，繼續(xù)在65℃加熱攪拌10min，冷卻至室溫，抽濾，固體部分水洗至中性，烘干，得到白色固體7.45g，即為4-氯甲基-7-羥基香豆素，產(chǎn)率70％。
4-氯甲基-7-羥基香豆素的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ4.95(s,2h,ch2cl),6.42(s,1h,3-h),6.76(d,1h,j＝2.4hz,8-h),6.83,6.85(dd,1h,j＝2.4hz,j＝8.7hz,6-h),7.67(d,1h,j＝8.7hz,5-h),10.66(s,1h,oh)ppm
實(shí)施例2：制備4-氯甲基-7-山梨酰氧基香豆素(化合物k1)
在0℃下，將山梨酸(0.224g，2.0mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10ml無(wú)水二氯甲烷(ch2cl2)溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比7:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物白色固體0.338g，即為4-氯甲基-7-山梨酰氧基香豆素(化合物k1)，產(chǎn)率74％。
化合物k1的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ1.87(d,3h,j＝4.5hz,6'-ch3),5.04(s,2h,ch2cl),6.11(d,1h,j＝15.3hz,2'-h),6.36-6.46(m,2h,3',4'-chch),6.68(s,1h,3-h),7.26,7.28(dd,1h,j＝2.2hz,j＝8.7hz,6-h),7.37(d,1h,j＝2.2hz,8-h),7.44-7.50(m,1h,5'-h),7.90(d,1h,j＝8.7hz,5-h)ppm
實(shí)施例3：制備4-氯甲基-7-己酰氧基香豆素(化合物k2)
在0℃下，將己酸(0.232g，2.0mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10mlch2cl2溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比7:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物白色固體0.337g，即為4-氯甲基-7-己酰氧基香豆素(化合物k2)，產(chǎn)率73％。
化合物k2的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ0.90(t,3h,j＝7.0hz,6'-ch3),1.29-1.39(m,4h,4',5'-ch2ch2),1.63-1.70(m,2h,3'-h),2.62(t,2h,j＝7.5hz,2'-h),5.04(s,2h,ch2cl),6.68(s,1h,3-h),7.21,7.23(dd,1h,j＝2.2hz,j＝8.7hz,6-h),7.31(d,1h,j＝2.2hz,8-h),7.90(d,1h,j＝8.7hz,5-h)ppm
實(shí)施例4：制備4-氯甲基-7-煙酰氧基香豆素(化合物k3)
在0℃下，將煙酸(0.246g，2.0mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10mlch2cl2溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比1:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物白色固體0.340g，即為4-氯甲基-7-煙酰氧基香豆素(化合物k3)，產(chǎn)率72％。
化合物k3的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ5.07(s,2h,ch2cl),6.72(s,1h,3-h),7.45,7.47(dd,1h,j＝2.2hz,j＝8.7hz,6-h),7.57(d,1h,j＝2.2hz,8-h),7.66-7.69(m,1h,5'-h),7.98(d,1h,j＝8.7hz,5-h),8.49-8.52(m,1h,4'-h),8.92,8.93(dd,1h,j＝1.5hz,j＝4.8hz,6'-h),9.29(d,1h,j＝1.5hz,2'-h)ppm
實(shí)施例5：制備4-氯甲基-7-苯丙酰氧基香豆素(化合物k4)
在0℃下，將苯丙酸(0.300g，2mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10mlch2cl2溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比5:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物淺黃色固體0.420g，即為4-氯甲基-7-苯丙酰氧基香豆素(化合物k4)，產(chǎn)率82％。
化合物k4的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ2.94-3.03(m,4h,ch2ch2),5.04(s,2h,ch2cl),6.68(s,1h,3-h),7.14,7.16(dd,1h,j＝2.2hz,j＝8.7hz,6-h),7.23(d,1h,j＝2.2hz,8-h),7.22-7.26(m,2h,aromatic,8-h),7.30-7.35(m,4h,aromatic),7.89(d,1h,j＝8.7hz,5-h)ppm
實(shí)施例6：制備4-氯甲基-7-苯氧乙酰氧基香豆素(化合物k5)
在0℃下，將苯氧乙酸(0.304g，2mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10mlch2cl2溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比6:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物淺黃色固體0.413g，即為4-氯甲基-7-苯氧乙酰氧基香豆素(化合物k5)，產(chǎn)率80％。
化合物k5的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ5.04(s,2h,ch2cl),5.13(s,2h,2’-h),6.70(s,1h,3-h),7.00-7.07(m,3h,aromatic),7.29,7.32(dd,1h,j＝2.24hz,j＝8.72hz,6-h),7.32-7.36(m,2h,aromatic),7.40(d,1h,j＝2.24hz,8-h),7.94(d,1h,j＝8.72hz)ppm
實(shí)施例7：制備4-氯甲基-7-呋喃甲酰氧基香豆素(化合物k6)
在0℃下，將呋喃甲酸(0.224g，2mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10mlch2cl2溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比5:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物淺黃色固體0.356g，即為4-氯甲基-7-呋喃甲酰氧基香豆素(化合物k6)，產(chǎn)率78％。
化合物k6的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ5.07(s,2h,ch2cl),6.71(s,1h,3-h),6.83,6.84(dd,1h,j＝1.7hz,j＝3.5hz,4’-h),7.39,7.41(dd,1h,j＝2.24hz,j＝8.7hz,6-h),7.52(d,1h,j＝2.2hz,8-h),7.64(d,1h,j＝3.5hz,3’-h),7.95(d,1h,j＝8.7hz,5-h),8.15(d,1h,j＝1.7hz,5’-h)ppm
實(shí)施例8：制備4-氯甲基-7-苯乙酰氧基香豆素(化合物k7)
在0℃下，將苯乙酸(0.272g，2mmol)置于25ml兩頸圓底燒瓶中，滴入2滴dmf，加入10mlch2cl2溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2ml，4.0mmol)；兩頸圓底燒瓶的一個(gè)口用橡皮塞塞緊，另一口接尾氣吸收裝置；冰浴30min后逐漸恢復(fù)至室溫，室溫下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾至干除去未反應(yīng)的草酰氯；產(chǎn)物用2mlch2cl2溶解后，用注射器抽取將其加入至10ml的含有4-氯甲基-7-羥基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的ch2cl2混合液中，室溫反應(yīng)3h；反應(yīng)結(jié)束后，用1mhcl調(diào)節(jié)反應(yīng)液ph值至中性，用15ml二氯甲烷萃取三遍，合并有機(jī)相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用飽和食鹽水洗滌兩次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品；粗產(chǎn)品在硅膠色譜柱上提純，以體積比6:1的石油醚-乙酸乙酯混合液為洗脫劑，得到最終產(chǎn)物淺黃色固體0.394g，即為4-氯甲基-7-苯乙酰氧基香豆素(化合物k7)，產(chǎn)率80％。
化合物k7的nmr數(shù)據(jù)：
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ3.92(s,2h,2'-h),4.64(s,2h,ch2cl),6.64(s,1h,3-h),7.09-7.11(dd,1h,j＝2.24hz,j＝8.70hz,6-h),7.16(d,1h,j＝2.24hz,,8-h),7.33-7.43(m,5h,aromatic),7.66(d,1h,j＝8.70hz,5-h)ppm
上述實(shí)施例可實(shí)現(xiàn)下述實(shí)驗(yàn)例之技術(shù)效果：
實(shí)驗(yàn)例：化合物k1～k7對(duì)rxrα轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用測(cè)試：
熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)：luciferase報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過(guò)熒光測(cè)定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測(cè)定儀測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。是檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動(dòng)子區(qū)dna相互作用的一種檢測(cè)方法。
本實(shí)驗(yàn)例之中采用熒光素酶報(bào)告基因的手段，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)入rxrα相關(guān)的熒光素酶報(bào)告基因的體系，通過(guò)將各個(gè)化合物分別和9-cis-ra(9-cis-ra為經(jīng)典的rxrα的激活劑)共處理細(xì)胞12h，再通過(guò)發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)這些化合物是否可以抑制9-cis-ra引起的rxrα轉(zhuǎn)錄活性激活效應(yīng)。從而確定化合物是否能夠抑制rxrα的轉(zhuǎn)錄活性。
具體地，細(xì)胞被提前用化合物k1～k7(20μm)分別和ra(0.1μm)共處理12h，收集細(xì)胞，用熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)rxrα轉(zhuǎn)錄活性。9-cis-ra的熒光素酶活性作為空白對(duì)照。數(shù)據(jù)通過(guò)mean+sd(n＝3)模式處理，結(jié)果用實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組的比值表示，***p＜0.001。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以進(jìn)一步由表2說(shuō)明：
表2化合物k1～k7對(duì)9-cis-ra引起的rxrα轉(zhuǎn)錄活性激活效應(yīng)的抑制作用
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：化合物k1～k7對(duì)9-cis-ra引起的rxrα轉(zhuǎn)錄活性激活效應(yīng)均有抑制作用，且抑制率均達(dá)到30％以上，化合物k5對(duì)9-cis-ra引起的rxrα轉(zhuǎn)錄活性激活效應(yīng)的抑制效果最好，抑制率達(dá)到45.31％。
由上述實(shí)驗(yàn)可知，本發(fā)明的化合物具有一定的抑制rxrα轉(zhuǎn)錄活性的作用，為開發(fā)以rxrα為靶點(diǎn)的藥物提供了思路。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說(shuō)明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。