本發(fā)明涉及n-取代順丁烯二酰亞胺化合物的制備與應(yīng)用，特別涉及含氨基環(huán)多醇的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的制備及在抗水稻紋枯病菌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

水稻紋枯病又稱云紋病，是由立枯絲核菌(rhizoctoniasolanikühn)引起的重要水稻病害，苗期至穗期都可發(fā)病，造成水稻不能抽穗，抽穗的秕谷較多，千粒重下降，水稻紋枯病發(fā)生在全國各大稻區(qū)，尤其在長江流域及南方經(jīng)常發(fā)生，發(fā)病后作物一般減產(chǎn)15％以上，重者無收，且會嚴(yán)重影響水稻品質(zhì)，該病目前已列于稻瘟病之前，居水稻病害之首，成為水稻高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的嚴(yán)重障礙。國內(nèi)防治水稻紋枯病主要使用井岡霉素，但長期單一使用同一種藥劑容易產(chǎn)生抗藥性，在一些地區(qū)井岡霉素早已產(chǎn)生抗性，而且近年來，隨著人們對化學(xué)農(nóng)藥殘留和食品安全問題的密切關(guān)注，發(fā)明安全高效的新型抗菌劑迫在眉睫。

含順丁烯二酸酐或n-取代順丁烯二酰亞胺結(jié)構(gòu)的天然化合物均具有良好的生物活性，尤其是抗真菌活性。n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物是一種含氮的五元雜環(huán)類化合物，n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的α、β不飽和二酰亞胺環(huán)狀結(jié)構(gòu)能夠與巰基官能團結(jié)合，從而影響體內(nèi)眾多含巰基的酶，進(jìn)而影響菌體的生長。經(jīng)研究表明，該類化合物對許多細(xì)菌、酵母、真菌等微生物具有較好的抑制作用，能有效治療馬鈴薯枝葉腐爛病、水稻胡麻斑病、菜豆莖腐病、菌核病及灰霉病，柑橘的瘡癡病、番茄的晚疫病等農(nóng)作物病害，而且具有高效、低毒、無公害等優(yōu)點。satoshihorii報道了n取代的有效醇胺對葡萄糖酶的抑制活性。

因此本發(fā)明基于氨基環(huán)多醇的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的制備，有望能成為防治水稻紋枯病的一類高效、安全的抗菌劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種基于氨基環(huán)多醇的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物及其制備與應(yīng)用，該類化合物制備方法簡單，是具有防治水稻紋枯病的一類高效、安全抗菌劑。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種如式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物：

式(i)中，r1、r2各自獨立為氫、氯、溴、甲基或苯基；r0為

進(jìn)一步，本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物，優(yōu)選為下列之一：

進(jìn)一步，本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物，更優(yōu)選為下列之一：

本發(fā)明提供所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的制備方法，所述的方法為：

以式(ⅱ)所示的酸酐、有機胺為原料，于有機溶劑中，在催化劑和脫水劑的作用下，經(jīng)酰胺化反應(yīng)和脫水閉環(huán)反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液分離純化制得式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物；所述的有機胺為井岡霉胺、井岡霉烯胺、井岡霉醇胺或氨基葡萄糖鹽酸鹽；所述催化劑為甲醇鈉；所述脫水劑為三乙胺；

式(i)中，r1、r2各自獨立為氫、氯、溴、甲基或苯基；r0為與所述有機胺對應(yīng)的中，所述r1與式(i)r1相同，所述r2與式(i)r2相同。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述酸酐優(yōu)選為馬來酸酐、2，3-二氯馬來酸酐、苯基順酐、2，3-二苯基馬來酸酐、溴代馬來酸酐、2，3-二甲基馬來酸酐或檸康酐。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述酸酐與有機胺的物質(zhì)的量之比為0.7～2.0:1；優(yōu)選為1.0～1.5：1。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述有機溶劑為甲醇，所述有機溶劑的用量以酸酐的物質(zhì)的量計為5～8ml/mmol。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述脫水劑用量以酸酐物質(zhì)的量計為130～170μl/mmol。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述催化劑與酸酐的物質(zhì)的量之比為1.3～2.1：1。

進(jìn)一步，所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的制備方法推薦按照以下步驟進(jìn)行：每取有機胺1mmol，溶于6～8ml0.26mol/l的甲醇鈉的甲醇溶液，25～30℃磁力攪拌20-30min，加入1.2mmol的酸酐，25-35℃反應(yīng)1～1.5h后加入150μl三乙胺，反應(yīng)20～30min，接著升溫至45～70℃，反應(yīng)1～3h，反應(yīng)液分離純化制得式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物。

本發(fā)明所述的分離純化為：將反應(yīng)液冷卻至室溫，減壓蒸餾得濃縮液，將濃縮液進(jìn)行硅膠柱層析或硅膠板分離，洗脫劑或展開劑為v正丙醇：v乙酸：v水＝4～16：1：1的混合液；采用硅膠柱層析后收集目標(biāo)液濃縮，減壓蒸餾得目標(biāo)產(chǎn)物；采用硅膠板分離后刮取目標(biāo)條帶，碾壓至粉末狀倒入硅膠柱中，加入洗脫液甲醇，收集目標(biāo)液，旋蒸后得到目標(biāo)產(chǎn)物。

進(jìn)一步，本發(fā)明還提供所述式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物在抑制水稻紋枯病菌或菌核病菌中的應(yīng)用。

更進(jìn)一步，本發(fā)明所述應(yīng)用為：在瓊脂培養(yǎng)基或pda培養(yǎng)基中加入本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物，采用菌絲生長速率法測定n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物對水稻紋枯病菌或菌核病病菌菌絲生長的抑制率：在丕氏培養(yǎng)基培養(yǎng)的水稻紋枯病菌菌落邊緣用直徑為6mm的打孔器取菌碟，分別接種至含n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的培養(yǎng)基平板正中央，以含助溶劑的平板為對照，于23℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待對照菌落生長至少50mm，但未長滿全皿時，采用十字交叉法測量含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落生長直徑；所述化合物以n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物與助溶劑和水的混合液的形式加入瓊脂培養(yǎng)基，配制成n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物濃度為100ppm的含藥培養(yǎng)基平板，所述助溶劑為吐溫-80，所述助溶劑為質(zhì)量濃度0.2％的吐溫-80水溶液。

本發(fā)明采用十字交叉法測量菌落生長直徑。菌絲生長抑制率計算公式(長度單位：mm)如下：

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有優(yōu)勢主要體現(xiàn)在：(1)基于井岡霉素變構(gòu)物的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物制備方法簡單、操作方便；(2)合成的此類n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物，，不但對水稻紋枯病與菌核病都有效果，而且為后續(xù)的研究打下了堅實的基礎(chǔ)。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此。

實施例1：n-井岡霉胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-1)的制備

稱取井岡霉胺0.176g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入10ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌20min，量取0.176g(1.8mmol)順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入235μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾,得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離,流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮,得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-1)，產(chǎn)率91.2％(以酸酐質(zhì)量計，以下同)。

¹hnmr(500mhz，dmso)：δ6.18(s,2h),4.07–3.96(m,1h),3.58–3.51(m,2h),3.52–3.47(m,2h),3.29–3.27(m,1h),1.91(s,4h),1.75–1.69(m,2h),1.63–1.60(m,1h).esi-msm/z:[m+h]+258。

實施例2：n-井岡霉烯胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-2)的制備

稱取井岡霉烯胺0.175g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入10ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌20min，量取0.175g(1.8mmol)順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入235μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾,得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離,流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉烯胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-2)，

yield35.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.05(s,1h),5.64(s,1h),5.49(s,1h),4.05–3.95(m,2h),3.81–3.75(m,2h),3.70–3.64(m,2h),1.99–1.70(m,4h).esi-msm/z:[m+na]+278。

實施例3：n-井岡霉醇胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-3)的制備

稱取井岡霉醇胺0.193g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌20min，量取0.1176g(1.2mmol)順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離,流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-3)，

yield70.5％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.21(s,1h),5.90(s,1h),4.35(s,1h),3.68–3.64(m,2h),3.53-3.50(m,1h),3.44(s,1h),3.40(s,1h),3.32(d,1h),3.09-3.05(m,4h),1.78-1.70(m,2h)esi-msm/z:[m+h]+274。

實施例4：n-葡萄糖胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-4)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.1176(1.2mmol)順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-葡萄糖胺n-取代順丁烯二酰亞胺(i-4)，

yield43％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.52(d,j＝12.1hz,1h),5.77(d,j＝12.1hz,1h),5.00(d,j＝8.5hz,1h),3.85(t,j＝11.8hz,1h),3.71-3.68(m,1h),3.50-3.42(m,2h),3.18-3.05(m,2h),1.92(s,4h).esi-msm/z:[m+h]+260.

實施例5：n-井岡霉胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-5)的制備

稱取井岡霉胺0.176(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.1344(1.2mmol)3-甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-5)，

yield88.5％¹hnmr(500mhz，dmso)δ6.30–5.80(m,1h),3.92(t,j＝6.6hz,1h),3.53–3.46(m,2h),3.34–3.27(m,2h),3.06–2.99(m,1h),1.89–1.81(m,4h),1.69(s,3h),1.64–1.55(m,2h),1.60–1.37(m,1h).esi-msm/z:[m+h]+272。

實施例6：n-井岡霉烯胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-6)的制備

稱取井岡霉烯胺0.175g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.1344(1.2mmol)3-甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾,得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離,流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮,得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉烯胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-6)，

yield35.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.05(s,1h),5.64(s,1h),5.49(m,1h),4.05–3.95(m,2h),3.81–3.75(m,2h),3.70–3.64(m,3h),3.52-3.61(m,2h)1.99(s,3h).esi-msm/z:[m+na]+292.1

實施例7：n-井岡霉醇胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-7)的制備

稱取井岡霉醇胺0.193g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入16ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2895(2.0mmol)3-甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌1h，再加入340μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾,得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離,流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮,得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-7)

yield76.2％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.07(s,1h),3.56(d,j＝8.1hz,2h),3.38(d,j＝10.4hz,2h),3.23–3.11(m,2h),1.85(s,5h),1.68(s,3h),1.67–1.60(m,2h).esi-msm/z:[m+na]+310。

實施例8：n-葡萄糖胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-8)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌20min，量取0.1344g(1.2mmol)3--甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-葡萄糖胺-3-甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-8),

yield30％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.23(s,1h),5.13-5.12(d,j＝5hz,1h),4.61(s,1h),3.97(t,1h),3.73(d,j＝12hz,1h),3.65-3.62(m,1h),3.21(s,2h),1.99(s,4h),1.89(s,3h).esi-msm/z:[m+h]+274.

實施例9：n-井岡霉胺-3，4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-9)的制備

稱取井岡霉胺0.176g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入16ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌20min，量取0.264g(2.0mmol)3，4-二甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入340μl三乙胺，反應(yīng)20min，后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺-3，4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-9),

yield87.6％¹hnmr(500mhz,dmso)δ3.77(t,j＝8.4hz,1h),3.57–3.38(m,2h),3.43–3.37(m,2h),3.37–3.28(m,1h),1.89(s,4h),1.82(s,6h),1.81–1.40(m,3h).esi-msm/z:[m+h]+286。

實施例10：n-井岡霉烯胺-3，4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-10)的制備

稱取井岡霉烯胺0.175g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.1512g(1.2mmol)3，4-二甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉烯胺-3，4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-10)

yield53.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ5.51–5.14(m,1h),4.35–3.80(m,2h),4.02–3.59(m,2h),3.80–3.24(m,2h),1.85(s,4h),1.83(s,6h).esi-msm/z:[m+na]+306

實施例11：n-井岡霉醇胺-3，4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-11)的制備

稱取井岡霉醇胺0.193g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌20min，量取0.1512g(1.2mmol)3，4-二甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺-3，4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-11)

yield53.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ4.65(m,1h),4.33-4.30(m,1h),4.15(t,j＝15hz,1h),3.69-3.67(m,1h),3.54-3.52(d,j＝10hz,1h),3.40-3.38(d,j＝10hz,1h),3.34-3.32(d,j＝10hz,1h),3.19(s,1h),2.19-2.15(m,1h),1.87(s,4h),1.78(s,6h).esi-msm/z:[m+h]⁺302

實施例12：n-葡萄糖胺-3,4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-12)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.179g(1.0mmol)3，4-二甲基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入170μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-葡萄糖胺-3,4-二甲基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-12)，

yield95.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ4.99(s,j＝8.5hz,1h),3.84(t,j＝12.8hz,1h),3.76–3.56(m,1h),3.60–3.26(m,2h),3.35–2.82(m,2h),1.91(s,4h),1.78(s,6h)esi-msm/z:[m+na]+310.

實施例13：n-井岡霉胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-13)的制備

稱取井岡霉胺0.176g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入9ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.264g(1.5mmol)3-溴-順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入195μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-13)，

yield78.5％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.14(s,1h),4.07–3.96(m,1h),3.58–3.51(m,2h),3.52–3.47(m,2h),3.29–3.27(m,1h),1.91(s,4h),1.75–1.69(m,2h),1.63–1.60(m,1h).esi-msm/z:[m+h]+336。

實施例14：n-井岡霉烯胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-14)的制備

稱取井岡霉烯胺0.175g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2112g(1.2mmol)3-溴-順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min后體系加熱至60℃繼續(xù)反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉烯胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-14)，

yield91.2％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.57(s,1h),5.47(d,j＝5.5hz,1h),4.07–3.92(m,2h),4.00–3.89(m,2h),3.79–3.72(m,1h),3.69–3.58(m,1h),1.82(d,j＝5.5hz,4h).esi-msm/z:[m+na]+356

實施例15：n-井岡霉醇胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-15)的制備

稱取井岡霉醇胺0.193g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.193g(1.0mmol)3-溴-順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入170μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-15)，

yield25.6％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.35(s,1h),4.01-3.92(m,1h),3.69–3.60(m,2h),3.60–3.54(m,1h),3.41–3.33(m,2h),1.84(s,5h),1.69(d,j＝6.6hz,2h).esi-msm/z:[m+na]+374。

實施例16：n-葡萄糖胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-16)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.3g(1.2mmol)3-溴-順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-葡萄糖胺-3-溴n-取代順丁烯二酰亞胺(i-16)(i-13)，

yield35％¹hnmr(500mhz,dmso)δ6.26(s,1h),5.05-5.03(d,j＝15hz,1h),3.69(m,1h),3.65-3.62(m,1h),3.51-3.49(m,2h),3.23(s,2h),1.86(m,4h).esi-msm/z:[m+h]+338.

實施例17：n-井岡霉胺-3，4-二苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-17)的制備

稱取井岡霉胺0.176g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入8ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.264g(1.0mmol)3，4-二苯基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入130μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺-3，4-二苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-17)，

yield26.9％¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.80–6.90(m,10h),3.83(t,j＝8.0hz,1h),3.59–3.53(m,2h),3.35–3.31(m,2h),3.17–3.13(m,1h),2.07–1.87(m,4h),1.22–1.13(m,3h).esi-msm/z:[m+h]+410。

實施例18：n-葡萄糖胺-3,4-二苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-18)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入5ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.179g(0.7mmol)3，4-二苯基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入90μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-葡萄糖胺-3,4-二苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-18)，

yield29.9％¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.44(s,j＝17.3hz,10h),5.39(s,1h),4.20–3.93(m,1h),3.93-3.74(m,1h),3.74–3.50(m,1h),3.62–3.39(m,1h),3.29–2.90(m,2h),1.89(s,4h)esi-msm/z:[m+na]+434.

實施例19：n-井岡霉胺-3-苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-19)的制備

稱取井岡霉胺0.176g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2088g(1.2mmol)3-苯基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺-3-苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-19)

yield61.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.65–7.00(m,6h),4.14(t,j＝6.7hz,1h),3.69–3.51(m,2h),3.25–3.20(m,2h),3.18–3.13(m,1h),1.98–1.86(m,4h),1.74–1.58(m,2h),1.43(t,j＝11.3hz,1h).esi-msm/z:[m+h]+334。

實施例20：n-井岡醇胺-3-苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-20)的制備

稱取井岡霉醇胺0.193g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6.6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.193g(1.1mmol)3-苯基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入190μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺-3-苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-20)

yield17.3％¹hnmr(500mhz,dmso)δ8.12(s,1h),7.35–7.00(m,5h),4.35(s,1h),3.68–3.64(m,2h),3.53-3.50(m,1h),3.44(s,1h),3.40(s,1h),3.32(d,1h),3.09-3.05(m,4h),1.78-1.70(m,2h)esi-msm/z:[m+h]+350。

實施例21：n-葡萄糖胺-3-苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-21)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2088g(1.2mmol)3-苯基順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-葡萄糖胺-3-苯基n-取代順丁烯二酰亞胺(i-21)

yield15％¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.54-7.53(m,3h),7.48-7.46(m,2h),6.52(s,1h),5.41(s,1h),4.85-4.83(d,j＝10hz,1h),3.79-3.77(m,1h),3.70-3.63(t,1h),3.60-3.58(m,1h),3.22-3.21(d,j＝10hz,1h),3.20-3.18(d,j＝10hz,1h),1.82(s,4h).esi-msm/z:[m+h]+336.

實施例22：n-井岡霉胺-3，4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-22)的制備

稱取井岡霉胺0.176g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2004(1.2mmol)3,4-二氯順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉胺-3,4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-22)，

yield33.8％¹hnmr(500mhz,dmso)δ3.97–3.80(m,1h),3.71–3.70(m,2h),3.41–3.30(m,2h),3.27–3.20(m,1h),2.09–1.94(m,4h),1.83–1.70(m,2h),1.61–1.57(m,1h).esi-msm/z,[m+h]+326

實施例23：n-井岡霉烯胺-3，4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-23)的制備

稱取井岡霉烯胺0.175g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2004g(1.2mmol)3，4-二氯順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉烯胺-3，4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-23)，

yield71.2％¹hnmr(500mhz,dmso)δ5.39(d,j＝2.7hz,1h),4.19–3.91(m,2h),3.97–3.62(m,2h),3.53–3.08(m,2h),1.82(s,4h).esi-msm/z:[m+na]+346。

實施例24：n-井岡霉醇胺-3，4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-24)的制備

稱取井岡霉醇胺0.193g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2004g(1.2mmol)3，4-二氯順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺-3，4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-24)，

yield65.9％¹hnmr(500mhz,dmso)δ3.63–3.53(m,1h),3.37(d,j＝13.6hz,2h),3.36–3.28(m,1h),3.23–3.15(m,2h),2.08–1.87(s,5h),1.52(d,j＝23.3hz,2h).esi-msm/z:[m+na]+364。

實施例25：n-葡萄糖胺-3,4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-25)的制備

稱取氨基葡萄糖0.179g(1mmol)加入到圓底燒瓶中，加入6ml0.26mol/l甲醇鈉的甲醇溶液，30℃攪拌反應(yīng)20min，量取0.2004g(1.2mmol)3，4-二氯順丁烯二酸酐加入到圓底燒瓶中，30℃攪拌反應(yīng)1h，再加入150μl三乙胺，反應(yīng)20min，體系加熱至60℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，減壓蒸餾，得到黃色油狀濃縮液，將濃縮液用200目硅膠上柱分離，流動相為正v正丙醇：v乙酸：v水＝6:1:1，收集目標(biāo)液濃縮，得到淺黃色油狀產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)1hnmr、ms光譜分析，確證為n-井岡霉醇胺-3，4-二氯n-取代順丁烯二酰亞胺(i-25)，

yield28％¹hnmr(500mhz,dmso)δ5.13-5,12(d,j＝5hz,1h),4.21(t,1h),3.38-3.33(m,1h),3.44-3.41(m,1h),3.37(t,1h),3.22(s,2h),1.86(s,4h).esi-msm/z:[m+h]+328.

實施例26：n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物對水稻紋枯病菌抑菌活性的測定

以水稻紋枯病菌為模型，測試了本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的抑菌活性。分別將實施例1-25所制備的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物(i-1)-(i-25)與吐溫-80和水混合，獲得混合液，混合液為2.5mgn-取代順丁烯二酰亞胺類化合物(i-1)-(i-25)和25ml的0.1％吐溫-80的水溶液配制成100ppm的含藥溶液，然后取100ppm含藥溶液1ml，用0.1％的吐溫-80水溶液稀釋成10ppm的含藥溶液；根據(jù)上述方法，再取10ppm的含藥溶液1ml稀釋成1ppm含藥溶液，然后分別取含藥溶液lml，加入9ml的瓊脂培養(yǎng)基中，分別配制成0.1ppm的含藥培養(yǎng)基平板，每個梯度設(shè)2個平行。采用菌絲生長速率法測定n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物對水稻紋枯病菌菌絲生長的抑制率，在丕氏培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)的水稻紋枯病菌菌落邊緣用直徑為5mm的打孔器取菌碟，分別接種至含藥瓊脂培養(yǎng)基平板正中央，以含0.1％吐溫-80的平板為對照，于23℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待對照菌落生長至少50mm但未長滿全皿時，采用十字交叉法測量含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落生長直徑，根據(jù)公式(1)計算菌絲生長抑制率，結(jié)果如表1所示，所述丕氏培養(yǎng)基終濃度組成為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母膏5g，加去離子水至1000ml，分裝至500ml錐形瓶中，總共4瓶。每瓶加入瓊脂條5g，ph自然，121℃滅菌20min。菌絲生長抑制率計算公式(長度單位：mm)如下：

表1n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物離體水稻紋枯病菌的抑制情況(單位：μg/ml)

注：*：無抑制效果；+：抑制效果不明顯，0～30％；++：抑制效果明顯，30～60％；+++：抑制效果明顯，但未完全抑制，60～90％；++++：完全抑制，100％

結(jié)果表明，測試的25個化合物對水稻紋枯病菌的抑制不佳，在低濃度時對水稻紋枯病菌菌的菌絲抑制比較弱，隨著濃度升高，抑制效果增加，但是大部分的化合物的抑制效果還是相對較弱的，未能完全抑制。同時發(fā)現(xiàn)當(dāng)化合物濃度由25μg/ml降為1.5μg/ml時，抑制率下降幅度均大于50％。其中i-3、i-11、i-20呈現(xiàn)較好的生物抑菌活性，其ec50分別為24.38、20.00、51.83。

實施例27：n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物對菌核病病菌抑菌活性的測定

以菌核病病菌為模型，測試了本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的抑菌活性。分別將實施例1-25所制備的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物(i-1)-(i-25)與吐溫-80和水混合，獲得混合液，混合液為2.5mgn-取代順丁烯二酰亞胺類化合物(i-1)-(i-25)和25ml的0.1％吐溫-80的水溶液配制成100ppm的含藥溶液，然后取100ppm含藥溶液1ml，用0.1％的吐溫-80水溶液稀釋成10ppm的含藥溶液；根據(jù)上述方法，再取10ppm的含藥溶液1ml稀釋成1ppm含藥溶液，然后分別取含藥溶液lml，加入9ml的pda培養(yǎng)基中，分別配制成0.1ppm的含藥培養(yǎng)基平板，每個梯度設(shè)2個平行。采用菌絲生長速率法測定n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物對菌核病菌菌絲生長的抑制率，在丕氏培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)的菌核菌菌落邊緣用直徑為5mm的打孔器取菌碟，分別接種至含藥pda培養(yǎng)基平板正中央，以含0.1％吐溫-80的平板為對照，于23℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待對照菌落生長至少50mm但未長滿全皿時，采用十字交叉法測量含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落生長直徑，根據(jù)公式(1)計算菌絲生長抑制率，結(jié)果如表1所示，所述丕氏培養(yǎng)基終濃度組成為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母膏5g，加去離子水至1000ml，分裝至500ml錐形瓶中，總共4瓶。每瓶加入瓊脂條5g，ph自然，121℃滅菌20min。菌絲生長抑制率計算公式(長度單位：mm)如下：

表2n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物離體菌核病菌的抑制情況(單位：μg/ml)

注：*：無抑制效果；+：抑制效果不明顯，0～30％；++：抑制效果明顯，30～60％；+++：抑制效果明顯，但未完全抑制，60～90％；++++：完全抑制，100％

結(jié)果表明，在制備的25個全新化合物中，除了ⅰ-2，ⅰ-7，ⅰ-12，ⅰ-15，ⅰ-18，ⅰ-22這5個化合物在低濃度沒有抑菌活性，而其他不同含氨基環(huán)多醇的順丁烯二酰亞胺類化合物對菌核病菌的菌絲生長都具有一定的抑制作用,大部分在50μg/ml以內(nèi)沒有抑制菌絲的生長，這有可能與合成順丁烯二酰亞胺化合物的胺有關(guān)，由于環(huán)多醇含有較多的羥基親水基，化合物極性較大不易透過真菌的細(xì)胞壁而難以與胞內(nèi)酶作用。