本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類具有靛紅結(jié)構(gòu)的吡唑衍生物，它們的制備方法以及用于預(yù)防或治療腫瘤的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

吡唑是一種具有潛在生物活性的氮雜環(huán)，近年來的研究表明吡唑衍生物具有多種藥理活性，如抗腫瘤、抗菌和抗炎等。此外，吡唑衍生物還能夠作為殺蟲劑和除草劑。目前，含有吡唑結(jié)構(gòu)的藥物有非甾體抗炎藥塞來西布、殺菌劑唑菌胺酯以及抗腫瘤藥阿西替尼等。近年來，趙寶祥課題組構(gòu)建了多種結(jié)構(gòu)類型的1-苯甲基-3-苯基吡唑類化合物庫，如酰肼、希夫堿、糖綴合物和羥肟酸衍生物（bioorg.med.chem.2007,15,6893;bioorg.med.chem.2009,17,1957;bioorg.med.chem.2009,17,7085）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，部分吡唑衍生物具有顯著的抗非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞增殖的活性。同時(shí)，berto?a等人的研究結(jié)果也表明，吡唑衍生物能夠有效抑制a549細(xì)胞的增殖（bioorg.med.chem.2012,20,2101）。

此外，靛紅又稱吲哚醌，是吲哚的二酮形式，其結(jié)構(gòu)被廣泛應(yīng)用于抗腫瘤藥物研究領(lǐng)域，是具有抗腫瘤活性的藥效團(tuán)（anti-canceragentsmedchem,2009,9,397）。例如，靛紅片段存在于中藥青黛抗腫瘤有效成分靛玉紅和小分子多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑舒尼替尼結(jié)構(gòu)中。靛紅基團(tuán)能夠有效增強(qiáng)天然產(chǎn)物鬼臼毒素的抗腫瘤細(xì)胞耐藥性（rscadv.2015,5,97816）。近年來的研究還表明，靛紅衍生物對多種腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用（eur.j.med.chem.2016,124,782;eur.j.med.chem.2015,90,684;bioorg.med.chem.lett.2016,26,1558）。

利用藥物化學(xué)領(lǐng)域的藥效團(tuán)拼合原理，將吡唑與靛紅這兩種具有抗腫瘤活性的藥效團(tuán)進(jìn)行綴合，得到了未見文獻(xiàn)報(bào)道的具有靛紅結(jié)構(gòu)的吡唑衍生物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開式了一類通式（i）的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)顯示，本發(fā)明物的化合物對人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞增殖具有較強(qiáng)的抑制作用。因此，本發(fā)明的式（i）化合物能夠用于預(yù)防或治療細(xì)胞增殖異常相關(guān)疾病，尤其是用于預(yù)防或治療腫瘤的藥物中的用途。

本發(fā)明的化合物通式（i）如下：

其中，r¹代表芳香基、5~7元雜環(huán)基、c1~c4烷烴或c4~c6脂肪環(huán)基；

r²代表c1~c10烷烴、芳香基、c4~c6脂肪環(huán)基或5~7元雜環(huán)基；

n代表1、2、3、4或5；

r³代表鹵素、h、芳香基、c1~c6烷基、腈基、三氟甲基、c1~c4烷氧基、硝基或c4~c6脂肪環(huán)基；

所述的芳香基是萘基、聯(lián)苯基、苯基或取代苯基；其中所述的取代苯基含1~4個(gè)取代基，該取代基取自鹵素、腈基、硝基、c1~c4烷氧基、c4~c6脂肪環(huán)基、h、三氟甲基或c1~c6烷基；

所述的5~7元雜環(huán)基含有1~2個(gè)選自硫、氧或氮的雜原子，能被苯基合并，并含有一個(gè)或多個(gè)選自硝基、鹵素、三氟甲基、芳香基或腈基的取代基；

所述鹵素為氟、氯、溴、碘。

根據(jù)本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的鹽包括通式（i）化合物與下列酸形成的酸加成鹽：硫酸、磷酸、硝酸、鹽酸、富馬酸、枸櫞酸、乳酸、馬來酸、甲磺酸、氫溴酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、煙酸、碳酸、甲酸或乙酸。

本發(fā)明所述的藥物組合物，其中含有有效劑量本發(fā)明物或其藥學(xué)上可接受的鹽，劑型可以是片劑、注射劑、緩釋劑、貼劑、栓劑、噴霧劑、膠囊劑、凝膠劑、顆粒劑、酊劑、混懸劑等制劑學(xué)上常規(guī)的劑型形式。

本通式（i）所示化合物的制備方法如下：

其中r¹、r²、n和r³的定義同前；

其中a~b代表反應(yīng)條件：

a：試劑為鈉氫或碳酸鉀；溶劑為n,n-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜；反應(yīng)溫度為20~35℃；

b：試劑為碳酸鉀；溶劑為n,n-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜；催化劑為碘化鉀；反應(yīng)溫度為70~110℃。

其中，中間體（iv）的制備方法可參照文獻(xiàn)（chinesejournaloforganicchemistry,2007,27,1542;bioorganic&medicinalchemistry,2007,15,6893;chinesejournalofsyntheticchemistry,2014,22,730）報(bào)道的方法，以乙酮類化合物（v）為原料，合成方法如下：

藥理活性實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明物能夠有效地抑制人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞的增殖。

以下是本發(fā)明部分化合物的藥理活性測試方法及結(jié)果：

cck-8法測試體外抗腫瘤活性

陽性藥：順鉑（ddp）

實(shí)驗(yàn)方法：

將處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)，接種于96孔板中，置于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。根據(jù)組別設(shè)置加入含有測試藥物的培養(yǎng)基，并設(shè)立溶媒組、陰性對照組和陽性對照組。在37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后，96孔板每孔加入10μlcck-8溶液，再孵化3小時(shí)。用酶標(biāo)儀在450nm處測定每孔的吸光度值(od)，并計(jì)算抑制率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用spss17.0計(jì)算得到半數(shù)抑制濃度值(ic50)。

部分化合物體外抗腫瘤活性結(jié)果如下：

表1本發(fā)明部分化合物對a549細(xì)胞的體外抗增殖活性

結(jié)果表明，本發(fā)明物對a549細(xì)胞具有不同程度的抑制作用，其中化合物i-6的活性最強(qiáng)，其ic50值為58.484μm，弱于陽性藥順鉑。

具體實(shí)施方式

儀器與試劑

熔點(diǎn)為sgwx-4顯微熔點(diǎn)儀，核磁共振儀為agilent-nmr-vnmrs400型，質(zhì)譜儀為agilentaccurate-mass-q-tof-ms6520型，薄層層析板和硅膠購自青島海洋化工廠，其它所用試劑為分析純。

下面的實(shí)施例用于具體說明本發(fā)明物的制備，但本發(fā)明并不局限于下列實(shí)施例。

實(shí)施例1：n¹-(2-溴乙基)-吲哚-2-酮（iii-1）的制備

將0.68mmol靛紅(ii-1)加入到25ml的圓底燒瓶中，再加入4mln,n-二甲基甲酰胺溶解，冰水浴冷卻至0℃，分批加入1.36mmol氫化鈉，0℃下攪拌反應(yīng)15min后再加入6.8mmol1,2-二溴乙烷，25℃下攪拌反應(yīng)2~3h。加入30ml飽和氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，二氯甲烷萃取3次，水洗2次，飽和氯化鈉溶液洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓除去有機(jī)溶劑，得到粗品，再經(jīng)硅膠柱層析純化得到紅色固體n¹-(2-溴乙基)-吲哚-2-酮（iii-1），收率76%。

m.p.128~129℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.61(t,j=8.0hz,2h),7.14(t,j=7.6hz,1h),7.01(d,j=8.0hz,1h),4.15(t,j=6.8hz,2h),3.61(t,j=6.8hz,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:182.64,158.18,150.42,138.41,125.68,124.05,117.59,110.22,41.93,27.10.

實(shí)施例2：n¹-(2-溴乙基)-4-氯吲哚-2-酮（iii-2）的制備

將4-氯靛紅代替靛紅，按實(shí)施例1所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例1，得到黃色固體n¹-(2-溴乙基)-4-氯吲哚-2-酮（iii-2），收率62%。

m.p.167~169℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.52(t,j=8.0hz,1h),7.09(d,j=8.4hz,1h),6.93(d,j=8.0hz,1h),4.15(s,2h),3.61(s,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:179.51,157.29,151.52,138.51,134.21,125.60,114.70,108.54,42.13,27.08.

實(shí)施例3：n¹-(2-溴乙基)-4-溴吲哚-2-酮（iii-3）的制備

將4-溴靛紅代替靛紅，按實(shí)施例1所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例1，得到黃色固體n¹-(2-溴乙基)-4-溴吲哚-2-酮（iii-3），收率70%。

m.p.177~179℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.43(t,j=8.0hz,1h),7.29(d,j=8.0hz,1h),6.97(d,j=8.0hz,1h),4.16(t,j=6.0hz,2h),3.61(t,j=6.4hz,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:157.23,151.97,138.31,128.78,122.07,108.99,42.03,27.00.

實(shí)施例4：n¹-(2-溴乙基)-5-氯吲哚-2-酮（iii-4）的制備

將5-氯靛紅代替靛紅，按實(shí)施例1所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例1，得到紅色固體n¹-(2-溴乙基)-5-氯吲哚-2-酮（iii-4），收率65%。

m.p.111~113℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.59(d,j=8.8hz,2h),6.99(d,j=8.0hz,1h),4.15(t,j=6.4hz,2h),3.61(t,j=6.4hz,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:181.66,157.66,148.79,137.75,129.89,125.53,118.39,111.65,42.17,27.20.

實(shí)施例5：n¹-(2-溴乙基)-6-氯吲哚-2-酮（iii-5）的制備

將6-氯靛紅代替靛紅，按實(shí)施例1所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例1，得到黃色固體n¹-(2-溴乙基)-6-氯吲哚-2-酮（iii-5），收率75%。

m.p.106~108℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.58(t,j=7.6hz,1h),7.14(d,j=7.6hz,1h),7.02(s,1h),4.13(t,j=6.4hz,2h),3.62(t,j=6.4hz,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:181.12,158.15,151.46,144.91,126.70,124.31,115.89,111.13,42.1927.07

實(shí)施例6：n¹-(2-溴乙基)-6-溴吲哚-2-酮（iii-6）的制備

將6-溴靛紅代替靛紅，按實(shí)施例1所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例1，得到黃色固體n¹-(2-溴乙基)-6-溴吲哚-2-酮（iii-6），收率58%。

m.p.165~166℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.49(d,j=8.0hz,1h),7.31(d,j=8.0hz,1h),7.19(s,1h),4.13(t,j=6.4hz,2h),3.61(t,j=6.4hz,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:181.39,158.02,151.23,133.70,127.31,126.60,116.26,113.96,42.16,27.07.

實(shí)施例7：2-(1-n’-吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-1）的制備

將0.30mmoln¹-(2-溴乙基)-(取代)吲哚-2-酮(iii-1)、0.27mmol5-[3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基吡唑-5-基]-2-巰基-1,3,4-噁二唑(iv-1)、0.41mmol碳酸鉀和催化量的碘化鉀加入到10ml的圓底燒瓶中，加入4mldmf，80℃下攪拌反應(yīng)1~2h。將反應(yīng)液傾入80ml水中，抽濾，固體水洗3次，真空干燥，再經(jīng)硅膠柱層析純化得到黃色固體2-(1-n’-吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-1），收率79%。

m.p.96~98℃;¹hnmr(cdcl3,400mhz)δ:7.79(d,j=8.4hz,2h),7.61~7.59(m,2h),7.36~7.23(m,6h),7.12(t,j=7.6hz,1h),7.07(s,1h),6.97(d,j=8.8hz,2h),5.92(s,2h),4.25(t,j=7.2hz,2h),3.85(s,3h),3.54(t,j=7.2hz,2h);¹³cnmr(cdcl3,100mhz)δ:182.74,163.44,159.82,158.64,158.30,151.50,150.35,138.81,136.55,128.57,127.81,127.64,127.38,126.99,125.61,124.86,124.09,114.15,110.56,105.61,55.34,55.09,39.13,29.00;hr-mscalcdforc29h23n5nao4s[m+na]⁺560.1363,found560.1368.

實(shí)施例8：2-(1-n’-4-氯吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-2）的制備

將n¹-(2-溴乙基)-4-氯吲哚-2-酮代替n¹-(2-溴乙基)-(取代)吲哚-2-酮，按實(shí)施例7所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例7，得到橙黃色固體2-(1-n’-4-氯吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-2），收率68%。

m.p.200~202℃;¹hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:7.81(d,j=8.4hz,2h),7.61(t,j=8.0hz,1h),7.42(s,1h),7.32(d,j=7.2hz,2h),7.25(t,j=8.8hz,4h),7.09(d,j=8.0hz,1h),6.99(d,j=8.4hz,2h),5.81(s,2h),4.13(s,2h),3.77(s,3h),3.55(s,2h);¹³cnmr(dmso-d6,100mhz)δ:180.26,164.12,159.83,158.23,157.95,151.13,139.10,137.37,131.54,129.02,128.08,127.66,127.13,124.82,124.66,114.93,114.64,110.04,105.98,55.62,54.71,29.89;hr-mscalcdforc29h22cln5nao4s[m+na]⁺594.0973,found594.0972.

實(shí)施例9：2-(1-n’-4-溴吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-3）的制備

將n¹-(2-溴乙基)-4-溴吲哚-2-酮代替n¹-(2-溴乙基)-(取代)吲哚-2-酮，按實(shí)施例7所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例7，得到黃色固體2-(1-n’-4-溴吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-3），收率80%。

m.p.193~195℃;¹hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:7.81(d,j=8.8hz,2h),7.52(t,j=8.0hz,1h),7.42(s,1h),7.32~7.23(m,7h),7.00(d,j=8.8hz,2h),5.81(s,2h),4.13(s,2h),3.77(s,3h),3.55(s,2h);¹³cnmr(dmso-d6,100mhz)δ:180.81,164.11,159.83,158.22,157.91,152.49,151.12,139.01,137.37,129.03,128.07,127.78,127.65,127.13,124.82,119.90,116.55,114.64,110.45,105.98,55.62,54.72,29.86;hr-mscalcdforc29h23brn5o4s[m+h]⁺616.0649,found616.0647.

實(shí)施例10：2-(1-n’-5-氯吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-4）的制備

將n¹-(2-溴乙基)-5-氯吲哚-2-酮代替n¹-(2-溴乙基)-(取代)吲哚-2-酮，按實(shí)施例7所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例7，得到橙黃色固體2-(1-n’-5-氯吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-4），收率66%。

m.p.219~220℃;¹hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:7.82(d,j=8.4hz,2h),7.68(d,j=8.0hz,1h),7.54(s,1h),7.42(s,1h),7.34~7.23(m,6h),6.99(d,j=8.4hz,2h),5.81(s,2h),4.13(s,2h),3.77(s,3h),3.56(s,2h);¹³cnmr(dmso-d6,100mhz)δ:182.31,164.08,159.83,158.22,151.13,149.25,137.43,137.37,129.03,128.07,127.66,127.13,124.84,124.37,119.25,114.64,113.06,105.99,55.62,54.70,29.88;hr-mscalcdforc29h22cln5nao4s[m+na]⁺594.0973,found594.0976.

實(shí)施例11：2-(1-n’-6-氯吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-5）的制備

將n¹-(2-溴乙基)-6-氯吲哚-2-酮代替n¹-(2-溴乙基)-(取代)吲哚-2-酮，按實(shí)施例7所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例7，得到黃色固體2-(1-n’-6-氯吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-5），收率72%。

m.p.202~203℃;¹hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:7.82(d,j=7.6hz,2h),7.52(d,j=8.8hz,2h),7.43(s,1h),7.33(d,j=7.2hz,2h),7.26(t,j=6.8hz,3h),7.12(d,j=7.6hz,1h),7.00(d,j=7.6hz,2h),5.81(s,2h),4.13(s,2h),3.78(s,3h),3.57(s,2h);¹³cnmr(dmso-d6,100mhz)δ:182.04,164.11,159.83,158.73,158.24,151.85,151.11,142.97,137.36,129.01,128.06,127.70,127.13,126.30,124.84,123.58,116.76,114.64,105.99,55.62,55.36,54.70,29.85;hr-mscalcdforc29h22cln5nao4s[m+na]⁺594.0973,found594.0972

實(shí)施例12：2-(1-n’-6-溴吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-6）的制備

將n¹-(2-溴乙基)-6-溴吲哚-2-酮代替n¹-(2-溴乙基)-(取代)吲哚-2-酮，按實(shí)施例7所述的方法，其余所需原料、試劑同實(shí)施例7，得到黃色固體2-(1-n’-6-溴吲哚-2,3-二酮)-乙基-2-硫基)-5-(1-苯甲-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-基)-1,3,4-噁二唑（i-6），收率72%。

m.p.223~224℃;¹hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:7.82(d,j=7.6hz,2h),7.65(s,1h),7.43(d,j=8.4hz,2h),7.34~7.24(m,6h),7.00(d,j=7.2hz,2h),5.81(s,2h),4.12(s,2h),3.78(s,3h),3.56(s,2h);¹³cnmr(dmso-d6,100mhz)δ:182.30,164.13,159.83,158.65,158.23,151.64,151.12,137.36,132.31,129.02,128.08,127.69,127.15,126.57,126.25,124.83,117.06,114.64,105.99,55.62,54.71,29.87;hr-mscalcdforc29h23brn5o4s[m+h]⁺638.0468,found638.0468。