本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，尤其涉及一種不依賴于高能能量分子的用于檢測(cè)i-iv型登革熱病毒的熒光恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及試劑盒。

背景技術(shù)：

登革病毒(dengusvirus，denv)登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬中的一個(gè)血清型亞群，它是由屬于黑斑蚊(又稱斑蚊、艾迪斯蚊或伊蚊)的白線斑蚊(aedesalbopictus)與埃及斑蚊(aedesaegypti)先叮咬患者后，成為“病媒蚊”，其它健康的人可能因這只病媒蚊叮咬而感染，引起登革熱(df)以及發(fā)病率和死亡率很高的登革出血熱(dh)和登革休克綜合征(dss)。依抗原性不同將登革病毒分為i、ii、iii、iv四個(gè)血清型，而同一型中不同毒株也有抗原差異。世界衛(wèi)生組織將登革病毒患者的臨床癥狀分類為登革熱、登革出血熱和登革休克綜合征?；颊咄ǔＴ诟腥镜歉锊《竞蟮?-7天表現(xiàn)出持續(xù)高熱的癥狀（熱型不明確），并伴有頭痛，全身乏力，惡心，嘔吐，肌肉痛和腹痛等癥狀。近年來(lái)，由于全球氣候變暖、人口流動(dòng)頻繁等因素，使得登革熱的爆發(fā)和流行范圍有逐年擴(kuò)大和愈演愈烈之勢(shì)，最終導(dǎo)致登革熱在全球的發(fā)病率提高了近30倍。

據(jù)報(bào)道，截止至2015年10月10日僅在中國(guó)云南省西雙版納州累計(jì)報(bào)告登革熱病例達(dá)到398例。登革熱是過(guò)去50年間世界范圍內(nèi)危害性最大的傳染病之一，已成為嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題。

目前由于治療登革熱的特效藥物以及相關(guān)的預(yù)防疫苗還沒(méi)有上市，所以即時(shí)檢測(cè)及定期檢測(cè)登革熱具有預(yù)防和指導(dǎo)臨床治療的積極意義。常規(guī)的診斷方法有：elisa法和rt-pcr法。elisa法是一種將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)，其特異性強(qiáng)，因?yàn)榭乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間，而兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。但其干擾因素較多（如溫度、時(shí)間），重復(fù)性不好；且容易受到自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽(yáng)性。rt-pcr法為最經(jīng)典的檢測(cè)方法：是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（pcr）的一種廣泛應(yīng)用的變形，在rt-pcr中，一條rna鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)dna，再以此為模板通過(guò)pcr進(jìn)行dna擴(kuò)增。但缺點(diǎn)在于操作時(shí)間長(zhǎng)，所需儀器設(shè)備昂貴，需要配備專業(yè)技術(shù)人員在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測(cè)，操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，無(wú)法做到現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)，不適合臨床樣本的大批量處理及檢測(cè)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)行技術(shù)重復(fù)性差、容易出現(xiàn)假陽(yáng)性、耗時(shí)長(zhǎng)、操作復(fù)雜、儀器設(shè)備昂貴等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種不依賴于atp、磷酸肌酸等高能能量分子，僅需在恒溫條件下即可進(jìn)行核酸的擴(kuò)增的試劑盒。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，包括反應(yīng)液，啟動(dòng)液，反應(yīng)酶系，i-iv型登革熱病毒的特異性引物及探針，內(nèi)標(biāo)18srna的特異性引物及探針，陰陽(yáng)性質(zhì)控品，其特征在于：所述采用的上游引物、下游引物和熒光探針序列如下：

檢測(cè)i型登革熱病毒的上游引物的序列為：ggcaattagcggagatgattgtg

tggtgaaacc（seqidno：1）；下游引物的序列為：acagaaaggcact

tgctgccagtcattccatc（seqidno：2）；熒光探針序列為：fam-gtt

g(dspacer)tgacaggtttgcaacagccttaatagctc-bhq（seqidno：3）；

檢測(cè)ii型登革熱病毒的上游引物序列為：agatggttcgtcgagagaaatatg

gtcacacc（seqidno：4）；下游引物的序列為：gttgacatggggatgg

gttcttcgtgtcctgg（seqidno：5）；熒光探針序列為：fam-aagg(ds

pacer)aaggtggtggacctcggttgtggcag-bhq（seqidno：6）；

檢測(cè)iii型登革熱病毒的上游引物的序列為：agccatggacttgggagagatg

tgtgatgac（seqidno：7）；下游引物的序列為：gtcgcgtctatgctc

tccggcttgattacacgt（seqidno：8）；熒光探針序列為：fam-cact

(dspacer)acaaatgcccccacatcaccgaagtgga-bhq（seqidno：9）；

檢測(cè)iv型登革熱病毒的上游引物的序列為：tgtggcccaagacccacacatt

gtggagcaa（seqidno：10）；下游引物的序列為：caagtgccatgggc

ccgcggtctgcgtggcat（seqidno：11）；熒光探針序列為：fam-gctg(

dspacer)aaagccagatgctcatcccaaaagcata-bhq（seqidno：12）；

檢測(cè)內(nèi)標(biāo)18srna的上游引物的序列為：gtctggttaattccgataacgaa

cgagactct（seqidno：13）；下游引物的序列為：gcatcacagacctg

ttattgctcaatctcgg（seqidno：14）；熒光探針序列為：vic-catg(

dspacer)taactagttacgcgacccccgagcggtc-bhq（seqidno：15）。

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其反應(yīng)液的成分包括：

tris-緩沖液40~60mm

kcl50~80mm

(nh4)2so45~15mm

甜菜堿0.5~3m

tritonx-1000.05%~1%

peg1%~6%

dmso3%~7%

bsa0.05~1mg/ml

優(yōu)選的，tris-緩沖液可選自tris-h2so4、tris-乙酸、tris-hcl中的任意一種或多種，tris-緩沖液的ph為7.0～9.0；tritonx-100的ph為7.0～9.0。

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其啟動(dòng)液的成分包括：

mg²⁺5mm~20mm

優(yōu)選的，mg²⁺來(lái)自于硫酸鎂、乙酸鎂、氯化鎂中的任意一種或多種。

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其反應(yīng)酶系的成分包括：

dntps150~300um

聚合酶bsu60~180ng/ul

單鏈結(jié)合蛋白200~300ng/ul

重組酶（e.colirect）300~450ng/ul

逆轉(zhuǎn)錄酶0.1~1u/ul

聚合酶、單鏈結(jié)合蛋白、重組酶和逆轉(zhuǎn)錄酶的用量可以根據(jù)需要調(diào)整其添加量，或通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定其用量。

優(yōu)選的，一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒反應(yīng)液的具體組分如下：

tris-hcl（ph8.2）50mm

kcl60mm

(nh4)2so410mm

甜菜堿1m

tritonx-100（ph8.8）0.1%

peg5%

dmso6%

bsa0.1mg/ml

優(yōu)選的，一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒啟動(dòng)液的具體組分如下：

氯化鎂15mm

優(yōu)選的，一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒反應(yīng)酶系的具體組分如下：

dntps200um

聚合酶bsu100ng/ul

單鏈結(jié)合蛋白262ng/ul

重組酶（e.colirect）360ng/ul

逆轉(zhuǎn)錄酶0.5u/ul

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，所采用的特上游引物、下游引物和熒光探針序列如下：

檢測(cè)i型登革熱病毒的上游引物的序列為：ggcaattagcggagatgattgtg

tggtgaaacc（seqidno：1）；下游引物的序列為：acagaaaggcact

tgctgccagtcattccatc（seqidno：2）；熒光探針序列為：fam-gtt

g(dspacer)tgacaggtttgcaacagccttaatagctc-bhq（seqidno：3）；

檢測(cè)ii型登革熱病毒的上游引物序列為：agatggttcgtcgagagaaatatg

gtcacacc（seqidno：4）；下游引物的序列為：gttgacatggggatgg

gttcttcgtgtcctgg（seqidno：5）；熒光探針序列為：fam-aagg(ds

pacer)aaggtggtggacctcggttgtggcag-bhq（seqidno：6）；

檢測(cè)iii型登革熱病毒的上游引物的序列為：agccatggacttgggagagatg

tgtgatgac（seqidno：7）；下游引物的序列為：gtcgcgtctatgctc

tccggcttgattacacgt（seqidno：8）；熒光探針序列為：fam-cact

(dspacer)acaaatgcccccacatcaccgaagtgga-bhq（seqidno：9）；

檢測(cè)iv型登革熱病毒的上游引物的序列為：tgtggcccaagacccacacatt

gtggagcaa（seqidno：10）；下游引物的序列為：caagtgccatgggc

ccgcggtctgcgtggcat（seqidno：11）；熒光探針序列為：fam-gctg(

dspacer)aaagccagatgctcatcccaaaagcata-bhq（seqidno：12）；

檢測(cè)內(nèi)標(biāo)18srna的上游引物的序列為：gtctggttaattccgataacgaa

cgagactct（seqidno：13）；下游引物的序列為：gcatcacagacctg

ttattgctcaatctcgg（seqidno：14）；熒光探針序列為：vic-catg(

dspacer)taactagttacgcgacccccgagcggtc-bhq（seqidno：15）。

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其陰陽(yáng)性質(zhì)控品的組分如下：

品名成分

陽(yáng)性質(zhì)控品含有內(nèi)標(biāo)片段、i-iv型登革熱病毒的假病毒溶液

陰性質(zhì)控品depc水。

優(yōu)選的，一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其i-iv型登革熱病毒探針連接的熒光基團(tuán)不同于內(nèi)標(biāo)18srna探針連接的熒光基團(tuán)。

優(yōu)選的，一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒所采用的重組酶選自e.colirect蛋白；λ噬菌體β蛋白；啤酒酵母sepι/stpβ；啤酒酵母dpa蛋白；啤酒酵母stpα蛋白；粟酒裂殖酵母p¹⁴⁰/exo∥蛋白以及rrpι、hpp-ι、v-sep、icp8蛋白。

優(yōu)選的，一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒所采用的重組酶為不依賴于能量分子的重組酶。

優(yōu)選的，恒溫?cái)U(kuò)增的溫度為35～42℃。優(yōu)選擴(kuò)增溫度為37℃。

本發(fā)明的有益效果：

①本發(fā)明所采用的恒溫的擴(kuò)增技術(shù)主要利用重組酶的活性，在不進(jìn)行核酸解鏈和退火的情況下即可在恒溫條件下（如37℃）進(jìn)行核酸的擴(kuò)增。

②本發(fā)明所采用的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與傳統(tǒng)的pcr技術(shù)相比，不需要昂貴的儀器設(shè)備，也避免了高溫對(duì)酶的損耗，同時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在體系中不需要加入過(guò)量的引物，降低了引物與模板錯(cuò)配或生成引物二聚體的可能性。

③基于此上述兩點(diǎn)，本發(fā)明運(yùn)用的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)大大降低了實(shí)驗(yàn)成本的同時(shí)還提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

④本發(fā)明所采用的恒溫?cái)U(kuò)增體系有多重工具酶匹配進(jìn)行有效擴(kuò)增，擴(kuò)增效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)pcr技術(shù)，所用時(shí)間更短，最短可以在5min內(nèi)實(shí)現(xiàn)。

⑤本發(fā)明所用的重組酶依賴擴(kuò)增技術(shù)平臺(tái)相對(duì)于目前其他恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)平臺(tái)，本發(fā)明所用的重組酶依賴擴(kuò)增技術(shù)平臺(tái)是新一代核酸檢測(cè)的利器，在檢測(cè)的時(shí)效性，便捷性和技術(shù)參數(shù)等多個(gè)方面都優(yōu)于其它恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)平臺(tái)，通過(guò)試劑的有效匹配，甚至可以在人體腋下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在該技術(shù)平臺(tái)上，除了可以開(kāi)發(fā)基于小型便攜式診斷設(shè)備用于醫(yī)療檢測(cè)機(jī)構(gòu)（如醫(yī)院急診科、手術(shù)室）、社區(qū)服務(wù)中心、基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)、檢驗(yàn)檢疫疾病防控機(jī)構(gòu)的分子診斷產(chǎn)品，還可以開(kāi)發(fā)出適合家庭使用的分子診斷產(chǎn)品，使我國(guó)不同區(qū)域即便存在經(jīng)濟(jì)條件參差不齊的情況下，也可以展開(kāi)全國(guó)性病毒性疾病、腫瘤和遺傳性疾病的定期和快速普查。這是一個(gè)非常巨大的潛在市場(chǎng)，其經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)效益不可估量。當(dāng)前我們已經(jīng)開(kāi)發(fā)出適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)和家庭使用的hiv檢測(cè)產(chǎn)品、宮頸癌hpv檢測(cè)產(chǎn)品和登革熱檢測(cè)產(chǎn)品。隨著該技術(shù)平臺(tái)的不斷成熟，可進(jìn)一步拓展到食品安全、檢驗(yàn)檢疫、防恐等多個(gè)領(lǐng)域。

⑥本發(fā)明i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒將恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)應(yīng)用到i-iv型登革熱病毒的檢測(cè)上，縮短了反應(yīng)時(shí)間，降低了體系對(duì)反應(yīng)條件的要求，大大地提高了檢測(cè)的效率，也不需要人為主觀判讀結(jié)果，消除了錯(cuò)誤判讀結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)，有利于臨床的快速診斷和對(duì)癥治療。

附圖說(shuō)明

圖1至圖3依次分別為實(shí)施例1至實(shí)施例3的目的基因的熒光結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，采用了一種不依賴于高能能量分子的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。試劑盒成分包括反應(yīng)液，啟動(dòng)液，反應(yīng)酶系，i-iv型登革熱特異性引物及探針內(nèi)標(biāo)18srna的特異性引物及探針，各成分的具體組分如下：

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒反應(yīng)液的具體組分如下：

tris-hcl（ph8.2）50mm

kcl60mm

(nh4)2so410mm

甜菜堿1m

tritonx-100（ph8.8）0.1%

peg5%

dmso6%

bsa0.1mg/ml

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒啟動(dòng)液的具體組分如下：

氯化鎂15mm

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒反應(yīng)酶系的具體組分如下：

dntps200um

聚合酶bsu100ng/ul

單鏈結(jié)合蛋白262ng/ul

重組酶（e.colirect）360ng/ul

逆轉(zhuǎn)錄酶0.5u/ul

作為上述反應(yīng)試劑的進(jìn)一步改進(jìn)，所使用的tris-hcl的ph為8.2；所使用的tritonx-100的ph為8.8。

聚合酶為恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中常用的聚合酶，優(yōu)選為bsu或klenow。重組酶選自e.colirect蛋白；λ噬菌體β蛋白；啤酒酵母sepι/stpβ；啤酒酵母dpa蛋白；啤酒酵母stpα蛋白；粟酒裂殖酵母p¹⁴⁰/exo∥蛋白以及rrpι、hpp-ι、v-sep、icp8蛋白。

作為上述方法的進(jìn)一步改進(jìn)，恒溫?cái)U(kuò)增的溫度為37℃。

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，所采用的特上游引物、下游引物和熒光探針序列如下：

檢測(cè)i型登革熱病毒的上游引物的序列為：ggcaattagcggagatgattgtg

tggtgaaacc（seqidno：1）；下游引物的序列為：acagaaaggcact

tgctgccagtcattccatc（seqidno：2）；熒光探針序列為：fam-gtt

g(dspacer)tgacaggtttgcaacagccttaatagctc-bhq（seqidno：3）；

檢測(cè)ii型登革熱病毒的上游引物序列為：agatggttcgtcgagagaaatatg

gtcacacc（seqidno：4）；下游引物的序列為：gttgacatggggatgg

gttcttcgtgtcctgg（seqidno：5）；熒光探針序列為：fam-aagg(ds

pacer)aaggtggtggacctcggttgtggcag-bhq（seqidno：6）；

檢測(cè)iii型登革熱病毒的上游引物的序列為：agccatggacttgggagagatg

tgtgatgac（seqidno：7）；下游引物的序列為：gtcgcgtctatgctc

tccggcttgattacacgt（seqidno：8）；熒光探針序列為：fam-cact

(dspacer)acaaatgcccccacatcaccgaagtgga-bhq（seqidno：9）；

檢測(cè)iv型登革熱病毒的上游引物的序列為：tgtggcccaagacccacacatt

gtggagcaa（seqidno：10）；下游引物的序列為：caagtgccatgggc

ccgcggtctgcgtggcat（seqidno：11）；熒光探針序列為：fam-gctg(

dspacer)aaagccagatgctcatcccaaaagcata-bhq（seqidno：12）；

檢測(cè)內(nèi)標(biāo)18srna的上游引物的序列為：gtctggttaattccgataacgaa

cgagactct（seqidno：13）；下游引物的序列為：gcatcacagacctg

ttattgctcaatctcgg（seqidno：14）；熒光探針序列為：vic-catg(

dspacer)taactagttacgcgacccccgagcggtc-bhq（seqidno：15）。

一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其陰陽(yáng)性質(zhì)控品的組分如下：

品名成分

陽(yáng)性質(zhì)控品含有內(nèi)標(biāo)片段、i-iv型登革熱病毒的假病毒溶液

陰性質(zhì)控品depc水。

下面結(jié)合具體的實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步說(shuō)明i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒的優(yōu)勢(shì)，所舉實(shí)例并非限制本發(fā)明。

實(shí)驗(yàn)樣本來(lái)源：

以感染i-iv型登革熱病毒患者的血漿經(jīng)提取得到的核酸溶液作為樣本；

以甲型h1n1流感、甲型h3n2流感、甲型h5n1流感、甲型h9n7流感、季節(jié)性流感b、人季節(jié)型流感h1n1作為特異性實(shí)驗(yàn)的樣本；

以含有內(nèi)標(biāo)片段、i-iv型登革熱病毒的假病毒溶液作為陽(yáng)性質(zhì)控品；

以depc水作為陰性質(zhì)控品。

實(shí)施例1（i-iv型登革熱病毒的檢測(cè)）：

取12個(gè)200ul反應(yīng)管，分別標(biāo)記為反應(yīng)管1~12。在反應(yīng)管1~12中分別加入20ul反應(yīng)液、5ul反應(yīng)酶系；在反應(yīng)管1~3中加入上游引物1（200nm）、下游引物1（200nm）、熒光探針1（150nm）、上游引物5（200nm）、下游引物5（200nm）、熒光探針5（150nm）；在反應(yīng)管4~6中加入上游引物2（200nm）、下游引物2（200nm）、熒光探針2（150nm）、上游引物5（200nm）、下游引物5（200nm）、熒光探針5（150nm）；在反應(yīng)管7~9中加入上游引物3（200nm）、下游引物3（200nm）、熒光探針3（150nm）、上游引物5（200nm）、下游引物5（200nm）、熒光探針5（150nm）；在反應(yīng)管10~12中加入上游引物4（200nm）、下游引物4（200nm）、熒光探針4（150nm）、上游引物5（200nm）、下游引物5（200nm）、熒光探針5（150nm）。在反應(yīng)管1中加入i型登革熱病毒核酸2ul；在反應(yīng)管4中加入ii型登革熱病毒核酸2ul；在反應(yīng)管7中加入iii型登革熱病毒核酸2ul；在反應(yīng)管10中加入iv型登革熱病毒核酸2ul；在反應(yīng)管2、5、8、11都分別加入陰性質(zhì)控品2ul；在反應(yīng)管3、6、9、12都分別加入陰性質(zhì)控品2ul。各反應(yīng)管均用滅菌水補(bǔ)足體系到45ul，振蕩混勻后各管再分別加入5ul啟動(dòng)液（各管的終體積為50ul）。

選擇熒光定量pcr儀進(jìn)行擴(kuò)增及收集熒光，具體上機(jī)條件為：37℃，30s，30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)都搜集熒光，結(jié)果如圖1。

實(shí)施例2（非最優(yōu)擴(kuò)增溫度條件的檢測(cè)）：

同實(shí)施例1，不同處在于上機(jī)條件改為：35℃，30s，30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)都收集熒光，結(jié)果如圖2。

實(shí)施例3（非最優(yōu)擴(kuò)增溫度條件的檢測(cè)）：

同實(shí)施例1，不同處在于上機(jī)條件改為：42℃，30s，30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)都收集熒光，結(jié)果如圖3。

結(jié)論：

1.從圖1的結(jié)果可以看出，對(duì)應(yīng)的病原體樣本擴(kuò)增結(jié)果都有“s”型擴(kuò)增曲線，說(shuō)明本發(fā)明試劑盒的恒溫?cái)U(kuò)增效果好。

2.從圖2、3的結(jié)果可以看出，即使不是在最適溫度下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，仍然得到穩(wěn)定的陽(yáng)性結(jié)果，說(shuō)明本發(fā)明試劑盒的容錯(cuò)率高、穩(wěn)定性強(qiáng)。

以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書及附圖內(nèi)容所作的等效世紀(jì)變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。

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<110>廣州和實(shí)生物技術(shù)有限公司

<120>一種i-iv型登革熱病毒的即時(shí)恒溫檢測(cè)試劑盒

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