本發(fā)明涉及農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種克里本類芽孢桿菌顆粒劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
克里本類芽孢桿菌屬于芽孢桿菌科，類芽孢桿菌屬的一種，該菌廣譜性好，抑菌活性高，對(duì)多種植物病害都有防治效果，另外該殺菌種發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的次生代謝物多聚果糖對(duì)植物還具有促生特性，同時(shí)該菌株還有解磷作用，具有很高的市場(chǎng)價(jià)值。
目前常用的是克里本類芽孢桿水劑，不便運(yùn)輸、包裝成本大、不易存儲(chǔ)的因素，生物活性持效短，藥效受到影響，使得其在推廣和使用中具有一定的區(qū)域性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種克里本類芽孢桿菌顆粒劑。本發(fā)明提供的克里本類芽孢桿菌顆粒劑生物活性高、抑菌效果好，且易于運(yùn)輸和儲(chǔ)存。
本發(fā)明提供了一種克里本類芽孢桿菌顆粒劑，包括以下重量份數(shù)的組分：
克里本類芽孢桿菌4份；
助劑13～18份；
填料55～68份；
水18～20份。
優(yōu)選的是，所述的克里本類芽胞桿菌菌種的生物保藏號(hào)為cgmccno.7996。
優(yōu)選的是，所述助劑包括白砂糖和玉米淀粉，所述白砂糖和玉米淀粉的質(zhì)量比為1：(4～7.5)。
優(yōu)選的是，所述填料包括滑石粉和高嶺土；所述滑石粉和高嶺土的質(zhì)量比為(1～2.5)：1。
優(yōu)選的是，所述顆粒劑中克里本類芽胞桿菌的含量為190～210iu/mg。
優(yōu)選的是，所述顆粒劑的干燥減量≤6％。
優(yōu)選的是，所述顆粒劑的ph值為6～8。
優(yōu)選的是，所述顆粒劑的懸浮率≥80％。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述顆粒劑的制備方法，包括以下步驟：將克里本類芽孢桿菌、助劑、填料和水混合后攪拌，進(jìn)行氣流粉碎，得到顆粒劑。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述顆粒劑或上述技術(shù)方案所述制備方法得到的顆粒劑在防治水稻紋枯病中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種克里本類芽孢桿菌顆粒劑，包括以下重量份數(shù)的組分：克里本類芽孢桿菌4份；助劑13～18份；填料55～68份和水。本發(fā)明提供的克里本類芽孢桿菌顆粒劑生物活性高、抑菌效果好，且易于運(yùn)輸和儲(chǔ)存。
生物保藏說(shuō)明
克里本類芽孢桿菌(paenibacilluskribbensis)，于2013年08月13日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，生物保藏編號(hào)為cgmccno.7996。
附圖說(shuō)明
圖1為本發(fā)明實(shí)施例3提供的克里本類芽孢桿菌抑菌譜。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了一種克里本類芽孢桿菌顆粒劑，包括以下重量份數(shù)的組分：
克里本類芽孢桿菌4份；
助劑13～18份；
填料55～68份；
水18～20份。
在本發(fā)明中，所述克里本類芽孢桿菌顆粒劑包括4份的克里本類芽胞桿菌。本發(fā)明所述克里本類芽孢桿菌的菌種保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，生物保藏編號(hào)為cgmccno.7996。本發(fā)明對(duì)所述克里本類芽胞桿菌的制備方法沒(méi)有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的克里本類芽胞桿菌的制備方法即可。在本發(fā)明中，所述顆粒劑中克里本類芽胞桿菌的含量為190～210iu/mg，更優(yōu)選為200iu/mg。
以所述4份克里本類芽胞桿菌為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的克里本類芽孢桿菌顆粒劑包括13～18份的助劑，優(yōu)選為15份。在本發(fā)明中，所述助劑優(yōu)選包括白砂糖和玉米淀粉，所述白砂糖和玉米淀粉的質(zhì)量比優(yōu)選為1：(4～7.5)，更優(yōu)選為1：5。在本發(fā)明中，所述白砂糖起到粘結(jié)劑的作用，所述玉米淀粉屬于崩解劑，加快入水稀釋速度。本發(fā)明對(duì)所述白砂糖和玉米淀粉的來(lái)源沒(méi)有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的白砂糖和淀粉的市售產(chǎn)品即可。
以所述4份克里本類芽胞桿菌為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的克里本類芽孢桿菌顆粒劑包括55～68份的填料，優(yōu)選為60份。在本發(fā)明中，所述填料優(yōu)選包括滑石粉和高嶺土；所述滑石粉和高嶺土的質(zhì)量比優(yōu)選為(1～2.5)：1。在本發(fā)明中，所述滑石粉起到潤(rùn)滑作用，加快造粒時(shí)的出粒速度；所述高嶺土屬于填充料，起到稀釋作用。本發(fā)明對(duì)所述滑石粉和高嶺土的來(lái)源沒(méi)有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的滑石粉和高嶺土的常規(guī)市售產(chǎn)品即可。
在本發(fā)明中，所述顆粒劑的干燥減量≤6％。
在本發(fā)明中，所述顆粒劑的ph值為6～8。
在本發(fā)明中，所述顆粒劑的懸浮率≥80％。
在本發(fā)明中，所述顆粒劑的粒徑為1.0～1.2mm。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述顆粒劑的制備方法，包括以下步驟：將克里本類芽孢桿菌、助劑、填料和水混合后攪拌，進(jìn)行氣流粉碎，得到顆粒劑。
在本發(fā)明中，所述攪拌的時(shí)間優(yōu)選為0.8～2h，更優(yōu)選為1h。
本發(fā)明對(duì)氣流粉碎的裝置沒(méi)有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的氣流粉碎機(jī)即可。如qyf-60氣流粉碎機(jī)。具體的，在具體氣流粉碎過(guò)程中，軸密封壓力優(yōu)選為0.1～0.15mpa，更優(yōu)選為0.12mpa；出料氣封壓力優(yōu)選為0.15mpa；脈沖壓力優(yōu)選為0.4～0.6mpa，更優(yōu)選為0.5mpa；進(jìn)料壓力優(yōu)選為0.75～0.85mpa，更優(yōu)選為0.8mpa；粉碎打料速度優(yōu)選為200～300kg/h，更優(yōu)選為240kg/h；粉碎投料量?jī)?yōu)選為800～1000kg/批，更優(yōu)選為850kg/批；捏合水量控制優(yōu)選為20～25％，更優(yōu)選為23％；造粒溫度控制優(yōu)選為50～60℃，更優(yōu)選為55℃。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述顆粒劑或上述技術(shù)方案所述制備方法得到的顆粒劑在防治水稻紋枯病中的應(yīng)用。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的一種克里本類芽孢桿菌顆粒劑及其制備方法做進(jìn)一步詳細(xì)的介紹，本發(fā)明的技術(shù)方案包括但不限于以下實(shí)施例。
實(shí)施例1
克里本類芽孢桿菌一級(jí)種子液的制備：將保藏的克里本類芽孢桿菌菌種接種于裝有活化培養(yǎng)基的茄型瓶中，28℃培養(yǎng)12h進(jìn)行活化培養(yǎng)，完成菌種活化；活化后的克里本類芽孢桿菌菌種按照1％的接種量接種于克里本類芽孢桿菌一級(jí)液體培養(yǎng)基中，一級(jí)液體培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量含量的組分：蔗糖3％、硝酸鈉0.15％、磷酸氫二鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、氯化鉀0.05％、硫酸鐵0.002％，余量為水。克里本類芽孢桿菌一級(jí)液體培養(yǎng)的溫度為30℃，初始ph值為7.5，進(jìn)入培養(yǎng)24h內(nèi)按照15m3/h通氣量進(jìn)行通氣培養(yǎng)，液體培養(yǎng)24h后按照20m3/h的通氣量進(jìn)行通氣培養(yǎng)，光照培養(yǎng)30h后，停止培養(yǎng)，得到克里本類芽孢桿菌一級(jí)種子液。
克里本類芽孢桿菌二級(jí)種子液的制備：將得到的克里本類芽孢桿菌一級(jí)種子液以10％接種量接種于克里本類芽孢桿菌二級(jí)液體培養(yǎng)基中，二級(jí)液體培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量含量的組分：蔗糖1.5％、葡萄糖1.5％、黃豆粉1.0％、硫酸銨0.05％、磷酸氫二鉀0.05％、氯化鈣0.1％，余量為水。二級(jí)液體培養(yǎng)的溫度為32℃，ph值為7.5，進(jìn)入培養(yǎng)24h內(nèi)，通氣量為150m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為250m3/h，每小時(shí)攪拌2次，每次攪拌時(shí)間為15min，光照培養(yǎng)48h后，停止培養(yǎng)，得到克里本類芽孢桿菌二級(jí)種子液。
克里本類芽孢桿菌的制備：將得到的克里本類芽孢桿菌二級(jí)種子液以10％接種量接種于克里本類芽孢桿菌三級(jí)液體培養(yǎng)基中，三級(jí)液體培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量含量的組分：葡萄糖2.5％、玉米粉1％、硫酸銨0.05％、磷酸氫二鉀0.05％、氯化鈣0.1％，余量為水。三級(jí)液體培養(yǎng)的溫度為30℃，ph值為7.5，進(jìn)入培養(yǎng)24h內(nèi)，通氣量為2000m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為1000m3/h，每小時(shí)攪拌2次，每次攪拌時(shí)間為15min，光照培養(yǎng)65h后，停止培養(yǎng)，得到克里本類芽孢桿菌三級(jí)培養(yǎng)液，采用蝶式離心機(jī)在5000rpm條件下離心20min，得到上清液和濃縮液，將濃縮液經(jīng)噴霧干燥塔干燥，得到克里本類芽孢桿菌。
實(shí)施例2
取實(shí)施例1得到的克里本類芽胞桿菌4kg，與10kg白砂糖、5.5kg玉米淀粉、10kg滑石粉、5kg高嶺土和20kg水混合攪拌1h，進(jìn)行氣流粉碎，軸密封壓力為0.12mpa；出料氣封壓力為0.15mpa；脈沖壓力為0.6mpa；進(jìn)料壓力為0.85mpa；粉碎打料速度為240kg/h；粉碎投料量為850kg/批；捏合水量控制為20％；造粒溫度控制為55℃，復(fù)配成200iu/mg克里本類芽孢桿菌顆粒劑。
實(shí)施例3
將實(shí)施例2制備得到的克里本類芽胞桿菌顆粒劑用水稀釋50～1000倍，對(duì)紋枯病的抑菌活性分別與農(nóng)業(yè)部登記的丙環(huán)唑?qū)Ρ取?/p>
1)克里本類芽孢桿菌抑菌譜
將克里本發(fā)酵原液稀釋50倍對(duì)22種植物病原菌進(jìn)行抑菌活性測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明，克里本發(fā)酵液對(duì)所有測(cè)試的22種病原菌均表現(xiàn)出不同程度的抑菌活性，克里本發(fā)酵液對(duì)蔬菜、水果及煙草常見(jiàn)病害具有一定的抑制作用，可用于防治多種農(nóng)作物真菌性病害，抗菌譜較廣。
2)200iu/mg克里本類芽孢桿菌顆粒劑不同稀釋倍數(shù)抑菌效果
為探究克里本類芽孢桿菌顆粒劑最佳抑菌稀釋倍數(shù)，對(duì)其設(shè)置稀釋倍數(shù)梯度觀測(cè)抑菌效果，以0.5ppm丙環(huán)唑溶液作對(duì)照，同等條件下，0.5ppm丙環(huán)唑溶液對(duì)水稻紋枯病的抑菌率為80.06％，克里本類芽孢桿菌顆粒劑稀釋不同倍數(shù)的抑菌效果如表1所示?？梢?jiàn)隨著稀釋倍數(shù)的增加，克里本類芽孢桿菌顆粒劑抑菌效果呈下降趨勢(shì)，稀釋200倍時(shí)的抑菌效果相當(dāng)于0.5ppm丙環(huán)唑溶液的抑菌效果，在稀釋1000倍條件下，仍對(duì)水稻紋枯病菌具有一定的抑制效果。
表1克里本類芽孢桿菌顆粒劑稀釋不同倍數(shù)抑菌率
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。