本發(fā)明涉及海參提取物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高干海參蛋白與多糖提取率的方法。

背景技術(shù)：

海參中含有多種活性成分，如多糖，蛋白，皂苷等。海參體壁是海參主要食（藥）用部位，其主要構(gòu)成為上皮組織和真皮結(jié)締組織。海參真皮結(jié)締組織的細胞間充填著膠原等纖維成分和蛋白聚糖，以及其他糖蛋白等無定形間質(zhì)，即細胞外基質(zhì)。因此，蛋白質(zhì)是海參最主要成分。海參體內(nèi)含有18種氨基酸，有8種是人體自身不能合成的必需氨基酸。海參多糖主要存在于海參體壁中，少量存在于內(nèi)臟及性腺中，是海參的重要組成部分，具有治療動脈血栓、降血脂、防治動脈粥樣硬化疾病、調(diào)節(jié)機體免疫力、保護腸黏膜、抗胃潰瘍作用。新鮮海參易發(fā)生自溶現(xiàn)象，不宜運輸和貯藏，因此促使了海參加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前，市場上流通最多的是干海參制品。因此，以干海參為原料高效提取其中蛋白、多糖，已經(jīng)成為海參深度開發(fā)利用的重要方向。

北方仿刺參價格昂貴，食用品質(zhì)上乘，但不適合作為工業(yè)上提取海參蛋白、多糖的原料，葉瓜參主要分布于北極地區(qū)，加拿大、俄羅斯、英國、挪威等國也有分布。近年來，隨著我國人民生活水平日益提高，人們對海參的需求也不斷增加，海參加工與深加工產(chǎn)品也在市面上出現(xiàn)。葉瓜參在我國海參市場有相當大的占有率，其體壁厚、質(zhì)地硬，蛋白質(zhì)、多糖及皂苷等活性成分含量很高，產(chǎn)量高，價格低廉，相對于價格昂貴的刺參，開發(fā)前景更為廣闊。

目前，一般以冷水長時間泡發(fā)后的海參或新鮮海參為原料，提取海參蛋白或多糖。冷水泡發(fā)的缺點是時間過長，一般2天-3天，汁液流失嚴重，且在夏季泡發(fā)容易腐敗變質(zhì)，不適合工業(yè)化生產(chǎn)；采用新鮮海參的缺點是，海參易自溶，不易收集，不易貯藏，不易控制每批次提取的穩(wěn)定性和產(chǎn)品品質(zhì)。而以干海參粉碎后直接提取蛋白或多糖得率較低，原料利用率低，且產(chǎn)品鹽含量較高，不適合做為功能性食品配料。因此，需要一種以干海參為原料，快速、高效提取其中蛋白或多糖的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種原料利用率高、快速、高效提取海參中蛋白與多糖的方法。該方法以干海參為原料，通過低溫泡發(fā)、高溫煮制、高溫泡發(fā)的處理方法，聯(lián)合溫和的酶解處理方法，提取海參提取物，從而提取海參中的蛋白與多糖。

本發(fā)明方法提取得到的海參提取物中，蛋白質(zhì)含量>72%，多糖含量>16%，鹽含量<4%，水分含量<3%，且得到的海參提取物無腥味。

本發(fā)明方法的海參提取物得率>50%，蛋白質(zhì)提取率>85%，多糖提取率>90%。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)。

一種提高干海參蛋白與多糖提取率的方法，該方法采用去離子水泡發(fā)和酶解聯(lián)合處理，包括如下步驟：

（1）低溫泡發(fā)與清洗：將干海參采用去離子水低溫泡發(fā)，泡發(fā)得到的濕海參用去離子水清洗；

（2）高溫煮制與泡發(fā)：將清洗后的濕海參用熱水煮制，煮制結(jié)束后停止加熱，余熱繼續(xù)泡發(fā)，分別收集泡發(fā)好的濕海參和泡發(fā)濕海參的熱水；

（3）濃縮泡發(fā)液：減壓濃縮步驟（2）收集的泡發(fā)濕海參的熱水，得到海參泡發(fā)濃縮液；

（4）第一階段酶解：將步驟（2）收集的泡發(fā)好的濕海參絞成海參肉糜，添加海參肉糜重量的2-4倍的步驟（3）得到的海參泡發(fā)濃縮液，加入制備好的生姜勻漿液，再加入蛋白酶進行酶解；滅酶，離心，得到酶解液a和沉淀a；

（5）第二階段酶解：取沉淀a，添加沉淀a重量的2-4倍的步驟（3）得到的海參泡發(fā)濃縮液，加入制備好的生姜勻漿液，再加入蛋白酶進行酶解；滅酶，離心，得到酶解液b和沉淀b；

（6）濃縮與干燥：合并酶解液a和酶解液b，減壓濃縮后，加入麥芽糊精，噴霧干燥，得到海參提取物。

進一步地，步驟（1）中，所述干海參包括干葉瓜參。

進一步地，步驟（1）中，所述泡發(fā)過程中，去離子水是干海參重量的20-30倍。

進一步地，步驟（1）中，所述泡發(fā)的溫度為45-55℃，時間為10-12小時。

進一步地，步驟（1）中，所述清洗是用濕海參重量15-20倍的去離子水清洗3-4次。

進一步地，步驟（2）中，所述煮制過程，是將濕海參與濕海參重量15-20倍的去離子水在90-95℃下煮制40-60min。

進一步地，步驟（2）中，所述繼續(xù)泡發(fā)的時間為2-4小時。

進一步地，步驟（3）中，所述減壓濃縮是在55℃下濃縮至原體積的1/4-1/3。

進一步地，步驟（4）中，所述生姜勻漿液為海參肉糜重量的1-3%。

進一步地，步驟（4）中，所述蛋白酶的添加量為海參肉糜的0.5-0.7%。

進一步地，步驟（4）中，所述蛋白酶包括復(fù)合蛋白酶和風味蛋白酶。

更進一步地，步驟（4）中，所述蛋白酶為諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）和風味蛋白酶（flavourzyme500mg）。

進一步地，步驟（4）中，所述酶解是在55℃下酶解4-6小時。

進一步地，步驟（5）中，所述生姜勻漿液為沉淀a重量的0.5-1.5%。

進一步地，步驟（5）中，所述蛋白酶的添加量為沉淀a重量的0.3-0.5%。

進一步地，步驟（5）中，所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶和風味蛋白酶。

更進一步地，步驟（5）中，所述蛋白酶為廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶和諾維信公司的風味蛋白酶（flavourzyme500mg）。

進一步地，步驟（5）中，所述酶解是在55℃下酶解2-4小時。

進一步地，步驟（4）、（5）中，所述生姜勻漿液通過如下方法制得：取新鮮生姜，按料液比1:1-1:3g/ml加入去離子水，組織勻漿機破壁20-40秒，得到所述生姜勻漿液。

進一步地，步驟（4）、（5）中，所述滅酶是在95℃下滅酶15min。

進一步地，步驟（6）中，所述減壓濃縮是在55℃下，減壓濃縮至固形物濃度為30-35%。

進一步地，步驟（6）中，所述麥芽糊精的添加量為減壓濃縮后固形物質(zhì)量的10%。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點和有益效果：

本發(fā)明方法以南方特色海參葉瓜參為代表原料進行干海參蛋白與多糖的提取，提高了海參蛋白和多糖的提取率，縮短了提取時間，提高了原料利用率和設(shè)備利用率；同時，提取得到的海參提取物的產(chǎn)品得率與品質(zhì)高，鹽含量低，且得到的海參提取物無腥味。

具體實施方式

本發(fā)明用下列實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于下列實施例。

實施例1

（1）低溫泡發(fā)：采用干海參重量20倍的去離子水低溫浸泡葉瓜參；低溫浸泡時，保持泡發(fā)溫度45℃，泡發(fā)10小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量15倍的去離子水清洗濕海參3次；

（3）高溫煮制：將葉瓜參投入濕海參重量15倍的溫度為95℃的去離子水中，高溫煮制40分鐘；

（4）高溫泡發(fā)：停止加熱，用余熱繼續(xù)泡發(fā)2小時，分別收集發(fā)好的海參（sc）和泡發(fā)海參的熱水（hw）；

（5）濃縮海參泡發(fā)液：55℃減壓濃縮泡發(fā)海參的熱水（hw），至原體積的1/3，得海參泡發(fā)濃縮液（hwc）；

（6）制備生姜勻漿液：取新鮮生姜，按料液比1:1g/ml加入去離子水，組織勻漿機破壁20秒，得生姜勻漿液（ge）；

（7）第一階段酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量2倍的海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入肉糜重量1%的生姜勻漿液（ge），加入肉糜重量0.45%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解4小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液a和沉淀a；

（8）第二階段酶解：取沉淀a，加入沉淀a重量2倍海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入沉淀a重量0.5%的生姜勻漿液（ge），加入沉淀a重量0.25%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解2小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液b和沉淀b；

（9）濃縮與噴霧干燥：合并酶解液a和酶解液b，55℃減壓濃縮至固形物濃度為30%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中蛋白質(zhì)含量為74%，多糖含量為17%，鹽含量為3%，水分含量為3%。

海參提取物得率為53%，蛋白質(zhì)提取率為86%，多糖提取率為91%，且無腥味。

實施例2

（1）低溫泡發(fā)：采用干海參重量25倍的去離子水低溫浸泡葉瓜參；低溫浸泡時，保持泡發(fā)溫度50℃，泡發(fā)11小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量18倍的去離子水清洗濕海參3次；

（3）高溫煮制：將葉瓜參投入濕海參重量18倍的溫度為90℃的去離子水中，高溫煮制50分鐘；

（4）高溫泡發(fā)：停止加熱，用余熱繼續(xù)泡發(fā)3小時，分別收集發(fā)好的海參（sc）和泡發(fā)海參的熱水（hw）；

（5）濃縮海參泡發(fā)液：55℃減壓濃縮泡發(fā)海參的熱水（hw），至原體積的3/10，得海參泡發(fā)濃縮液（hwc）；

（6）制備生姜勻漿液：取新鮮生姜，按料液比1:2g/ml加入去離子水，組織勻漿機破壁30秒，得生姜勻漿液（ge）；

（7）第一階段酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量3倍的海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入肉糜重量2%的生姜勻漿液（ge），加入肉糜重量0.45%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）以及0.15%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解5小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液a和沉淀a；

（8）第二階段酶解：取沉淀a，加入沉淀a重量3倍海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入沉淀a重量1%的生姜勻漿液（ge），加入沉淀a重量0.35%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解3小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液b和沉淀b；

（9）濃縮與噴霧干燥：合并酶解液a和酶解液b，55℃減壓濃縮至固形物濃度為33%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中，蛋白質(zhì)含量為74%，多糖含量為18%，鹽含量為3%，水分含量為3%。

海參提取物得率為55%，蛋白質(zhì)提取率為87%，多糖提取率為92%，且無腥味。

實施例3

（1）低溫泡發(fā)：采用干海參重量30倍的去離子水低溫浸泡葉瓜參；低溫浸泡時，保持泡發(fā)溫度55℃，泡發(fā)12小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量20倍的去離子水清洗濕海參4次；

（3）高溫煮制：將葉瓜參投入濕海參重量20倍的溫度為90℃的去離子水中，高溫煮制60分鐘；

（4）高溫泡發(fā)：停止加熱，用余熱繼續(xù)泡發(fā)4小時，分別收集發(fā)好的海參（sc）和泡發(fā)海參的熱水（hw）；

（5）濃縮海參泡發(fā)液：55℃減壓濃縮泡發(fā)海參的熱水（hw），至原體積的1/4，得海參泡發(fā)濃縮液（hwc）；

（6）制備生姜勻漿液：取新鮮生姜，按料液比1:3g/ml加入去離子水，組織勻漿機破壁40秒，得生姜勻漿液（ge）；

（7）第一階段酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量4倍的海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入肉糜重量3%的生姜勻漿液（ge），加入肉糜重量0.55%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）以及0.15%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解6小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液a和沉淀a；

（8）第二階段酶解：取沉淀a，加入沉淀a重量4倍海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入沉淀a重量1.5%的生姜勻漿液（ge），加入沉淀a重量0.35%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶以及0.15%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解4小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液b和沉淀b；

（9）濃縮與噴霧干燥：合并酶解液a和酶解液b，55℃減壓濃縮至固形物濃度為35%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中蛋白質(zhì)含量為75%，多糖含量為18%，鹽含量為3%，水分含量為3%。

海參提取物得率為57%，蛋白質(zhì)提取率為88%，多糖提取率為91%，且無腥味。

對比例1

（1）低溫泡發(fā)：采用干海參重量25倍的去離子水低溫浸泡葉瓜參；低溫浸泡時，保持泡發(fā)溫度50℃，泡發(fā)10小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量20倍的去離子水清洗濕海參3次；

（3）高溫煮制：將葉瓜參投入濕海參重量20倍的溫度為95℃的去離子水中，高溫煮制40分鐘；

（4）高溫泡發(fā)：停止加熱，用余熱繼續(xù)泡發(fā)2.5小時，分別收集發(fā)好的海參（sc）和泡發(fā)海參的熱水（hw）；

（5）濃縮海參泡發(fā)液：55℃減壓濃縮泡發(fā)海參的熱水（hw），至原體積的1/4，得海參泡發(fā)濃縮液（hwc）；

（6）第一階段酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量3倍的海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入肉糜重量0.55%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解4.5小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液a和沉淀a；

（7）第二階段酶解：取沉淀a，加入沉淀a重量3倍海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入沉淀a重量0.4%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解2.5小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液b和沉淀b；

（8）濃縮與噴霧干燥：合并酶解液a和酶解液b，55℃減壓濃縮至固形物濃度為30%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中蛋白質(zhì)含量為74%，多糖含量為18%，鹽含量為3%，水分含量為3%。

海參提取物得率為50%，蛋白質(zhì)提取率為80%，多糖提取率為90%，腥味突出。

對比例2

（1）冷水泡發(fā)：采用干海參重量25倍的去離子水浸泡葉瓜參；泡發(fā)溫度15℃，泡發(fā)48小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量20倍的去離子水清洗濕海參3次；

（3）制備生姜勻漿液：取新鮮生姜，按料液比1:1.5g/ml加入去離子水，組織勻漿機破壁30秒，得生姜勻漿液（ge）；

（4）第一階段酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量3倍的海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入肉糜重量2.5%的生姜勻漿液（ge），加入肉糜重量0.5%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）以及0.15%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解5.5小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液a和沉淀a；

（5）第二階段酶解：取沉淀a，加入沉淀a重量3.5倍海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入沉淀a重量1%的生姜勻漿液（ge），加入沉淀a重量0.4%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解3小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液b和沉淀b；

（6）濃縮與噴霧干燥：合并酶解液a和酶解液b，55℃減壓濃縮至固形物濃度為30%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中蛋白質(zhì)含量為69%，多糖含量為18%，鹽含量為8%，水分含量為3%。

海參提取物得率為43%，蛋白質(zhì)提取率為69%，多糖提取率為80%，且無腥味。

對比例3

（1）冷水泡發(fā)：采用干海參重量25倍的去離子水浸泡葉瓜參；泡發(fā)溫度15℃，泡發(fā)48小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量20倍的去離子水清洗濕海參3次；

（3）第一階段酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量3倍的海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入肉糜重量0.45%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）以及0.15%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解5.5小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液a和沉淀a；

（4）第二階段酶解：取沉淀a，加入沉淀a重量3.5倍海參泡發(fā)濃縮液（hwc），加入沉淀a重量0.35%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶以及0.05%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），55℃酶解2.5小時，95℃滅酶15分鐘，離心，得酶解液b和沉淀b；

（5）濃縮與噴霧干燥：合并酶解液a和酶解液b，55℃減壓濃縮至固形物濃度為30%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中蛋白質(zhì)含量為68%，多糖含量為18%，鹽含量為8%，水分含量為3%。

海參提取物得率為41%，蛋白質(zhì)提取率為65%，多糖提取率為80%，腥味突出。

對比例4

（1）冷水泡發(fā)：采用干海參重量25倍的去離子水浸泡葉瓜參；泡發(fā)溫度15℃，泡發(fā)48小時；

（2）清洗：低溫浸泡結(jié)束后，用濕海參重量20倍的去離子水清洗濕海參3次；

（3）酶解：用絞肉機將發(fā)好的海參（sc）絞成肉糜，加入肉糜重量5.5倍的去離子水，加入肉糜重量0.45%的諾維信公司的復(fù)合蛋白酶（protamex）、0.1%風味蛋白酶（flavourzyme500mg），以及0.4%廣州裕立寶生物科技公司的木瓜蛋白酶，55℃酶解7小時，95℃滅酶15分鐘，離心去渣，得上清液；

（4）濃縮與噴霧干燥：55℃減壓濃縮至固形物濃度為30%，加入固形物含量10%的麥芽糊精，噴霧干燥而得葉瓜參提取物。

所得海參提取物中蛋白質(zhì)含量為68%，多糖含量為18%，鹽含量為8%，水分含量為3%。

海參提取物得率為38%，蛋白質(zhì)提取率為60%，多糖提取率為80%，腥味突出。

通過將實施例與對比例進行比較，海參提取物得率顯著提高，蛋白質(zhì)、多糖提取率顯著提高，鹽含量顯著降低，提取效率顯著增加，提取時間顯著縮短，且提取物無腥味。