本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從牛肝臟中提取牛磺酸的方法。
背景技術(shù)：
我國是一個畜牧業(yè)生產(chǎn)大國，生牛飼養(yǎng)量及生產(chǎn)總量一直位居世界前列，據(jù)相關(guān)資料顯示，2008年我國年末存欄牛頭數(shù)為10626.4萬頭，牛肉產(chǎn)量約為613.2萬噸，可食臟器產(chǎn)量約占牛肉產(chǎn)量的10％，其中肝臟產(chǎn)量約為49.1萬噸。2009年，我國牛肉產(chǎn)量約為890萬噸，其中肝臟產(chǎn)量約為71.2萬噸，同比增長了45％。
隨著肉牛養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展及人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，牛肉需求量明顯增加，副產(chǎn)物產(chǎn)量也隨之大量增加，因受傳統(tǒng)飲食習(xí)慣的影響，“副產(chǎn)物不當肉”，是人們傳統(tǒng)的消費以及飲食觀念，至今也無多大改變，作為生牛屠宰的副產(chǎn)品-牛的肝臟被視為下品，上不了筵席，很少有人問津，附加值非常低，而牛肝臟中富含大量的?；撬?，如不合理利用，既浪費了寶貴的資源，又污染了環(huán)境，?；撬崾且环N含硫的β-氨基酸，分子量為125.15，熔點328℃(317℃分解)，單斜棱形棒狀白色晶體，?；撬釓V泛分布于水藻及動物體內(nèi)，?；撬嵩趧游矬w內(nèi)主要分布于一些易興奮組織內(nèi)，如肝臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜、骨骼肌和心臟等組織，?；撬崮苡绊憴C體脂類的消化吸收、影響蛋白質(zhì)和氨基酸代謝、影響糖代謝、影響礦物元素代謝、?；撬徇€可以促進巨噬細胞產(chǎn)生白細胞介素-iv，加強中性粒細胞的吞噬殺菌功能，提高人和動物的非特異性和特異性免疫功能，是機體腸道內(nèi)雙歧菌的促生因子，優(yōu)化腸道內(nèi)細菌群結(jié)構(gòu)維持機體正常的生殖功能，還具有抗氧化、延緩衰老作用，能夠促進急性肝炎恢復(fù)正常，還可鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和消炎，對凍傷、kcn中毒及偏頭疼也有防治作用，能運用于食品添加劑、醫(yī)藥、化妝品、護膚品等行業(yè)，具有較高的的開發(fā)價值。
目前從我國肝臟加工現(xiàn)狀來看，肉牛屠宰后產(chǎn)生的肝臟大部分作為原料直接上市，少部分初級加工成食品添加輔料、飼料等，以原料或初級加工品銷售，價格均不高，使得企業(yè)獲利極少，在我國大量畜禽副產(chǎn)物未被充分利用且畜禽副產(chǎn)物提取純化技術(shù)水平落后的前提下，開發(fā)臟器生化制品已經(jīng)成為動物源性產(chǎn)品的新興產(chǎn)業(yè)和主流趨勢，且生化制品價格相對較高，為企業(yè)開辟了一條新的增效途徑。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題，提供了一種從牛肝臟中提取?；撬岬姆椒?。
具體是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：
一種從牛肝臟中提取?；撬岬姆椒ǎㄒ韵虏襟E：
(1)牛肝預(yù)處理：去除牛肝上的結(jié)締組織，洗凈后剁碎，加入牛肝質(zhì)量的3～6％的復(fù)合酶1，拌勻放置120～180min后，加入牛肝質(zhì)量的8～10倍的蒸餾水，在溫度1下水浴加熱10～15h，得料1；
(2)精制：將料1和蛋白沉降劑按1∶0.08～0.12的質(zhì)量比混合，調(diào)節(jié)混合料的ph值為4～4.5，在溫度2下水浴加熱2～4h，得料2；
(3)除雜：將料2取出，過濾，將濾液與復(fù)合酶2按1∶1.2～1.5的質(zhì)量比混合，拌勻靜置6～8h，離心取上清液，將上清液通過陽離子交換樹脂，得料3；
(4)提?。簩⒘?用超聲處理8～12min后，加入料3質(zhì)量的3～4倍的乙醇，待結(jié)晶析出后，再用無水乙醇重結(jié)晶，烘干即可。
所述的復(fù)合酶1，是胰蛋白酶、組織蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶按0.5～1.2∶1～1.8∶0.2～0.6的質(zhì)量比混合。
所述的溫度1為85～88℃。
所述的蛋白沉降劑，是將含量為20～30％的磺基水楊酸溶液和濃度為0.18～0.22％的鹽水溶液按0.8～1.2∶1.2～1.8的質(zhì)量比混合制得。
所述的溫度2溫度為65～75℃。
所述的復(fù)合酶2，是將木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2～0.4∶0.8～1.2的質(zhì)量比混合。
所述的離心，其轉(zhuǎn)速為3300～3800r/min。
所述的超聲，其頻率為45～55khz。
所述的烘干，其烘干溫度為120～140℃。
所述的乙醇，其濃度≥75％。
綜上所述，本發(fā)明的有益效果在于：采用本發(fā)明的提取方法，有效的提高牛肝臟中牛磺酸的提取率，?；撬岬奶崛÷蔬_到93.6％，純度達98.5％以上，顯著的提高了?；撬崞焚|(zhì)，有效的滿足目前市場對天然?；撬岬男枨?，有效提升?；撬岬乃幱脙r值。
其中，通過對牛肝臟的預(yù)處理步驟，添加了復(fù)合酶，有效的水解肝臟中的蛋白質(zhì)，有效的為后期的?；撬岷偷鞍踪|(zhì)的分離提供保證；利用蛋白質(zhì)為兩性物質(zhì)的特性，在酸性環(huán)境中帶正電荷，而磺基水楊酸根帶負電，正負結(jié)合，有效的使得蛋白質(zhì)得到聚沉，另外蛋白質(zhì)表面有一層水膜將蛋白質(zhì)分子彼此隔開，通過合適濃度的鹽離子破壞了這層水膜，使得蛋白質(zhì)分子發(fā)生凝聚沉淀，從而達到降低蛋白質(zhì)含量的目的；通過復(fù)合酶2的作用，進一步將蛋白質(zhì)進行水解，降低其含量，進一步提高?；撬岬募兌?。
具體實施方式
下面對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細的說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施方式，任何在本實施例基本精神上的改進或代替，仍屬于本發(fā)明權(quán)利要求所要求保護的范圍。
實施例1
一種從牛肝臟中提取?；撬岬姆椒?，包括以下步驟：
(1)牛肝預(yù)處理：去除牛肝上的結(jié)締組織，洗凈后剁碎，加入牛肝質(zhì)量的3％的復(fù)合酶1，拌勻放置120min后，加入牛肝質(zhì)量的8倍的蒸餾水，在85℃下水浴加熱10h，得料1；
所述的復(fù)合酶1，是胰蛋白酶、組織蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶按0.5∶1∶0.2的質(zhì)量比混合；
(2)精制：將料1和蛋白沉降劑按1∶0.08～的質(zhì)量比混合，調(diào)節(jié)混合料的ph值為4～4.5，在65℃下水浴加熱2～4h，得料2；
所述的蛋白沉降劑，是將含量為20％的磺基水楊酸溶液和濃度為0.18％的鹽水溶液按0.8∶1.2的質(zhì)量比混合制得；
(3)除雜：將料2取出，過濾，將濾液與復(fù)合酶2按1∶1.2的質(zhì)量比混合，拌勻靜置6～8h，在3300r/min的轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，將上清液通過陽離子交換樹脂，得料3；
所述的復(fù)合酶2，是將木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2∶0.8的質(zhì)量比混合；
(4)提?。簩⒘?用超聲處理8min后，加入料3質(zhì)量的3倍的乙醇，待結(jié)晶析出后，再用無水乙醇重結(jié)晶，烘干即可。
實施例2
一種從牛肝臟中提取?；撬岬姆椒ǎㄒ韵虏襟E：
(1)牛肝預(yù)處理：去除牛肝上的結(jié)締組織，洗凈后剁碎，加入牛肝質(zhì)量的6％的復(fù)合酶1，拌勻放置180min后，加入牛肝質(zhì)量的10倍的蒸餾水，在88℃下水浴加熱15h，得料1；
所述的復(fù)合酶1，是胰蛋白酶、組織蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶按1.2∶1.8∶0.6的質(zhì)量比混合；
(2)精制：將料1和蛋白沉降劑按1∶0.12的質(zhì)量比混合，調(diào)節(jié)混合料的ph值為4～4.5，在75℃下水浴加熱2～4h，得料2；
所述的蛋白沉降劑，是將含量為30％的磺基水楊酸溶液和濃度為0.22％的鹽水溶液按1.2∶1.8的質(zhì)量比混合制得；
(3)除雜：將料2取出，過濾，將濾液與復(fù)合酶2按1∶1.5的質(zhì)量比混合，拌勻靜置6～8h，在3800r/min的轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，將上清液通過陽離子交換樹脂，得料3；
所述的復(fù)合酶2，是將木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.4∶1.2的質(zhì)量比混合；
(4)提?。簩⒘?用超聲處理12min后，加入料3質(zhì)量的4倍的乙醇，待結(jié)晶析出后，再用無水乙醇重結(jié)晶，烘干即可。
實施例3
一種從牛肝臟中提取牛磺酸的方法，包括以下步驟：
(1)牛肝預(yù)處理：去除牛肝上的結(jié)締組織，洗凈后剁碎，加入牛肝質(zhì)量的5％的復(fù)合酶1，拌勻放置150min后，加入牛肝質(zhì)量的9倍的蒸餾水，在87℃下水浴加熱13h，得料1；
所述的復(fù)合酶1，是胰蛋白酶、組織蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶按0.8∶1.5∶0.4的質(zhì)量比混合；
(2)精制：將料1和蛋白沉降劑按1∶0.1的質(zhì)量比混合，調(diào)節(jié)混合料的ph值為4～4.5，在70℃下水浴加熱2～4h，得料2；
所述的蛋白沉降劑，是將含量為25％的磺基水楊酸溶液和濃度為0.2％的鹽水溶液按1∶1.5的質(zhì)量比混合制得；
(3)除雜：將料2取出，過濾，將濾液與復(fù)合酶2按1∶1.3的質(zhì)量比混合，拌勻靜置6～8h，在3500r/min的轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，將上清液通過陽離子交換樹脂，得料3；
所述的復(fù)合酶2，是將木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.3∶1的質(zhì)量比混合；
(4)提?。簩⒘?用超聲處理10min后，加入料3質(zhì)量的3.5倍的乙醇，待結(jié)晶析出后，再用無水乙醇重結(jié)晶，烘干即可。
實施例4
一種從牛肝臟中提取牛磺酸的方法，包括以下步驟：
(1)牛肝預(yù)處理：去除牛肝上的結(jié)締組織，洗凈后剁碎，加入牛肝質(zhì)量的3％的復(fù)合酶1，拌勻放置180min后，加入牛肝質(zhì)量的8倍的蒸餾水，在88℃下水浴加熱10h，得料1；
所述的復(fù)合酶1，是胰蛋白酶、組織蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶按1.2∶1∶0.6的質(zhì)量比混合；
(2)精制：將料1和蛋白沉降劑按1∶0.08的質(zhì)量比混合，調(diào)節(jié)混合料的ph值為4.5，在75℃下水浴加熱2h，得料2；
所述的蛋白沉降劑，是將含量為20％的磺基水楊酸溶液和濃度為0.22％的鹽水溶液按1.2∶1.8的質(zhì)量比混合制得；
(3)除雜：將料2取出，過濾，將濾液與復(fù)合酶2按1∶1.5的質(zhì)量比混合，拌勻靜置6h，在3300r/min的轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，將上清液通過陽離子交換樹脂，得料3；
所述的復(fù)合酶2，是將木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2∶1.2的質(zhì)量比混合；
(4)提取：將料3用超聲處理8min后，加入料3質(zhì)量的4倍的乙醇，待結(jié)晶析出后，再用無水乙醇重結(jié)晶，烘干即可。
實施例5
一種從牛肝臟中提取牛磺酸的方法，包括以下步驟：
(1)牛肝預(yù)處理：去除牛肝上的結(jié)締組織，洗凈后剁碎，加入牛肝質(zhì)量的5％的復(fù)合酶1，拌勻放置120min后，加入牛肝質(zhì)量的10倍的蒸餾水，在85℃下水浴加熱15h，得料1；
所述的復(fù)合酶1，是胰蛋白酶、組織蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶按0.8∶1∶0.6的質(zhì)量比混合；
(2)精制：將料1和蛋白沉降劑按1∶0.08的質(zhì)量比混合，調(diào)節(jié)混合料的ph值為4.5，在75℃下水浴加熱2～4h，得料2；
所述的蛋白沉降劑，是將含量為20％的磺基水楊酸溶液和濃度為0.18％的鹽水溶液按1.2∶1.5的質(zhì)量比混合制得；
(3)除雜：將料2取出，過濾，將濾液與復(fù)合酶2按1∶1.5的質(zhì)量比混合，拌勻靜置8h，在3800r/min的轉(zhuǎn)速下離心，取上清液，將上清液通過陽離子交換樹脂，得料3；
所述的復(fù)合酶2，是將木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.4∶0.8的質(zhì)量比混合；
(4)提?。簩⒘?用超聲處理12min后，加入料3質(zhì)量的3倍的乙醇，待結(jié)晶析出后，再用無水乙醇重結(jié)晶，烘干即可。
實驗例
分別對本發(fā)明對牛磺酸的提取率以及純度進行統(tǒng)計，以傳統(tǒng)對牛磺酸的提取方法作為對照，結(jié)果如表1所示：
表1