本發(fā)明涉及蛋白提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種提取牛血清蛋白的方法。
背景技術(shù)：
：畜禽血液是畜禽重要的副產(chǎn)品之一，內(nèi)含豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和多種生物活性物質(zhì)，血清蛋白是血漿里最豐富的蛋白質(zhì)，是血液中脂肪酸的攜帶者，每一個(gè)蛋白分子能攜帶七個(gè)脂肪酸分子，這些脂肪酸分子結(jié)合在蛋白的縫隙中，它們富含碳的尾部埋藏在里面安全地避開(kāi)周?chē)乃肿?，脂肪酸是建造脂質(zhì)的成分，而脂質(zhì)又構(gòu)成了細(xì)胞周?chē)图?xì)胞內(nèi)所有的生物膜，脂肪酸又是能量的重要來(lái)源，脂肪酸還是脂溶性維生素的載體，當(dāng)身體需要能量或者需要建造材料時(shí)，脂肪細(xì)胞就把脂肪酸釋放到血液中，脂肪酸被血清蛋白獲取，并被運(yùn)送到需要的部位，血清蛋白同樣能夠攜帶許多其它的不溶于水的分子，正因?yàn)檠宓鞍资侨绱似毡榈卮嬖谟谘褐胁⑶胰菀妆惶峒?，所以它成為科學(xué)家最早研究的蛋白質(zhì)之一，牛血清蛋白作為一種功能因子，廣泛應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、診斷試劑、食品乳化等方面，能提高人體t淋巴細(xì)胞數(shù)量和抗氧化活性，具有極大的醫(yī)學(xué)開(kāi)發(fā)價(jià)值。牛血清中白蛋白的制備方法很多，主要采用鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法和熱激法提取，鹽析法用硫酸銨分級(jí)沉淀后，經(jīng)辛酸處理精制而得；有機(jī)溶劑沉淀法最早用于人血液制品的生產(chǎn)，利用乙醇的低介電常數(shù)性質(zhì)以及蛋白質(zhì)在一定溫度、ph、離子強(qiáng)度及濃度條件下在不同濃度乙醇中的溶解度不同分離血漿蛋白質(zhì)，可以生產(chǎn)出多種血漿蛋白；熱激法是取牛血用枸櫞酸鈉抗凝離心后得到血漿，加熱，加入辛酸鈉，調(diào)ph值后加乙醇，再經(jīng)過(guò)濾、脫鹽、濃縮、凍干后得牛血清中白蛋白，但是，現(xiàn)有的用于制備牛血清白蛋白的方法所得的牛血清白蛋白收率或純度都比較低，且所提取的牛血清白蛋白中含有較高濃度的雜質(zhì)例如脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及內(nèi)毒素，這類雜質(zhì)限制了牛血清白蛋白的進(jìn)一步應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供了一種提取牛血清蛋白的方法。具體是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種提取牛血清蛋白的方法，包括以下步驟：(1)從牛靜脈處收集新鮮牛血液，經(jīng)血液分離機(jī)分離成血細(xì)胞和血漿，在血漿中加入血漿質(zhì)量的20～30％的蛋白沉降劑，分離，得固體蛋白料和溶液料；(2)固體蛋白料處理：將固體蛋白料加水?dāng)嚢瑁玫鞍兹芤?，加入固體蛋白料質(zhì)量的12～18％的抗凝劑，攪拌搖勻，離心，取上清液，加入鹽酸調(diào)節(jié)上清液ph值為4.5～5，加入上清液質(zhì)量4～8％的脫水劑，拌勻，靜置，離心取沉淀，烘干得料1；(3)溶液料處理：將溶液料、分散劑、氧化劑按1.2～1.8∶0.1～0.2∶0.35～0.45的質(zhì)量比混合，得混合料，進(jìn)行氧化處理，再加入混合料質(zhì)量的0.12～0.15％的金屬劑，離心，取上清液，再加入上清液質(zhì)量10～15％的蛋白質(zhì)析出劑，靜置12～18h，離心取沉淀，烘干得料2；(4)將料1和料2混合，得混合料，先用乙醇洗滌混合料2～3次，再用乙醚洗滌2～3次，烘干即可。所述的蛋白沉降劑，是將含量為12～18％的磺基水楊酸水溶液和含量為10～20％的三氯乙酸水溶液按0.8～1.2∶1.2～1.8的質(zhì)量比混合制得。所述的抗凝劑，是將枸櫞酸鈉和濃度為0.012～0.18％的鹽水按1∶0.3～0.6的質(zhì)量比混合。所述的脫水劑，是將甘露醇和甘油按0.2～0.3∶0.12～0.18的質(zhì)量比混合。所述的分散劑是十二烷基硫酸鈉、聚丙烯酰胺和甲基戊醇中的一種。所述的氧化劑，是將濃度為22～28ml/l的臭氧、硫解酶按1.2～1.6∶0.25～0.35的質(zhì)量比混合。所述的氧化處理，是將物料加熱至34～36℃，反應(yīng)時(shí)間為2.5～3.5h。所述的金屬劑，其中鋅離子、鉛離子和鐵離子的質(zhì)量比為0.8～1.2∶0.1～0.2∶0.36～0.48。所述的蛋白質(zhì)析出劑，是將甲醇和乙醇等質(zhì)量混合，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為4.5～5，拌勻即可。綜上所述，本發(fā)明的有益效果在于：采用本發(fā)明的提取方法，有效的提高牛血清蛋白的提取率，牛血清蛋白的提取率達(dá)到95.6％，純度達(dá)99.6％以上，顯著的提高了牛血清蛋白的品質(zhì)，有效的滿足目前市場(chǎng)對(duì)牛血清蛋白的需求，有效提升牛血清蛋白的藥用價(jià)值。其中，先對(duì)血液進(jìn)行血漿和血細(xì)胞的分離，減小提取的難度，先通過(guò)磺基水楊酸和三氯乙酸按合適濃度配比制成蛋白沉降劑，通過(guò)所帶的正負(fù)電荷之間的結(jié)合作用，使得血漿中的蛋白質(zhì)大部分沉降下來(lái)，再通過(guò)枸櫞酸鈉和鹽水制成的抗凝劑，形成可溶性螯合物，增大溶液的滲透壓，避免纖維蛋白原形成纖維蛋白，避免的血漿的凝固，同時(shí)，也破壞了血漿中的纖維蛋白原，為提高牛血清蛋白的純度提供基礎(chǔ)；在對(duì)溶液料處理時(shí)，其中還含有部分的蛋白質(zhì)和大量的雜質(zhì)，因此，將溶液料進(jìn)行氧化處理，通過(guò)調(diào)控氧化的是將的溫度，以及采用合適的氧化劑，使得血漿中的脂肪酸得到最大限度的氧化分解，提高牛血清蛋白的純度，再通過(guò)特定的金屬對(duì)酶的特定破壞的情況，采用合適比例的金屬，有效的去除血漿中原有的蛋白酶、核酸酶等雜質(zhì)，進(jìn)一步提高了牛血清蛋白的純度。具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施方式，任何在本實(shí)施例基本精神上的改進(jìn)或代替，仍屬于本發(fā)明權(quán)利要求所要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例1一種提取牛血清蛋白的方法，包括以下步驟：(1)從牛靜脈處收集新鮮牛血液，經(jīng)血液分離機(jī)分離成血細(xì)胞和血漿，在血漿中加入血漿質(zhì)量的20％的蛋白沉降劑，分離，得固體蛋白料和溶液料；所述的蛋白沉降劑，是將含量為12％的磺基水楊酸水溶液和含量為10％的三氯乙酸水溶液按0.8∶1.2的質(zhì)量比混合制得；(2)固體蛋白料處理：將固體蛋白料加水?dāng)嚢?，得蛋白溶液，加入固體蛋白料質(zhì)量的12％的抗凝劑，攪拌搖勻，離心，取上清液，加入鹽酸調(diào)節(jié)上清液ph值為4.5，加入上清液質(zhì)量4％的脫水劑，拌勻，靜置，離心取沉淀，烘干得料1；所述的抗凝劑，是將枸櫞酸鈉和濃度為0.012％的鹽水按1∶0.3的質(zhì)量比混合；所述的脫水劑，是將甘露醇和甘油按0.2∶0.12的質(zhì)量比混合；(3)溶液料處理：將溶液料、十二烷基硫酸鈉、氧化劑按1.2∶0.1∶0.35的質(zhì)量比混合，得混合料，將混合料加熱至34℃，反應(yīng)時(shí)間為2.5h，再加入混合料質(zhì)量的0.12％的金屬劑，離心，取上清液，再加入上清液質(zhì)量10％的蛋白質(zhì)析出劑，靜置12h，離心取沉淀，烘干得料2；所述的氧化劑，是將濃度為22ml/l的臭氧、硫解酶按1.2∶0.25的質(zhì)量比混合；所述的金屬劑，其中鋅離子、鉛離子和鐵離子的質(zhì)量比為0.8∶0.1∶0.36；所述的蛋白質(zhì)析出劑，是將甲醇和乙醇等質(zhì)量混合，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為4.5，拌勻即可；(4)將料1和料2混合，得混合料，先用乙醇洗滌混合料2～3次，再用乙醚洗滌2～3次，烘干即可。實(shí)施例2一種提取牛血清蛋白的方法，包括以下步驟：(1)從牛靜脈處收集新鮮牛血液，經(jīng)血液分離機(jī)分離成血細(xì)胞和血漿，在血漿中加入血漿質(zhì)量的30％的蛋白沉降劑，分離，得固體蛋白料和溶液料；所述的蛋白沉降劑，是將含量為18％的磺基水楊酸水溶液和含量為20％的三氯乙酸水溶液按1.2∶1.8的質(zhì)量比混合制得；(2)固體蛋白料處理：將固體蛋白料加水?dāng)嚢?，得蛋白溶液，加入固體蛋白料質(zhì)量的18％的抗凝劑，攪拌搖勻，離心，取上清液，加入鹽酸調(diào)節(jié)上清液ph值為5，加入上清液質(zhì)量8％的脫水劑，拌勻，靜置，離心取沉淀，烘干得料1；所述的抗凝劑，是將枸櫞酸鈉和濃度為0.18％的鹽水按1∶0.6的質(zhì)量比混合；所述的脫水劑，是將甘露醇和甘油按0.3∶0.18的質(zhì)量比混合；(3)溶液料處理：將溶液料、聚丙烯酰胺、氧化劑按1.8∶0.2∶0.45的質(zhì)量比混合，得混合料，將混合料加熱至36℃，反應(yīng)時(shí)間為3.5h，再加入混合料質(zhì)量的0.15％的金屬劑，離心，取上清液，再加入上清液質(zhì)量15％的蛋白質(zhì)析出劑，靜置18h，離心取沉淀，烘干得料2；所述的氧化劑，是將濃度為28ml/l的臭氧、硫解酶按1.6∶0.35的質(zhì)量比混合；所述的金屬劑，其中鋅離子、鉛離子和鐵離子的質(zhì)量比為1.2∶0.2∶0.48；所述的蛋白質(zhì)析出劑，是將甲醇和乙醇等質(zhì)量混合，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為5，拌勻即可；(4)將料1和料2混合，得混合料，先用乙醇洗滌混合料2～3次，再用乙醚洗滌2～3次，烘干即可。實(shí)施例3一種提取牛血清蛋白的方法，包括以下步驟：(1)從牛靜脈處收集新鮮牛血液，經(jīng)血液分離機(jī)分離成血細(xì)胞和血漿，在血漿中加入血漿質(zhì)量的25％的蛋白沉降劑，分離，得固體蛋白料和溶液料；所述的蛋白沉降劑，是將含量為15％的磺基水楊酸水溶液和含量為15％的三氯乙酸水溶液按1∶1.5的質(zhì)量比混合制得；(2)固體蛋白料處理：將固體蛋白料加水?dāng)嚢?，得蛋白溶液，加入固體蛋白料質(zhì)量的15％的抗凝劑，攪拌搖勻，離心，取上清液，加入鹽酸調(diào)節(jié)上清液ph值為4.8，加入上清液質(zhì)量6％的脫水劑，拌勻，靜置，離心取沉淀，烘干得料1；所述的抗凝劑，是將枸櫞酸鈉和濃度為0.015％的鹽水按1∶0.5的質(zhì)量比混合；所述的脫水劑，是將甘露醇和甘油按0.25∶0.15的質(zhì)量比混合；(3)溶液料處理：將溶液料、甲基戊醇、氧化劑按1.5∶0.15∶0.4的質(zhì)量比混合，得混合料，將混合料加熱至35℃，反應(yīng)時(shí)間為3h，再加入混合料質(zhì)量的0.13％的金屬劑，離心，取上清液，再加入上清液質(zhì)量13％的蛋白質(zhì)析出劑，靜置15h，離心取沉淀，烘干得料2；所述的氧化劑，是將濃度為5ml/l的臭氧、硫解酶按1.4∶0.3的質(zhì)量比混合；所述的金屬劑，其中鋅離子、鉛離子和鐵離子的質(zhì)量比為1∶0.15∶0.42；所述的蛋白質(zhì)析出劑，是將甲醇和乙醇等質(zhì)量混合，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為4.8，拌勻即可；(4)將料1和料2混合，得混合料，先用乙醇洗滌混合料2～3次，再用乙醚洗滌2～3次，烘干即可。實(shí)施例4一種提取牛血清蛋白的方法，包括以下步驟：(1)從牛靜脈處收集新鮮牛血液，經(jīng)血液分離機(jī)分離成血細(xì)胞和血漿，在血漿中加入血漿質(zhì)量的20％的蛋白沉降劑，分離，得固體蛋白料和溶液料；所述的蛋白沉降劑，是將含量為18％的磺基水楊酸水溶液和含量為20％的三氯乙酸水溶液按1∶1.2的質(zhì)量比混合制得；(2)固體蛋白料處理：將固體蛋白料加水?dāng)嚢瑁玫鞍兹芤?，加入固體蛋白料質(zhì)量的12％的抗凝劑，攪拌搖勻，離心，取上清液，加入鹽酸調(diào)節(jié)上清液ph值為5，加入上清液質(zhì)量4％的脫水劑，拌勻，靜置，離心取沉淀，烘干得料1；所述的抗凝劑，是將枸櫞酸鈉和濃度為0.18％的鹽水按1∶0.3的質(zhì)量比混合；所述的脫水劑，是將甘露醇和甘油按0.2∶0.15的質(zhì)量比混合；(3)溶液料處理：將溶液料、聚丙烯酰胺、氧化劑按1.2∶0.1∶0.45的質(zhì)量比混合，得混合料，將混合料加熱至34℃，反應(yīng)時(shí)間為3.5h，再加入混合料質(zhì)量的0.12％的金屬劑，離心，取上清液，再加入上清液質(zhì)量15％的蛋白質(zhì)析出劑，靜置12h，離心取沉淀，烘干得料2；所述的氧化劑，是將濃度為22ml/l的臭氧、硫解酶按1.6∶0.35的質(zhì)量比混合；所述的金屬劑，其中鋅離子、鉛離子和鐵離子的質(zhì)量比為1.2∶0.1∶0.4；所述的蛋白質(zhì)析出劑，是將甲醇和乙醇等質(zhì)量混合，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為5，拌勻即可；(4)將料1和料2混合，得混合料，先用乙醇洗滌混合料2～3次，再用乙醚洗滌2～3次，烘干即可。實(shí)施例5一種提取牛血清蛋白的方法，包括以下步驟：(1)從牛靜脈處收集新鮮牛血液，經(jīng)血液分離機(jī)分離成血細(xì)胞和血漿，在血漿中加入血漿質(zhì)量的20％的蛋白沉降劑，分離，得固體蛋白料和溶液料；所述的蛋白沉降劑，是將含量為12％的磺基水楊酸水溶液和含量為20％的三氯乙酸水溶液按1.2∶1.2的質(zhì)量比混合制得；(2)固體蛋白料處理：將固體蛋白料加水?dāng)嚢?，得蛋白溶液，加入固體蛋白料質(zhì)量的18％的抗凝劑，攪拌搖勻，離心，取上清液，加入鹽酸調(diào)節(jié)上清液ph值為5，加入上清液質(zhì)量4％的脫水劑，拌勻，靜置，離心取沉淀，烘干得料1；所述的抗凝劑，是將枸櫞酸鈉和濃度為0.18％的鹽水按1∶0.6的質(zhì)量比混合；所述的脫水劑，是將甘露醇和甘油按0.3∶0.12的質(zhì)量比混合；(3)溶液料處理：將溶液料、十二烷基硫酸鈉、氧化劑按1.5∶0.2∶0.35的質(zhì)量比混合，得混合料，將混合料加熱至34℃，反應(yīng)時(shí)間為3.5h，再加入混合料質(zhì)量的0.12％的金屬劑，離心，取上清液，再加入上清液質(zhì)量15％的蛋白質(zhì)析出劑，靜置12h，離心取沉淀，烘干得料2；所述的氧化劑，是將濃度為22ml/l的臭氧、硫解酶按1.2∶0.35的質(zhì)量比混合；所述的金屬劑，其中鋅離子、鉛離子和鐵離子的質(zhì)量比為1.2∶0.1∶0.48；所述的蛋白質(zhì)析出劑，是將甲醇和乙醇等質(zhì)量混合，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為4.5，拌勻即可；(4)將料1和料2混合，得混合料，先用乙醇洗滌混合料2～3次，再用乙醚洗滌2～3次，烘干即可。實(shí)驗(yàn)例分別對(duì)本發(fā)明對(duì)牛血清蛋白的提取率以及純度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以傳統(tǒng)對(duì)牛血清蛋白的提取方法作為對(duì)照，結(jié)果如表1所示：表1項(xiàng)目本發(fā)明方法傳統(tǒng)方法平均提取率％95.693.2純度％99.699.3當(dāng)前第1頁(yè)12