本發(fā)明涉及一種芒果核鞣花酸的制備方法，屬于食品技術(shù)及生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鞣花酸(ellagicacid)是沒食子酸的二聚衍生物，屬于鞣花酸類化合物，存在于多種植物的果實(shí)中。近幾年，鞣花酸因其具有顯著的抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、增強(qiáng)免疫生理活性、美白等而受到人們的關(guān)注。
目前，鞣花酸的制備方法主要有以下幾種方法：
(1)植物提取方法：從植物中提取鞣花酸。自然界中，紅木莓、草莓、石榴以及蕨類等植物中含有少量鞣花酸((1％)。目前，國際上有公司以草莓、石榴為原料，可生產(chǎn)出含量為5-40％左右的天然鞣花酸提取物，用于食品添加劑，但難以生產(chǎn)高純度的鞣花酸，由于受原料成本較高，且原料中鞣花酸含量的限制而意義不大。雖然歐洲專利(ep0390107a2kiyoshim.，yasuhikoi.，katsumiy.，etal)公開了另一種方法制備含量為50-60％的鞣花酸，以五倍子為原料，用甲醇提取，但是五倍子是動(dòng)物的蟲瘦，雖屬于中藥但是僅限于外用，因此，以五倍子為生產(chǎn)原料制備的鞣花酸不能用于食品添加劑。得到的鞣花酸品質(zhì)較低，外觀與顏色較差；再加上述方法步驟繁多，周期長，生產(chǎn)成本高，不易大規(guī)模投產(chǎn)。中國專利(200810073982.1)公開了一種高純度的鞣花酸的制備方法，以塔拉粉為原料經(jīng)純凈水或50-90％乙醇或甲醇水溶液提取、通過濃硫酸或雙氧水水解、使用二乙胺或三乙胺純化、結(jié)晶，可以得到高純度鞣花酸，但用到強(qiáng)酸等腐蝕性試劑，步驟繁瑣。
(2)化學(xué)合成方法：由于沒食子酸或沒食子酸酯通過酶作用下的氧化聚合作用制取鞣花酸，這一鞣花酸的制備方法，產(chǎn)率為20-30％，但所用的沒食子酸(酯)本身的制備過程十分繁瑣復(fù)雜，酶也需要精制純化，而且產(chǎn)物中還有一種未知的醌類物質(zhì)，其與鞣花酸的比例為1∶2.4，為產(chǎn)品的分離純化帶來了很大困難，因此目前較少用此法進(jìn)行鞣花酸的生產(chǎn)。
芒果屬于性平味甘、解渴生津的果品，有益胃、止嘔、防暈的功效。芒果中含有的芒果苷具有明顯的抗過氧化、保護(hù)腦神經(jīng)元和祛痰止咳的功效。
廣西作為我國生產(chǎn)芒果為數(shù)不多的主要省份之一，更是具有芒果資源豐富，品種繁多等優(yōu)勢，但是目前市場上主要還是以產(chǎn)地鮮銷為主，少量加工成果汁、果脯以及果肉為輔外，芒果深加工產(chǎn)業(yè)亟待需要進(jìn)一步發(fā)展。在芒果生產(chǎn)加工中的廢棄物，在過去常被丟棄或者飼養(yǎng)牲畜。近年來，人們逐漸對(duì)芒果廢棄物進(jìn)行研究，包括芒果葉、芒果皮、芒果核、芒果樹皮等，尤其是占芒果總重20-60％的芒果核獲得大部分研究者和企業(yè)家的關(guān)注。
據(jù)報(bào)道，芒果核富含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酚類、黃酮、多糖、有機(jī)酸、皂苷、鞣質(zhì)、黃酮、蒽醌、生物堿、香豆素與內(nèi)酯、三萜及甾體、生物堿、揮發(fā)油及油脂等多種活性成分。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了充分利用自然資源，尤其是廣西特色果蔬資源，課題組研究發(fā)現(xiàn)芒果中芒果甙和鞣花酸含量較高，為了得到純度和含量較高核鞣花酸，本發(fā)明提供了一種芒果核鞣花酸制備方法。本發(fā)明方法是經(jīng)過醇提取及大孔樹脂、硅膠柱層析純化方法制備得到了純度高、含量高的芒果核鞣花酸，且所用試劑安全無毒，得到的產(chǎn)品是食品安全的，具有廣泛的應(yīng)用前景。
本發(fā)明的芒果核鞣花酸的制備方法，是先將芒果核干燥粉碎，用乙醇提取后濃縮得到提取液浸膏，再用乙醇溶解并用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，從大孔吸附樹脂上得到醇濃度40-70％(v/v)的乙醇溶液洗脫的含有鞣花酸組分的洗脫液；再利用硅膠柱層析進(jìn)行分離，得到含有鞣花酸的餾分，餾分經(jīng)去溶劑、濃縮或干燥得到鞣花酸提取物。
在一種實(shí)施方式中，所述方法包括以下步驟：
(1)將芒果核干燥粉碎；
(2)用醇濃度20-90％(v/v)的乙醇溶液作為溶劑對(duì)步驟(1)中得到的芒果核干燥粉末進(jìn)行提取，然后將得到的提取液減壓濃縮或真空冷凍干燥至浸膏；
(3)將步驟(2)中得到的浸膏用水或醇濃度小于50％(v/v)的乙醇溶液溶解，除去不溶物，得到大孔吸附樹脂上樣溶液；
(4)取非極性或弱極性大孔吸附樹脂，將步驟(3)得到的上樣溶液上樣，先用水洗去雜質(zhì)，然后用醇濃度40-70％(v/v)的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；所述大孔吸附樹脂和芒果核干燥粉末重量比為1:0.5-1:20；
(5)將步驟(4)收集的洗脫液減壓濃縮或真空冷凍干燥至浸膏，浸膏用水或醇濃度小于50％(v/v)的乙醇溶液溶解，除去不溶物，得到硅膠柱上樣溶液；然后進(jìn)行硅膠柱層析結(jié)合薄層色譜分析，得到含有鞣花酸的餾分，并減壓濃縮或真空冷凍干燥；得到芒果核鞣花酸提取物。
在一種實(shí)施方式中，步驟(2)中提取方法為每千克芒果核粉末加入2-50l醇濃度為30％-80％的乙醇溶液，熱回流或浸漬或浸漉提取2-5次，合并提取液；其中熱回流提取時(shí)每次提取1-3h，浸漬或浸漉提取時(shí)每次提取10-15天。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，乙醇濃度為40％-60％。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，料液比(芒果核粉末質(zhì)量與乙醇溶液之比，m/v)為1:1-1:40，優(yōu)選1:5-1:30，更優(yōu)選地為1:15-1:25。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(3)中浸膏的溶解所用的水或乙醇溶液的重量為浸膏重量的3-50倍。
在一種實(shí)施方式中，步驟(3)的提取方法如下：將步驟(2)中得到的浸膏用10倍浸膏重量的水或者10％乙醇溶液溶解，除去不溶物后得到上樣溶液。
在一種實(shí)施方式中，步驟(3)的除去不溶物，是采用過濾或離心的方法。
在一種實(shí)施方式中，步驟(4)的大孔吸附樹脂的類型選用hpd-722、hpd-826、lx-17、lx-26、lx-28、sp70、sp700、ab-8、dm21或者d101，優(yōu)選大孔樹脂ab-8、dm21、d101，更優(yōu)選地為ab-8。
在一種實(shí)施方式中，步驟(4)中的先用水洗去雜質(zhì)，是指用2-5bv的水進(jìn)行洗脫以除去雜質(zhì)。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(4)的洗脫流速為洗脫液流速1bv/h-10bv/h，優(yōu)選為2bv/h-5bv/h。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(4)中，芒果核粉末質(zhì)量：樹脂質(zhì)量為1:1-10:1。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(5)的硅膠柱層析分離，是將硅膠柱上樣溶液加入到硅膠層析柱中，然后向柱子中不同梯度的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫；其中洗脫劑分別為氯仿：丙酮：甲酸的體積比為95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1、90:9:1的氯仿/丙酮/甲酸混合液；每個(gè)梯度用1～10倍的柱體積洗脫液進(jìn)行洗脫。
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(5)中氯仿/丙酮/甲酸混合液每個(gè)梯度用3倍的柱體積洗脫液進(jìn)行洗脫.
在一種實(shí)施方式中，所述步驟(5)的硅膠柱層析的洗脫步驟，控制流速在2ml/min。
在一種實(shí)施方式中，所述薄層色譜分析所用的展開劑為氯仿：丙酮：甲酸＝9:0.9:0.1或石油醚：丙酮：甲酸＝7.9:2:0.1或石油醚：乙酸乙酯：甲酸＝6:3.9:0.1或環(huán)己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6.9:3:0.1或氯仿：甲醇＝6:1。
本發(fā)明還要求保護(hù)按照所述制備方法或者純化方法得到的芒果核鞣花酸提取物，及其在制備食品、保健品或藥物上的應(yīng)用。
在一種實(shí)施方式中，所述保健品或藥物，是具有美白、抑菌抗氧化活性的保健品或藥物。
本發(fā)明的有益效果：
(1)本發(fā)明提出的一種芒果核制備鞣花酸提取物的方法，芒果核原料采用水醇提取，蒸發(fā)濃縮、大孔吸附樹脂、硅膠柱層析分離方法可得到鞣花酸提取物。得到的提取物中鞣花酸的純度可達(dá)85-88％。
(2)本發(fā)明采用的芒果核原料，在我國有豐富的資源；從芒果核中提取、純化具有生物活性的鞣花酸，變廢為寶，提升了芒果的綜合利用價(jià)值。
(3)本發(fā)明方法工藝簡單，適合大規(guī)模生產(chǎn)。以芒果核為原料生產(chǎn)價(jià)格昂貴的鞣花酸，具有非常廣闊的經(jīng)濟(jì)前景。
附圖說明
圖1為鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)樣品及獲得的鞣花酸提取物的紅外光譜圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容做進(jìn)一步說明，下述實(shí)施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
各實(shí)施例中使用的儀器設(shè)備、化學(xué)試劑以及檢測方法如下：
儀器與設(shè)備：fw100高速萬能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；upc-ⅱ-20t優(yōu)普系列超純水器，四川優(yōu)普超純科技有限公司；sqp電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；zwyr-d2403振蕩培養(yǎng)箱，上海智誠分析儀器制造有限公司；shz-dⅲ予華牌循環(huán)水真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；hhs-6s電子恒溫不銹鋼水浴鍋，上海宜昌儀器紗篩廠；uv1901pc紫外可見分光光度計(jì)，上海奧析科學(xué)儀器有限公司；
化學(xué)試劑：無水碳酸鈉、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、福林酚試劑、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品、各種類型大孔樹脂、硅膠板等均由柳州蘇利有限責(zé)任公司提供。
鞣花酸提取物中鞣花酸純度的測定：
分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液1，5，10，15和20ml于200ml容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成質(zhì)量濃度依次為0.5，2.5，5，7.5和10μg/ml的對(duì)照品稀釋液。以純水為參比，在標(biāo)準(zhǔn)溶液紫外光譜測定的最大吸收波長下，測定不同濃度對(duì)照品溶液的吸光度，重復(fù)測定3次，取其平均值。以鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度(a)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將分離純化獲得的樣品分別配制5.0μg/ml的石榴皮鞣花酸供試品檢測溶液，分別稀釋1000倍后測定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算鞣花酸質(zhì)量濃度，再推算出鞣花酸質(zhì)量，計(jì)算鞣花酸提取液中鞣花酸的純度，即鞣花酸純度＝(提取液中鞣花酸質(zhì)量濃度×稀釋倍數(shù)×提取液體積)/鞣花酸提取液干質(zhì)量*100％。
抗氧化活性的測定：
清除羥基自由基能力測定：分別取不同質(zhì)量濃度的待測樣液于5只試管中，各加入硫酸亞鐵、雙氧水，靜置，10min后加入水楊酸，靜置后在510nm處測定吸光度a1，用蒸餾水替代水楊酸按照上述方法測定吸光度值a2，用蒸餾水代替待測液按上述方法測定吸光度值a0，vc做對(duì)照，按照下列公式求鞣花酸物質(zhì)對(duì)羥自由基的清除率：羥自由基(％)＝[a0-(a1-a2)]/(a0)*100(％)。
dpph清除能力測定：分別取2.0ml不同質(zhì)量濃度(1.0、5.0、10.0、15.0、芒果核活性成分樣液于5只試管中，各加入2mldpph(0.04mg/ml)，靜置20min在517nm檢測吸光度a1；以無水乙醇代替dpph，按照上述方法測定吸光度a2；做空白組按上述方法測定吸光度a0，以vc做對(duì)照，樣品對(duì)dpph自由基的清除率：dpph清除率(％)＝[1-(a1-a2)/a0]*100(％)。
鞣花酸對(duì)彈性蛋白酶抑制率的測定：采用分光光度法測定鞣花酸對(duì)彈性蛋白酶的抑制率。以剛果紅-彈性蛋白為底物，彈性蛋白被酶分解后，剛果紅會(huì)脫落，測定溶液中剛果紅的含量以表征酶活性。以ph8.8硼酸鹽緩沖溶液分別配制不同濃度的鞣花酸、芒果核粗提物溶液。具塞三角燒瓶中依次加入剛果紅-彈性蛋白及硼酸緩沖溶液，置于37℃水浴中預(yù)熱10min，然后加入不同濃度的樣品溶液及0.2mg/ml彈性蛋白酶溶液。將上述反應(yīng)體系置于37℃恒溫水浴振蕩器中振搖20min，立即加入5.0mlph6.0磷酸緩沖溶液混合終止反應(yīng)，于5000r/min下離心15min。準(zhǔn)確吸取上清液2.0ml，加入ph8.8硼酸緩沖液和ph6.0磷酸緩沖液等量混合液2.0ml，充分搖勻并于495nm測定其吸光度，
抑制率計(jì)算公式如下：
抑制率＝(1-(a1-a2)/(b1-b2))×100％
表1反應(yīng)液組成與體積
實(shí)施例1：本發(fā)明的芒果核鞣花酸的粗提取
粗提取：芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20l濃度為50％的乙醇，熱回流提取三次，熱回流提取每次1h，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，過濾出去不溶物，得到上樣溶液，即為芒果核鞣花酸的粗提物。
實(shí)施例2：大孔吸附樹脂、硅膠柱層析純化工藝
(1)大孔吸附樹脂上柱：將實(shí)施例1得到的上樣溶液進(jìn)行大孔吸附樹脂ab-8的上柱，控制流出液流速為0.5bv/h，上樣量與樹脂ab-8體積比為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床。
(2)大孔吸附樹脂的乙醇洗脫：處理好的ab-8樹脂20ml于柱內(nèi)，加芒果核鞣花酸提取液于柱頂，以0.5bv/h的流速進(jìn)行吸附后，再用5bv的70％乙醇以2bv/h流速進(jìn)行單獨(dú)洗脫，按照樹脂體積流出收集洗脫液。
(3)硅膠柱層析：
上樣：稱取從大孔吸附樹脂中經(jīng)70％體積濃度乙醇洗脫流出液真空干燥后的樣品，將樣品用盡可能少量的乙醇溶解，并加入少量100-200目的硅膠拌拌勻，然后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至乙醇揮發(fā)后，將混有樣品的硅膠倒入裝好的硅膠層析柱中，使樣品表面平整，并在樣品表面再覆蓋上一層石英砂，以防在添加洗脫劑時(shí)樣品被沖散。其中真空干燥后的樣品與硅膠總質(zhì)量比為1:100～1:130。
過柱及洗脫收集：當(dāng)上樣結(jié)束后，就向柱子中不同梯度的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫(氯仿：丙酮：甲酸＝95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1、90:9:1)，每個(gè)梯度用3倍的柱體積洗脫液進(jìn)行洗脫，控制流速在2ml/min，每15-20ml左右接一個(gè)餾分。在低于40℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收洗脫溶劑，樣品備用。
硅膠層析柱分離組分的定性鑒定：將收集好的分離組分，通過硅膠薄層層析板檢測收集的組分是否為同一組分，同一組分則合并，合并完成后，采用10％的硫酸-乙醇溶液以及碘進(jìn)行顯色反應(yīng)來初步定性判定各洗脫組分。
結(jié)果顯示，將經(jīng)硅膠層析柱分離的含有鞣花酸餾分干燥，得到的鞣花酸提取物中鞣花酸的純度為85-88％。
如圖1所示，為鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)樣品及獲得的鞣花酸提取物的紅外光譜圖。從紅外圖譜中可以看出主要吸收峰[ir(kbr)]/cm-1：2955，2925，1699，1618，1583，1512，1451，1397，1340，1259，1196，1112，1056，924，883，756。其中2955和2925cm-1是由于c-h伸縮振動(dòng)引起，1699cm-1附近的吸收峰是為c＝o的伸縮振動(dòng)引起的；1618，1583，1512，1451cm-1是苯環(huán)上的c＝c伸縮振動(dòng)峰，924、883及756cm-1出現(xiàn)的吸收峰是c-h面外彎曲振動(dòng)引起的，且756cm-1是判斷為苯環(huán)鄰二取代的重要峰值。所獲得的鞣花酸提取物與鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品的紅外圖譜峰重合性較好，各個(gè)峰波數(shù)大致相同。
實(shí)施例3：不同大孔吸附樹脂洗脫液經(jīng)硅膠層析柱分離得到的鞣花酸純度
(1)大孔吸附樹脂上柱：將實(shí)施例1得到的上樣溶液進(jìn)行大孔吸附樹脂ab-8的上柱，控制流出液流速為0.5bv/h，上樣量與樹脂ab-8體積比為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床。
(2)取11份處理好的ab-8樹脂20ml于柱內(nèi)，加芒果核鞣花酸提取液于柱頂，以0.5bv/h的流速進(jìn)行吸附后，再分別用5bv的水、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％乙醇以2bv/h流速進(jìn)行單獨(dú)洗脫，按照樹脂體積流出收集洗脫液。
(3)硅膠柱層析：
上樣：稱取從大孔吸附樹脂中經(jīng)水、5％-90％體積濃度乙醇洗脫流出液真空干燥后的樣品，將樣品用盡可能少量的乙醇溶解，并加入少量100-200目的硅膠拌拌勻，然后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至乙醇揮發(fā)后，將混有樣品的硅膠倒入裝好的硅膠層析柱中，使樣品表面平整，并在樣品表面再覆蓋上一層石英砂，以防在添加洗脫劑時(shí)樣品被沖散。
過柱及洗脫收集：當(dāng)上樣結(jié)束后，就向柱子中不同梯度的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫(氯仿：丙酮：甲酸＝95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1、90:9:1)，每個(gè)梯度用3倍的柱體積洗脫液進(jìn)行洗脫，控制流速在2ml/min，每15-20ml左右接一個(gè)餾分。在低于40℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收洗脫溶劑，樣品備用。經(jīng)過硅膠柱層析后合并含有鞣花酸的餾分，得到芒果核鞣花酸提取物。
結(jié)果顯示，芒果核鞣花酸提取物中，由水洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為10％，5％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為15％，10％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為18％，20％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為22％，30％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為28％，40％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為40％，50％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為58％，60％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為70％，70％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為85％，80％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為30％，90％乙醇洗脫液得到的提取物的鞣花酸純度約為20％。
實(shí)施例4：本發(fā)明方法得到的芒果核鞣花酸的抗菌抗氧化性能
抑菌效果的測定：
將供試菌株于斜面培養(yǎng)基上活化，用接種環(huán)挑取環(huán)1-2環(huán)于50ml無菌生理鹽水三角瓶中振蕩10min(內(nèi)有數(shù)粒玻璃珠)，要求菌懸液約108cfu/ml左右備用。稱取一定量真空冷凍干燥的實(shí)施例2得到的芒果核鞣花酸提取物樣品，在超凈工作臺(tái)上用無菌的40％乙醇水溶液溶解樣品至所需的濃度，備用。新鮮配制的培養(yǎng)基基于121℃條件下滅菌，當(dāng)培養(yǎng)基冷至50-60℃時(shí)，于超凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒入滅菌的
芒果核鞣花酸物質(zhì)抗氧化活性研究：
羥基是活性最強(qiáng)的活性氧化自由基，會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷，其清除率常常是反應(yīng)藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)。同樣的，超氧陰離子也是生物體主要的活性氧自由基，由其引起的體內(nèi)脂質(zhì)過氧化是機(jī)體衰老、心血管疾病及腫瘤發(fā)生的重要原因。芒果核鞣花酸羥基自由基清除能力隨著鞣花酸濃度增加而增加，當(dāng)芒果核鞣花酸的濃度達(dá)到0.05-0.2mg/ml時(shí)清除率能達(dá)到約90％，說明芒果核鞣花酸具有較強(qiáng)的清除羥基自由基作用，且清除作用比vc的清除作用強(qiáng)。芒果核鞣花酸提取物dpph自由基清除能力隨著鞣花酸濃度增加而增加，當(dāng)濃度達(dá)到0.06-0.25mg/ml以上時(shí)，其對(duì)dpph自由基的清除率能達(dá)到88％，說明芒果核鞣花酸具有較強(qiáng)的清除dpph自由基作用。以上數(shù)據(jù)說明芒果果核鞣花酸對(duì)羥基自由基以及dpph·自由基均具有較好的清除能力，研究結(jié)果將為芒果核資源的綜合利用及其相應(yīng)的功能性食品開發(fā)提供參考借鑒。
實(shí)施例5：本發(fā)明方法得到的芒果核鞣花酸抗衰老作用
鞣花酸、芒果核粗提物對(duì)彈性蛋白酶活性均有一定的抑制作用，且隨著濃度的增加均逐漸增強(qiáng)。當(dāng)鞣花酸的質(zhì)量濃度為3mg/ml時(shí)，抑制率高達(dá)80.3％。
彈性蛋白酶(elastase)是一種分解不溶性彈性蛋白為特征的蛋白水解酶，主要通過動(dòng)物胰臟和微生物發(fā)酵獲得，是除了dpph·和·oh等自由基外，對(duì)人體皮膚等產(chǎn)生重要影響的生物活性酶。彈性蛋白酶會(huì)使皮膚真皮中支撐皮膚結(jié)構(gòu)的彈性蛋白被過度的降解，從而使皮膚產(chǎn)生皺紋、松弛無彈性等衰老癥狀。鞣花酸作為天然彈性蛋白酶抑制劑，可以有效地抑制彈性蛋白酶的活性，從而起到增強(qiáng)皮膚彈性，減少皺紋及色素沉著，延緩皮膚衰老等作用。
以上通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，不能被認(rèn)為用于限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。