本申請(qǐng)是國際申請(qǐng)日2012年3月21日，國際申請(qǐng)?zhí)杙ct/us2012/029861，中國申請(qǐng)日為2013年12月5日，中國申請(qǐng)?zhí)?01280027682.4，發(fā)明名稱為“抗-表皮生長因子受體變體iii嵌合抗原受體及其用于治療癌癥的用途”的分案申請(qǐng)。對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本專利申請(qǐng)要求2011年4月8日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/473,409的權(quán)益，其通過引用整體結(jié)合于此。電子遞交的材料的通過引用的結(jié)合通過引用完整結(jié)合于此的是與本文同時(shí)遞交并且如下識(shí)別的計(jì)算機(jī)可讀的核苷酸/氨基酸序列表：一個(gè)24，425字節(jié)的ascii(文本)文件，文件名：“709980_st25.txt”，日期：2012年3月5日。
背景技術(shù)：
：：美國癌癥學(xué)會(huì)估計(jì)，在美國每年出現(xiàn)大約20,500例新的原發(fā)性腦和神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤病例，并且大約12,740位患者由于這些癌癥而死亡(jemal等，cancerj.clin.，57：43-66(2007))。腦腫瘤占所有中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤的大約85-90％。成膠質(zhì)細(xì)胞瘤是最有侵襲性的和最常見的神經(jīng)膠質(zhì)瘤，占所有神經(jīng)膠質(zhì)瘤的51％(cbtrus2008statisticalreport：primarybraintumorsintheunitedstates-cbtrus，2000-2004(2008))。盡管在常規(guī)治療(諸如外科手術(shù)切除術(shù)、放射療法和化學(xué)療法)方面有所進(jìn)展，神經(jīng)膠質(zhì)瘤以及其它類型的腦和神經(jīng)系統(tǒng)癌癥的預(yù)后可能較差。例如，大多數(shù)具有多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(gbm)的患者從診斷以后存活小于15個(gè)月。因此，對(duì)癌癥、尤其是神經(jīng)膠質(zhì)瘤的其它治療存在未得到滿足的需要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了嵌合抗原受體(car)，其包含人抗體139的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的其它實(shí)施方案提供了有關(guān)的核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群、抗體或其抗原結(jié)合部分、和與本發(fā)明的car有關(guān)的藥物組合物。本發(fā)明的其它實(shí)施方案提供了檢測(cè)癌癥在宿主中的存在的方法以及治療或預(yù)防宿主中的癌癥的方法。附圖說明圖1a的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼綠色熒光蛋白(gfp)(●)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人外周血淋巴細(xì)胞(pbl)(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的親本u87成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(“u87”)(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖1b的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼gfp(●)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的u87-gfp(表達(dá)gfp)成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖1c的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼gfp(●)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的u87-egfr成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(表達(dá)野生型表皮生長因子受體)(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖1d的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼gfp(●)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的u87-viii成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(表達(dá)egfrviii)(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖2a的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼綠色熒光蛋白(gfp)(●)、抗-erbb2car(◆)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的親本u251成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖2b的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼綠色熒光蛋白(gfp)(●)、抗-erbb2car(◆)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的u251-gfp成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(表達(dá)gfp)(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖2c的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼綠色熒光蛋白(gfp)(●)、抗-erbb2car(◆)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的u251-egfr成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(表達(dá)野生型egfr)(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖2d的圖顯示了在不同效應(yīng)物：靶標(biāo)比(e：t比)，未轉(zhuǎn)導(dǎo)(untd)(■)或轉(zhuǎn)導(dǎo)有編碼綠色熒光蛋白(gfp)(●)、抗-erbb2car(◆)、seqidno：10(h139ab-hcd828bbzcar)(x)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)(▲)的載體的人pbl(效應(yīng)細(xì)胞)對(duì)51cr標(biāo)記的u251-viii成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤細(xì)胞系(表達(dá)野生型egfrviii)(靶細(xì)胞)的特異性裂解(裂解百分比)。圖3a-3c的圖顯示了在與靶細(xì)胞系未轉(zhuǎn)導(dǎo)的nih-3t3(3t3)(3t3ut，灰色條)、未轉(zhuǎn)導(dǎo)的bhk(bhkut，帶點(diǎn)的條)、未轉(zhuǎn)導(dǎo)的293gp(293gput，帶方格的條)、egfr-野生型轉(zhuǎn)導(dǎo)的3t3(3t3egfrwt，白色條)、egfr-野生型轉(zhuǎn)導(dǎo)的bhk(bhkegfrwt，帶條紋的條)、egfrviii-轉(zhuǎn)導(dǎo)的3t3(3t3egfrviii，黑色條)、egfrviii-轉(zhuǎn)導(dǎo)的bhk(bhkegfrviii，帶交叉影線的條)或egfrviii-轉(zhuǎn)導(dǎo)的293gp(293gpegfrviii，帶垂直和水平條紋的條)共培養(yǎng)以后，通過elisa測(cè)得的未轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞(ut)或被3c10car(圖3a)、l8a4car(圖3b)、h139ab-hcd28zcar(圖3c)轉(zhuǎn)導(dǎo)的人t細(xì)胞的干擾素(ifn)-γ分泌(pg/ml，一式三份測(cè)定的平均值)。圖4a和4b的圖顯示了通過elisa測(cè)得的下述t-細(xì)胞的ifn-γ分泌(pg/ml，一式三份測(cè)定的平均值)：被綠色熒光蛋白(gfp)或139-28z載體(未分選)(139bulk)轉(zhuǎn)導(dǎo)的、得自供體2(圖4a)或供體3(圖4b)的t-細(xì)胞，或被h139ab-hcd28z載體轉(zhuǎn)導(dǎo)、然后小珠(bead)分選成cd8和cd4富集的(＞96％+)t細(xì)胞群(139cd8+和139cd4+)的t細(xì)胞。在轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞與bhk靶細(xì)胞(黑色條)、egfr野生型工程改造的bhk細(xì)胞(egfrwt，灰色條)或egfrviii工程改造的bhk細(xì)胞(egfrviii，帶交叉影線的條)或培養(yǎng)基(帶方格的條)一起共培養(yǎng)過夜以后，測(cè)量ifn-γ。圖5a和5b的圖顯示了被抗-egfrviiicar載體(139-28bbz)(egfrviii)、gfp表達(dá)載體(gfp)或car載體靶向erbb2轉(zhuǎn)導(dǎo)的或未轉(zhuǎn)導(dǎo)的(ut)、得自人供體4(圖5a)和人供體5(圖5b)的t細(xì)胞的ifn-γ分泌。將轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞與培養(yǎng)基(黑色條)、野生型egfr工程改造的u251細(xì)胞(u251-egfrwt，白色條)、egfr變體iii工程改造的u251細(xì)胞(u251-egfrviii，灰色條)或神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞系1228(帶水平線的條)、308(帶點(diǎn)的條)或822(帶交叉影線的條)共培養(yǎng)。具體實(shí)施方式本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了嵌合抗原受體(car)，其包含人抗體139(h139ab)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。嵌合抗原受體(car)是人工構(gòu)建的雜合蛋白或多肽，其含有與t-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域連接的、抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如，scfv)。car的特征包括：它們利用單克隆抗體的抗原結(jié)合性質(zhì)以非-mhc限制的方式改變t-細(xì)胞對(duì)選定靶標(biāo)的特異性和反應(yīng)性的能力。所述非-mhc限制的抗原識(shí)別會(huì)給表達(dá)car的t細(xì)胞提供不依賴抗原加工而識(shí)別抗原的能力，由此繞過腫瘤逃逸的主要機(jī)制。此外，當(dāng)在t-細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，car有利地不會(huì)與內(nèi)源t細(xì)胞受體(tcr)α和β鏈二聚化。本文中使用的短語“具有抗原特異性”和“引起抗原-特異性反應(yīng)”是指，car可以特異性地結(jié)合并免疫識(shí)別抗原，使得car與所述抗原的結(jié)合會(huì)引起免疫反應(yīng)。本發(fā)明的car對(duì)表皮生長因子受體變體iii(egfrviii)具有抗原特異性。egfrviii是表皮生長因子受體(egfr)的變體，其是作為蛋白激酶超家族成員之一的跨膜糖蛋白。egfrviii是在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中發(fā)現(xiàn)的幾種egfr突變中的最普遍的，且在約30％至約50％的多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(gbm)(也被稱作“成膠質(zhì)細(xì)胞瘤”)中表達(dá)。egfrviii的表達(dá)源自消除egfr外顯子2-7并造成編碼序列的外顯子1和8的連接的基因內(nèi)缺失重排。egfrviii由不同癌癥的腫瘤細(xì)胞表達(dá)，所述癌癥如，例如：成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(包括成膠質(zhì)細(xì)胞瘤干細(xì)胞)；乳腺癌、卵巢癌和非小細(xì)胞肺癌；頭頸鱗狀細(xì)胞癌；髓母細(xì)胞瘤、結(jié)直腸癌、前列腺癌和膀胱癌。不受特定理論或機(jī)制的約束，據(jù)信，通過引起針對(duì)egfrviii的抗原-特異性反應(yīng)，本發(fā)明的car會(huì)提供下述的一項(xiàng)或多項(xiàng)：靶向和破壞表達(dá)egfrviii的腫瘤細(xì)胞，減少或消除腫瘤，促進(jìn)免疫細(xì)胞向腫瘤部位的滲入，和增強(qiáng)/延長抗腫瘤反應(yīng)。因?yàn)閑gfrviii不在正常的(即，非癌性的)組織中表達(dá)，預(yù)見到，本發(fā)明的car有利地基本上避免靶向/破壞正常的組織和細(xì)胞。本發(fā)明提供了一種包含人抗體139的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的car。抗體139是一種人抗-egfrviii抗體?？贵w139特異性地結(jié)合egfrviii。合適的人抗體139序列公開在例如美國專利7,628,986中，所述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合于此。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案提供了包含抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域的car，其包含人抗體139的單鏈可變片段(scfv)、由其組成或基本上由其組成。人抗體139包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。所述輕鏈可變區(qū)可以包含seqidno：1、由其組成或基本上由其組成。所述重鏈可變區(qū)可以包含seqidno：2、由其組成或基本上由其組成。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：包含seqidno：1的輕鏈可變區(qū)和/或包含seqidno：2的重鏈可變區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含接頭肽。所述接頭肽可以位于輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)之間。在這點(diǎn)上，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包含這樣的接頭肽：其包含seqidno：3、由其組成或基本上由其組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含前導(dǎo)序列。所述前導(dǎo)序列可以位于輕鏈可變區(qū)的氨基端。在這點(diǎn)上，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包含這樣的前導(dǎo)序列：其包含seqidno：4、由其組成或基本上由其組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包含前導(dǎo)序列、輕鏈可變區(qū)、接頭肽和重鏈可變區(qū)。在這點(diǎn)上，所述包含前導(dǎo)序列、輕鏈可變區(qū)、接頭肽和重鏈可變區(qū)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含seqidno：5(scfv人抗體139)、由其組成或基本上由其組成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述car包含細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、和任選的含有cd8的細(xì)胞內(nèi)鉸鏈結(jié)構(gòu)域、以及含有cd28、4-1bb和cd3ζ的細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。cd28是一種在t細(xì)胞共刺激中重要的t細(xì)胞標(biāo)志物。cd8也是一種t細(xì)胞標(biāo)志物。4-1bb會(huì)將有效的共刺激信號(hào)傳導(dǎo)至t細(xì)胞，從而促進(jìn)分化和增強(qiáng)t淋巴細(xì)胞的長期存活。cd3ζ與tcr結(jié)合以產(chǎn)生信號(hào)，且含有基于免疫受體酪氨酸的活化基序(itam)。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案提供了這樣的細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域：其包含seqidno：6(人cd8細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域)、基本上由其組成或由其組成。所述細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seqidno：7(人cd28、4-1bb和cd3ζ細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)、基本上由其組成或由其組成。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述car包含細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、以及含有cd28和cd3ζ的細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案提供了這樣的的細(xì)胞外鉸鏈結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其包含seqidno：8(人cd28細(xì)胞外鉸鏈、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)和seqidno：9(人cd3ζ細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)，基本上由其組成或由其組成。本發(fā)明的其它實(shí)施方案提供了這樣的car：其包含顯示在表1中的任意氨基酸序列、由其組成或基本上由其組成。表1本發(fā)明還提供了有關(guān)的核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群、抗體或其抗原結(jié)合部分、以及與本發(fā)明的car有關(guān)的藥物組合物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)包括本文中描述的本發(fā)明的car的功能部分。當(dāng)關(guān)于car使用時(shí)，術(shù)語“功能部分”表示本發(fā)明的car的任何這樣的部分或片段，所述部分或片段保持car(所述部分或片段是所述car的部分)(親本car)的生物學(xué)活性。功能部分包括，例如，這樣的car部分：其以與親本car相似、相同或更高的程度保持識(shí)別靶細(xì)胞或者檢測(cè)、治療或預(yù)防疾病的能力。關(guān)于親本car，功能部分可以包含，例如，親本car的約10％、25％、30％、50％、68％、80％、90％、95％或更多。所述功能部分可以包含位于所述部分的氨基或羧基端或者兩端的額外的氨基酸，所述額外的氨基酸未在親本car的氨基酸序列中發(fā)現(xiàn)。理想地，所述額外的氨基酸不干擾功能部分的生物學(xué)功能，例如，識(shí)別靶細(xì)胞、檢測(cè)癌癥、治療或預(yù)防癌癥等。更理想的是，與親本car的生物學(xué)活性相比，所述額外的氨基酸增強(qiáng)生物學(xué)活性。在本發(fā)明的范圍內(nèi)包括本文所述的本發(fā)明的car的功能變體。本文中使用的術(shù)語“功能變體”表示與親本car具有基本或顯著序列同一性或者相似性的car、多肽或蛋白，所述功能變體保持所述功能變體作為其變體的car的生物學(xué)活性。功能變體包括，例如，本文所述的car(親本car)的那些變體，所述變體以與親本car相似、相同或更高的程度保持識(shí)別靶細(xì)胞的能力。關(guān)于親本car，功能變體可以，例如，在氨基酸序列上與親本car具有至少約30％、50％、75％、80％、90％、98％或更多的的同一性。功能變體可以，例如，包含具有至少一個(gè)保守氨基酸置換的親本car的氨基酸序列。備選地或另外地，功能變體可以包含具有至少一個(gè)非保守氨基酸置換的親本car的氨基酸序列。在該情況下，優(yōu)選的是，所述非保守氨基酸置換不會(huì)干擾或抑制功能變體的生物學(xué)活性。所述非保守氨基酸置換可能增強(qiáng)功能變體的生物學(xué)活性，使得所述功能變體的生物學(xué)活性與親本car相比增加。本發(fā)明的car的氨基酸置換優(yōu)選地是保守氨基酸置換。保守氨基酸置換是本領(lǐng)域已知的，并且包括這樣的氨基酸置換：其中一個(gè)具有特定物理和/或化學(xué)性質(zhì)的氨基酸被交換為另一個(gè)具有相同或類似化學(xué)或物理性質(zhì)的氨基酸。例如，保守氨基酸置換可以是一個(gè)酸性的/帶負(fù)電荷的極性氨基酸置換另一個(gè)酸性的/帶負(fù)電荷的極性氨基酸(例如，asp或glu)，一個(gè)具有非極性側(cè)鏈的氨基酸置換另一個(gè)具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，ala、gly、val、ile、leu、met、phe、pro、trp、cys、val等)，一個(gè)堿性/帶正電荷的極性氨基酸置換另一個(gè)堿性/帶正電荷的極性氨基酸(例如lys、his、arg等)，一個(gè)具有極性側(cè)鏈的不帶電荷的氨基酸置換另一個(gè)具有極性側(cè)鏈的不帶電荷的氨基酸(例如，asn、gln、ser、thr、tyr等)，一個(gè)具有β-分支的側(cè)鏈的氨基酸置換另一個(gè)具有β-分支的側(cè)鏈的氨基酸(例如，ile、thr和val)，一個(gè)具有芳族側(cè)鏈的氨基酸置換另一個(gè)具有芳族側(cè)鏈的氨基酸(例如，his、phe、trp和tyr)等。所述car可以基本上由本文所述的一個(gè)或多個(gè)特定氨基酸序列組成，以致其它組分(例如，其它氨基酸)不實(shí)質(zhì)改變功能變體的生物學(xué)活性。本發(fā)明的實(shí)施方案的car(包括功能部分和功能變體)可以具有任何長度，即，可以包含任何數(shù)量的氨基酸，條件是，所述car(或其功能部分或功能變體)保持其生物學(xué)活性，例如，以下能力：特異性結(jié)合抗原，檢測(cè)宿主中的患病細(xì)胞，或者治療或預(yù)防宿主的疾病等。例如，所述car的長度可以是50至5000個(gè)氨基酸，諸如50、70、75、100、125、150、175、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或更多個(gè)氨基酸的長度。本發(fā)明的實(shí)施方案的car(包括本發(fā)明的功能部分和功能變體)可以包含代替一個(gè)或多個(gè)天然存在的氨基酸的合成氨基酸。這樣的合成氨基酸在本領(lǐng)域中是已知的，并且包括，例如，氨基環(huán)己烷羧酸、正亮氨酸、α-氨基正癸酸、高絲氨酸、s-乙酰氨基甲基-半胱氨酸、反-3-和反-4-羥基脯氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸、β-苯基絲氨酸β-羥基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、α-萘基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸、二氫吲哚-2-羧酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、氨基丙二酸、氨基丙二酸單酰胺、n’-芐基-n’-甲基-賴氨酸、n’，n’-二芐基-賴氨酸、6-羥基賴氨酸、鳥氨酸、α-氨基環(huán)戊烷羧酸、α-氨基環(huán)己烷羧酸、α-氨基環(huán)庚烷羧酸、α-(2-氨基-2-降莰烷)-羧酸、α，γ-二氨基丁酸、α，β-二氨基丙酸、高苯丙氨酸，和α-叔丁基甘氨酸。本發(fā)明的實(shí)施方案的car(包括功能部分和功能變體)可以被糖基化、酰胺化、羧基化、磷酸化、酯化、n-酰化、經(jīng)由例如二硫鍵環(huán)化，或者轉(zhuǎn)化為酸加成鹽和/或任選地二聚或多聚，或者綴合。本發(fā)明的實(shí)施方案的car(包括其功能部分和功能變體)可以通過本領(lǐng)域已知的方法得到。所述car可以通過任意合適的制備多肽或蛋白的方法來制備。從頭合成多肽和蛋白的合適方法描述于文獻(xiàn)中，如chan等，fmocsolidphasepeptidesynthesis(fmoc固相肽合成)，oxforduniversitypress，oxford，unitedkingdom，2000；peptideandproteindruganalysis(肽和蛋白藥物分析)，ed.reid，r.，marceldekker，inc.，2000；epitopemapping(表位定位)，ed.westwood等，oxforduniversitypress，oxford，unitedkingdom，2001；和美國專利5,449,752。并且，可以使用本文所述的核酸使用標(biāo)準(zhǔn)重組方法重組地生產(chǎn)多肽和蛋白。見，例如，sambrook等，molecularcloning：alaboratorymanual(分子克隆：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))，3rded.，coldspringharborpress，coldspringharbor，ny2001；和ausubel等，currentprotocolsinmolecularbiology(當(dāng)前的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方案)，greenepublishingassociatesandjohnwiley&sons，ny，1994。此外，本發(fā)明的一些car(包括其功能部分和功能變體)可以從如以下的來源分離和/或純化：植物、細(xì)菌、昆蟲、哺乳動(dòng)物例如大鼠、人等。分離和純化的方法是本領(lǐng)域中已知的。備選地，本文中描述的car(包括其功能部分和功能變體)可以由公司如synpep(dublin，ca)、peptidetechnologiescorp.(gaithersburg，md)和multiplepeptidesystems(sandiego，ca)商業(yè)合成。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的car可以是合成的、重組的、分離的和/或純化的。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)一步提供了特異性地結(jié)合本發(fā)明的car的表位的抗體或其抗原結(jié)合部分。所述抗體可以是本領(lǐng)域已知的任意類型的免疫球蛋白。例如，所述抗體可以是任何同種型，例如，iga、igd、ige、igg、igm等?？贵w可以是單克隆的或多克隆的?？贵w可以是天然抗體，例如，分離和/或純化自哺乳動(dòng)物，例如小鼠、兔、山羊、馬、雞、倉鼠、人等的抗體。備選地，抗體可以是遺傳改造的抗體，例如，人源化抗體或者嵌合抗體?？贵w可以是以單體或多聚體形式。并且，抗體可以具有針對(duì)本發(fā)明的car的功能部分的任何水平的親和力或親合力。檢測(cè)抗體結(jié)合本發(fā)明的car的任何功能部分的能力的方法是本領(lǐng)域中已知的并且包括任何抗體-抗原結(jié)合測(cè)定，如，例如，放射免疫測(cè)定(ria)、elisa、蛋白印跡法、免疫沉淀和競(jìng)爭(zhēng)性抑制測(cè)定(見，例如，janeway等，如下，和美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2002/0197266a1)。制備抗體的合適的方法是本領(lǐng)域中已知的。例如，標(biāo)準(zhǔn)雜交瘤方法被描述于，例如，和milstein，eur.j.immunol.，5，511-519(1976)，harlow和lane(編)，antibodies：alaboratorymanual(抗體：實(shí)驗(yàn)手冊(cè))，cshpress(1988)，和c.a.janeway等(編)，immunobiology，第5版，garlandpublishing，newyork，ny(2001))。備選地，其它方法，如ebv-雜交瘤法(haskard和archer，j.immunol.methods，74(2)，361-67(1984)，和roder等，methodsenzymol.，121，140-67(1986))，和噬菌體載體表達(dá)系統(tǒng)(見，例如，huse等，science，246，1275-81(1989))是本領(lǐng)域中已知的。此外，在非人動(dòng)物中制備抗體的方法被描述于，例如，美國專利5,545,806、5,569,825和5,714,352，以及美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2002/0197266a1)。此外，噬菌體展示可以用于生產(chǎn)抗體。在這點(diǎn)上，可以使用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)和重組dna技術(shù)(見，例如，sambrook等，出處同上，和ausubel等，出處同上)，生產(chǎn)編碼抗體的抗原結(jié)合可變(v)結(jié)構(gòu)域的噬菌體文庫。選擇編碼具有所需特異性的可變區(qū)的噬菌體用于與所需抗原的特異性結(jié)合，并且重建包含所選的可變結(jié)構(gòu)域的完全或部分抗體。將編碼重建的抗體的核酸序列引入合適的細(xì)胞系中，如用于雜交瘤制備的骨髓瘤細(xì)胞，以致由所述細(xì)胞分泌具有單克隆抗體特性的抗體(見，例如，janeway等，出處同上，huse等，出處同上，和美國專利6,265,150)?？贵w可以由轉(zhuǎn)有特定的重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠制備。所述方法是本領(lǐng)域中已知的并且描述于，例如美國專利5,545,806和5,569,825，以及janeway等，出處同上。制備人源化抗體的方法是本領(lǐng)域中已知的，并且詳細(xì)描述于，例如，janewaγ等，出處同上，美國專利5,225,539、5,585,089和5,693,761，歐洲專利號(hào)0239400b1，和英國專利號(hào)2188638。也可以使用描述于美國專利5,639,641和pedersen等，j.mol.biol.，235，959-973(1994)中的抗體表面重建(resurfacing)技術(shù)制備人源化抗體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案還提供本文所述任何抗體的抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分可以是具有至少一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的任何部分，如fab、f(ab’)2、dsfv、sfv、雙抗體(diabodies)和三抗體(triabodies)?？梢允褂贸Ｒ?guī)重組dna技術(shù)(見，例如，janeway等，出處同上)制備單鏈可變區(qū)片段(sfv)抗體片段，所述片段是截短的fab片段，其包括經(jīng)由合成肽與輕抗體鏈的v結(jié)構(gòu)域相連的抗體重鏈的可變(v)結(jié)構(gòu)域。類似地，可以通過重組dna技術(shù)(見，例如，reiter等，proteinengineering，7,697-704(1994))制備二硫鍵穩(wěn)定的可變區(qū)片段(dsfv)。然而，本發(fā)明的抗體片段不限于這些示例類型的抗體片段。并且，抗體或其抗原結(jié)合部分可以被修飾成包含可檢測(cè)的標(biāo)記，如，例如，放射性同位素、熒光團(tuán)(例如，熒光素異硫氰酸酯(fitc)，藻紅蛋白(pe))，酶(例如，堿性磷酸酶、辣根過氧化酶)，和元素顆粒(例如，金顆粒)。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)一步提供了核酸，其包含編碼本文中描述的任意car(包括其功能部分和功能變體)的核苷酸序列。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了一種核酸，其包含編碼人抗體139的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列，所述核苷酸序列包含seqidno：12(其編碼前導(dǎo)序列、人抗體139的輕鏈可變區(qū)、接頭肽、和人抗體139的重鏈可變區(qū))。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了這樣的核酸，其包含表2的核苷酸序列、由其組成或基本上由其組成：表2本文中使用的“核酸”包括“多核苷酸”、“寡核苷酸”、和“核酸分子”，并且通常表示dna或rna的聚合物，其可以是單鏈的或雙鏈的、合成的或從天然源獲得的(例如，分離的和/或純化的)，其可以包含天然、非天然或改變的核苷酸，并且其可以包含天然、非天然或改變的核苷酸間鍵合，如氨基磷酸酯鍵合或硫代磷酸酯鍵合，而不是在未修飾的寡核苷酸的核苷酸之間發(fā)現(xiàn)的磷酸二酯。在某些實(shí)施方案中，所述核酸不包含任何插入、缺失、倒位和/或置換。然而，如本文所述，在某些情況下，對(duì)于核酸可能合適的是包含一個(gè)或多個(gè)插入、缺失、倒位和/或置換。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的核酸可以是重組體。本文中使用的術(shù)語“重組體”表示：(i)在活細(xì)胞外通過將天然或合成的核酸片段與可以在活細(xì)胞中復(fù)制的核酸分子連接構(gòu)建的分子，或者(ii)由以上(i)中所述的那些分子的復(fù)制產(chǎn)生的分子。對(duì)于本文，復(fù)制可以是體外復(fù)制或體內(nèi)復(fù)制。重組核酸可以是這樣的核酸：其具有非天然存在的序列，或者具有通過2個(gè)否則分開的序列區(qū)段的人工組合而制備的序列。該人工組合經(jīng)常通過化學(xué)合成來實(shí)現(xiàn)，或者更常見地，通過分離的核酸區(qū)段的人工操作來實(shí)現(xiàn)，例如，通過基因工程技術(shù)，諸如在sambrook等(出處同上)中描述的那些?？梢曰诨瘜W(xué)合成和/或酶連反應(yīng)使用本領(lǐng)域中已知的方法構(gòu)建核酸。見，例如，sambrook等，出處同上，和ausubel等，出處同上。例如，可以使用被設(shè)計(jì)用來增加分子的生物學(xué)穩(wěn)定性或增加雜交后形成的雙鏈體的物理穩(wěn)定性的天然核苷酸或不同修飾的核苷酸(例如，硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸)來化學(xué)合成核酸?？梢杂糜谏a(chǎn)核酸的修飾的核苷酸的實(shí)例包括但不限于：5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羥基甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿苷、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、β-d-galactosylqueosine、肌苷、n6-異戊烯腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2、2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、n6-取代腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-d-mannosylqueosine、5′-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫代-n6-異戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、懷丁氧苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、q核苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、3-(3-氨基-3-n-2-羧基丙基)尿嘧啶和2，6-二氨基嘌呤。備選地，本發(fā)明的一種或多種核酸可以購買自公司，如macromolecularresources(fortcollins，co)和synthegen(houston，tx)。核酸可以包含編碼任何car或其功能部分或功能變體的任何分離的或純化的核苷酸序列。備選地，核苷酸序列可以包含簡(jiǎn)并為任意序列或簡(jiǎn)并序列的組合的核苷酸序列。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案還提供分離或純化的核酸，所述核酸包含與本文所述的任何核酸的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列，或者在嚴(yán)格條件下與本文所述的任何核酸的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。在嚴(yán)格條件下雜交的核苷酸序列可以在高嚴(yán)格性條件下雜交?！案叨葒?yán)格條件”是指核苷酸序列以相比于非特異性雜交的可檢測(cè)地更強(qiáng)的量與靶序列(本文所述的任何核酸的核苷酸序列)特異性地雜交。高度嚴(yán)格條件包括將區(qū)別具有正確互補(bǔ)序列的多核苷酸的條件，或者僅包含少量分散錯(cuò)配的條件，所述錯(cuò)配來自正好具有少量匹配所述核苷酸序列的小區(qū)域(例如，3-10個(gè)堿基)的隨機(jī)序列。這樣的互補(bǔ)性小區(qū)域比14-17個(gè)以上堿基的全長補(bǔ)體更容易解鏈，并且高度嚴(yán)格雜交使得它們可以容易地區(qū)分。相對(duì)的高度嚴(yán)格條件包括，例如，低鹽和/或高溫條件，如由約0.02-0.1mnacl或等價(jià)物，在約50-70℃的溫度提供的。這樣的高度嚴(yán)格條件幾乎不允許(即使有)核苷酸序列與模板或靶鏈之間的錯(cuò)配，并且尤其適于檢測(cè)任何本發(fā)明的car的表達(dá)。通常被理解的是，可以通過添加增加量的甲酰胺使得條件更嚴(yán)格。本發(fā)明還提供了一種核酸，其包含與本文中描述的任意核酸具有至少約70％或更多(例如，約80％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％)同一性的核苷酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸可以結(jié)合到重組表達(dá)載體中。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了包含本發(fā)明的任何核酸的重組表達(dá)載體。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語″重組表達(dá)載體″表示遺傳修飾的寡核苷酸或多核苷酸構(gòu)建體，當(dāng)所述構(gòu)建體包含編碼mrna、蛋白、多肽或肽的核苷酸序列，并且將載體在足以使mrna、蛋白、多肽或肽在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的條件下與細(xì)胞接觸時(shí)，所述遺傳修飾的寡核苷酸或多核苷酸構(gòu)建體允許宿主細(xì)胞表達(dá)mrna、蛋白、多肽或肽。本發(fā)明的載體整體上不是天然存在的。然而，所述載體的部分可以是天然存在的。本發(fā)明的重組表達(dá)載體可以包含任何類型的核苷酸，包括但不限于dna和rna，其可以是單鏈的或雙鏈的，合成的或部分從天然來源獲得的，并且其可以包含天然存在或非天然存在或改變的核苷酸。重組表達(dá)載體可以包含天然存在、非天然存在的核苷酸間鍵合，或上述兩種類型的鍵合。優(yōu)選地，非天然或改變的核苷酸或核苷酸間鍵合不妨礙載體的轉(zhuǎn)錄或復(fù)制。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的重組表達(dá)載體可以是任何合適的重組表達(dá)載體，并且可以用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染任何合適的宿主。合適的載體包括那些載體，所述載體被設(shè)計(jì)成用于增殖和擴(kuò)大或表達(dá)或兩者，如質(zhì)粒和病毒。載體可以選自由以下組成的組：puc系列(fermentaslifesciences，glenburnie，md)，pbluescript系列(stratagene，lajolla，ca)，pet系列(novagen，madison，wi)，pgex系列(pharmaciabiotech，uppsala，sweden)和pex系列(clontech，paloalto，ca)。也可以使用噬菌體載體，如λgt10，λgt11，λzapii(stratagene)，λembl4和λnm1149。植物表達(dá)載體的實(shí)例包括pbi01，pbi101.2，pbi101.3，pbi121和pbin19(clontech)。動(dòng)物表達(dá)載體的實(shí)例包括peuk-cl，pmam和pmamneo(clontech)。重組表達(dá)載體可以是病毒載體，例如，反轉(zhuǎn)錄病毒載體。許多轉(zhuǎn)染技術(shù)通常是本領(lǐng)域已知的(見，例如，graham等人，virology，52：456-467(1973)；sambrook等人，出處同上；davis等人，basicmethodsinmolecularbiology，elsevier(1986)；和chu等人，gene，13：97(1981)。轉(zhuǎn)染方法包括磷酸鈣共沉淀(見，例如，graham等，出處同上)、直接顯微注射進(jìn)培養(yǎng)的細(xì)胞中(見，例如，capecchi，cell，22：479-488(1980))、電穿孔(見，例如，shigekawa等人，biotechniques，6：742-751(1988))、脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移(見，例如，mannino等人，biotechniques，6：682-690(1988))、脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)(見，例如，felgner等，proc.natl.acad.sci.usa，84：7413-7417(1987))和使用高速微射彈的核酸遞送(見，例如，klein等，nature，327：70-73(1987))。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用標(biāo)準(zhǔn)重組dna技術(shù)制備本發(fā)明的重組表達(dá)載體，所述技術(shù)描述于例如，sambrook等，同上，和ausubel等，同上。環(huán)形或線形的表達(dá)載體的構(gòu)建體可被制備成包含在原核或真核宿主細(xì)胞中起作用的復(fù)制系統(tǒng)。復(fù)制系統(tǒng)可以來源自，例如，cole1、2μ質(zhì)粒、λ病毒、sv40病毒、牛乳頭瘤病毒等。重組表達(dá)載體可以包含調(diào)節(jié)序列，如轉(zhuǎn)錄和翻譯起始和終止密碼子，其對(duì)其中將要引入所述載體的宿主(例如，細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物)是特異的，適當(dāng)?shù)夭⑶铱紤]載體是基于dna的還是基于rna的。重組表達(dá)載體可以包括一種或多種標(biāo)記物基因，這允許選擇轉(zhuǎn)化的或轉(zhuǎn)染的宿主。標(biāo)記物基因包括殺菌劑抗性，例如，對(duì)抗生素、重金屬等的的抗性，在營養(yǎng)缺陷型宿主中的互補(bǔ)以提供原營養(yǎng)，等。適用于本發(fā)明的表達(dá)載體的標(biāo)記物基因包括，例如，新霉素/g418抗性基因，潮霉素抗性基因，組胺醇抗性基因，四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因。重組表達(dá)載體可以包含天然或者非天然啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子可操作地連接至編碼car(包括其功能部分和功能變體)的核苷酸序列、或連接至這樣的核苷酸序列：其與編碼car的核苷酸序列互補(bǔ)或雜交。選擇例如，強(qiáng)的、弱的、可誘導(dǎo)的、組織特異性的和發(fā)育特異性的啟動(dòng)子屬于技術(shù)人員的常規(guī)技術(shù)。類似地，將核苷酸序列與啟動(dòng)子結(jié)合也在技術(shù)人員的技術(shù)內(nèi)。啟動(dòng)子可以是非病毒啟動(dòng)子或病毒啟動(dòng)子，例如，巨細(xì)胞病毒(cmv)啟動(dòng)子、sv40啟動(dòng)子、rsv啟動(dòng)子或發(fā)現(xiàn)于鼠干細(xì)胞病毒的長末端重復(fù)中的啟動(dòng)子。本發(fā)明的重組表達(dá)載體可以被設(shè)計(jì)成用于瞬時(shí)表達(dá)、穩(wěn)定表達(dá)或兩者。并且，重組表達(dá)載體可以被制成用于組成型表達(dá)或可誘導(dǎo)表達(dá)。此外，重組表達(dá)載體可以被制成包括自殺基因。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語″自殺基因″是指導(dǎo)致表達(dá)自殺基因的細(xì)胞死亡的基因。自殺基因可以是這樣的基因，其將對(duì)藥劑例如藥物的敏感性給予表達(dá)該基因的細(xì)胞，并且當(dāng)細(xì)胞與所述藥劑接觸或暴露于所述藥劑時(shí)導(dǎo)致所述細(xì)胞死亡。自殺基因是本領(lǐng)域中已知的(見，例如，suicidegenetherapy：methodsandreviews(自殺基因療法：方法和綜述)，springer，carolinej.(cancerresearchukcentreforcancertherapeuticsattheinstituteofcancerresearch，sutton，surrey，uk)，humanapress，2004)，并且包括，例如，單純皰疹病毒(hsv)胸腺嘧啶激酶(tk)基因，胞嘧啶脫氨酶(daminase)，嘌呤核苷磷酸化酶，和硝基還原酶。在本發(fā)明的范圍內(nèi)包括綴合物，例如，生物綴合物，其包含任何本發(fā)明的car(包括其任何功能部分或變體)、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、宿主細(xì)胞群或抗體或其抗原結(jié)合部分。綴合物，以及通常用于合成綴合物的方法在本領(lǐng)域中是已知的(見，例如，hudecz，f.，methodsmol.biol.298：209-223(2005)和kirin等，inorgchem.44(15)：5405-5415(2005))。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案還提供包含本文所述的任何重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語″宿主細(xì)胞″是指可以包含本發(fā)明的重組表達(dá)載體的任何類型的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是真核細(xì)胞，例如，植物、動(dòng)物、真菌或藻類，或者可以是原核細(xì)胞，例如，細(xì)菌或原生動(dòng)物。宿主細(xì)胞可以是培養(yǎng)的細(xì)胞或原代細(xì)胞，即，直接分離自生物例如人的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是粘附細(xì)胞或懸浮細(xì)胞，即，在懸浮液中生長的細(xì)胞。合適的宿主細(xì)胞是本領(lǐng)域中已知的并且包括，例如，dh5α大腸桿菌細(xì)胞，中國倉鼠卵巢細(xì)胞，猴vero細(xì)胞，cos細(xì)胞，hek293細(xì)胞等。為了擴(kuò)增或復(fù)制重組表達(dá)載體，宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，例如，dh5α細(xì)胞。為了制備重組car，宿主細(xì)胞可以是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是人細(xì)胞。雖然宿主細(xì)胞可以是任何細(xì)胞類型，可以來源于任何類型的組織，并且可以處于任何發(fā)育階段，但是宿主細(xì)胞可以是外周血淋巴細(xì)胞(pbl)或者外周血單核細(xì)胞(pbmc)。宿主細(xì)胞可以是t細(xì)胞。當(dāng)用于本文時(shí)，t細(xì)胞可以是任何t細(xì)胞，如培養(yǎng)的t細(xì)胞，例如，原代t細(xì)胞，或者來自培養(yǎng)的t細(xì)胞系例如jurkat、supt1等的t細(xì)胞，或獲得自哺乳動(dòng)物的t細(xì)胞。如果獲得自哺乳動(dòng)物，t細(xì)胞可以獲得自多個(gè)來源，包括但不限于血液、骨髓、淋巴結(jié)、胸腺或其他組織或流體。t細(xì)胞也可以被濃縮或純化。t細(xì)胞可以是人t細(xì)胞。t細(xì)胞可以是分離自人的t細(xì)胞。t細(xì)胞可以是任何類型的t細(xì)胞并且可以處于任何發(fā)育階段，包括但不限于，cd4+/cd8+雙陽性t細(xì)胞，cd4+輔助t細(xì)胞，例如，th1和th2細(xì)胞，cd8+t細(xì)胞(例如，細(xì)胞毒性t細(xì)胞)，腫瘤浸潤細(xì)胞，記憶t細(xì)胞，幼稚t細(xì)胞等。t細(xì)胞可以是cd8+t細(xì)胞或cd4+t細(xì)胞。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案還提供包含至少一種本文所述的宿主細(xì)胞的細(xì)胞群。細(xì)胞群可以是異種群，其包含含有所述任何重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞，此外還包含至少一種其他細(xì)胞，例如，不含有任何重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞(例如，t細(xì)胞)，或者除t細(xì)胞以外的細(xì)胞，例如，b細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、肌細(xì)胞、腦細(xì)胞等。備選地，細(xì)胞群可以是基本同種的群，其中該群主要包含含有重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞(例如，基本由其組成)。所述群也可以是克隆的細(xì)胞群，其中該群的所有細(xì)胞都是含有重組表達(dá)載體的單個(gè)宿主細(xì)胞的克隆，以致該群的所有細(xì)胞都含有重組表達(dá)載體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞群是克隆的群，其包含宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含如本文所述的重組表達(dá)載體。car(包括其功能部分和變體)、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞(包括其群)和抗體(包括其抗原結(jié)合部分)(它們?cè)谙挛闹斜唤y(tǒng)稱為“本發(fā)明的car材料”)可以是分離的和/或純化的。本文中使用的術(shù)語“分離的”表示已經(jīng)從其天然環(huán)境中取出。本文中使用的術(shù)語“純化的”或“分離的”不要求絕對(duì)純度或分離；相反，它是指相對(duì)術(shù)語。因而，例如，純化的(或分離的)宿主細(xì)胞制品是這樣的：其中宿主細(xì)胞比處于其在體內(nèi)天然環(huán)境中的細(xì)胞更純。這樣的宿主細(xì)胞可以通過例如標(biāo)準(zhǔn)純化技術(shù)來生產(chǎn)。在某些實(shí)施方案中，純化宿主細(xì)胞制品，使得宿主細(xì)胞占所述制品的總細(xì)胞含量的至少約50％，例如至少約70％。例如，所述純度可以是至少約50％，可以是大于約60％、約70％或約80％，或可以是約100％。本發(fā)明的car材料可以被制成組合物，如藥物組合物。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了一種藥物組合物，其包含任意的car、功能部分、功能變體、核酸、表達(dá)載體、宿主細(xì)胞(包括其群)和抗體(包括其抗原結(jié)合部分)和藥用載體。含有任何本發(fā)明的car材料的本發(fā)明的藥物組合物可以包含超過一種本發(fā)明的car材料，例如，car和核酸，或者2種或更多種不同的car。備選地，藥物組合物可以包含本發(fā)明的car材料以及其他藥物活性試劑或藥物，如化療劑，例如，天冬酰胺酶、白消安(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、順鉑、柔紅霉素(daunorubicin)、阿霉素(doxorubicin)、氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcitabine)、羥基脲、甲胺蝶呤、紫杉醇(paclitaxel)、利妥昔單抗(rituximab)、長春堿(vinblastine)、長春新堿(vincristine)等。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含本發(fā)明的宿主細(xì)胞或其群體。本發(fā)明的car材料可以以鹽(例如，藥用鹽)的形式提供。合適的藥用酸加成鹽包括源自無機(jī)酸(諸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸)和有機(jī)酸(諸如酒石酸、乙酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、羥乙酸、葡糖酸、琥珀酸和芳基磺酸，例如，對(duì)甲苯磺酸)的那些鹽。關(guān)于藥物組合物，藥用載體可以是任何常規(guī)使用的那些載體并且僅受化學(xué)-物理考慮，如溶解性和缺少與活性劑的反應(yīng)性，和給藥路徑的限制。本文所述的藥用載體，例如，運(yùn)載體(vehicle)、佐劑、賦形劑和稀釋劑對(duì)于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員是已知的，并且公眾可以容易地獲得。優(yōu)選地，藥用載體是在化學(xué)上對(duì)活性試劑為惰性的載體和在使用條件下沒有有害副作用或毒性的載體。載體的選擇將部分由特定的本發(fā)明的car材料以及用于給藥本發(fā)明的car材料的特定方法確定。因此，存在多種本發(fā)明的藥物組合物的合適制劑?？梢允褂梅栏瘎?。合適的防腐劑可以包括，例如，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸鈉和苯扎氯銨?？梢匀芜x地使用2種或更多種防腐劑的混合物。防腐劑或其混合物通常以總組合物的約0.0001重量％至約2重量％的量存在。合適的緩沖劑可以包括，例如，檸檬酸、檸檬酸鈉、磷酸、磷酸鉀、和多種其它酸和鹽?？梢匀芜x地使用2種或更多種緩沖劑的混合物。所述緩沖劑或其混合物通常以總組合物的約0.001重量％至約4重量％的量存在。本發(fā)明的car材料在藥物制劑中的濃度可以變化，例如，按重量計(jì)，從小于約1％(通常在或至少約10％)到多達(dá)約20％至約50％或更多，且可以主要根據(jù)選擇的特定給藥模式通過流體體積和粘度來選擇。用于制備可施用的(例如，可胃腸外施用的)組合物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的或顯而易見的，且更詳細(xì)地描述在，例如，remington：thescienceandpracticeofpharmacy，lippincottwilliams&wilkins；第21版(2005年5月1日)。以下用于口服給藥、氣溶膠給藥、腸胃外給藥(例如，皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜間和鞘內(nèi))和局部給藥的制劑僅僅是示例性的并且決不是限制性的。超過一種路徑可以用于施用本發(fā)明的car材料，并且在某些情況下，特定途徑可以提供比另一種途徑更快速和更有效的反應(yīng)。適于口服給藥的制劑可以包含以下或者由以下組成：(a)液體溶液，如溶解在稀釋劑如水、鹽水或橙汁中的有效量的本發(fā)明的car材料；(b)膠囊、囊劑、片劑、錠劑(lozenge)和錠劑(troche)，其各自含有預(yù)定量的為固體或顆粒的活性成分；(c)粉劑；(d)在合適液體中的混懸劑；和(e)合適的乳狀劑。液體制劑可以包括稀釋劑，如水和醇，例如，乙醇、芐醇和聚乙烯醇，同時(shí)添加或不添加藥用表面活性劑。膠囊形式可以是常規(guī)的硬殼明膠類型或軟殼明膠類型，其含有，例如，表面活性劑、潤滑劑和惰性填料，如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉。片劑形式可以包括以下各項(xiàng)中的一種更多種：乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸、微晶纖維素、阿拉伯樹膠、明膠、瓜爾膠、膠體二氧化硅、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸和其他賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、潤濕劑、防腐劑、調(diào)味劑和其他藥用賦形劑。錠劑(lozenge)形式可以包含具有風(fēng)味的本發(fā)明的car材料，通常是蔗糖和阿拉伯樹膠或黃蓍膠，以及在惰性基質(zhì)中包含本發(fā)明的car材料的軟錠劑(pastille)，所述惰性基質(zhì)如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯樹膠，包含除此之外的賦形劑的乳劑，凝膠等，其是本領(lǐng)域中已知的。適用于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性的、等滲無菌注射液，其可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使制劑與目標(biāo)受體的血液等滲的溶質(zhì)，以及水性和非水性的無菌混懸劑，其可以包括助懸劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。本發(fā)明的car材料可以在藥物載體中在生理用稀釋劑中被施用，所述稀釋劑如無菌液體或液體的混合物，包括水、鹽水、葡萄糖水溶液和相關(guān)糖溶液，醇，如乙醇或十六醇，二醇，如丙二醇或聚乙二醇，二甲亞砜，甘油，縮酮如2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇，醚，聚(乙二醇)400，油劑，脂肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或乙?；舅岣视王?在添加或不添加藥用表面活性劑的情況下，所述藥用表面活性劑如脂肪酸鹽(soap)或去垢劑)，助懸劑，如果膠，卡波姆，甲基纖維素，羥基丙基甲基纖維素，或羧基甲基纖維素，或乳化劑和其他藥物佐劑?？梢杂糜谀c胃外制劑中的油包括石油、動(dòng)物油、植物油或合成油。油的具體實(shí)例包括花生、大豆、芝麻、棉籽、玉米、橄欖、礦脂和礦物油。適用于腸胃外制劑的脂肪酸包括油酸、硬脂酸和異硬脂酸。油酸乙酯和豆蔻酸異丙酯是合適的脂肪酸酯的實(shí)例。適用于腸胃外制劑中的脂肪酸鹽(soap)包括脂肪堿金屬鹽、銨鹽和三乙醇胺鹽，而合適的去垢劑包括(a)陽離子去垢劑如，例如，二甲基二烷基鹵化銨和烷基鹵化吡啶，(b)陰離子去垢劑如，例如，烷基，芳基，和烯烴磺酸酯(或鹽)，烷基，烯烴，醚，和單甘油酯硫酸酯，和磺基琥珀酸酯(或鹽)，(c)非離子去垢劑如，例如，脂肪胺氧化物，脂肪酸鏈烷醇酰胺，和聚乙烯聚丙烯共聚物，(d)兩性去垢劑如，例如，烷基-β-氨基丙酸酯(或鹽)，和2-烷基-咪唑啉季銨鹽，和(e)它們的混合物。腸胃外制劑將典型地包含例如約0.5重量％至約25重量％的溶液中的本發(fā)明的car材料?？梢允褂梅栏瘎┖途彌_劑。為了最小化或消除注射位點(diǎn)處的刺激，所述組合物可以包含一種或多種非離子表面活性劑，所述非離子表面活性劑具有例如約12至約17的親水親油平衡值(hlb)。表面活性劑在所述制劑中的量典型地為例如約5重量％至約15重量％。合適的表面活性劑包括聚乙二醇脫水山梨醇脂肪酸酯，如單油酸脫水山梨醇酯和環(huán)氧乙烷與通過縮合環(huán)氧丙烷和丙二醇形成的疏水基質(zhì)的高分子量加合物。腸胃外制劑可以被提供在單位劑量或多劑量的密封容器如安瓿和小藥瓶中，并且可以存儲(chǔ)在冷凍干燥(凍干)條件中，其僅需要在使用前的即刻添加注射用無菌液體賦形劑，例如，水。臨時(shí)注射溶液和混懸劑可以制備自之前所述類型的無菌粉劑、粒劑和片劑?？勺⑸渲苿┦歉鶕?jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案。對(duì)用于可注射組合物的有效藥物載體的需要是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(見，例如，pharmaceuticsandpharmacypractice(藥物和藥學(xué)實(shí)踐)，j.b.lippincottcompany，philadelphia，pa，banker和chalmers編輯，238-250頁(1982)，以及ashphandbookoninjectabledrugs(關(guān)于可注射藥物的ashp手冊(cè))，toissel，第4版，622-630頁(1986))。局部制劑(包括可用于透皮藥物釋放的那些)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，且在本發(fā)明的實(shí)施方案的背景下適合施用于皮膚。本發(fā)明的car材料(單獨(dú)地或者與其它合適的組分組合地)可以被制成經(jīng)由吸入給藥的氣溶膠制劑。這些氣溶膠制劑可以被置于加壓可用的推進(jìn)劑(諸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮?dú)獾?中。它們也可以被制成用于非加壓制劑的藥物，如在噴霧器或霧化器中。所述噴霧制劑也可以用于粘膜噴霧?！坝行Я俊被颉爸委煛挠行Я俊北硎荆阋灶A(yù)防或治療個(gè)體中的癌癥的劑量。對(duì)于治療或預(yù)防用途而言，有效量將取決于，例如，要治療的疾病或障礙的階段和嚴(yán)重程度，患者的年齡、重量和一般健康情況，以及處方醫(yī)師的判斷。劑量的大小也將取決于：選擇的活性劑，施用方法，施用時(shí)機(jī)和頻率，可能伴隨特定活性劑的施用的任何不利副作用的存在、性質(zhì)和程度，以及期望的生理效應(yīng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明白，不同的疾病或障礙可能需要包括多次施用的長期治療，可能在每輪或不同輪施用中使用本發(fā)明的car材料。作為示例且無意限制本發(fā)明，本發(fā)明的car材料的劑量可以是約0.001至約1000mg/kg要治療的受試者的體重/天，約0.01至約10mg/kg體重/天，約0.01mg至約1mg/kg體重/天。當(dāng)本發(fā)明的car材料是宿主細(xì)胞時(shí)，宿主細(xì)胞的一種示例性劑量可以是約100萬個(gè)細(xì)胞(1mg細(xì)胞/劑)的最小值。當(dāng)本發(fā)明的car材料是被包裝在病毒中的核酸時(shí)，病毒的一種示例性劑量可以是約1ng/劑。就本發(fā)明的目的而言，施用的本發(fā)明的car材料的量或劑量應(yīng)當(dāng)足以在合理的時(shí)間范圍內(nèi)，在受試者或動(dòng)物中產(chǎn)生治療或預(yù)防反應(yīng)。例如，本發(fā)明的car材料的劑量應(yīng)當(dāng)足以在自給藥起的約2小時(shí)以上例如約12小時(shí)至約24個(gè)小時(shí)以上的時(shí)間中結(jié)合抗原，或檢測(cè)、治療或預(yù)防疾病。在某些實(shí)施方案中，時(shí)間可以更長。劑量將取決于具體的本發(fā)明的car材料的效力和動(dòng)物(例如，人)的狀態(tài)，以及待治療的動(dòng)物(例如，人)的體重。就本發(fā)明的目的而言，這樣的測(cè)定可以用于確定向哺乳動(dòng)物施用的起始劑量：所述測(cè)定包含例如，在各自被施用不同劑量的t細(xì)胞的一組哺乳動(dòng)物之間，比較在向所述哺乳動(dòng)物施用給定劑量的所述t細(xì)胞后，靶細(xì)胞被溶解的程度和/或表達(dá)本發(fā)明的car的t細(xì)胞分泌ifn-γ的程度。施用特定劑量后靶細(xì)胞溶解的程度和/或ifn-γ分泌的程度可以通過本領(lǐng)域中已知的方法測(cè)定。除了前述藥物組合物以外，本發(fā)明的car材料可以被配制為包合絡(luò)合物，諸如環(huán)糊精包合絡(luò)合物或脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可以用于將本發(fā)明的car材料靶向特定組織。脂質(zhì)體也可以用于增加本發(fā)明的car材料的半衰期。許多方法可用于制備脂質(zhì)體，如在例如下述文獻(xiàn)中所述：szoka等，ann.rev.biophys.bioeng.，9，467(1980)和美國專利4,235,871、4,501,728、4,837,028和5,019,369。在本發(fā)明的實(shí)施方案的背景下有用的遞送系統(tǒng)可以包括定時(shí)釋放、延遲釋放和持續(xù)釋放遞送系統(tǒng)，使得本發(fā)明的組合物的遞送提前發(fā)生，且具有足夠的時(shí)間以造成要治療的部位的致敏。本發(fā)明的組合物可以與其它治療劑或療法結(jié)合使用。這樣的系統(tǒng)可以避免本發(fā)明的組合物的重復(fù)施用，由此增加受試者和醫(yī)師的便利，且可以特別適合用于本發(fā)明的某些組合物實(shí)施方案。許多類型的釋放遞送系統(tǒng)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可利用的和已知的。它們包括基于聚合物的系統(tǒng)，諸如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己內(nèi)酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羥基丁酸和聚酸酐。含有藥物的前述聚合物的微膠囊描述于，例如，美國專利5,075,109。遞送系統(tǒng)也包括非聚合物系統(tǒng)，其為：脂質(zhì)，包括甾醇諸如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或者中性脂肪如甘油一酯、甘油二脂和甘油三酯；水凝膠釋放系統(tǒng)；硅橡膠(sylastic)系統(tǒng)；基于肽的系統(tǒng)；蠟包被物；使用常規(guī)粘合劑和賦形劑的壓制片劑；部分融合的植入物；等。具體例子包括但不限于：(a)侵蝕系統(tǒng)，其中活性組合物以在基質(zhì)內(nèi)的形式被包含，諸如在美國專利4,452,775、4,667,014、4,748,034和5,239,660中描述的那些，以及(b)擴(kuò)散系統(tǒng)，其中活性組分以受控速率從聚合物滲透，例如在美國專利3,832,253和3,854,480中描述的那些。另外，可以使用基于泵的硬件遞送系統(tǒng)，其中的一些適合用于植入。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解，本發(fā)明的car材料可以以任何數(shù)量的方式修飾，以致本發(fā)明的car材料的治療或預(yù)防效力通過所述修飾而增加。例如，本發(fā)明的car材料可以通過接頭直接或間接與靶向部分綴合。將化合物(例如本發(fā)明的car材料)綴合到靶向部分的實(shí)踐是本領(lǐng)域中已知的。見，例如，wadwa等，j.drugtargeting3：111(1995)和美國專利號(hào)5,087,616。備選地，本發(fā)明的car材料可以被改變成貯庫(depot)形式，以致本發(fā)明的car材料釋放到其被給藥于的身體中的方式關(guān)于時(shí)間和體內(nèi)的位置被控制(見，例如，美國專利4,450,150)。本發(fā)明的car材料的貯庫形式可以是，例如，可植入組合物，所述可植入組合物包含本發(fā)明的car材料和多孔或非多孔材料，如聚合物，其中本發(fā)明的car材料被所述材料包封或通過所述材料和/或非多孔材料的分解擴(kuò)散。然后貯庫被植入到所需的體內(nèi)位置中，并且本發(fā)明的car材料以預(yù)定的速率從所述植入物釋放。當(dāng)本發(fā)明的car材料與一種或多種其他治療劑一起施用時(shí)，可以將一種或多種其他治療劑共同施用給哺乳動(dòng)物?！肮餐┯谩笔侵福跁r(shí)間上足夠靠近地施用一種或多種其他治療劑和本發(fā)明的car材料，使得本發(fā)明的car材料可以增強(qiáng)一種或多種其他治療劑的作用，或反之亦然。在這點(diǎn)上，可以首先施用本發(fā)明的car材料，并可以然后施用一種或多種其他治療劑，或反之亦然。備選地，可以同時(shí)地施用本發(fā)明的car材料和一種或多種其他治療劑?？梢耘ccar材料共同施用的一種示例性的治療劑是il-2。據(jù)信，il-2會(huì)增強(qiáng)本發(fā)明的car材料的治療效果。為了本發(fā)明的方法(其中將宿主細(xì)胞或細(xì)胞群施用給宿主)的目的，所述細(xì)胞可以是與宿主同種異源的細(xì)胞或宿主的自體細(xì)胞。預(yù)見到，本發(fā)明的藥物組合物、car、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞或細(xì)胞群可以用于治療或預(yù)防宿主的疾病的方法。不受特定理論或機(jī)制的約束，本發(fā)明的car具有生物學(xué)活性，例如，識(shí)別抗原(例如，egfrviii)的能力，使得當(dāng)被細(xì)胞表達(dá)時(shí)，car能夠介導(dǎo)針對(duì)表達(dá)所述car對(duì)其具有特異性的抗原(例如，egfrviii)的細(xì)胞的免疫反應(yīng)。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了一種治療或預(yù)防宿主的癌癥的方法，所述方法包括：以有效地治療或預(yù)防宿主的癌癥的量，給所述宿主施用本發(fā)明的car、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群、抗體和/或其抗原結(jié)合部分和/或藥物組合物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案進(jìn)一步包括，在施用本發(fā)明的car材料之前，使宿主淋巴細(xì)胞耗竭。淋巴細(xì)胞耗竭(lymphodepletion)的例子包括、但是可以不限于：非骨髓根除的(nonmyeloablative)淋巴細(xì)胞耗竭化學(xué)療法、骨髓根除的淋巴細(xì)胞耗竭化學(xué)療法、全身輻照等。為了本發(fā)明的方法(其中施用宿主細(xì)胞或細(xì)胞群)的目的，所述細(xì)胞可以是與宿主同種異源的細(xì)胞或宿主的自體細(xì)胞。優(yōu)選地，所述細(xì)胞是宿主自體細(xì)胞。在本文中提及的宿主可以是任何宿主。所述宿主可以是哺乳動(dòng)物。本文中使用的術(shù)語“哺乳動(dòng)物”表示任何哺乳動(dòng)物，包括、但不限于，嚙齒目(orderrodentia)的哺乳動(dòng)物，如小鼠和倉鼠，和兔形目(orderlogomorpha)的哺乳動(dòng)物，如兔子。所述哺乳動(dòng)物可以來自食肉目(ordercarnivora)，包括貓科(貓)和犬科(狗)。所述哺乳動(dòng)物可以來自偶蹄目(orderartiodactyla)，包括?？?牛)和豬科(豬)，或奇蹄目(orderperssodactyla)，包括馬科(馬)。所述哺乳動(dòng)物可以是靈長目(orderprimates)、ceboids或simoids(猴)，或類人目(orderanthropoids)(人和猿)。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物是人。關(guān)于本發(fā)明的方法，所述癌癥可以是任何癌癥，包括下述的任一種：急性淋巴細(xì)胞癌，急性髓性白血病，小泡型橫紋肌肉瘤，膀胱癌(例如，膀胱惡性腫瘤)，骨癌，腦癌(例如，髓母細(xì)胞瘤)，乳腺癌，肛門、肛管或肛門直腸的癌癥，眼睛的癌癥，肝內(nèi)膽管的癌癥，關(guān)節(jié)的癌癥，頸、膽囊或胸膜的癌癥，鼻、鼻腔或中耳的癌癥，口腔的癌癥，外陰的癌癥，慢性淋巴細(xì)胞白血病，慢性骨髓癌，結(jié)腸癌，食管癌，宮頸癌，纖維肉瘤，胃腸類癌瘤，頭頸癌(例如，頭頸鱗狀細(xì)胞癌)，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，腎癌，喉癌，白血病，液體腫瘤，肝癌，肺癌(例如，非小細(xì)胞肺癌)，淋巴瘤，惡性間皮瘤，肥大細(xì)胞瘤，黑素瘤，多發(fā)性骨髓瘤，鼻咽癌，非霍奇金淋巴瘤，卵巢癌，胰腺癌，腹膜、網(wǎng)膜和腸系膜癌，咽癌，前列腺癌，直腸癌，腎癌，皮膚癌，小腸癌，軟組織癌，實(shí)體瘤，胃癌，睪丸癌，甲狀腺癌，和輸尿管癌。優(yōu)選地，所述癌癥是神經(jīng)膠質(zhì)瘤(例如，室管膜瘤、星形細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤和寡星狀細(xì)胞瘤)，更優(yōu)選多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(gbm)(也被稱作成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤iv級(jí)和iv級(jí)星形細(xì)胞瘤)。優(yōu)選地，所述癌癥的特征在于egfrviii的表達(dá)。術(shù)語″治療″和″預(yù)防″以及從其衍生的詞語，當(dāng)在本文中使用時(shí)，不一定意味100％或完全的治療或預(yù)防。而是，有不同程度的治療或預(yù)防，本領(lǐng)域技術(shù)人員承認(rèn)其具有潛在的有利或治療效果。在這點(diǎn)上，本發(fā)明的方法可以提供任何量的任何水平的對(duì)哺乳動(dòng)物癌癥的治療或預(yù)防。此外，本發(fā)明的方法提供的治療或預(yù)防可以包括治療或預(yù)防被治療或預(yù)防的疾病(例如癌癥)的一種或多種病癥或癥狀。同樣，當(dāng)用于本文的目的時(shí)，“預(yù)防”可以包括延遲疾病或其癥狀或病癥的發(fā)作。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了本發(fā)明的car、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群、抗體或其抗原結(jié)合部分、或藥物組合物用于治療或預(yù)防宿主的癌癥的用途。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了一種檢測(cè)癌癥在宿主中的存在的方法，所述方法包括：(a)使包含一個(gè)或多個(gè)得自宿主的細(xì)胞的樣品與本發(fā)明的car、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群、抗體和/或其抗原結(jié)合部分接觸，由此形成復(fù)合物，(b)和檢測(cè)所述復(fù)合物，其中檢測(cè)到所述復(fù)合物指示癌癥在宿主中的存在。所述樣品可以通過任意合適的方法得到，例如，活組織檢查或尸檢?；罱M織檢查是從個(gè)體取出組織和/或細(xì)胞。這樣的取出可以是從個(gè)體收集組織和/或細(xì)胞，以便對(duì)取出的組織和/或細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)可以包括確定個(gè)體是否具有和/或正在遭受某種病癥或疾病狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)。所述病癥或疾病可以是例如癌癥。關(guān)于本發(fā)明的檢測(cè)癌癥在宿主中的存在的方法的一個(gè)實(shí)施方案，包含宿主細(xì)胞的樣品可以是含有全細(xì)胞、其裂解物或全細(xì)胞裂解物的級(jí)分(例如，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)級(jí)分、全蛋白級(jí)分、或核酸級(jí)分)的樣品。如果樣品包含全細(xì)胞，所述細(xì)胞可以是宿主的任意細(xì)胞，例如，任意器官或組織的細(xì)胞，包括血細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。對(duì)本發(fā)明的檢測(cè)方法來說，所述接觸可以發(fā)生在相對(duì)于宿主的體外或體內(nèi)。優(yōu)選地，接觸是在體外。并且，對(duì)復(fù)合物的檢測(cè)可以通過本領(lǐng)域中已知的任何數(shù)量的方式發(fā)生。例如，本文所述的本發(fā)明的tcr、多肽、蛋白、核酸、重組表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、細(xì)胞群或抗體或其抗原結(jié)合部分，可以被標(biāo)記以可檢測(cè)的標(biāo)記物如，例如，放射性同位素，熒光團(tuán)(例如，熒光素異硫氰酸酯(fitc)，藻紅蛋白(pe))，酶(例如，堿性磷酸酶、辣根過氧化酶)，和元素顆粒(例如，金顆粒)。針對(duì)識(shí)別靶細(xì)胞的能力和抗原特異性來測(cè)試car的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，clay等人，j.immunol.，163：507-513(1999)教導(dǎo)了測(cè)量細(xì)胞因子(例如，干擾素-γ、粒細(xì)胞/單核細(xì)胞集落刺激因子(gm-csf)、腫瘤壞死因子α(tnf-α)或白介素2(il-2))的釋放的方法。另外，如在zhao等，j.immunol.，174：4415-4423(2005)中所述，可以通過測(cè)量細(xì)胞的細(xì)胞毒性來評(píng)價(jià)car功能。下述實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明，但是，當(dāng)然不應(yīng)該解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1本實(shí)施例證實(shí)，包含seqidno：10(h139ab-hcd828bbz)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)的car在與egfrviii工程改造的靶細(xì)胞系共培養(yǎng)以后產(chǎn)生ifn-γ。通過將得自7種不同的抗-egfrviii抗體的單鏈抗體序列與cd28和cd3ζ的t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域結(jié)合，生產(chǎn)靶向egfrviii的嵌合抗原受體?；谑罂贵w3c10、mr-1、y10、l8a4和人抗體131、139和13.1.2(它們插入在γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體msgv1中)，裝配了共計(jì)9種不同的構(gòu)建體(在2種構(gòu)建體中，轉(zhuǎn)換vl和vh的次序)。通過轉(zhuǎn)導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞(pbl)和使用抗-fab特異性試劑(或在以后的實(shí)驗(yàn)中，蛋白l)的熒光激活細(xì)胞分選(facs)分析，試驗(yàn)了每種構(gòu)建體的表達(dá)。9種構(gòu)建的載體中的3種在轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl中可再現(xiàn)地表現(xiàn)出car表達(dá)，特別是基于抗體3c10、l8a4和139(seqidno：11)的那些car被證實(shí)在轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl中具有細(xì)胞表面染色。為了試驗(yàn)這3種抗-egfrviiicar構(gòu)建體的生物學(xué)活性，生產(chǎn)了γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上清液并用于轉(zhuǎn)導(dǎo)pbl，將所述pbl與表達(dá)egfrviii的靶細(xì)胞系共培養(yǎng)。為了開發(fā)體外系統(tǒng)以評(píng)價(jià)潛在的egfrviii靶向載體，建立了適當(dāng)?shù)陌屑?xì)胞系，因?yàn)闆]有已知的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系表達(dá)egfrviii。從商業(yè)來源得到野生型egfr基因，并通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)構(gòu)建viii形式并將其插入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中，所述載體共表達(dá)neor基因。轉(zhuǎn)導(dǎo)和選擇幾個(gè)細(xì)胞系(nih-3t3、bhk、hek-293gp、u87和u251)，并通過viii特異性抗體確定egfrviii表達(dá)。通過與egfrviii工程改造的建立的細(xì)胞系一起的共培養(yǎng)，證實(shí)了所有3種構(gòu)建體的特異性ifn-γ生產(chǎn)(圖3a、3b和3c，與nih-3t3、bhk和293gp來源的系的共培養(yǎng)的代表性數(shù)據(jù))。將bhk細(xì)胞(bhk)、egfr轉(zhuǎn)導(dǎo)的bhk(bhk-egfrwt)、egfrviii轉(zhuǎn)導(dǎo)的bhk(bhk-egfrviii)、3t3細(xì)胞(3t3ut)、egfr轉(zhuǎn)導(dǎo)的3t3(3t3-egfrwt)、egfrviii轉(zhuǎn)導(dǎo)的3t3(3t3-egfrviii)、293gp細(xì)胞(293gput)或egfrviii轉(zhuǎn)導(dǎo)的293gp(293gp-egfrviii)與指定的car-轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl(或作為對(duì)照的未轉(zhuǎn)導(dǎo)的(ut)pbl)共培養(yǎng)，并確定ifn-γ水平(值為共培養(yǎng)過夜以后以pg/ml計(jì)的ifn-γ)。在這些共培養(yǎng)測(cè)定中，當(dāng)暴露于表達(dá)egfrviii的靶細(xì)胞而不是被工程改造成過表達(dá)野生型egfr基因的細(xì)胞時(shí)，所有3種car3c10、l8a4和139產(chǎn)生了特異性的ifn-γ生產(chǎn)?；谙率霭l(fā)現(xiàn)使用基于139scfv的car構(gòu)建體(seqidno：11)進(jìn)行所有隨后測(cè)定：139car具有稍微更高的反應(yīng)性，且是人起源的，并且因此在患者中可能具有更低的免疫原性。將得自2種被139-car轉(zhuǎn)導(dǎo)的供體的t細(xì)胞分類成cd8和cd4t細(xì)胞群，并針對(duì)反應(yīng)性獨(dú)立地進(jìn)行試驗(yàn)(圖4a(供體2)和4b(供體3))。cd4和cd8t細(xì)胞在與egfrviii靶細(xì)胞的共培養(yǎng)中特異性地產(chǎn)生了ifn-γ。得自41bb共刺激分子的t細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)元件的添加可以增強(qiáng)car工程改造的t細(xì)胞的存活。使用得自cd28-41bb-cd3ξ的信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域裝配了新構(gòu)建體(seqidno：13)，并與原始cd28-cd3ζ構(gòu)建體(seqidno：14)進(jìn)行了對(duì)比。盡管通過facs對(duì)28bbzcar載體構(gòu)建的檢測(cè)小于28z構(gòu)建體，轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞對(duì)表達(dá)egfrviii的靶標(biāo)具有同樣的反應(yīng)性。用這些載體和對(duì)照載體(gfp或her2/neucar)轉(zhuǎn)導(dǎo)t細(xì)胞，并與工程改造的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系和多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤干細(xì)胞(gbm-tsc)系一起共培養(yǎng)(表3a和3b)。對(duì)建立的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤系u87和u251工程改造以表達(dá)對(duì)照gfp基因、野生型egfr基因(egfrwt)或egfrviii基因(，egfrviii)。將這些靶細(xì)胞或gbm-tsc系308、822和1228與被含有cd28-cd3ζ(139-28z)(seqidno：14)或cd28-41bb-cd3ζ(139-bbz；h139ab-hcd828bbz)(seqidno：13)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的egfrviii-car載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞一起共培養(yǎng)。確定ifn-γ水平(值為與工程改造成表達(dá)egfrviii的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系共培養(yǎng)過夜以后以pg/ml計(jì)的ifn-γ)。其他t細(xì)胞對(duì)照包括ut-未轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl、gfp-gfp載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl和her2/neu特異性的car。通過ifn-γ釋放確定的生物學(xué)活性(表3a和3b)證實(shí)，所述2種不同的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞對(duì)表達(dá)egfrviii的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系u87和u251具有同樣的反應(yīng)性。表3a表3butgfp139-28z139-bbzher2/neugbm-tsc3080359871123578gbm-tsc82209516832267372gbm-tsc12280013871493371實(shí)施例2本實(shí)施例證實(shí)，包含seqidno：10(h139ab-hcd828bbz)或seqidno：11(h139ab-hcd28z)的car特異性地裂解被工程改造成表達(dá)突變體egfrviii的細(xì)胞系。接下來在標(biāo)準(zhǔn)51cr-釋放測(cè)定中確定了egfrviiicar工程改造的t細(xì)胞裂解靶細(xì)胞的能力(圖1a-d和2a-d)。將未轉(zhuǎn)導(dǎo)的(untd)pbl或被對(duì)照gfp載體(gfp)、139-28zcar(viii-28z)(編碼seqidno：11)或139-28bbz(viii-bbz)(編碼seqidno：10)轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl與51cr標(biāo)記的靶腫瘤細(xì)胞系一起共培養(yǎng)4小時(shí)(圖1a-1d：親本u87，gfp，野生型egfr，或egfrviii工程改造的)。將未轉(zhuǎn)導(dǎo)的(untd)pbl或被對(duì)照gfp載體(gfp)、抗-erbb2car(erbb2)、139-28zcar(viii-28z)(編碼seqidno：11)或139-28bbz(viii-bbz)(編碼seqidno：10)轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl與51cr標(biāo)記的靶腫瘤細(xì)胞系一起共培養(yǎng)4小時(shí)(圖2a-2d：親本u251，gfp，野生型egfr，或egfrviii工程改造的)。在圖1a-1d和2a-2d的實(shí)驗(yàn)中，使用公式：[(特異性釋放-自發(fā)釋放)/總釋放-自發(fā)釋放)]，在給定的e∶t比，測(cè)量腫瘤細(xì)胞的特異性裂解。如圖1a-1d和2a-d所示，兩種載體僅特異性地裂解被工程改造成表達(dá)突變體egfrviii的細(xì)胞系，而沒有裂解對(duì)照或野生型egfr工程改造的細(xì)胞系。實(shí)施例3本實(shí)施例證實(shí)，抗-egfrviiicar(seqidno：10(h139ab-hcd828bbz))在與腫瘤干細(xì)胞(tsc)系一起共培養(yǎng)后產(chǎn)生ifn-γ。通過對(duì)許多不同種類的癌細(xì)胞系的詳細(xì)分子分析，已證實(shí)，建立的癌細(xì)胞系經(jīng)常不會(huì)反映原發(fā)性人癌癥的分子特征，對(duì)于神經(jīng)膠質(zhì)瘤系也是如此。使用建立的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的一種替代方案是，分析腫瘤干細(xì)胞(tsc)系。tsc范例提議，在癌癥中存在這樣的細(xì)胞亞群，其產(chǎn)生分化的腫瘤中的所有細(xì)胞。已經(jīng)證實(shí)，原位神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中未發(fā)現(xiàn)的性質(zhì)，并且具有與腫瘤干細(xì)胞一致的特征。進(jìn)一步證實(shí)，在原發(fā)性人腫瘤來源的tsc及其匹配的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系之間存在顯著的表型和基因型差異。直接來源于原發(fā)性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的tsc具有與正常神經(jīng)干細(xì)胞的極大相似性，并重現(xiàn)了人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的基因型、基因表達(dá)譜和體內(nèi)生物學(xué)。這些發(fā)現(xiàn)提示，對(duì)于理解原發(fā)性人腫瘤的生物學(xué)來說，來源于神經(jīng)膠質(zhì)瘤的tsc可以是比許多常用的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系更可靠的模型。因此，針對(duì)egfrviii的存在分析了3個(gè)tsc系，并通過rt-pcr證實(shí)，egfrviii在這些系中表達(dá)。然后用抗-egfrviiicar載體(表達(dá)seqidno：10(h139ab-hcd828bbz))工程改造得自2種供體(效應(yīng)物i和效應(yīng)物ii)的pbl，將其與神經(jīng)膠質(zhì)瘤tsc系和對(duì)照表達(dá)egfrviii的細(xì)胞系共培養(yǎng)。將5種轉(zhuǎn)導(dǎo)后的pbl與神經(jīng)膠質(zhì)瘤tsc系或已經(jīng)被工程改造成表達(dá)野生型egfr或egfrviii的細(xì)胞系u251共培養(yǎng)。在所有共培養(yǎng)物中，未轉(zhuǎn)導(dǎo)的(ut)細(xì)胞和gfp轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞充當(dāng)陰性對(duì)照，且抗-erbb2car充當(dāng)陽性對(duì)照。如圖5a和5b所示，egfrviiicar工程改造的t細(xì)胞顯示了u251egfrviii的特異性識(shí)別(當(dāng)與u251egfr野生型基因工程改造的細(xì)胞相比時(shí))，并識(shí)別試驗(yàn)的所有3種神經(jīng)膠質(zhì)瘤tsc系(308、822和1228)。這些結(jié)果進(jìn)一步支持了egfrviiicar工程改造的t細(xì)胞作為神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的潛在免疫療法的用途。實(shí)施例4本實(shí)施例證實(shí)，car-工程改造的t-細(xì)胞在t細(xì)胞數(shù)目擴(kuò)大后保持反應(yīng)性。使用139-28bbz(h139ab-hcd828bbz)載體轉(zhuǎn)導(dǎo)得自2位成膠質(zhì)細(xì)胞瘤患者、以及1位健康供體的pbl，并針對(duì)表達(dá)和反應(yīng)性進(jìn)行試驗(yàn)。將轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞與egfrviii-工程改造的u87細(xì)胞共培養(yǎng)，然后通過細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色進(jìn)行測(cè)定。得自患者和健康供體的工程改造的t細(xì)胞在cd8+和cd8-(推測(cè)是cd4+)cd3+t細(xì)胞中都表現(xiàn)出的特異性ifn-γ生產(chǎn)(7.8％-16.2％ifn-γ+，相對(duì)于，針對(duì)對(duì)照u87系的＞0.36％)。在成膠質(zhì)細(xì)胞瘤患者t細(xì)胞和健康供體之間的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也是類似的。如果將來的臨床應(yīng)用需要大量t細(xì)胞(＞1x109)，這些可以通過例如14-天快速擴(kuò)增方案(rep)得到(riddell等，j.immunol.methods，128：189-201(1990))獲得。為了證實(shí)139-28bbz(h139ab-hcd828bbz)car轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞可以擴(kuò)增至足夠用于患者治療的數(shù)目且仍然保持反應(yīng)性，對(duì)這些t細(xì)胞進(jìn)行rep和再試驗(yàn)。139-car轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞保持它們特異性生產(chǎn)ifn-γ的能力，如表4所示。表4實(shí)施例5本實(shí)施例證實(shí)了可用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞所用的病毒載體上清液的生產(chǎn)細(xì)胞克隆的生產(chǎn)。使用139-28bbz(h139ab-hcd828bbz)egfrviiicar構(gòu)建體，在滿足美國食品和藥品管理局(fda)關(guān)于人基因治療臨床試驗(yàn)的指南的條件下，生產(chǎn)pg13γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體生產(chǎn)細(xì)胞克隆。使用1個(gè)細(xì)胞克隆(克隆f10)在經(jīng)歷4天收集的6批收獲物中生產(chǎn)18l病毒載體上清液。使用每批收獲物轉(zhuǎn)導(dǎo)供體pbl，并確定基因轉(zhuǎn)移效率和生物學(xué)活性?；谵D(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞表達(dá)car和特異性識(shí)別表達(dá)egfrviii的細(xì)胞系的能力，所有收獲物產(chǎn)生了具有生物學(xué)活性的上清液。在該測(cè)定中，收獲物1的反應(yīng)性稍微低于收獲物2-6。為了試驗(yàn)對(duì)正常人組織的可能毒性，使用收獲物3和4的混合物(pool)來轉(zhuǎn)導(dǎo)不同的供體，并將這些轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞與7種不同的原代人成年和新生兒細(xì)胞培養(yǎng)物(來源于上皮、內(nèi)皮和成纖維細(xì)胞)一起共培養(yǎng)。如通過ifn-γ生產(chǎn)所確定的，egfrviiicar轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞與試驗(yàn)的任何原代人細(xì)胞培養(yǎng)物沒有反應(yīng)性。實(shí)施例6本實(shí)施例證實(shí)了治療或預(yù)防人患者的癌癥的方法，所述方法包括：給所述患者施用包含seqidno：10(h139ab-hcd828bbz)的car。合格中選條件合格的患者具有在組織學(xué)上證實(shí)的通過免疫組織化學(xué)(ihc)確定表達(dá)egfrviii的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤；先前用放射療法(用或不用化學(xué)療法)進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)治療失敗；karnofsky評(píng)分大于或等于60％；心臟、肺和實(shí)驗(yàn)室參數(shù)在可接受的限度內(nèi)。研究設(shè)計(jì)：使用i/ii期設(shè)計(jì)進(jìn)行本研究。將患者以2組進(jìn)行試驗(yàn)的i期和ii期部分兩者：1)在治療開始時(shí)需要使用類固醇的、具有復(fù)發(fā)性惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的患者，或2)在治療開始時(shí)不需要使用類固醇的、具有復(fù)發(fā)性惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的患者。在試驗(yàn)的i期部分中確定每個(gè)單個(gè)組的最高耐受劑量以后，研究進(jìn)入ii期部分。再次將患者分成相同的2組。對(duì)于評(píng)價(jià)的2個(gè)組中的每個(gè)組，使用單階段ii期設(shè)計(jì)進(jìn)行研究?；颊呓邮芊枪撬韪?、但是淋巴細(xì)胞耗竭的預(yù)處理方案，包括環(huán)磷酰胺和氟達(dá)拉濱和隨后靜脈內(nèi)輸注離體腫瘤反應(yīng)性的egfrviiicar基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbmc，加上靜脈內(nèi)(iv)阿地白介素(aldesleukin)(720,000iu/kg，每8小時(shí)1次，最多15次給藥)。在治療結(jié)束后4周(±7天)，患者經(jīng)歷完全腫瘤評(píng)價(jià)(身體和神經(jīng)學(xué)的檢查、使用和不使用釓的腦mri)和臨床實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)。如果患者具有穩(wěn)定的疾病或腫瘤收縮，每1個(gè)月(±7天)進(jìn)行重復(fù)的完全評(píng)價(jià)。第一年以后，在適當(dāng)時(shí)每2個(gè)月(±7天)繼續(xù)用該評(píng)價(jià)跟蹤持續(xù)反應(yīng)的患者。細(xì)胞制備：通過白細(xì)胞除去術(shù)得到pbmc(大約1x1010個(gè)細(xì)胞)。在有抗-cd3(okt3)和阿地白介素存在下培養(yǎng)全pbmc，以便刺激t細(xì)胞生長。通過將大約1x107至5x108個(gè)細(xì)胞暴露于含有抗-egfrviiicar逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的上清液，開始轉(zhuǎn)導(dǎo)。擴(kuò)增這些轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞，并測(cè)試其抗腫瘤活性。通過針對(duì)car蛋白的facs分析，確定成功的car基因轉(zhuǎn)移，并通過在表達(dá)egfrviii的細(xì)胞上測(cè)量的細(xì)胞因子釋放，測(cè)試抗腫瘤反應(yīng)性。將每個(gè)轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl群體的成功car基因轉(zhuǎn)移定義為＞10％car陽性細(xì)胞，并且對(duì)于生物學(xué)活性而言，γ-干擾素分泌必須是至少200pg/ml并且是背景水平的2倍。抗-egvrviiicar轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl：用含有嵌合抗-egfrviiicar的逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液轉(zhuǎn)導(dǎo)pbl。按照目前的良好生產(chǎn)操作規(guī)程(cgmp)條件，制備和保存編碼針對(duì)抗原egfrviii的嵌合抗原受體(car)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上清液(pg13-139-f10)。所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體利用msgv1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體主鏈，且包括4,032個(gè)堿基對(duì)，包括得自鼠干細(xì)胞病毒的5′ltr(啟動(dòng)子)、包含剪接供體(sd)和剪接受體位點(diǎn)的包裝信號(hào)、含有信號(hào)肽信號(hào)的基于人抗-egfrviiiscfv(mab139)的car蛋白(人gm-csfr)、139輕鏈可變區(qū)、接頭肽、139重鏈可變區(qū)、cd8(鉸鏈，跨膜)、cd28(細(xì)胞質(zhì)區(qū)域)、4-1bb(細(xì)胞質(zhì)區(qū)域)和tcrζ(細(xì)胞質(zhì)區(qū)域)，繼之以鼠干細(xì)胞病毒3′ltr。所述載體包含核苷酸序列seqidno：13，其編碼氨基酸序列seqidno：10。根據(jù)發(fā)起人的證書，通過rna斑點(diǎn)印跡確定物理滴度。在生產(chǎn)結(jié)束后，將上清液在-80℃保存在sbvpf，連續(xù)不斷地監(jiān)測(cè)溫度。根據(jù)請(qǐng)求，將上清液在干冰上遞送以用于體外轉(zhuǎn)導(dǎo)。對(duì)于不同的患者，不重復(fù)使用相同單位的上清液。已經(jīng)證實(shí)逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度在立即融化和立即施用(包被預(yù)先用retronectin包被的組織培養(yǎng)孔)以后是穩(wěn)定的。載體的操作遵循biosafetylevel-2(bsl-2)的指南。i期-劑量逐步增加：該方案以1期劑量逐步增加設(shè)計(jì)開始，使用8個(gè)組群(cohort)和2個(gè)不同組(一組是在治療時(shí)接受類固醇的患者，一組是沒有接受類固醇的患者)。將每個(gè)組處理為完全單獨(dú)的劑量逐步增加試驗(yàn)。首先，該方案在前3個(gè)劑量組群中的每一個(gè)中招募1位患者，直到該患者經(jīng)歷劑量限制毒性(dlt)。在組群3以后，所有隨后的組群進(jìn)入1期劑量逐步增加設(shè)計(jì)，5個(gè)組群，n＝3。對(duì)于每個(gè)組群，egfrviii工程改造的細(xì)胞的總數(shù)是根據(jù)表5：表5順序地招募患者，因此招募不進(jìn)入更高的劑量水平，直至患者已經(jīng)在前一個(gè)組群中被治療。但是，將患者劑量逐步增加至給定組內(nèi)的下一個(gè)組群，而不依賴于在其他組中發(fā)生什么。如果不能培養(yǎng)足夠的細(xì)胞來滿足分配的組群的標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)輸入的細(xì)胞的數(shù)目在適當(dāng)組群中招募患者。在組群1-3中，如果患者經(jīng)歷dlt，那么以該劑量治療另外5位患者，以保證不超過1/6的患者在進(jìn)入下一個(gè)更高水平之前具有dlt。如果已經(jīng)在3-6位患者中鑒別出具有2例或更多例dlt的水平，則以次低劑量處理另外5位患者，以致總數(shù)為6，以便在開始ii期部分之前進(jìn)一步表征最高耐受劑量的安全性。如果在第一組群中存在1例或更少的dlt，則研究進(jìn)入第二組群。如果劑量限制毒性發(fā)生在第一組群，將該組群擴(kuò)大至n＝6位患者。如果2例dlt發(fā)生在第一組群，則終止研究。在組群4-8中，由于特定劑量水平的細(xì)胞輸注，單個(gè)患者將經(jīng)歷劑量限制毒性，應(yīng)當(dāng)以該劑量治療另外3位患者，以保證不超過1/6的患者在進(jìn)入下一個(gè)更高水平之前具有dlt。如果已經(jīng)在3-6位患者中鑒別出具有2例或更多例dlt的水平，則以次低劑量處理另外3位患者，總數(shù)為6，以便在開始ii期部分之前進(jìn)一步表征最高耐受劑量的安全性。最大耐受細(xì)胞劑量是6位患者中≤1位患者經(jīng)歷dlt時(shí)的最高劑量，或在3個(gè)劑量水平中的任一個(gè)處沒有觀察到dlt時(shí)研究的最高劑量水平。在接受工程改造的pbl細(xì)胞之前，所有患者接受非骨髓根除的、但是淋巴細(xì)胞耗竭的預(yù)處理方案，包括環(huán)磷酰胺和氟達(dá)拉濱(fludarabine)和隨后在1-4天中靜脈內(nèi)輸注體外腫瘤反應(yīng)性、egfrviiicar基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的pbl加iv阿地白介素(720,000iu/kg，每8小時(shí)1次，最多15劑)。最大耐受細(xì)胞劑量是6位患者中≤1位患者經(jīng)歷dlt時(shí)的最高劑量，或在3個(gè)劑量水平中的任一個(gè)處沒有觀察到dlt時(shí)研究的最高劑量水平。如下定義劑量限制毒性：2級(jí)或更大變應(yīng)性反應(yīng)，或包括支氣管痙攣或全身性蕁麻疹的反應(yīng)；所有3級(jí)和4級(jí)毒性，除了骨髓抑制，將其定義為淋巴細(xì)胞減少癥、嗜中性粒細(xì)胞減少癥和血小板減少癥；il-2預(yù)期的毒性；在細(xì)胞輸注后24小時(shí)內(nèi)發(fā)生的毒性(與細(xì)胞輸注有關(guān))，利用兩劑對(duì)乙酰氨基酚(650mg)或兩劑苯海拉明(25mg)，其在8小時(shí)內(nèi)可逆轉(zhuǎn)至2級(jí)或以下。治療計(jì)劃治療計(jì)劃闡述在表6中：表61最后1劑氟達(dá)拉濱后1-4天2在細(xì)胞輸注后24小時(shí)內(nèi)開始3繼續(xù)至嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)＞1x109/l持續(xù)連續(xù)3天或＞5x109/l。4tmp/smx計(jì)劃應(yīng)當(dāng)調(diào)節(jié)至qd每周3次(星期一、星期三、星期五)，并持續(xù)至少6個(gè)月且直到cd4＞200x25繼續(xù)至anc＞1000/mm36在hsv陽性的患者中，繼續(xù)至anc大于1000/mm3免疫學(xué)試驗(yàn)：在治療之前和治療之后4-6周，進(jìn)行單采血液成分術(shù)(apheresis)。在其他時(shí)間點(diǎn)，通過使用在ficoll墊上的離心的純化，從全血得到患者外周血淋巴細(xì)胞(pbl)。將這些pbmc的等分試樣1)冷凍保存，用于細(xì)胞功能的免疫學(xué)監(jiān)測(cè)，2)進(jìn)行dna和rna提取，用于car的pcr分析和載體拷貝數(shù)估測(cè)，和3)直接測(cè)試淋巴細(xì)胞和進(jìn)行體外培養(yǎng)。直接免疫學(xué)監(jiān)測(cè)包括：使用car特異性的染色，通過facs分析定量可與egfrviii反應(yīng)的t細(xì)胞。離體免疫學(xué)測(cè)定包括，通過大量pbl(±抗原刺激)和通過其他實(shí)驗(yàn)研究(諸如細(xì)胞裂解，如果可得到足夠的細(xì)胞的話)的細(xì)胞因子釋放。如果細(xì)胞數(shù)目是有限的，優(yōu)選的是，直接分析免疫學(xué)活性。通過包括1)輸注前pbmc和2)在輸注時(shí)冷凍保存的工程改造的pbl的等分試樣，將免疫學(xué)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化。一般而言，這些測(cè)定中的2-3倍的差異指示真實(shí)的生物學(xué)差異。監(jiān)測(cè)基因治療試驗(yàn)：持久性和有能力復(fù)制的逆轉(zhuǎn)錄病毒(rcr)：工程改造的細(xì)胞存活：使用現(xiàn)有的pcr技術(shù)，在pbmc樣品中定量car和載體存在。將使用car-特異性的染色的免疫學(xué)監(jiān)測(cè)用于增強(qiáng)基于pcr的分析。這會(huì)提供數(shù)據(jù)來估測(cè)源自輸入的細(xì)胞的淋巴細(xì)胞的體內(nèi)存活。另外，進(jìn)行了cd4和cd8t-細(xì)胞的測(cè)量，并且通過使用特異性的pcr測(cè)定來確定循環(huán)中的這些t-細(xì)胞子集的研究，所述pcr測(cè)定能夠檢測(cè)每種逆轉(zhuǎn)錄病毒載體工程改造的t-細(xì)胞的獨(dú)特dna序列。在細(xì)胞輸注之前，得到患者的血液樣品，并通過pcr進(jìn)行分析以檢測(cè)rcr，并且在細(xì)胞施用后3和6個(gè)月時(shí)以及1年時(shí)，進(jìn)行rcrpcr。如果所有以前的試驗(yàn)已經(jīng)是陰性的且具有簡(jiǎn)要病歷，此后每年保存血液樣品。如果患者在該試驗(yàn)期間死亡或發(fā)展腫瘤，努力測(cè)定用于rcr的活組織檢查樣品。如果任何治療后樣品是陽性的，進(jìn)一步分析rcr并咨詢fda采取更廣泛的患者隨訪。rcrpcr測(cè)定會(huì)檢測(cè)galv殼基因(envelopgene)，并在合同下由位于indiana大學(xué)的naionalgenevectorlaboratory進(jìn)行。這些試驗(yàn)的結(jié)果由執(zhí)行rcr試驗(yàn)的承包方和國家癌癥研究所(naionalcancerinstitute，nci)surgerybranch研究團(tuán)隊(duì)維護(hù)。由于這些研究的性質(zhì)，可能觀察到特定t-細(xì)胞克隆的擴(kuò)增作為響應(yīng)于腫瘤抗原的腫瘤反應(yīng)性t-細(xì)胞增殖。因此，在免疫學(xué)上和在分子上小心地跟蹤t-細(xì)胞持久性。在細(xì)胞輸注后1個(gè)月，然后在3、6、12個(gè)月，此后每年，得到血液樣品(5-10ml)，用于確定car轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的持久性。如果任何患者在第6個(gè)月顯示出car基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的高持久性水平(通過半定量dna-pcr，使用對(duì)載體序列特異的引物)，對(duì)以前保存的樣品進(jìn)行這樣的技術(shù)：所述技術(shù)允許鑒別持久的car基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的克隆性(clonality)。這樣的技術(shù)可以包括t細(xì)胞克隆或lam-pcr30。如果在隨訪過程中鑒別出源自car基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)或單克隆t細(xì)胞克隆，則鑒別出整合位點(diǎn)和序列，并隨后針對(duì)人基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，以確定所述序列是否與任何已知的人癌癥有關(guān)。如果觀察到優(yōu)勢(shì)的整合位點(diǎn)，則在首次觀察以后以不超過3個(gè)月的間隔使用t細(xì)胞克隆或lam-pcr試驗(yàn)，以觀察所述克隆是否持續(xù)或是暫時(shí)的。在單克隆性為持續(xù)的所有情況下，且特別是在存在克隆擴(kuò)增的情況下，不論是否已知該序列與已知的人癌癥有關(guān)，應(yīng)當(dāng)密切監(jiān)測(cè)該受試者的惡性腫瘤征象，從而可以在早期開始治療(如果可用的話)。治療后評(píng)價(jià)(隨訪)常規(guī)隨訪：在初次治療方案(定義為最后一劑阿地白介素后)以后4周(±7天)，評(píng)價(jià)患者。如果患者具有sd或腫瘤縮小，則每月(±7天)進(jìn)行重復(fù)完全評(píng)價(jià)持續(xù)12個(gè)月，然后在適當(dāng)時(shí)每1-2個(gè)月(±7天)進(jìn)行評(píng)價(jià)。在每次評(píng)價(jià)時(shí)，執(zhí)行下述評(píng)價(jià)i)身體檢查，包括神經(jīng)學(xué)檢查和karnofsky評(píng)分；ii)chem20：(鈉(na)、鉀(k)、氯(cl)、總co2(碳酸氫鹽)、肌酸酐、葡萄糖、尿素氮(bun)、白蛋白、總鈣、總鎂(mg)、無機(jī)磷、堿性磷酸酶、alt/gpt、ast/got、總膽紅素、直接膽紅素、ld、總蛋白、總ck、尿酸)、完全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和甲狀腺板；iii)cbc；iv)毒性評(píng)估；v)使用和不用釓的腦mri；和vi)檢測(cè)rcr和car基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的持久性：(如上所述)。僅在第一次隨訪時(shí)，進(jìn)行5升單采血液成分術(shù)。隨后，在隨訪(大約每個(gè)月)時(shí)得到60ml血液，達(dá)至少3個(gè)月。冷凍保存外周血單核細(xì)胞，使得免疫學(xué)試驗(yàn)可以進(jìn)行。接受基因轉(zhuǎn)移的患者的長期隨訪：在細(xì)胞輸注后，每年進(jìn)行身體檢查并記錄，持續(xù)5年，以評(píng)價(jià)長期安全性。5年后，通過電話聯(lián)系或郵寄的問卷調(diào)查從存活患者得到的健康狀況數(shù)據(jù)。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的長期隨訪期是15年。反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)：作為該試驗(yàn)的一部分，以及為了輔助確定腫瘤進(jìn)展，做出所有努力來觀察患者腫瘤隨時(shí)間的放射照相變化?？蓽y(cè)量的疾?。和ㄟ^mri掃描，具有清楚限定的邊緣的二維對(duì)比增強(qiáng)病變(2個(gè)至少10mm的垂直直徑)在2個(gè)或更多個(gè)軸向切片上可見。測(cè)量胞囊或外科手術(shù)腔周圍的腫瘤是特別困難的挑戰(zhàn)。一般而言，這樣的病變應(yīng)當(dāng)視作不可測(cè)量的，除非存在測(cè)量直徑≥10mm的結(jié)節(jié)組分。在確定反應(yīng)時(shí)，不應(yīng)當(dāng)測(cè)量胞囊或外科手術(shù)腔。不可測(cè)量、但是可評(píng)價(jià)的疾?。?jiǎn)尉S可測(cè)量的病變，邊緣未清楚限定的團(tuán)塊，或具有多個(gè)胞囊組分的病變。不可評(píng)價(jià)的疾?。簺]有確定的、可測(cè)量的或可評(píng)價(jià)的腫瘤?？蓽y(cè)量的病變：完全反應(yīng)(cr)：完全反應(yīng)要求所有以下各項(xiàng)：持續(xù)至少4周的所有增強(qiáng)的可測(cè)量的和不可測(cè)量的疾病的完全消失；沒有新病變；穩(wěn)定的或改善的非增強(qiáng)(t2/flair)病變；和患者必須停用皮質(zhì)類固醇或僅僅處于生理學(xué)替換劑量，且在臨床上是穩(wěn)定的或改善的。在沒有4周后的確認(rèn)掃描的情況下，該反應(yīng)僅僅視作穩(wěn)定的疾病。部分反應(yīng)(pr)：部分反應(yīng)要求所有以下各項(xiàng)：與基線相比，持續(xù)至少4周的所有可測(cè)量的增強(qiáng)病變的垂直直徑的積和減小≥50％；沒有不可測(cè)量的疾病的進(jìn)展；沒有新病變；與基線掃描相比，在相同或更低劑量的皮質(zhì)類固醇，穩(wěn)定的或改善的非增強(qiáng)(t2/flair)病變；和患者所用的皮質(zhì)類固醇劑量必須不大于在基線掃描處的劑量，且在臨床上是穩(wěn)定的或改善的。在沒有4周后的確認(rèn)掃描的情況下，該反應(yīng)僅僅視作穩(wěn)定疾病。穩(wěn)定的：如果患者不符合完全反應(yīng)、部分反應(yīng)或進(jìn)展，則發(fā)生穩(wěn)定的疾病，并且其要求以下各項(xiàng)：與基線掃描相比，在相同或更低的皮質(zhì)類固醇劑量上，穩(wěn)定的非增強(qiáng)(t2/flair)病變，和臨床上穩(wěn)定的狀態(tài)。在以下事件中被認(rèn)為顯示穩(wěn)定疾病的最后一次掃描是當(dāng)皮質(zhì)類固醇劑量等同于基線劑量時(shí)得到的掃描：由于新征狀和征象而增加皮質(zhì)類固醇劑量，而在神經(jīng)成像上沒有確認(rèn)疾病進(jìn)展，且隨后的隨訪成像顯示由于疾病進(jìn)展而需要該皮質(zhì)類固醇增加。進(jìn)展：進(jìn)展由下述的任一項(xiàng)來定義：在穩(wěn)定或增加的皮質(zhì)類固醇劑量上，增強(qiáng)病變的垂直直徑的積和具有≥25％增加(相對(duì)于最佳反應(yīng)，或如果沒有減小，則相對(duì)于基線)；在穩(wěn)定或增加的皮質(zhì)類固醇劑量上，相對(duì)于基線掃描或治療開始以后的最佳反應(yīng)，并非由于共病事件的t2/flair非增強(qiáng)病變的顯著增加；任何新病變的出現(xiàn)；不可測(cè)量的病變的清楚進(jìn)展；或不可歸因于除了腫瘤以外的其他原因或皮質(zhì)類固醇劑量減小的確定的臨床惡化。由于死亡或情況惡化而不能返回以進(jìn)行評(píng)價(jià)也應(yīng)視作進(jìn)展。具有不可測(cè)量的增強(qiáng)疾病的患者如果其病變的尺寸顯著增加，且變?yōu)榭蓽y(cè)量的(最小雙向直徑≥10mm，且在至少2個(gè)軸向切片上可見)，也被認(rèn)為已經(jīng)經(jīng)歷進(jìn)展。導(dǎo)致進(jìn)展的從不可測(cè)量的病變向可測(cè)量的病變的轉(zhuǎn)變，在理論上可以在腫瘤尺寸具有相對(duì)較小的增加的情況下發(fā)生(例如，9x9mm病變[不可測(cè)量]增加至10x11mm病變[可測(cè)量])。理想地，所述變化應(yīng)當(dāng)是顯著的(最大直徑增加＞5mm，或增強(qiáng)病變的垂直直徑的積和增加≥25％)。一般而言，如果存在關(guān)于病變是否已經(jīng)進(jìn)展的疑惑，繼續(xù)治療和密切隨訪評(píng)價(jià)有助于澄清是否存在真實(shí)進(jìn)展。可評(píng)價(jià)的病變：在每次評(píng)價(jià)時(shí)記錄可評(píng)價(jià)的病變。如果合適的話，也應(yīng)當(dāng)評(píng)估flair或t2-加權(quán)圖像作為可評(píng)價(jià)的疾病。使用下述量表來表示mri掃描的相對(duì)變化：+3＝腫瘤消失(cr)+2＝明確更好(pr)+1＝可能更好0＝無變化-1＝可能更差-2＝明確更差(pd)-3＝新病變的發(fā)展(pd)。可評(píng)價(jià)的病變的反應(yīng)的定義完全反應(yīng)(cr)：定義為這樣的情況：mri掃描評(píng)級(jí)為+3，且通過神經(jīng)成像不再看到腫瘤，并且患者不再需要類固醇用于控制腫瘤誘導(dǎo)的腦水腫。部分反應(yīng)(pr)：定義為，mri掃描評(píng)級(jí)為+2，前提條件是，自最近一個(gè)評(píng)價(jià)時(shí)段以來，患者沒有增加他/她的類固醇劑量。進(jìn)展(p)：定義為這樣的情況：mri掃描評(píng)級(jí)為-2或-3，或者存在新病變。穩(wěn)定疾病(sd)：定義為這樣的情況：mri掃描顯示沒有變化或可能(-1或+1)變化?；颊邞?yīng)當(dāng)正在接受穩(wěn)定或減小劑量的類固醇。本文引用的所有的參考文獻(xiàn)，包括出版物、專利申請(qǐng)和專利，通過引用以如同每一參考文獻(xiàn)單獨(dú)且特別表示通過引用結(jié)合的相同程度結(jié)合于此，并且在本文中完全闡述。術(shù)語“一個(gè)”和”一種”和”所述”以及相似指示詞在描述本發(fā)明的上下文中(特別是在后附權(quán)利要求中)的使用應(yīng)該解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非另外在本文中指明或者明顯與上下文相抵觸。術(shù)語“包括”，“具有”，“包含”，和“含有”應(yīng)該被解釋為開放的術(shù)語(即，意指“包括，但不限于”)，除非另外指明。本文中數(shù)值范圍的引用僅意欲作為單獨(dú)引用落入該范圍的每個(gè)獨(dú)立值的速記方法，除非本文中另外指明，并且每個(gè)獨(dú)立值結(jié)合在本說明書中，如同其在本文中獨(dú)立地引用那樣。本文所述的所有方法可以以任何適當(dāng)?shù)捻樞蜻M(jìn)行，除非本文另外指明或者明顯與上下文相抵觸。本文提供的任何和全部實(shí)例或示例性語言(例如，“諸如”)的使用僅意欲更好地舉例說明本發(fā)明，并且不產(chǎn)生對(duì)本發(fā)明范圍的限制，除非另外要求。在本說明書中沒有任何語言應(yīng)該被解釋為指示對(duì)實(shí)施本發(fā)明是重要的任何未要求的元件。本文記述了本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案，包括本發(fā)明人已知的用于實(shí)施本發(fā)明的最佳模式。當(dāng)閱讀前述說明書后，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，這些優(yōu)選實(shí)施方案的變化可以變得顯而易見。本發(fā)明人預(yù)計(jì)熟練的技術(shù)人員適當(dāng)使用所有變化，并且本發(fā)明人意欲本發(fā)明以與本文具體描述不同的方式實(shí)施。因此，本發(fā)明包括在后附權(quán)利要求中引用的主題由現(xiàn)行法律所允許的所有改進(jìn)和等價(jià)物。此外，本發(fā)明包括上述元件以其所有可能的變化的任意組合，除非本文另外指明，或者明顯與上下文相抵觸。序列表<110>美國衛(wèi)生和人力服務(wù)部<120>抗-表皮生長因子受體變體iii嵌合抗原受體及其用于治療癌癥的用途<130>709980<150>us61/473,409<151>2011-04-08<160>14<170>patentinversion3.5<210>1<211>107<212>prt<213>人<400>1aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileargasnasn202530leualatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysargleuile354045tyralaalaserasnleuglnserglyvalproserargphethrgly505560serglyserglythrgluphethrleuilevalserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysleuglnhishissertyrproleu859095thrserglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>2<211>116<212>prt<213>人<400>2gluvalglnvalleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr202530alametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045seralaileserglyserglyglyserthrasntyralaaspserval505560lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaglyserserglytrpserglutyrtrpglyglnglythrleuval100105110thrvalserser115<210>3<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>合成<400>3argthrglyserthrserglyserglylysproglyserglyglugly151015ser<210>4<211>22<212>prt<213>人工序列<220><223>合成<400>4metvalleuleuvalthrserleuleuleucysgluleuprohispro151015alapheleuleuilepro20<210>5<211>262<212>prt<213>人工序列<220><223>合成<400>5metvalleuleuvalthrserleuleuleucysgluleuprohispro151015alapheleuleuileproaspileglnmetthrglnserproserser202530leuseralaservalglyaspargvalthrilethrcysargalaser354045glnglyileargasnasnleualatrptyrglnglnlysproglylys505560alaprolysargleuiletyralaalaserasnleuglnserglyval65707580proserargphethrglyserglyserglythrgluphethrleuile859095valserserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcysleugln100105110hishissertyrproleuthrserglyglyglythrlysvalgluile115120125lysargthrglyserthrserglyserglylysproglyserglyglu130135140glysergluvalglnvalleugluserglyglyglyleuvalglnpro145150155160glyglyserleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser165170175sertyralametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglu180185190trpvalseralaileserglyserglyglyserthrasntyralaasp195200205servallysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthr210215220leutyrleuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyr225230235240tyrcysalaglyserserglytrpserglutyrtrpglyglnglythr245250255leuvalthrvalserser260<210>6<211>83<212>prt<213>人<400>6phevalprovalpheleuproalalysprothrthrthrproalapro151015argproprothrproalaprothrilealaserglnproleuserleu202530argproglualacysargproalaalaglyglyalavalhisthrarg354045glyleuaspphealacysaspiletyriletrpalaproleualagly505560thrcysglyvalleuleuleuserleuvalilethrleutyrcysasn65707580hisargasn<210>7<211>200<212>prt<213>人<400>7argserlysargserargleuleuhisserasptyrmetasnmetthr151015proargargproglyprothrarglyshistyrglnprotyralapro202530proargaspphealaalatyrargserargpheservalvallysarg354045glyarglyslysleuleutyrilephelysglnprophemetargpro505560valglnthrthrglnglugluaspglycyssercysargpheproglu65707580gluglugluglyglycysgluleuargvallyspheserargserala859095aspalaproalatyrglnglnglyglnasnglnleutyrasngluleu100105110asnleuglyargarggluglutyraspvalleuasplysargarggly115120125argaspproglumetglyglylysproargarglysasnproglnglu130135140glyleutyrasngluleuglnlysasplysmetalaglualatyrser145150155160gluileglymetlysglygluargargargglylysglyhisaspgly165170175leutyrglnglyleuserthralathrlysaspthrtyraspalaleu180185190hismetglnalaleuproproarg195200<210>8<211>106<212>prt<213>人<400>8ilegluvalmettyrproproprotyrleuaspasnglulysserasn151015glythrileilehisvallysglylyshisleucysproserproleu202530pheproglyproserlysprophetrpvalleuvalvalvalglygly354045valleualacystyrserleuleuvalthrvalalapheileilephe505560trpargserlysargserargleuleuhisserasptyrmetasnmet65707580thrproargargproglyprothrarglyshistyrglnprotyrala859095proproargaspphealaalatyrargser100105<210>9<211>112<212>prt<213>人<400>9argvallyspheserargseralaaspalaproalatyrglnglngly151015glnasnglnleutyrasngluleuasnleuglyargarggluglutyr202530aspvalleuasplysargargglyargaspproglumetglyglylys354045proargarglysasnproglngluglyleutyrasngluleuglnlys505560asplysmetalaglualatyrsergluileglymetlysglygluarg65707580argargglylysglyhisaspglyleutyrglnglyleuserthrala859095thrlysaspthrtyraspalaleuhismetglnalaleuproproarg100105110<210>10<211>548<212>prt<213>人工序列<220><223>合成<400>10metvalleuleuvalthrserleuleuleucysgluleuprohispro151015alapheleuleuileproaspileglnmetthrglnserproserser202530leuseralaservalglyaspargvalthrilethrcysargalaser354045glnglyileargasnasnleualatrptyrglnglnlysproglylys505560alaprolysargleuiletyralaalaserasnleuglnserglyval65707580proserargphethrglyserglyserglythrgluphethrleuile859095valserserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcysleugln100105110hishissertyrproleuthrserglyglyglythrlysvalgluile115120125lysargthrglyserthrserglyserglylysproglyserglyglu130135140glysergluvalglnvalleugluserglyglyglyleuvalglnpro145150155160glyglyserleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser165170175sertyralametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglu180185190trpvalseralaileserglyserglyglyserthrasntyralaasp195200205servallysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthr210215220leutyrleuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyr225230235240tyrcysalaglyserserglytrpserglutyrtrpglyglnglythr245250255leuvalthrvalserseralaalaalaphevalpro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