本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域分離提取技術(shù)，具體地，涉及貴州老鷹茶中一類新的黃烷醇骨架，及其分離制備的方法。

背景技術(shù)：

老鷹茶原產(chǎn)大婁山，現(xiàn)仍處于野生和半野生狀態(tài)，是我國(guó)南方各民族民間長(zhǎng)期飲用的一種植物代用茶，尤以四川、重慶及貴州遵義地區(qū)少數(shù)民族飲用歷史悠久。研究表明老鷹茶具有抗氧化、降糖、降脂、抗炎、抗菌、抗病毒等功效，有較大的開發(fā)和應(yīng)用前景，符合國(guó)家倡導(dǎo)的大健康研究主題。

毛豹皮樟(litseacoreanalévl.var.lanuginosa(migo)yangetp.h.huang)來源的老鷹茶中化合物以黃酮類化合物居多，因?yàn)楹^多酚羥基和共軛體系，紫外吸收強(qiáng)，極性大，分離純化時(shí)，可以充分利用這些特點(diǎn)?，F(xiàn)有的技術(shù)中，從毛豹皮樟來源的老鷹茶中分離黃酮類化合物已公開發(fā)表如下方法：(1)將老鷹茶用沸水提取，濃縮物上大孔樹脂柱，乙醇-水梯度洗脫，再反復(fù)過大孔樹脂柱色譜得到黃酮及其苷類化合物。參見：葉輝，郁建平.老鷹茶中三種黃酮類物質(zhì)抗脂質(zhì)過氧作用初探[j].中藥材，2004,27(2):113-115.其缺點(diǎn)是只提取了水溶性成分。(2)將老鷹茶以12倍量的80％乙醇提取，石油醚脫脂后正丁醇萃取，再用聚酰胺柱色譜分離富集黃酮類化合物，再經(jīng)硅膠柱色譜和sephadexlh-20柱分離得到黃酮類及其苷類化合物。參見：陳玉璞,程文明,李俊.老鷹茶中黃酮類化學(xué)成分分析[j].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,43(1):65-67.其缺點(diǎn)也是只得到大極性黃酮類化合物。(3)將老鷹茶以10倍量的70％乙醇提取，提取物分散到水中后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取得到不同部位。乙酸乙酯和正丁醇部位經(jīng)硅膠柱層析，sephadexlh-20柱層析和制備高效液相色譜分離得到黃酮類化合物。參見：王靜，陸維麗，張義龍，等.老鷹茶的化學(xué)成分研究[j].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,49(4):479-483.其缺點(diǎn)是未曾系統(tǒng)分離乙酸乙酯部位，得到的也是極性大的黃酮及其苷類。

以上幾種方法側(cè)重于使用分離極性大的黃酮類化合物的色譜技術(shù)，無法分離得到脂溶性成分，使用的分離方法對(duì)樣品損失大，微量成分也不容易得到。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種從老鷹茶中分離得到的新骨架黃烷醇類化合物并提供了制備該類化合物的方法，該提取方法可控性和重現(xiàn)性好，樣品損失少，操作方便，對(duì)中等極性黃酮提取充分，也適用于工業(yè)生產(chǎn)。

其中，本發(fā)明提供一種老鷹茶中分離得到的新骨架黃烷醇類化合物，其特征在于：所述新骨架化合物成分的化學(xué)名稱為：catechin-[6,7-bc]-4-(undec-10-en-1-yl)-dihydro-2(3h)-pyranone，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明還提供了一種老鷹茶中分離得到的新骨架黃烷醇類化合物的提取分離方法，包括以下步驟。

1)取毛豹皮樟來源的老鷹茶地上部分，經(jīng)干燥、粉碎后，用體積分?jǐn)?shù)70～95％乙醇回流提取1～4次，減壓濃縮得到乙醇浸膏；

2)將步驟1)中所得乙醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取1～4次，減壓濃縮得到各部位浸膏；

3)將步驟2)中石油醚和乙酸乙酯部位浸膏合并后上硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯以不同體積比梯度洗脫，結(jié)合tlc檢測(cè)方法，根據(jù)黃烷醇極性不同分為若干個(gè)組分；

4)將步驟3)中某個(gè)組分過制備hplc，用甲醇-水等度洗脫，分為若干個(gè)亞組分；

5)將步驟4)中得到的某個(gè)亞組分過制備hplc，用甲醇-水等度洗脫，得到此新化合物。

上述步驟4)和步驟5)用乙腈-水代替甲醇-水等度洗脫，也可以得到基本類似結(jié)果。

本發(fā)明從毛豹皮樟來源的老鷹茶中的提取黃烷醇類化合物的優(yōu)點(diǎn)在于，首先通過硅膠柱色譜，用tlc方法結(jié)合紫外跟蹤迅速找到黃酮部位，高效富集中等極性黃烷醇部位，再利用制備hplc色譜得到單體，整個(gè)過程只使用一次硅膠柱色譜，減少樣品損失，分離方法可控性和重現(xiàn)性好，成本較低，填料可反復(fù)使用，操作也較簡(jiǎn)單。

附圖說明

圖1為本發(fā)明新骨架黃烷醇類化合物的hr-esi-ms；

圖2為本發(fā)明新骨架黃烷醇類化合物的¹h-nmr光譜圖；

圖3為本發(fā)明新骨架黃烷醇類化合物的¹³c-nmr光譜圖；

圖4為本發(fā)明新骨架黃烷醇類化合物的dept135光譜圖；

圖5為本發(fā)明新骨架黃烷醇類化合物的核磁共振hsqc光譜圖；

圖6為本發(fā)明新骨架黃烷醇類化合物的核磁共振hmbc光譜圖。

具體實(shí)施方式

現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

本發(fā)明所述的新骨架黃烷醇類化合物的制備方法包括以下步驟：

1)取毛豹皮樟來源的老鷹茶樹葉1.6kg，經(jīng)干燥、粉碎后，用體積分?jǐn)?shù)95％乙醇回流提取3次，減壓濃縮得到乙醇浸膏210g；

2)將步驟1)中乙醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，減壓濃縮得到各部位浸膏；

3)將步驟2)中石油醚和乙酸乙酯部位浸膏點(diǎn)tlc板合并之后上硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯以體積比100:0、9:1、8:2、6:4、0:100梯度洗脫，結(jié)合tlc檢測(cè)方法，根據(jù)黃烷醇極性不同分為7個(gè)組分，fr.1～fr.7，以下每個(gè)組分都結(jié)合tlc分析；

4)將步驟3)中第四個(gè)組分fr.4過制備hplc，用體積分?jǐn)?shù)92％的甲醇-水，色譜柱用c18，20×250mm，流速20ml/min洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，收集5～15min之間餾分分為5個(gè)部分fr.4.1～fr.4.5；

5)步驟4)中fr.4.3過制備hplc，用體積分?jǐn)?shù)85％甲醇-水，色譜柱用c18，10×250mm，流速4ml/min洗脫,收集8～12min之間色譜峰，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，得到新骨架黃烷醇化合物。

上述步驟1)中回流提取用的含水乙醇體積分?jǐn)?shù)85％，90％，100％，回流提取1次，2次，4次；步驟2)中萃取1次，2次，4次；步驟4)中用體積分?jǐn)?shù)88％，90％，94％的乙腈-水；步驟5)中用體積分?jǐn)?shù)80％，83％，90％的乙腈-水。步驟同實(shí)施例1，也可以取得本發(fā)明所述的有益效果。

本發(fā)明進(jìn)行tlc檢識(shí)的條件：展開劑為石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)及氯仿-甲醇系統(tǒng)，顯色劑a：紫外燈(254nm)下觀察熒光；顯色劑b：10％硫酸乙醇噴灑，105℃烘烤至顯色。

結(jié)構(gòu)鑒定：利用的光譜技術(shù)，主要包括核磁共振譜(¹h-nmr、¹³c-nmr、dept、hsqc、hmbc)和質(zhì)譜分析(hr-esi-ms)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。

該化合物為黃色膠狀物，遇三氯化鐵試劑顯藍(lán)色。hr-esi-ms[m+h]⁺m/z497.2526(計(jì)算值497.2534),[m-h]^-m/z495.2383(計(jì)算值495.2388),結(jié)合nmr譜確定化合物的分子式為c29h36o7,通過光譜技術(shù)，確定該化合物為catechin-[6,7-bc]-4-(undec-10-en-1-yl)-dihydro-2(3h)-pyranone。其核磁數(shù)據(jù)見表1。

表1新骨架化合物的核磁數(shù)據(jù)(400/100mhz，cd3cocd3)：

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。