本發(fā)明屬于微生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種牛用微生物制劑的制備方法。

背景技術(shù)：

牛肉是一種受大眾喜愛(ài)的食物，其牛肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，其含有豐富的蛋白質(zhì)，氨基酸組成比豬肉更接近人體需要，能提高機(jī)體抗病能力，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育及手術(shù)后、病后調(diào)養(yǎng)的人在補(bǔ)充失血和修復(fù)組織等方面特別適宜，寒冬食牛肉，有暖胃作用，為寒冬補(bǔ)益佳品，中醫(yī)認(rèn)為：牛肉有補(bǔ)中益氣、滋養(yǎng)脾胃、強(qiáng)健筋骨、化痰息風(fēng)、止渴止涎的功能，適用于中氣下陷、氣短體虛，筋骨酸軟和貧血久病及面黃目眩之人食用。

目前，大多數(shù)養(yǎng)殖戶牛在養(yǎng)殖過(guò)程中對(duì)日糧進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)搭配，基本滿足牛的生長(zhǎng)需求，但是在實(shí)際過(guò)程中，牛對(duì)飼料的消化率并不能達(dá)到理論效果，導(dǎo)致生產(chǎn)緩慢、出欄率低；這都與胃腸道功能下降、病原菌侵入以及應(yīng)激性等因素的相關(guān)；并且由于微生物制劑的價(jià)格高昂、作用效果較差，因此其應(yīng)用還未得到大面積的推廣。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

具體是通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種牛用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備發(fā)酵液：將禽畜糞便和桑樹(shù)葉按照(5.5～6.3)：1的重量配比混勻，置于攪拌機(jī)中粉碎，加入去離子水調(diào)整水分含量為70～80％，加入ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph值為6.8～7.5得發(fā)酵液；

(2)培養(yǎng)：將微生物菌種接種于步驟(1)中的發(fā)酵液中，控制溫度為45～50℃，通氣條件為0.3～0.5v/v，發(fā)酵6～10h，再添加營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)入搖床轉(zhuǎn)速為120～160r/min，溫度為35～45℃中震蕩發(fā)酵，得到培養(yǎng)液；

(3)菌粉制備：將步驟(2)培養(yǎng)液在4～6℃條件下3000～400r/min離心25～30min，干燥至粉末，真空包裝即可。

所述ph調(diào)節(jié)劑為碳酸鈣、碳酸鈉和氫氧化鈉，其質(zhì)量比為(2～4)：1.5：1。

所述微生物菌種包括多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌。

所述多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的接種量分別為步驟(1)發(fā)酵液總量的5～7％、1～3％、2～4％和2～4％。

所述營(yíng)養(yǎng)物是由玉米粉10～15份、甘油3～5份、低聚木糖2～4份、葡萄糖1～3份、磷酸二氫鉀1～3份混合后經(jīng)100～120℃高溫滅菌，冷卻至35～40℃制成。

所述培養(yǎng)液中多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的cfu數(shù)分別為107/g、110/g、108/g和105/g以上。

所述步驟(1)發(fā)酵液在接種前置于超聲波中處理10～20s，頻率為15～20khz。

所述牛用微生物制劑，添加劑量為牛日糧的0.1～1％。

本發(fā)明有益效果：

本發(fā)明微生物制劑通過(guò)制備發(fā)酵液、培養(yǎng)、菌粉制備等步驟制備而成，該微生物制劑能夠在牛胃腸道內(nèi)大量繁殖、形成優(yōu)勢(shì)菌群，促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)繁殖，競(jìng)爭(zhēng)性抑制腸道內(nèi)的病菌繁殖，減少病原菌對(duì)胃腸道的損害，同時(shí)還能在胃腸道內(nèi)產(chǎn)生乳酸、過(guò)氧化氫等物質(zhì)，能夠有效的抑制致病菌的活性；該微生物制劑還能改善胃腸道功能，促進(jìn)胃腸道的蠕動(dòng)，提高牛對(duì)飼料的利用率，促進(jìn)牛的生長(zhǎng)發(fā)育；此外還能提高牛的免疫功能，增強(qiáng)體質(zhì)，降低牛的患病率，為牛的健康生長(zhǎng)提供保證。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)核具體的實(shí)施方式來(lái)對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的限定，但要求保護(hù)的范圍不僅局限于所作的描述。

實(shí)施例1

一種牛用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備發(fā)酵液：將禽畜糞便和桑樹(shù)葉按照5.5：1的重量配比混勻，置于攪拌機(jī)中粉碎，加入去離子水調(diào)整水分含量為70％，加入ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph值為6.8得發(fā)酵液；

(2)培養(yǎng)：將微生物菌種接種于步驟(1)中的發(fā)酵液中，控制溫度為45℃，通氣條件為0.3v/v，發(fā)酵6h，再添加營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)入搖床轉(zhuǎn)速為120r/min，溫度為35℃中震蕩發(fā)酵，得到培養(yǎng)液；

(3)菌粉制備：將步驟(2)培養(yǎng)液在4℃條件下3000r/min離心25min，干燥至粉末，真空包裝即可。

所述ph調(diào)節(jié)劑為碳酸鈣、碳酸鈉和氫氧化鈉，其質(zhì)量比為2：1.5：1。

所述微生物菌種包括多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌。

所述多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的接種量分別為步驟(1)發(fā)酵液總量的5％、1％、2％和2％。

所述營(yíng)養(yǎng)物是由玉米粉10份、甘油3份、低聚木糖2份、葡萄糖1份、磷酸二氫鉀1份混合后經(jīng)100℃高溫滅菌，冷卻至35℃制成。

所述培養(yǎng)液中多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的cfu數(shù)分別為107/g、110/g、108/g和105/g以上。

所述步驟(1)發(fā)酵液在接種前置于超聲波中處理10s，頻率為15khz。

所述牛用微生物制劑，添加劑量為牛日糧的0.1％。

實(shí)施例2

一種牛用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備發(fā)酵液：將禽畜糞便和桑樹(shù)葉按照6.3：1的重量配比混勻，置于攪拌機(jī)中粉碎，加入去離子水調(diào)整水分含量為80％，加入ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph值為7.5得發(fā)酵液；

(2)培養(yǎng)：將微生物菌種接種于步驟(1)中的發(fā)酵液中，控制溫度為50℃，通氣條件為0.5v/v，發(fā)酵10h，再添加營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)入搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，溫度為45℃中震蕩發(fā)酵，得到培養(yǎng)液；

(3)菌粉制備：將步驟(2)培養(yǎng)液在6℃條件下4000r/min離心30min，干燥至粉末，真空包裝即可。

所述ph調(diào)節(jié)劑為碳酸鈣、碳酸鈉和氫氧化鈉，其質(zhì)量比為4：1.5：1。

所述微生物菌種包括多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌。

所述多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的接種量分別為步驟(1)發(fā)酵液總量的7％、3％、4％和4％。

所述營(yíng)養(yǎng)物是由玉米粉15份、甘油5份、低聚木糖4份、葡萄糖3份、磷酸二氫鉀3份混合后經(jīng)120℃高溫滅菌，冷卻至40℃制成。

所述培養(yǎng)液中多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的cfu數(shù)分別為107/g、110/g、108/g和105/g以上。

所述步驟(1)發(fā)酵液在接種前置于超聲波中處理20s，頻率為20khz。

所述牛用微生物制劑，添加劑量為牛日糧的1％。

實(shí)施例3

一種牛用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備發(fā)酵液：將禽畜糞便和桑樹(shù)葉按照6.1：1的重量配比混勻，置于攪拌機(jī)中粉碎，加入去離子水調(diào)整水分含量為75％，加入ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph值為7.2得發(fā)酵液；

(2)培養(yǎng)：將微生物菌種接種于步驟(1)中的發(fā)酵液中，控制溫度為48℃，通氣條件為0.4v/v，發(fā)酵7h，再添加營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)入搖床轉(zhuǎn)速為140r/min，溫度為38℃中震蕩發(fā)酵，得到培養(yǎng)液；

(3)菌粉制備：將步驟(2)培養(yǎng)液在5℃條件下3500r/min離心28min，干燥至粉末，真空包裝即可。

所述ph調(diào)節(jié)劑為碳酸鈣、碳酸鈉和氫氧化鈉，其質(zhì)量比為3：1.5：1。

所述微生物菌種包括多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌。

所述多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的接種量分別為步驟(1)發(fā)酵液總量的6％、3％、3％和2％。

所述營(yíng)養(yǎng)物是由玉米粉14份、甘油4份、低聚木糖3份、葡萄糖3份、磷酸二氫鉀2份混合后經(jīng)105℃高溫滅菌，冷卻至40℃制成。

所述培養(yǎng)液中多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的cfu數(shù)分別為107/g、110/g、108/g和105/g以上。

所述步驟(1)發(fā)酵液在接種前置于超聲波中處理15s，頻率為18khz。

所述牛用微生物制劑，添加劑量為牛日糧的0.8％。

試驗(yàn)例4

一種牛用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備發(fā)酵液：將禽畜糞便和桑樹(shù)葉按照5.8：1的重量配比混勻，置于攪拌機(jī)中粉碎，加入去離子水調(diào)整水分含量為72％，加入ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph值為7得發(fā)酵液；

(2)培養(yǎng)：將微生物菌種接種于步驟(1)中的發(fā)酵液中，控制溫度為46℃，通氣條件為0.5v/v，發(fā)酵9h，再添加營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)入搖床轉(zhuǎn)速為150r/min，溫度為37℃中震蕩發(fā)酵，得到培養(yǎng)液；

(3)菌粉制備：將步驟(2)培養(yǎng)液在5℃條件下3800r/min離心26min，干燥至粉末，真空包裝即可。

所述ph調(diào)節(jié)劑為碳酸鈣、碳酸鈉和氫氧化鈉，其質(zhì)量比為2：1.5：1。

所述微生物菌種包括多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌。

所述多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的接種量分別為步驟(1)發(fā)酵液總量的7％、1％、4％和2％。

所述營(yíng)養(yǎng)物是由玉米粉15份、甘油3份、低聚木糖4份、葡萄糖1份、磷酸二氫鉀1份混合后經(jīng)120℃高溫滅菌，冷卻至40℃制成。

所述培養(yǎng)液中多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的cfu數(shù)分別為107/g、110/g、108/g和105/g以上。

所述步驟(1)發(fā)酵液在接種前置于超聲波中處理10s，頻率為20khz。

所述牛用微生物制劑，添加劑量為牛日糧的0.7％。

實(shí)施例5

一種牛用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備發(fā)酵液：將禽畜糞便和桑樹(shù)葉按照(5.5～6.3)：1的重量配比混勻，置于攪拌機(jī)中粉碎，加入去離子水調(diào)整水分含量為70～80％，加入ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph值為6.8～7.5得發(fā)酵液；

(2)培養(yǎng)：將微生物菌種接種于步驟(1)中的發(fā)酵液中，控制溫度為45～50℃，通氣條件為0.3～0.5v/v，發(fā)酵6～10h，再添加營(yíng)養(yǎng)物轉(zhuǎn)入搖床轉(zhuǎn)速為120～160r/min，溫度為35～45℃中震蕩發(fā)酵，得到培養(yǎng)液；

(3)菌粉制備：將步驟(2)培養(yǎng)液在4～6℃條件下3000～400r/min離心25～30min，干燥至粉末，真空包裝即可。

所述ph調(diào)節(jié)劑為碳酸鈣、碳酸鈉和氫氧化鈉，其質(zhì)量比為(2～4)：1.5：1。

所述微生物菌種包括多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌。

所述多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的接種量分別為步驟(1)發(fā)酵液總量的5～7％、1～3％、2～4％和2～4％。

所述營(yíng)養(yǎng)物是由玉米粉10～15份、甘油3～5份、低聚木糖2～4份、葡萄糖1～3份、磷酸二氫鉀1～3份混合后經(jīng)100～120℃高溫滅菌，冷卻至35～40℃制成。

所述培養(yǎng)液中多粘類芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和根霉菌的cfu數(shù)分別為107/g、110/g、108/g和105/g以上。

所述步驟(1)發(fā)酵液在接種前置于超聲波中處理10～20s，頻率為15～20khz。

所述牛用微生物制劑，添加劑量為牛日糧的0.1～1％。

試驗(yàn)例1

其中實(shí)施例組采用本發(fā)明制備的微生物制劑，對(duì)照組采用市場(chǎng)上售賣的微生物制劑，添加入牛的日常飼料中，經(jīng)過(guò)90d的飼養(yǎng)結(jié)果觀察，結(jié)果如下：

由試驗(yàn)結(jié)果可知，采用本發(fā)明方案制備的微生物制劑，牛的體重增加明顯優(yōu)于對(duì)照組，飼料的轉(zhuǎn)化率明顯高于對(duì)照組，其中以實(shí)施例3方案制備的微生物制劑效果最佳，90d牛的體重增加63kg，飼料轉(zhuǎn)化率為2.57。

上述試驗(yàn)牛經(jīng)過(guò)90d的飼養(yǎng)后，于第91d早晨前空腹筋脈采血10ml，并將其置于促凝真空管內(nèi)，隨后在室溫下放置20min后，進(jìn)行離心分離出血清，測(cè)定血清中iga、igm、igg的含量，結(jié)果如下：

由試驗(yàn)結(jié)果可知，采用本發(fā)明微生物制劑能夠有效的提高牛的免疫功能，其中血清中的iga、igm、igg含量均顯著高于對(duì)照組，其中以實(shí)施例4方案的作用最為明顯，iga含量達(dá)到57.46ng/ml，igm含量達(dá)到97.34μg/ml，iga含量達(dá)到437.02μg/ml。