本發(fā)明屬于化學(xué)傳感技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針，本發(fā)明還涉及一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針的制備方法。

背景技術(shù)：

2,4,6-三硝基苯酚(tnp)又稱苦味酸(picricacid,pa)，是一種比2,4,6-三硝基甲苯(tnt)具有更強(qiáng)爆炸力的黃色炸藥，最初用于填裝炮彈而被人們熟知。2,4,6-三硝基苯酚經(jīng)震動、碰撞等易發(fā)生劇烈分解而引起爆炸，被用于制造電雷管、煙花等。此外，2,4,6-三硝基苯酚還廣泛用于染料、醫(yī)藥、皮革等行業(yè)中。然而，tnp的大量使用對人類健康及公共安全造成極大的危害。長期大量接觸tnp會引起頭暈、頭痛、誘發(fā)皮炎及導(dǎo)致肝、腎損害。

目前已經(jīng)報(bào)道的tnp的檢測方法多為儀器檢測方法：如電化學(xué)法、拉曼光譜法、質(zhì)譜法等。該類方法仍需解決現(xiàn)場檢測不便及選擇性低等問題。因此，一種簡便、高效、專一的有機(jī)小分子類tnp檢測探針更符合實(shí)時、高效、高選擇性的檢測需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針，解決了現(xiàn)有技術(shù)tnp檢測技術(shù)存在的空白，提供一種具有選擇性好、靈敏度高、響應(yīng)速度快等特點(diǎn)的有機(jī)小分子類tnp比色/熒光探針。

本發(fā)明所采用的第一技術(shù)方案是，一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針，具有以下結(jié)構(gòu)式：

本發(fā)明所采用的第二技術(shù)方案是，一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針的制備方法，具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1、將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體；

步驟2、將所述步驟1得到的羅丹明b乙二胺中間體與1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐于干燥的有機(jī)溶劑中、加熱條件下發(fā)生反應(yīng)，合成對稱的探針分子；

步驟3、將步驟2得到的反應(yīng)液經(jīng)過濾得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物采用有機(jī)溶劑重結(jié)晶得到淡紅色探針分子。

步驟2中羅丹明b乙二胺中間體與1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐的摩爾比為2.0:0.9～1.2。

步驟2中羅丹明b乙二胺中間體與1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐發(fā)生反應(yīng)時的反應(yīng)溫度為10～100℃。

步驟2中的有機(jī)溶劑為乙腈、四氫呋喃、氯仿、n,n-二甲基甲酰胺或n-甲基吡咯烷酮中的一種。

步驟3中重結(jié)晶采用的有機(jī)溶劑為乙腈或乙醇。

本發(fā)明的有益效果是，一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針，填補(bǔ)了該類型tnp檢測方法的空白，可根據(jù)探針溶液顏色的變化，可視化鑒別tnp；使用熒光光譜儀及紫外可見光譜儀可定量地測定tnp濃度，解決了現(xiàn)有tnp檢測技術(shù)中存在的特異性識別能力低、檢測操作復(fù)雜、檢測靈敏度低等技術(shù)缺陷。

附圖說明

圖1是探針分子以氘代dmso為溶劑所做核磁共振氫譜；

圖2是探針分子以氘代dmso和氘代水混合溶劑所做核磁共振氫譜；

圖3是20μm/l探針甲醇溶液對不同濃度tnp(0-190μm)的熒光測試響應(yīng)曲線圖；

圖4是20μm/l探針甲醇溶液對不同濃度tnp(0-190μm)的熒光測試響應(yīng)擬合曲線圖；

圖5是20μm/l探針甲醇溶液對不同濃度tnp(0-190μm)的紫外-可見吸收響應(yīng)曲線圖；

圖6是20μm/l探針甲醇溶液對不同濃度tnp(0-190μm)的紫外-可見吸收響應(yīng)擬合曲線；

圖7是20μm/l探針甲醇溶液對同等濃度(100μm)不同結(jié)構(gòu)類似物的熒光測試響應(yīng)圖；

圖8是探針甲醇溶液對tnp熒光檢測響應(yīng)時間測試圖；

圖9是探針甲醇溶液對tnp紫外-可見吸收檢測響應(yīng)時間測試圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。

本發(fā)明一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針，具有以下結(jié)構(gòu)式：

一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針的制備方法，具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1、將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體；

步驟2、將所述步驟1得到的羅丹明b乙二胺中間體與1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐于干燥的有機(jī)溶劑中、加熱條件下發(fā)生反應(yīng)，合成對稱的探針分子；

步驟2中羅丹明b乙二胺中間體與1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐的摩爾比為2.0:0.9～1.2；

步驟2中羅丹明b乙二胺中間體與1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐發(fā)生反應(yīng)時的反應(yīng)溫度為10～100℃；

步驟2中干燥的有機(jī)溶劑為乙腈、四氫呋喃、氯仿、n,n-二甲基甲酰胺或n-甲基吡咯烷酮中的一種。

步驟3、將步驟2得到的反應(yīng)液經(jīng)過濾得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物采用有機(jī)溶劑重結(jié)晶得到淡紅色探針分子；

步驟3中重結(jié)晶采用的有機(jī)溶劑為乙腈或乙醇。

一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針的制備方法如下：

式1為羅丹明b乙二胺中間體，式2為1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐，式3為比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針。

本發(fā)明一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針的檢測原理如下：

本發(fā)明利用探針分子與tnp分子特異性的絡(luò)合作用反應(yīng)，打開探針分子中羅丹明b結(jié)構(gòu)單元中的螺環(huán)，而導(dǎo)致探針分子共軛體系發(fā)生變化，使其在紫外和熒光光譜上產(chǎn)生顯著地變化，且該變化可通過肉眼辨別(探針溶液由無色變?yōu)榧t色)。

本發(fā)明所述探針的使用方法并無特殊限制。通常可以在室溫下將探針分子溶解在乙醇或甲醇溶液中進(jìn)行測試。為研究該探針分子對tnp分子的特異性識別作用，以甲醇或乙醇為溶劑配制濃度為20μm/l的探針溶液；分別配制10mm的對硝基苯酚、間硝基苯胺、2,4,6-三硝基苯酚(tnp)、對硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼、苯肼、對硝基苯甲酸、5-氨基間苯二甲酸、3,3-二氨基聯(lián)苯胺、聯(lián)苯胺、對苯二胺的甲醇或乙醇溶液。

該探針對于不同濃度的tnp產(chǎn)生響應(yīng)，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。在tnp濃度為25-80μm及80-170μm范圍內(nèi)可采用熒光檢測方法對tnp進(jìn)行定量檢測，tnp最低檢測濃度為1.69nm/ml(激發(fā)波長為500nm)；在tnp濃度為15-80μm及80-170μm范圍內(nèi)，可采用紫外可見吸收檢測方法對tnp進(jìn)行定量檢測，tnp最低檢測濃度為1.17nm/ml。

該探針對于同等濃度(100μm)的不同tnp結(jié)構(gòu)類似物均無明顯響應(yīng)，且對tnp響應(yīng)迅速。

圖1為以dmso-d6為溶劑對探針分子所做的核磁共振氫譜表征，從該圖可以看出該探針為對稱分子，化學(xué)位移δ＝12.17為羧基氫核磁共振信號、δ＝7.77為酰胺氫核磁共振信號，其它位置的氫均可歸屬。結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)可確證該分子結(jié)構(gòu)；

圖2為以dmso-d6和d2o為溶劑，對探針分子所做的核磁共振氫譜表征，化學(xué)位移δ＝12.17的羧基氫核磁共振信號、δ＝7.77的酰胺氫核磁共振信號(結(jié)合圖1)消失，結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)可進(jìn)一步確證該分子結(jié)構(gòu)；

圖3中橫坐標(biāo)為波長、縱坐標(biāo)為探針溶液加入tnp溶液后(ph約為7.0)的相對熒光強(qiáng)度；

圖4中橫坐標(biāo)為濃度、縱坐標(biāo)為探針溶液加入tnp溶液后(ph約為7.0)的相對熒光強(qiáng)度；

圖5中橫坐標(biāo)為波長、縱坐標(biāo)為探針溶液加入tnp溶液后(ph約為7.0)的相對紫外吸收強(qiáng)度；

圖6中橫坐標(biāo)為濃度、縱坐標(biāo)為探針溶液加入tnp溶液后(ph約為7.0)的相對紫外吸收強(qiáng)度；

圖7中橫坐標(biāo)為不同結(jié)構(gòu)類似物、縱坐標(biāo)為探針溶液加入同等濃度不同結(jié)構(gòu)類似物后(ph約為7.0)的相對熒光強(qiáng)度。

實(shí)施例1

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的乙腈(10ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，油浴加熱下50℃反應(yīng)24小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、抽濾，濾餅用少量乙腈和水的混合溶劑洗滌兩到三次。濾液旋蒸除去溶劑，固體用乙醇重結(jié)晶得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)1.01g，收率87％。

產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例2：

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的四氫呋喃(10ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，油浴加熱下50℃反應(yīng)24小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、抽濾，濾餅用少量四氫呋喃和水的混合溶劑洗滌兩到三次。濾液旋蒸除去溶劑，固體用乙腈重結(jié)晶得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)0.97g，收率83％。

產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例3：

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的n-甲基吡咯烷酮(8ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，油浴加熱下100℃反應(yīng)10小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、向反應(yīng)液中加入約50ml飽和食鹽水，有大量固體析出。抽濾、干燥、固體用乙腈重結(jié)晶，得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)0.99g，收率85％。產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例4：

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的乙腈(10ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，于10℃反應(yīng)30小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、抽濾，濾餅用少量乙腈和水的混合溶劑洗滌兩到三次。濾液旋蒸除去溶劑，固體用乙醇重結(jié)晶得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)0.87g，收率75％。

產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例5：

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，176mg，0.9mmol)及干燥的乙腈(10ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，于50℃反應(yīng)24小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、抽濾，濾餅用少量乙腈和水的混合溶劑洗滌兩到三次。濾液旋蒸除去溶劑，固體用乙腈重結(jié)晶得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)0.84g，收率72％。

產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例6：

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，235mg，1.2mmol)及干燥的乙腈(10ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，于50℃反應(yīng)24小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、抽濾，濾餅用少量乙腈和水的混合溶劑洗滌兩到三次。濾液旋蒸除去溶劑，固體用乙醇重結(jié)晶得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)1.01g，收率87％。

產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例7

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的氯仿(10ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，油浴加熱下50℃反應(yīng)24小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、抽濾，濾餅用少量乙腈和水的混合溶劑洗滌兩到三次。濾液旋蒸除去溶劑，固體用乙醇重結(jié)晶得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)0.93g，收率80％。

產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例8：

將羅丹明b與乙二胺反應(yīng)制備得到羅丹明b乙二胺中間體，稱取羅丹明b乙二胺中間體(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-環(huán)丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的n,n-二甲基甲酰胺(8ml)于雙頸反應(yīng)瓶中，油浴加熱下100℃反應(yīng)10小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，冷卻、向反應(yīng)液中加入約50ml飽和食鹽水，有大量固體析出。抽濾、干燥、固體用乙腈重結(jié)晶，得到淡紅色探針分子固體，共計(jì)1.00g，收率86％。產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

實(shí)施例9：

本實(shí)施例為實(shí)施例1～8制得的探針分子，對不同濃度tnp的熒光響應(yīng)。

采用甲醇配制濃度為20μm的探針分子溶液，再分向探針溶液中加入tnp，使得tnp濃度分別為0μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm并且探針溶液體積變化可以忽略。以波長為500nm的激發(fā)光，測定加入tnp前后探針溶液的熒光光譜變化，結(jié)果如圖3所示。

圖3是20μm/l探針溶液對不同濃度tnp(0-190μm)的響應(yīng)，橫坐標(biāo)為波長、縱坐標(biāo)為探針溶液加入tnp溶液后(ph約為7.0)的相對熒光強(qiáng)度，從圖中可以看出，隨著tnp濃度的增加，該探針分子在580nm左右的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，tnp濃度為170μm時接近飽和。以不同濃度tnp對應(yīng)的相對熒光強(qiáng)度作圖，如圖4所示。根據(jù)擬合曲線可知，tnp濃度在25-80μm及80-170μm范圍內(nèi)時與熒光強(qiáng)度成線性關(guān)系，r²＝0.9860，檢出限為1.69nm/ml。本實(shí)施例所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該探針分子可以用于定量檢測tnp，且有較高的靈敏度。

實(shí)施例10

本實(shí)施例為實(shí)施例1～8制得的探針分子，對不同濃度tnp的紫外可見吸收響應(yīng)。

配制20μm的探針分子的甲醇溶液，再分向探針溶液中加入tnp，使得tnp濃度分別為0μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm，并且探針溶液體積變化可以忽略。測定加入tnp前后探針溶液的紫外可見吸收光譜變化，結(jié)果如圖5所示。

圖5是20μm/l探針溶液對不同濃度tnp(0-190μm)的吸收響應(yīng)，橫坐標(biāo)為波長、縱坐標(biāo)為探針溶液加入tnp溶液后(ph約為7.0)的相對紫外吸收強(qiáng)度，從圖中可以看出，隨著tnp濃度的增加，該探針分子在554nm處的吸收逐漸增強(qiáng)，tnp濃度為170μm時接近飽和。以不同濃度tnp對應(yīng)的相對吸收強(qiáng)度作圖得到圖6，根據(jù)擬合曲線可知，tnp濃度在15-80μm及80-170μm范圍內(nèi)時與紫外吸收強(qiáng)度成線性關(guān)系，r²＝0.9949，檢出限為1.17nm/ml。本實(shí)施例所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該探針分子可以采用紫外可見吸收光譜法定量檢測tnp，且有較高的靈敏度。

實(shí)施例11

本實(shí)施例為實(shí)施例1～8制得的探針分子，對相同濃度的tnp結(jié)構(gòu)類似物的熒光響應(yīng)測試。

配制濃度為20μm的探針分子甲醇溶液，再分向探針溶液中加入對硝基苯酚、間硝基苯胺、2,4,6-三硝基苯酚(tnp)、對硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼、苯肼、對硝基苯甲酸、5-氨基間苯二甲酸、3,3-二氨基聯(lián)苯胺、聯(lián)苯胺、對苯二胺，使得每種被測試物濃度均為100μm并且保持探針溶液體積變化可忽略。測定探針溶液加入不同結(jié)構(gòu)類似物后的相對熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖7所示。從圖7中可以看出，僅有加入tnp的探針溶液，熒光顯著增強(qiáng)。其它結(jié)構(gòu)類似物與探針分子均無明顯作用。本實(shí)施例所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該探針分子可以特異性地識別并檢測出tnp。

實(shí)施例12

本實(shí)施例為實(shí)施例1～8制得的探針分子，對tnp熒光測試響應(yīng)時間。

配制濃度為20μm的探針分子甲醇溶液。室溫下，向探針溶液中加入100μmtnp進(jìn)行熒光測試，分別記錄加入tnp后每隔5分鐘的熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖8所示，橫坐標(biāo)為加入tnp的時間，縱坐標(biāo)為相對熒光強(qiáng)度。從圖8可以看出：加入tnp后，1分鐘內(nèi)已經(jīng)開始響應(yīng)，到35分鐘已經(jīng)接近完全響應(yīng)。本實(shí)施例所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該探針分子可以快速地與tnp發(fā)生作用，給出熒光信號。

實(shí)施例13

本實(shí)施例為實(shí)施例1～8制得的探針分子，對tnp檢測紫外吸收響應(yīng)時間。

配制濃度為20μm的探針分子甲醇溶液。室溫下，向探針溶液中加入100μmtnp進(jìn)行熒光測試，分別記錄加入tnp后每隔5分鐘的紫外吸收強(qiáng)度，結(jié)果如圖9所示，橫坐標(biāo)為加入tnp的時間，縱坐標(biāo)為相對紫外吸收強(qiáng)度。從圖9可以看出：加入tnp后，1分鐘內(nèi)已經(jīng)開始響應(yīng)，到35分鐘已經(jīng)接近完全響應(yīng)。探針溶液顏色由無色透明逐漸變?yōu)榧t色，可進(jìn)行可視化檢測

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，一種比色和熒光雙響應(yīng)型tnp檢測探針，填補(bǔ)了該類型tnp檢測方法的空白，可根據(jù)探針溶液顏色的變化，可視化鑒別tnp；使用熒光光譜儀及紫外可見光譜儀可定量地測定tnp濃度，解決了現(xiàn)有tnp檢測技術(shù)中存在的特異性識別能力低、檢測操作復(fù)雜、檢測靈敏度低等技術(shù)缺陷。