本發(fā)明屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

半胱亞磺酸脫羧酶是一種氨基酸脫羧酶，用于催化半胱亞磺酸脫羧產(chǎn)生氨乙基亞磺酸和二氧化碳的酶，胺乙基亞磺酸經(jīng)過脫氫而生成牛磺酸。該酶可在動(dòng)物的肝臟、脾臟、腎臟、小腸壁等中見到，以磷酸吡哆醛為輔酶。而?；撬崾且环N含硫的非蛋白氨基酸，在動(dòng)物體內(nèi)以游離狀態(tài)存在，是調(diào)節(jié)機(jī)體正常生理活動(dòng)的活性物質(zhì)，具有廣泛的生理功能，可以增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力、保護(hù)心肌細(xì)胞、提高神經(jīng)傳導(dǎo)和視覺機(jī)能、防止心血管病、改善內(nèi)分泌狀態(tài)，在臨床上被廣泛應(yīng)用于心血管疾病、糖尿病、消化道疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、眼部疾病等一系列疾病的治療，在哺乳動(dòng)物的主要臟器，以及海洋生物，特別是海魚、貝類中廣泛分布。但是動(dòng)物體內(nèi)?；撬岬纳锖铣赏緩捷^為復(fù)雜，尤其是相比于哺乳動(dòng)物，海洋生物體內(nèi)牛磺酸含量雖然非常豐富，但其合成途徑的機(jī)理還不清楚。因此以生產(chǎn)?；撬嶂饕緩街械陌腚讈喕撬崦擊让笧閷?duì)象，通過建立快速靈敏的分析方法來評(píng)價(jià)不同種類海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的活力，對(duì)于后續(xù)進(jìn)一步研究海洋生物體內(nèi)?；撬岬暮铣赏緩骄哂兄匾饔?，但目前尚未有對(duì)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的研究，也未有建立針對(duì)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的準(zhǔn)確、簡(jiǎn)捷、安全的測(cè)定方法。

中國專利cn201410369496x，專利名稱一種魚類組織中三種脫碘酶活性的測(cè)定方法，申請(qǐng)日期2014年7月31日，公開了一種利用碘125標(biāo)記分別與三種脫碘酶相適應(yīng)的三種底物，經(jīng)過一段時(shí)間孵育后測(cè)定脫碘酶脫下的碘離子的放射性強(qiáng)度，經(jīng)公式計(jì)算出脫碘酶的酶活性的方法，以測(cè)定三種類型的脫碘酶id1、id2、id3。但是該方法具有特定的適用性，適用于脫碘酶的活力測(cè)定，而且測(cè)定碘離子的放射性強(qiáng)度對(duì)儀器的要求高，因此不適合半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)半胱亞磺酸脫羧酶對(duì)弄清?；撬岬暮铣蓹C(jī)理具有重要意義，但目前尚未有對(duì)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的研究問題，本發(fā)明的目的在于提供一種海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法，可以準(zhǔn)確、簡(jiǎn)潔、安全的測(cè)定海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力，而且檢測(cè)成本低，同時(shí)也可以用于其他動(dòng)物體內(nèi)的半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定，具有普遍適用性。

本發(fā)明提供如下的技術(shù)方案：

一種海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法，從海洋生物體的組織樣品中分離出含半胱亞磺酸脫羧酶的溶液，在合適的反應(yīng)條件下將加入的磺基丙氨酸轉(zhuǎn)化成牛磺酸，測(cè)定生成的牛磺酸的含量，進(jìn)而計(jì)算半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

本發(fā)明的海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法中，首先對(duì)海洋生物體的組織樣品進(jìn)行處理，分離出含半胱亞磺酸脫羧酶的溶液，然后以磺基丙氨酸為底物，向含半胱亞磺酸脫羧酶的溶液中定量加入磺基丙氨酸，并經(jīng)半胱亞磺酸脫羧酶和進(jìn)一步的脫氫反應(yīng)轉(zhuǎn)化成?；撬?，通過測(cè)定生成的牛磺酸的含量計(jì)算出半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力，其中酶活力單位u定義為每分鐘催化生成1μg的牛磺酸所需的酶量，這樣酶活力的計(jì)算公式為：ea＝m/t，其中ea指酶活力u，m指?；撬岬馁|(zhì)量μg，t指反應(yīng)時(shí)間min。這樣通過轉(zhuǎn)化與半胱亞磺酸脫羧酶相適應(yīng)的磺基丙氨酸底物，準(zhǔn)確、定量的計(jì)算出半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力，而且不僅適用于海洋生物，也適用于一般的動(dòng)物體。

作為本發(fā)明放過的一種改進(jìn)，測(cè)定生成的?；撬岬暮堪ㄒ韵虏襟E，首先向含?；撬岬娜芤褐屑尤牒线m的衍生化試劑，然后經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定衍生物的濃度。通過衍生化試劑將牛磺酸轉(zhuǎn)化成衍生物，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，所述衍生化試劑經(jīng)以下過程制備而成：向1ml的甲醇中溶解0.01g的鄰苯二甲醛，再加入0.01ml的乙硫醇混合，然后用0.4mol/l的硼酸鈉緩沖液定容至10ml得到衍生化試劑。常用的衍生試劑包括異硫氰酸苯酯、單磺酰氯試劑，但是異硫氰酸苯酯毒性高，對(duì)色譜柱存在危害，而單磺酰氯試劑的價(jià)格昂貴，而鄰苯二甲醛則安全、方便、成本低。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法包括以下步驟：

(1)將海洋生物體的組織樣品洗凈、勻漿、離心并保留上清液；

(2)向定量體積的上清液中加入1～1.2倍體積的磺基丙氨酸溶液、0.2～0.24倍體積的磷酸吡哆醛溶液，然后35～39℃下震蕩反應(yīng)1～3h得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液煮沸滅酶活性5～10min；

(3)向定量體積的反應(yīng)液中加入等體積的衍生化試劑并加熱震蕩反應(yīng)，過濾得到測(cè)試液；

(4)經(jīng)高效液相色譜法建立?；撬岬臐舛扰c峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)將測(cè)試液經(jīng)高效液相色譜法分析并由步驟(4)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到牛磺酸的濃度；

(6)由步驟(5)中?；撬岬臐舛扔?jì)算出半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

上清液中的半胱亞磺酸脫羧酶在磷酸吡哆醛的存在下并經(jīng)進(jìn)一步脫氫反應(yīng)將磺基丙氨酸充分轉(zhuǎn)化成?；撬?，通過高效液相色譜法建立?；撬岬臐舛扰c吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而計(jì)算出反應(yīng)液中轉(zhuǎn)化生成的?；撬岬牧?。其中海洋生物包括魚類、貝類、螺類、蝦蟹類、頭足類生物，其組織樣品包括肉、肝臟、腸、腮等組織。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，步驟(1)中上清液制備過程如下：將海洋生物的組織樣品洗凈后置于2～3倍體積的磷酸鹽緩沖液中浸潤(rùn)，磷酸鹽緩沖液的溫度為0～8℃，然后經(jīng)勻漿機(jī)勻漿25～35min并在2～6℃下離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為8000～10000rpm/min。充分將海洋生物的組織樣品中的半胱亞磺酸脫羧酶分離出來并保持活性。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，步驟(3)中的震蕩頻率為100～140rpm/min，反應(yīng)溫度35～39℃，反應(yīng)時(shí)間為1～5min，濾膜的孔徑為0.22μm。反應(yīng)時(shí)間短會(huì)使?；撬崤c衍生化試劑反應(yīng)不完全，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)則導(dǎo)致半胱亞磺酸的衍生產(chǎn)物分解，造成測(cè)試偏差。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，步驟(4)中建立?；撬釢舛扰c峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線包括以下步驟：

步驟一：配制?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液；

步驟二：向?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液中分別添加定量的衍生化試劑并震蕩反應(yīng)得到混合液；

步驟三：將混合液經(jīng)濾膜過濾后送入高效液相色譜中分析，得到以?；撬岬臐舛葹闄M坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

選擇合適的?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，使?；撬岬臐舛扰c峰面積具有良好的線性關(guān)系，得到的線性方程的擬合優(yōu)度系數(shù)不低于0.995。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，步驟一中?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)定量的?；撬崛苡诹姿猁}緩沖液中定容制成。與上清液的制備保持一致。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，步驟二中?；撬崤c鄰苯二甲醛的摩爾比為0.3～2:1。在該比例范圍內(nèi)的?；撬崤c鄰苯二甲醛的衍生反應(yīng)完全，峰面積好。

作為本發(fā)明方法的一種改進(jìn)，高效液相色譜檢測(cè)的參數(shù)如下：色譜柱為agilenteclipsexdb-c18，流動(dòng)相分別為乙腈與水，其中乙腈的體積為10％～60％，流動(dòng)相的流速為0.2～0.8ml/min，波長(zhǎng)為360nm。牛磺酸具有良好的分離效果，出峰時(shí)間短，為3.5～3.8min，牛磺酸的峰型與相鄰峰能夠?qū)崿F(xiàn)完全分離。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明的海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法，可以準(zhǔn)確、簡(jiǎn)潔、安全的測(cè)定海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力，而且檢測(cè)成本低，同時(shí)也可以用于其他動(dòng)物體內(nèi)的半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定，具有普遍適用性。

具體實(shí)施方式

下面就本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步說明。

如無特別說明，本發(fā)明中所采用的原料均可從市場(chǎng)上購得或是本領(lǐng)域常用的，如無特別說明，下述實(shí)施例中的方法均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。

實(shí)施例1

一種海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法，從海洋生物體的組織樣品中分離出含半胱亞磺酸脫羧酶的溶液，在合適的反應(yīng)條件下將加入的磺基丙氨酸轉(zhuǎn)化成牛磺酸，測(cè)定生成的?；撬岬暮浚M(jìn)而計(jì)算半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

測(cè)定生成的?；撬岬暮?jī)?yōu)選包括以下步驟，首先向含?；撬岬娜芤褐屑尤牒线m的衍生化試劑，然后經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定衍生物的濃度。其中衍生化試劑優(yōu)選經(jīng)以下過程制備而成：向1ml的甲醇中溶解0.01g的鄰苯二甲醛，再加入0.01ml的乙硫醇混合，然后用0.4mol/l的硼酸鈉緩沖液定容至10ml得到衍生化試劑。

上述海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法優(yōu)選包括以下步驟：

(1)將海洋生物體的組織樣品洗凈、勻漿、離心并保留上清液。優(yōu)選的上清液制備過程如下：將海洋生物的組織樣品洗凈后置于2.5倍體積的磷酸鹽緩沖液中浸潤(rùn)，磷酸鹽緩沖液的ph值為7.6，磷酸鹽緩沖液的溫度為4℃，然后經(jīng)勻漿機(jī)勻漿30min并在4℃下離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為8000rpm/min；

(2)向定量體積的上清液中加入1倍體積的磺基丙氨酸溶液、0.2倍體積的磷酸吡哆醛溶液，然后37℃下震蕩反應(yīng)1h得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液煮沸滅酶活性5min。其中磺基丙氨酸溶液的濃度優(yōu)選50mmol/l，磷酸吡哆醛溶液的濃度優(yōu)選為50mmol/l；

(3)向定量體積的反應(yīng)液中加入等體積的衍生化試劑，在120rpm/min下震蕩反應(yīng)3min，反應(yīng)溫度37℃，過濾得到測(cè)試液，優(yōu)選濾膜的孔徑為0.22μm；

(4)經(jīng)高效液相色譜法建立?；撬岬臐舛扰c峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，優(yōu)選包括以下步驟：

步驟一：配制?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液，優(yōu)選?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)定量的牛磺酸溶于磷酸鹽緩沖液中定容制成，配制的半胱亞磺酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度依次為：0.005、0.01、0.015、0.025、0.035、0.05、0.1、0.25、0.5，單位μg/ml；

步驟二：向?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液中分別添加定量的衍生化試劑并震蕩反應(yīng)得到混合液，優(yōu)選牛磺酸與鄰苯二甲醛的摩爾比為0.3:1；

步驟三：將混合液經(jīng)濾膜過濾后送入高效液相色譜中分析，得到以?；撬岬臐舛葹闄M坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)將測(cè)試液經(jīng)高效液相色譜法分析并由步驟(4)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到?；撬岬臐舛龋瑴y(cè)試液中?；撬岬臏y(cè)試濃度扣除空白對(duì)照組的結(jié)果即為反應(yīng)液中牛磺酸的濃度；

(6)由步驟(5)中牛磺酸的濃度計(jì)算出半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

上述海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法中，優(yōu)選的高效液相色譜檢測(cè)的參數(shù)如下：色譜柱為agilenteclipsexdb-c18，流動(dòng)相分別為乙腈與水，其中乙腈所占體積為15％，余下為水，流動(dòng)相的流速為0.5ml/min，波長(zhǎng)為360nm。

空白對(duì)照組經(jīng)取相同體積的上清液，按照步驟(2)與步驟(3)的過程處理得到，但在步驟(2)中不加入磺基丙氨酸溶液。

實(shí)施例2

一種海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法，從海洋生物體的組織樣品中分離出含半胱亞磺酸脫羧酶的溶液，在合適的反應(yīng)條件下將加入的磺基丙氨酸轉(zhuǎn)化成?；撬幔瑴y(cè)定生成的?；撬岬暮?，進(jìn)而計(jì)算半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

測(cè)定生成的?；撬岬暮?jī)?yōu)選包括以下步驟，首先向含?；撬岬娜芤褐屑尤牒线m的衍生化試劑，然后經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定衍生物的濃度。其中衍生化試劑優(yōu)選經(jīng)以下過程制備而成：向1ml的甲醇中溶解0.01g的鄰苯二甲醛，再加入0.01ml的乙硫醇混合，然后用0.4mol/l的硼酸鈉緩沖液定容至10ml得到衍生化試劑。

上述海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法優(yōu)選包括以下步驟：

(1)將海洋生物體的組織樣品洗凈、勻漿、離心并保留上清液。優(yōu)選的上清液制備過程如下：將海洋生物的組織樣品洗凈后置于2倍體積的磷酸鹽緩沖液中浸潤(rùn)，磷酸鹽緩沖液的ph值為7.6，磷酸鹽緩沖液的溫度為0℃，然后經(jīng)勻漿機(jī)勻漿25min并在2℃下離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為9000rpm/min；

(2)向定量體積的上清液中加入1.1倍體積的磺基丙氨酸溶液、0.22倍體積的磷酸吡哆醛溶液，然后35℃下震蕩反應(yīng)2h得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液煮沸滅酶活性7min。其中磺基丙氨酸溶液的濃度優(yōu)選50mmol/l，磷酸吡哆醛溶液的濃度優(yōu)選為50mmol/l；

(3)向定量體積的反應(yīng)液中加入等體積的衍生化試劑，在100rpm/min下震蕩反應(yīng)1min，反應(yīng)溫度35℃，過濾得到測(cè)試液，優(yōu)選濾膜的孔徑為0.22μm；

(4)經(jīng)高效液相色譜法建立?；撬岬臐舛扰c峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，優(yōu)選包括以下步驟：

步驟一：配制?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液，優(yōu)選?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)定量的?；撬崛苡诹姿猁}緩沖液中定容制成，配制的半胱亞磺酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度依次為：0.005、0.01、0.015、0.025、0.035、0.05、0.1、0.25、0.5，單位μg/ml；

步驟二：向?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液中分別添加定量的衍生化試劑并震蕩反應(yīng)得到混合液，優(yōu)選牛磺酸與鄰苯二甲醛的摩爾比為1:1；

步驟三：將混合液經(jīng)濾膜過濾后送入高效液相色譜中分析，得到以牛磺酸的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)將測(cè)試液經(jīng)高效液相色譜法分析并由步驟(4)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到?；撬岬臐舛?，測(cè)試液中?；撬岬臏y(cè)試濃度扣除空白對(duì)照組的結(jié)果即為反應(yīng)液中?；撬岬臐舛?；

(6)由步驟(5)中?；撬岬臐舛扔?jì)算出半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

上述海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法中，優(yōu)選的高效液相色譜檢測(cè)的參數(shù)如下：色譜柱為agilenteclipsexdb-c18，流動(dòng)相分別為乙腈與水，其中乙腈所占體積為30％，余下為水，流動(dòng)相的流速為0.2ml/min，波長(zhǎng)為360nm。

空白對(duì)照組經(jīng)取相同體積的上清液，按照步驟(2)與步驟(3)的過程處理得到，但在步驟(2)中不加入磺基丙氨酸溶液。

實(shí)施例3

一種海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法，從海洋生物體的組織樣品中分離出含半胱亞磺酸脫羧酶的溶液，在合適的反應(yīng)條件下將加入的磺基丙氨酸轉(zhuǎn)化成牛磺酸，測(cè)定生成的?；撬岬暮?，進(jìn)而計(jì)算半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

測(cè)定生成的牛磺酸的含量?jī)?yōu)選包括以下步驟，首先向含?；撬岬娜芤褐屑尤牒线m的衍生化試劑，然后經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定衍生物的濃度。其中衍生化試劑優(yōu)選經(jīng)以下過程制備而成：向1ml的甲醇中溶解0.01g的鄰苯二甲醛，再加入0.01ml的乙硫醇混合，然后用0.4mol/l的硼酸鈉緩沖液定容至10ml得到衍生化試劑。

上述海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法優(yōu)選包括以下步驟：

(1)將海洋生物體的組織樣品洗凈、勻漿、離心并保留上清液。優(yōu)選的上清液制備過程如下：將海洋生物的組織樣品洗凈后置于3倍體積的磷酸鹽緩沖液中浸潤(rùn)，磷酸鹽緩沖液的ph值為7.6，磷酸鹽緩沖液的溫度為8℃，然后經(jīng)勻漿機(jī)勻漿35min并在6℃下離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為10000rpm/min；

(2)向定量體積的上清液中加入1.2倍體積的磺基丙氨酸溶液、0.24倍體積的磷酸吡哆醛溶液，然后39℃下震蕩反應(yīng)3h得到反應(yīng)液，將反應(yīng)液煮沸滅酶活性10min。其中磺基丙氨酸溶液的濃度優(yōu)選50mmol/l，磷酸吡哆醛溶液的濃度優(yōu)選為50mmol/l；

(3)向定量體積的反應(yīng)液中加入等體積的衍生化試劑，在140rpm/min下震蕩反應(yīng)1～5min，反應(yīng)溫度39℃，過濾得到測(cè)試液，優(yōu)選濾膜的孔徑為0.22μm；

(4)經(jīng)高效液相色譜法建立?；撬岬臐舛扰c峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，優(yōu)選包括以下步驟：

步驟一：配制?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液，優(yōu)選?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)定量的?；撬崛苡诹姿猁}緩沖液中定容制成，配制的半胱亞磺酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度依次為：0.005、0.01、0.015、0.025、0.035、0.05、0.1、0.25、0.5，單位μg/ml；

步驟二：向?；撬岬臉?biāo)準(zhǔn)溶液中分別添加定量的衍生化試劑并震蕩反應(yīng)得到混合液，優(yōu)選?；撬崤c鄰苯二甲醛的摩爾比為2:1；

步驟三：將混合液經(jīng)濾膜過濾后送入高效液相色譜中分析，得到以牛磺酸的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)將測(cè)試液經(jīng)高效液相色譜法分析并由步驟(4)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到?；撬岬臐舛龋瑴y(cè)試液中?；撬岬臏y(cè)試濃度扣除空白對(duì)照組的結(jié)果即為反應(yīng)液中牛磺酸的濃度；

(6)由步驟(5)中?；撬岬臐舛扔?jì)算出半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

上述海洋生物體內(nèi)半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力的測(cè)定方法中，優(yōu)選的高效液相色譜檢測(cè)的參數(shù)如下：色譜柱為agilenteclipsexdb-c18，流動(dòng)相分別為乙腈與水，其中乙腈所占體積為60％，余下為水，流動(dòng)相的流速為0.8ml/min，波長(zhǎng)為360nm。

空白對(duì)照組經(jīng)取相同體積的上清液，按照步驟(2)與步驟(3)的過程處理得到，但在步驟(2)中不加入磺基丙氨酸溶液。

本測(cè)定方法的結(jié)果

1、偏差

配制3個(gè)不同濃度的?；撬針?biāo)樣溶液，分別為10μg/ml、100μg/ml、500μg/ml，然后步驟(3)處理后重復(fù)測(cè)試3次，測(cè)試結(jié)果見表1。

表1

此3種濃度的?；撬針?biāo)樣溶液的rsd分別為3.82％，1.06％和0.48％，說明該方法精密度較高，具有良好的重現(xiàn)性。

2、海洋生物體的測(cè)試

選取蛤蜊、蟶子、美國紅魚、海鱸魚、梭子蟹為代表，按本發(fā)明的測(cè)定方法對(duì)其不同組織中半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見表2，其中未檢測(cè)表示該部分組織無法清楚辨別分離而不能進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)。

從表中可以看出不同海洋生物體內(nèi)的半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力存在較大差別，其中海鱸魚的肝臟中半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力高達(dá)23.3u。另外不同組織中半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力也存在著差異，從表2可以看出腸組織內(nèi)均含有半胱亞磺酸脫羧酶，但美國紅魚的肝、肉、鰓中均未檢測(cè)到半胱亞磺酸脫羧酶的酶活力。

表2