本發(fā)明涉及試劑配制領域，特別涉及一種帶顏色的核酸提取試劑預分裝板的配制工藝。

背景技術：

目前，生命體遺傳特征的基本單元是核酸，在病毒、基因研究領域都離不開對核酸的檢測，而針對對核酸檢測，目前普遍有pcr、測序、分子雜交等技術。這些技術的運用的關鍵前提是提取出核酸。

針對核酸提取，目前市面上有各種各樣的提取方法：有磁珠法、柱提法、煮沸法和儀器自動提取法等。在這么多提取方法中，所用到的提取試劑幾乎都是無色透明的，即使有顏色也是某一提取成分，因此在分裝過程中容易出現(xiàn)差錯，且在提取過程中，顏色保持不變，這讓核酸提取過程單調(diào)、乏味，易出錯，且不能根據(jù)試劑所處的顏色狀態(tài)辨別出核酸提取的所處步驟。在不斷重復核酸提取的過程中，慢慢讓人感到疲憊，容易在核酸提取過程中，混淆提取步驟，降低了提取效率。

所以，一種帶顏色的，且在提取過程中可變色的預分裝提取試劑非常重要。

技術實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種帶顏色的核酸提取試劑預分裝板的配制工藝。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術方案是：一種帶顏色的核酸提取試劑預分裝板的配制工藝，磁珠法核酸提取試劑的組分包括磁珠裂解結合液、磁珠液、磁珠洗滌液1、磁珠洗滌液2、磁珠洗脫液，其中，所述磁珠裂解結合液包括tris-緩沖液、(nh4)2so4、np-40、鹽酸胍、tritonx-100、異丙醇、指示劑1；所述磁珠液包括tris-緩沖液、edta-2na、磁珠、指示劑2；所述磁珠洗滌液1包括tris-緩沖液、鹽酸胍、無水乙醇、指示劑3；所述磁珠洗滌液2包括tris-緩沖液、nacl、無水乙醇、指示劑4；所述磁珠洗脫液包括tris-緩沖液、edta-2na、carrierrna、指示劑5。

進一步的，所述磁珠裂解結合液包括10-30mmol/l的tris-緩沖液、90-110mmol/l的(nh4)2so4、1-3%的np-40、1.5-3.5mol/l的鹽酸胍、1-3%的tritonx-100、25-30%的異丙醇、0.01-0.08mmol/l的指示劑1；所述磁珠液包括10-25mmol/l的tris-緩沖液、5-15mmol/l的edta-2na、0.3-0.8mg/ml的磁珠、0.01-0.08mmol/l的指示劑2；所述磁珠洗滌液1包括70-100mmol/l的tris-緩沖液、90-110mmol/l的鹽酸胍、30-50%的無水乙醇、0.01-0.08mmol/l的指示劑3；所述磁珠洗滌液2包括5-10mmol/l的tris-緩沖液、0.5-1%的nacl、60-80%的無水乙醇、0.01-0.08mmol/l的指示劑4；所述磁珠洗脫液包括10-25mmol/l的tris-緩沖液、3-10mmol/l的edta-2na、0.1-0.4μg/μl的carrierrna、0.01-0.08mmol/l的指示劑5。

進一步的，所述tris-緩沖液可選自tris-h2so4、tris-乙酸、tris-hcl中的任意一種或多種，tris-緩沖液的ph為2.0～9.0。

進一步的，所述指示劑1-5可選自甲基橙、溴百里酚藍、酚酞、石蕊、甲基紅等指示劑中的任意一種或多種。

進一步的，所述磁珠裂解結合液、磁珠液、磁珠洗滌液1、磁珠洗滌液2、磁珠洗脫液各具一種顏色，其顏色由各組分的ph決定，且所述5種組分所具顏色互不相同。

進一步的，配制磁珠裂解結合液步驟為：配制磁珠裂解結合液步驟為：先加入一定體積的滅菌純化水，再依次加入一定濃度的tris-緩沖液、(nh4)2so4、np-40、鹽酸胍、tritonx-100、異丙醇、指示劑1，攪拌至充分溶解后，加入酸溶液調(diào)至一定ph，然后用滅菌純化水定容；配制磁珠液步驟為：先加入一定體積的滅菌純化水，再依次加入一定濃度的tris-緩沖液、edta-2na、磁珠、指示劑2，攪拌至充分溶解后，加入酸溶液調(diào)至一定ph，然后用滅菌純化水定容；配制磁珠洗滌液1步驟為：先加入一定體積的滅菌純化水，再依次加入一定濃度的tris-緩沖液、鹽酸胍、無水乙醇、指示劑3，攪拌至充分溶解后，加入酸溶液調(diào)至一定ph，然后用滅菌純化水定容；配制磁珠洗滌液2步驟為：先加入一定體積的滅菌純化水，再依次加入一定濃度的tris-緩沖液、nacl、無水乙醇、指示劑4，攪拌至充分溶解后，加入酸溶液調(diào)至一定ph，然后用滅菌純化水定容；配制磁珠洗脫液步驟為：先加入一定體積的滅菌純化水，再依次加入一定濃度的tris-緩沖液、edta-2na、carrierrna、指示劑5，攪拌至充分溶解后，加入酸溶液調(diào)至一定ph，然后用滅菌純化水定容。

進一步的，所述酸溶液可選自硫酸、硝酸、鹽酸、磷酸、乙酸等酸性溶液中的一種或多種，所加入酸溶液的ph及濃度不限。

進一步的，分裝提取試劑步驟為：按250-400μl/孔的量將磁珠裂解結合液分裝到96孔深孔板的第1列和第7列，按400-700μl/孔的量將磁珠液分裝到96孔深孔板的第2列和第8列，按400-700μl/孔的量將磁珠洗滌液1分裝到96孔深孔板的第3列和第9列，按400-700μl/孔的量將磁珠洗滌液2分裝到96孔深孔板的第4、5、10、11列，按60μl/孔的量將磁珠洗脫液分裝到96孔深孔板的第6列和第12列。

進一步的，封膜，利用熱封儀將熱封膜封在96孔深孔板上表面，防止提取試劑漏液。

進一步的，在利用上述分裝好的提取試劑進行核酸提取的過程中，當兩種提取試劑成分相接觸時會產(chǎn)生特定的顏色變化，核酸提取反應完畢后，5種組分所在的反應管中的最終液體具有特定顏色，且顏色互不相同。

優(yōu)選的，所述酸溶液可為鹽酸，ph可為2.0，濃度可為10mmol/l，亦可選用其他酸溶液，只需保證最終能配制出各組分的標準ph即可。

優(yōu)選的，所述磁珠裂解結合液為黃色，其ph為4.6，tris-hcl濃度為20mmol/l，tris-hcl的ph為3.5，(nh4)2so4濃度為100mmol/l，np-40含量為1%，鹽酸胍濃度為2.5mol/l，tritonx-100含量為2%，異丙醇含量為28%，甲基橙含量為0.05%。

優(yōu)選的，所述磁珠液為紅色，其ph為3.0，tris-hcl濃度為15mmol/l，tris-hcl的ph為2.9，edta-2na濃度為8mmol/l，磁珠濃度為0.5mg/ml，甲基橙含量為0.05%。

優(yōu)選的，所述磁珠洗滌液1為綠色，其ph為7.0，tris-hcl濃度為85mmol/l，tris-hcl的ph為9.0，鹽酸胍濃度為100mmol/l，無水乙醇的含量為42%，溴百里酚藍含量為0.01%。

優(yōu)選的，所述磁珠洗滌液2為藍色，其ph為7.8，tris-hcl濃度為8mmol/l，tris-hcl的ph為2.0，nacl含量為0.7%，無水乙醇的含量為70%，溴百里酚藍含量為0.01%。

優(yōu)選的，所述磁珠洗脫液為淺紅色，其ph為8.5，tris-hcl濃度為15mmol/l，tris-hcl的ph為2.9，edta-2na濃度為5mmol/l，carrierrna濃度為2μg/μl，酚酞含量為0.01%。

優(yōu)選的，按350μl/孔將磁珠裂解結合液分裝到96孔深孔板的第1列和第7列，按600μl/孔將磁珠液分裝到96孔深孔板的第2列和第8列，按600μl/孔將磁珠洗滌液1分裝到96孔深孔板的第3列和第9列，按600μl/孔將磁珠洗滌液2分裝到96孔深孔板的第4列和第5列、第10列、第11列，按60μl/孔將磁珠洗脫液分裝到96孔深孔板的第6列和第12列。

優(yōu)選的，在利用上述分裝好的提取試劑進行核酸提取的過程中，當兩種提取試劑成分相接觸時會產(chǎn)生特定的顏色變化：磁珠裂解結合液由黃色變?yōu)槌壬?；磁珠洗滌?顏色由綠色變?yōu)辄S色；磁珠洗滌液2顏色由藍色變?yōu)榫G色；磁珠洗脫液顏色由淺紅色變?yōu)闊o色。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明的帶有顏色的核酸提取試劑預分裝板的配制工藝，其讓提取試劑的每一成分都含有顏色，且在提取過程中，兩種提取試劑接觸時會變色，提取過程完畢后，每種提取試劑所在的反應管中的最終液體具有特定顏色，且顏色互不相同，顏色的變化可以使操作者更明顯的區(qū)分出核酸提取的所處步驟，有利于在核酸提取過程中的工作交接，并使操作者通過最后的顏色觀察確定反應是否完全、是否正確進行。利用試劑顏色之間的變換，能夠提高分裝過程的準確率，也使得操作更為得準確，并且不會出現(xiàn)提取過程步驟的混淆，不但提高了提取效率，還降低了出差錯的概率。

具體實施方式

為詳細說明本發(fā)明的技術內(nèi)容及所實現(xiàn)的目的，下面結合具體的實施例進行描述。

實施例1：磁珠法核酸提取試劑的制備

1、磁珠法核酸提取試劑各組分的配制：

配制磁珠裂解結合液（1l）：先加入約800ml滅菌純化水，再按ph為3.5、濃度為20mmol/l的tris-hcl、100mmol/l的(nh4)2so4、1%的np-40、2.5mol/l的鹽酸胍、2%的tritonx-100、28%的異丙醇、0.05%的甲基橙的量分別加入tris、(nh4)2so4、np-40、鹽酸胍、tritonx-100、異丙醇、甲基橙，攪拌至充分溶解后，加入10mmol/l的鹽酸將ph調(diào)至4.6，然后用滅菌純化水定容至1l。

配制磁珠液（1l）：先加入約800ml滅菌純化水，再按ph為2.9、濃度為15mmol/l的tris-hcl、8mmol/l的edta-2na、0.5mg/ml的磁珠、0.05%的甲基橙的量分別加入tris、edta-2na、甲基橙，攪拌至充分溶解后，加入10mmol/l的鹽酸將ph調(diào)至3.0，然后用滅菌純化水定容至1l。

配制磁珠洗滌液1（1l）：先加入約800ml滅菌純化水，再按ph為9.0、濃度為85mmol/l的tris-hcl、100mmol/l的鹽酸胍、42%的無水乙醇、0.01%的溴百里酚藍的量分別加入tris、鹽酸胍、無水乙醇、溴百里酚藍，攪拌至充分溶解后，加入10mmol/l的鹽酸將ph調(diào)至7.0，然后用滅菌純化水定容至1l。

配制磁珠洗滌液2（1l）：先加入約800ml滅菌純化水，再按ph為2.0、濃度為8mmol/l的tris-hcl、0.7%的nacl、70%的無水乙醇、0.01%的溴百里酚藍的量分別加入tris、nacl、無水乙醇、溴百里酚藍，攪拌至充分溶解后，加入10mmol/l的鹽酸將ph調(diào)至7.8，然后用滅菌純化水定容至1l。

配制磁珠洗脫液（1l）：先加入約800ml滅菌純化水，再按ph為2.9、濃度為15mmol/l的tris-hcl、5mmol/l的edta-2na、2μg/μl的carrierrna、0.01%的酚酞的量分別加入tris、edta-2na、carrierrna、酚酞，攪拌至充分溶解后，加入10mmol/l的鹽酸將ph調(diào)至8.5，然后用滅菌純化水定容至1l。

2、分裝：

按350μl/孔將磁珠裂解結合液分裝到96孔深孔板的第1列和第7列，按600μl/孔將磁珠液分裝到96孔深孔板的第2列和第8列，按600μl/孔將磁珠洗滌液1分裝到96孔深孔板的第3列和第9列，按600μl/孔將磁珠洗滌液2分裝到96孔深孔板的第4列和第5列、第10列、第11列，按60μl/孔將磁珠洗脫液分裝到96孔深孔板的第6列和第12列。

3、封膜：

利用熱封儀將熱封膜封在96孔深孔板上表面，防止提取試劑漏液。

實施例2：利用預分裝板中的提取試劑進行核酸提取的步驟（人工操作）

①此操作在96深孔預分裝板中進行，運用磁力架從第2列（第8列）吸取磁珠；

②把樣品、蛋白酶k、磁力架吸附的磁珠放進第1列（第7列）進行混勻反應，此時，第1列（第7列）中的液體顏色變化為黃色→橙色；

③運用磁力架從第1列（第7列）吸取磁珠，被吸取的磁珠同時帶有第1列（第7列）反應完畢的液體，通過磁力架把磁珠及第1列（第7列）反應完畢的液體放進第3列（第9列）進行混勻反應，此時，第3列（第9列）中的液體顏色變化為綠色→黃色；

④運用磁力架從第3列（第9列）吸取磁珠，被吸取的磁珠同時帶有第3列（第9列）反應完畢的液體，通過磁力架把磁珠及第3列（第9列）反應完畢的液體放進第4列（第10列）進行混勻反應，此時，第4列（第10列）中的液體顏色變化為藍色→綠色；

⑤運用磁力架從第4列（第10列）吸取磁珠，被吸取的磁珠同時帶有第4列（第10列）反應完畢的液體，通過磁力架把磁珠及第4列（第10列）反應完畢的液體放進第5列（第11列）進行混勻反應，此時，第5列（第11列）中的液體顏色變化為藍色→綠色；

⑥運用磁力架從第5列（第11列）吸取磁珠，被吸取的磁珠同時帶有第5列（第11列）反應完畢的液體，通過磁力架把磁珠及第5列（第11列）反應完畢的液體放進第6列（第12列）進行混勻反應，隨后運用磁力架從第6列（第12列）吸取磁珠放至第2列（第8列）中，此時，第6列（第12列）中的液體顏色變化為淺紅色→無色；

⑦當核酸提取反應過程完畢，96深孔預分裝板中每列顏色顯示如下：

第1列（第7列）：橙色

第2列（第8列）：紅色

第3列（第9列）：黃色

第4列（第10列）：綠色

第5列（第11列）：綠色

第6列（第12列）：無色

因此，本發(fā)明中特定的顏色變化有利于操作者根據(jù)試劑所處的顏色狀態(tài)辨別出核酸提取的所處步驟及辨別操作過程是否有誤，使得整個提取過程提取效率得以提高、降低了出差錯的概率，并使分裝過程準確率提高。

當然，本發(fā)明創(chuàng)造并不局限于上述實施方式，熟悉本領域的技術人員在不違背本發(fā)明精神的前提下還可做出等同變形或替換，這些等同的變形或替換均包含在本申請權利要求所限定的范圍內(nèi)。