本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯的純化方法。

背景技術(shù)：

穿心蓮為爵床科植物，在我國主產(chǎn)地為廣東、福建等濕熱地區(qū)，又名一見喜、印度草或苦膽草等，具有清熱解毒，涼血消腫等作用，常用于治療胃腸炎、急性菌痢、感冒、流腦、肺炎等疾病。穿心蓮中含有多種苦味素，多為二萜類化合物，其主要成分為穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮?fù)楹痛┬纳復(fù)?，其中穿心蓮?nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯含量較高，而且這兩種成分也是穿心蓮發(fā)揮解熱消炎作用的主要活性成分。

穿心蓮內(nèi)酯分子量較大，難溶于水，以往臨床上主要是口服劑型藥物。為方便臨床使用，20世紀(jì)70年代以來，藥物研究人員在穿心蓮內(nèi)酯的修飾和結(jié)構(gòu)改造方面做了大量的工作，比如對穿心蓮內(nèi)酯活潑羥基選擇性酯化、雙鍵的氧化、加成、還原以及分子內(nèi)部環(huán)化和內(nèi)酯環(huán)替換等反應(yīng)。通過在內(nèi)酯環(huán)和二萜環(huán)上引入不同的親水基團(tuán)，增加化合物水溶性，目前已開發(fā)出多種穿心蓮內(nèi)酯及其衍生物的注射劑，其中穿琥寧和炎琥寧兩大注射劑產(chǎn)品長期占據(jù)穿心蓮內(nèi)酯藥物市場的主導(dǎo)地位。

脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯，化學(xué)名為14-脫羥-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二琥珀酸半酯，白色針狀固體，熔點(diǎn)137.6～139.2℃。作為合成穿琥寧和炎琥寧的關(guān)鍵中間體，如果不對其進(jìn)行純化，導(dǎo)致最終得到的穿琥寧和炎琥寧收率偏低、顏色偏黃、雜質(zhì)總含量超出國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)且難除去。目前報(bào)道的穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯提取分離工藝有胡士高（安徽醫(yī)藥，2006,10(3):173-174）乙醇重結(jié)晶法，曾超（河南大學(xué)碩士論文,2007）柱層析分離法，侯茜茜（河南師范大學(xué)碩士論文，2014）活性炭吸附法，而采用超臨界流體萃取技術(shù)未曾見報(bào)道。

超臨界流體萃取（scfe）技術(shù)在醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域已有幾十年的歷史，具有高擴(kuò)散能力、低粘度和高可壓縮性等特點(diǎn)。co2由于其無毒、不可燃、價(jià)廉易得和臨界溫度接近室溫等優(yōu)點(diǎn)而成為最有吸引力的超臨界流體。“穿心蓮內(nèi)酯在超臨界co2萃取中晶體的形成與生長”（《電子顯微學(xué)報(bào)》2003年第5期）中報(bào)道超臨界co2反應(yīng)釜中能同步萃取結(jié)晶穿心蓮內(nèi)酯，且在體系壓力低于25mpa的條件下，穿心蓮內(nèi)酯與其它雜質(zhì)在超臨界co2中因結(jié)晶板表面吸附力、分子重力和分子間作用力的差異，結(jié)晶效果形成梯度結(jié)晶分布，進(jìn)而能分離出純度很高的穿心蓮內(nèi)酯?！皧A帶劑對穿心蓮內(nèi)酯超臨界萃取的影響”（《中成藥》2011年第6期）研究了在超臨界co2萃取穿心蓮內(nèi)酯時(shí)加入無毒的夾帶劑（如乙醇、水、乙酸）能夠進(jìn)一步提高結(jié)晶率，提高產(chǎn)品純度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯的純化方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯的純化方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品的合成，在惰性氣體保護(hù)下，以穿心蓮內(nèi)酯和琥珀酸酐為原料，無水吡啶為溶劑，攪拌升溫至回流狀態(tài)反應(yīng)，反應(yīng)過程由tlc監(jiān)控，反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液冷卻至70℃以下，在反應(yīng)液中倒入質(zhì)量為反應(yīng)液質(zhì)量8-12倍的酸液，于60℃攪拌得到橙黃色固體物質(zhì)，抽濾干燥后得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品，所述的酸液為ph=5-6的鹽酸或乙酸溶液；

（2）脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯的精制，在脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品中加入質(zhì)量為脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品質(zhì)量15%-25%的夾帶劑，放入超臨界反應(yīng)釜中，超臨界反應(yīng)釜內(nèi)放置有結(jié)晶架，關(guān)閉閥門，通入co2使體系壓力為5-25mpa，并控制體系溫度為50-80℃，攪拌1-4h后釋放co2使脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯在結(jié)晶架上析出得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯純品，所述的夾帶劑為純水、甲醇、乙醇或異丙醇中的一種或多種。

本發(fā)明在對脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯進(jìn)行分散結(jié)晶時(shí)選用ph為5-6的鹽酸或乙酸溶液作為分散劑，選用超臨界co2進(jìn)行脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯的萃取結(jié)晶精制，得到產(chǎn)品通過外標(biāo)法測得純度在99%以上。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

將穿心蓮內(nèi)酯（10g，28.5mmol）和琥珀酸酐（8g，80mmol）充分混勻，加入裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝管和溫度計(jì)的100ml四口瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入無水吡啶30ml，攪拌升溫至回流狀態(tài)，控溫反應(yīng)10h，溶液逐漸由透明無色變?yōu)辄S紅色，反應(yīng)過程由tlc監(jiān)控（二氯：無水乙醇：冰乙酸=40:1:1），反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液冷卻到70℃以下，然后將反應(yīng)液逐步倒入配好的ph=5-6的鹽酸或乙酸溶液中，其中鹽酸或乙酸溶液的質(zhì)量為反應(yīng)液質(zhì)量的8-12倍，強(qiáng)力機(jī)械攪拌分散，得到黃色固體物質(zhì)，干燥后得脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品13.22g（收率88%，純度85%）。

實(shí)施例2

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(0.45g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%)和純水(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)混合，將混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到8mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，2h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯7.76g，純度為99.18%，結(jié)晶率86.22%。

實(shí)施例3

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(0.45，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%)和純水(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到10mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，2h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.23g，純度為91.31%，結(jié)晶率91.42%。

實(shí)施例4

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(0.45g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%)和純水(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到6mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，2h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.14g，純度為92.25%，結(jié)晶率90.44%。

實(shí)施例5

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(0.45g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%)和純水(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到8mpa，溫度設(shè)為80℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，2h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.03g，純度為93.57%，結(jié)晶率89.18%。

實(shí)施例6

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(0.45g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%)和純水(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到5mpa，溫度設(shè)為50℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，2h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯7.96g，純度為94.33%，結(jié)晶率88.44%。

實(shí)施例7

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)和乙醇(1.35g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到25mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，1h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.32g，純度為89.77%，結(jié)晶率92.44%。

實(shí)施例8

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與乙醇(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)和異丙醇(0.9g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，使其處于結(jié)晶架的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到8mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，1.5h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.26g，純度為90.39%，結(jié)晶率91.81%。

實(shí)施例9

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與甲醇(1.35g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，并且注意料液的最大高度不能沒及結(jié)晶板的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到10mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，4h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，最后得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.53g，純度為87.64%，結(jié)晶率94.77%。

實(shí)施例10

稱取實(shí)施例1得到的脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯粗品9g與純水(1.35g，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%)混合，將混合后的固液混合物全部移入超臨界反應(yīng)釜中，并且注意料液的最大高度不能沒及結(jié)晶板的下端，關(guān)閉出口閥門，以15l/min的流速向超臨界反應(yīng)釜內(nèi)通入co2，直至壓力達(dá)到10mpa，溫度設(shè)為70℃，以350r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，2h后釋放co2，結(jié)晶板上有晶體析出，最后得到脫水穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯8.45g，純度為88.42%，結(jié)晶率93.91%。

以上實(shí)施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。