本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種在水飛薊油中提取純化不飽和脂肪酸的方法。

背景技術(shù)：

水飛薊油不僅營養(yǎng)價值高可以食用，而且還具有較高的藥用價值。水飛薊油中含有豐富的亞油酸，具有降低膽固醇、防止動脈硬化等作用。目前還沒有從水飛薊油中分離亞油酸的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是提供一種在水飛薊油中分離純化亞油酸等不飽和脂肪酸的方法，以用于制備副作用小、能預(yù)防或治療并緩解高血脂的藥品。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種在水飛薊油中提取純化不飽和脂肪酸的方法，包括如下步驟：

(1)向溶劑中加入尿素，加熱溶解，然后降溫，向其中加入抗氧化劑，后再加入水飛薊油，然后攪拌回流并冷卻至室溫，密封后在冷凍條件下包合結(jié)晶，得到包合物；

(2)一定時間后取出包合物，迅速抽濾，濾餅用乙醇洗滌若干次，濾液減壓濃縮揮出一半以上乙醇，用正己烷萃取不飽和脂肪酸，正己烷層用去離子水洗滌至ph5～6，加入適量無水硫酸鈉，干燥4～5h，抽濾，旋蒸除去正己烷即得到精制的不飽和脂肪酸。

優(yōu)選地，所述的溶劑為95％乙醇或95％甲醇，尿素的加入量為每毫升乙醇加入0.8-1.2g尿素，尿素與水飛薊油的比例為2∶1，3∶1，4∶1，優(yōu)選地，尿素與水飛薊油的比例為3∶1。如果尿素的添加量過少，飽和脂肪酸包合不完全，如果尿素的比例過大，油酸和亞油酸也將會被尿素包合，因此尿素過多過少都會導(dǎo)致油酸和亞油酸純度的降低。

加熱溶解的的條件為65-75℃水浴加熱溶解，然后降溫至55-60℃。

所述抗氧化劑為bht或維生素e，抗氧化劑的加入量為溶劑體積的0.05％。

水飛薊油的加入量為尿素的1/3(w/w)。

攪拌回流的條件為在55-65℃下攪拌回流30-35min。

包合結(jié)晶的條件為在-15℃的冰箱中進(jìn)行包合結(jié)晶。

(3)包合后得到的精制不飽和脂肪酸以油酸、亞油酸為檢測指標(biāo)，采用氣相色譜法測定其含量以確定產(chǎn)品的收率及純度。

氣相色譜條件：agilent7890氣相色譜儀；hp-innowax毛細(xì)管柱，氫火焰離子化檢測器；升溫程序：170℃為起始溫度，以10℃·min^-1升至210℃，保持1min，再以2℃·min^-1升至220℃，保持1min，最后以10℃·min^-1升至240℃，維持5min。檢測器溫度260℃，進(jìn)樣口溫度250℃，分流比為30∶1，進(jìn)樣量為1μl，載氣為氮?dú)猓魉贋?ml·min^-1，h2流速為30ml·min^-1，空氣300ml·min^-1；

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置：精密稱取油酸甲酯、亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品適量置于10ml容量瓶中，加入正己烷使其溶解，定容，搖勻，配置成油酸甲酯、亞油酸甲酯的濃度分別為0.98mg·ml^-1、1.13mg·ml^-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

甲酯化過程：精密稱取包合后的精制不飽和脂肪酸500mg，置于50ml容量瓶中，依次加入乙醚∶正己烷(1∶1)10ml混合溶劑，10ml甲醇，0.5mol/lkoh/ch3oh溶液10ml，放置60min，加入水至50ml，取上清液用無水硫酸鈉去除痕量水待用。取上清液1ml于10ml容量瓶中，加正己烷定容至刻度，搖勻，待測。

實驗結(jié)果：在上述色譜條件下，對油酸甲酯、亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測定，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線；對未包合的水飛薊油、包合后的精制物進(jìn)行測定，根據(jù)峰面積計算出油酸純度及亞油酸純度，并計算出包合后的收率；測得未包合水飛薊油中油酸含量為25％，亞油酸含量為50％。

本發(fā)明同時提出了利用上述方法制備得到的不飽和脂肪酸在制備用于預(yù)防或治療或緩解高血脂的藥品中的應(yīng)用。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明第一次利用尿素包合的方法提取純化水飛薊油的不飽和脂肪酸；得到的不飽和脂肪酸純度較高，可用于降血脂藥物的制備。

具體實施例

以下通過具體的實施實例進(jìn)一步說明本發(fā)明的工藝過程，但本發(fā)明并不僅限于這些實例項。

實施例1：

將1g尿素溶于4ml95％乙醇，70℃水浴加熱溶解，然后降溫至60℃，按尿油比為2∶1加入精制的水飛薊油(加樣前加入乙醇體積分?jǐn)?shù)為0.05％的bht)，在60℃下攪拌回流30min，冷卻到室溫，密封后放在-15℃的冰箱中包合結(jié)晶。24h后取出包合物，迅速抽濾(濾餅用乙醇洗滌3次)，濾液減壓濃縮揮出一半以上乙醇，用正己烷萃取不飽和脂肪酸，正己烷層用去離子水洗滌至ph5～6，加入適量無水硫酸鈉，干燥5h，抽濾，旋蒸除去正己烷即得到精制的不飽和脂肪酸。

包合后得到的精制不飽和脂肪酸以油酸、亞油酸為檢測指標(biāo)，采用氣相色譜法測定其含量以確定產(chǎn)品的收率及純度。

氣相色譜條件：agilent7890氣相色譜儀；hp-innowax毛細(xì)管柱，氫火焰離子化檢測器；升溫程序：170℃為起始溫度，以10℃·min^-1升至210℃，保持1min，再以2℃·min^-1升至220℃，保持1min，最后以10℃·min^-1升至240℃，維持5min。檢測器溫度260℃，進(jìn)樣口溫度250℃，分流比為30∶1，進(jìn)樣量為1μl，載氣為氮?dú)猓魉贋?ml·min^-1，h2流速為30ml·min^-1，空氣300ml·min^-1；

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置：精密稱取油酸甲酯、亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品適量置于10ml容量瓶中，加入正己烷使其溶解，定容，搖勻，配置成油酸甲酯、亞油酸甲酯的濃度分別為0.98mg·ml^-1、1.13mg·ml^-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

甲酯化過程：精密稱取包合后的精制不飽和脂肪酸500mg，置于50ml容量瓶中，依次加入乙醚∶正己烷(1∶1)10ml混合溶劑，10ml甲醇，0.5mol/lkoh/ch3oh溶液10ml，放置60min，加入水至50ml，取上清液用無水硫酸鈉去除痕量水待用。取上清液1ml于10ml容量瓶中，加正己烷定容至刻度，搖勻，待測。

實驗結(jié)果：在上述色譜條件下，對油酸甲酯、亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測定，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線；對未包合的水飛薊油、包合后的精制物進(jìn)行測定，根據(jù)峰面積計算出油酸純度及亞油酸純度，并計算出包合后的收率。根據(jù)氣相色譜法測定可知，測得未包合水飛薊油中油酸含量為25％，亞油酸含量為50％，經(jīng)包合后的油酸含量為27.7％，亞油酸含量為55.5％，收率為87％。

實施例2：

將1g尿素溶于4ml95％乙醇，70℃水浴加熱溶解，然后降溫至60℃，按尿油比為3∶1加入精制的水飛薊油(加樣前加入乙醇體積分?jǐn)?shù)為0.05％的bht)，在60℃下攪拌回流30min，冷卻到室溫，密封后放在-15℃的冰箱中包合結(jié)晶。24h后取出包合物，迅速抽濾(濾餅用乙醇洗滌3次)，濾液減壓濃縮揮出一半以上乙醇，用正己烷萃取不飽和脂肪酸，正己烷層用去離子水洗滌至ph5～6，加入適量無水硫酸鈉，干燥5h，抽濾，旋蒸除去正己烷即得到精制的不飽和脂肪酸。測試方法實施例1，根據(jù)氣相色譜法測定可知，經(jīng)包合后的油酸含量為31.7％，亞油酸含量為62.5％，收率為78％。

實施例3：

將1g尿素溶于4ml95％乙醇，70℃水浴加熱溶解，然后降溫至60℃，按尿油比為4∶1加入精制的水飛薊油(加樣前加入乙醇體積分?jǐn)?shù)為0.05％的bht)，在60℃下攪拌回流30min，冷卻到室溫，密封后放在-15℃的冰箱中包合結(jié)晶。24h后取出包合物，迅速抽濾(濾餅用乙醇洗滌3次)，濾液減壓濃縮揮出一半以上乙醇，用正己烷萃取不飽和脂肪酸，正己烷層用去離子水洗滌至ph5～6，加入適量無水硫酸鈉，干燥5h，抽濾，旋蒸除去正己烷即得到精制的不飽和脂肪酸。測試方法實施例1，根據(jù)氣相色譜法測定可知，經(jīng)包合后的油酸含量為31.3％，亞油酸含量為64.6％，收率為60％。