本發(fā)明涉及含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物，及其在制藥中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
藤茶，學(xué)名顯齒蛇葡萄（ampelopsisgrossedentala），是葡萄科蛇葡萄屬多年野生藤本植物的莖葉，具有消炎、止咳、抑菌、鎮(zhèn)痛、消脂、抗高血壓等功效。顯齒蛇葡萄的主要成分為黃酮類化合物，二氫楊梅素是藤茶中含量最高的化學(xué)成分（約占40%），具有抗病毒、抗脂質(zhì)過氧化、保肝、護(hù)肝等作用。
目前乙肝的抗病毒治療藥物主要有干擾素和核苷類似物，這些治療藥物主要是通過抑制病毒復(fù)制中的關(guān)鍵酶類而干預(yù)病毒復(fù)制過程，或者針對(duì)宿主抗病毒的不同環(huán)節(jié)而發(fā)揮抗病毒作用。這些藥物雖然有一定療效，但也存在病毒不易被完全清除、停藥后反跳等不良反應(yīng)，而且，核苷類似物的耐藥性也逐漸增加。因此，新型抗乙肝病毒藥物的研究具有重要意義。
no主要是由l-精氨酸在一氧化氮合酶（nos）的催化下產(chǎn)生的一種氣態(tài)自由基，具有維持血管張力的恒定、調(diào)節(jié)血壓穩(wěn)定及腦血流、促進(jìn)記憶過程、殺傷細(xì)菌病毒及腫瘤細(xì)胞等多種生物學(xué)功能。硝酸酯類化合物在醫(yī)藥方面主要表現(xiàn)在它是優(yōu)良的no供體，有其產(chǎn)生的no可使dna堿基部分脫氨基并斷裂，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。no可以作用于病毒復(fù)制的早期階段，具有阻止病毒擴(kuò)散、促進(jìn)病毒的清除和宿主的恢復(fù)作用，no供體型化合物具有潛在的抗病毒活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物、鹽，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體，其具有抗病毒的作用。
本發(fā)明的另一目的在于提供所述一種含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物、鹽，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體的制備方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供所述一種含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物、鹽，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體的用途。
以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
本發(fā)明提供的含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物、鹽，包括其立體異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，如下式所示：
式中，r1各自獨(dú)立為h,?；?，甲基、烴基、取代烴基、取代酰基；r2各自獨(dú)立為h,烴基、苯基、芐基、4-羥基芐基、吲哚甲基、羧甲基、咪唑甲基、羧乙基、酰胺甲基、羥甲基、羥乙基、巰甲基和酰胺乙基。r3各自獨(dú)立為h、烴基，取代烴基，雜環(huán)烴基，芳環(huán)烴基。
所述的含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物具體結(jié)構(gòu)實(shí)例如下：
本發(fā)明還提供了所述化合物的制備方法：
式中，r1各自獨(dú)立為h,酰基，甲基、烴基、取代烴基、取代?；?；r2各自獨(dú)立為h,烴基、苯基、芐基、4-羥基芐基、吲哚甲基、羧甲基、咪唑甲基、羧乙基、酰胺甲基、羥甲基、羥乙基、巰甲基和酰胺乙基。r3各自獨(dú)立為h、烴基，取代烴基，雜環(huán)烴基，芳環(huán)烴基。
所述藥學(xué)上可接受的鹽是各種有機(jī)酸、無機(jī)酸與所述二氫楊梅素硝酸酯衍生物形成的鹽。例如：鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫氟酸、氫碘酸、硝酸、乙酸、草酸、檸檬酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、甲苯磺酸等。
本發(fā)明的含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物具有抗病毒活性。
通過以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
中間體（i）的制備
n2下，取200mg二氫楊梅素，溶于10ml無水吡啶溶液中，緩慢加入80ml醋酐，室溫反應(yīng)2h，停止反應(yīng)，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=4:1），得到7,3’,4’,5’-四乙?；錀蠲匪刂虚g體（ia）。收率32.1%；ir（kbr）(cm-1):3370(o-h),1773(c=o),1636,1587,1504(芳環(huán)c=c),1201（c-o-c）。
n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無水dmf溶液中，加入無水345mg(2.5mmol)k2co3，緩慢加入355mg(2.5mmol)碘甲烷，室溫反應(yīng)6h，停止反應(yīng)，加1ml醋酸，過濾，減壓蒸干，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到7,3’,4’,5’-四甲氧基二氫楊梅素中間體（ib）。收率27.3%；ir（kbr）(cm-1):3200-3400(o-h,寬峰),1648(c=o),1450-1600(芳環(huán)c=c)，1200（c-o-c）。
實(shí)施例2
中間體（iii）的制備
取1mmol中間體（ia）或（ib），溶于5mldmf中，加入無水1.1mmolk2co3，于0℃下加入1.1mmol（ii）（氯乙酰氯或2-氯丙酰氯），反應(yīng)1h，自然升至室溫，反應(yīng)2h，過濾，減壓蒸干，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到7,3’,4’,5’-四乙?；?3-（2-氯）乙?；錀蠲匪刂虚g體（iiia），收率87%;得到7,3’,4’,5’-四乙?；?3-（2-氯）丙酰基二氫楊梅素中間體（iiib），收率85%；得到7,3’,4’,5’-四甲氧基-3-（2-氯）乙?；錀蠲匪刂虚g體（iiic），收率86%。
實(shí)施例3
中間體（iv）的制備
取16mmol（l)或(d)-2-boc-氨基醇，加入醋酸60ml，甲醇20ml，攪拌溶解，緩慢滴加發(fā)煙硝酸4.8ml和醋酐1.6ml的混合液，室溫反應(yīng)8h，將反應(yīng)液傾入450ml的冰水中，劇烈攪拌，用nahco3調(diào)ph至中性，過濾，濾餅分散在水中，過濾，水洗滌，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=5:1），得到固體。將上述固體加入到10ml氯化氫-乙酸乙酯飽和溶液中，攪拌反應(yīng)8h，再加入nahco3溶液至ph8，分層，有機(jī)層水洗，濃縮，得到中間體（iv）。
中間體（iva）：2-氨基乙醇硝酸酯，收率60%；
中間體（ivb）：2-氨基苯丙醇硝酸酯，收率66%；
中間體（ivc）：2-氨基咪唑丙醇硝酸酯，收率61%；
中間體（ivd）：2-氨基丙醇硝酸酯，收率57%；
中間體（ive）：2-四氫吡咯甲醇硝酸酯，收率49%；
中間體（ivf）：2-氨基-3-甲基-丁醇硝酸酯，收率71%；
中間體（ivg）：2-氨基-對(duì)羥苯丙醇硝酸酯，收率64%。
實(shí)施例4
化合物（1）的制備
取564mg（1mmol)中間體（iiia）和117mg（1.1mmol)中間體（iva），溶于10mldmf中，加入165mg（1.2mmol)k2co3和1mgki，加熱，40-50℃反應(yīng)6h，冷卻，過濾，減壓濃縮，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=4:1），得到化合物（1），收率79%。esi-ms(m/z):634[m]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.65(m,2h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),11.88(s,1h)。
實(shí)施例5
化合物（2）的制備
用215mg（1.1mmol)中間體（ivb）代替117mg（1.1mmol)中間體（iva），其它操作同實(shí)施例4，得到化合物（2），收率81%。esi-ms(m/z):724[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.79(m,2h),2.98(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),7.11(m,5h),11.88(s,1h)。
實(shí)施例6
化合物（3）的制備
用205mg（1.1mmol)中間體（ivc）代替117mg（1.1mmol)中間體（iva），其它操作同實(shí)施例4，得到化合物（3），收率71%。esi-ms(m/z):714[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.81(m,2h),2.98(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),6.81(s,1h),7.44(s,1h),11.88(s,1h),13.40(s,1h)。
實(shí)施例7
化合物（4）的制備
用132mg（1.1mmol)中間體（ivd）與579mg（1.0mmol)中間體（iiib）反應(yīng)，其它操作同實(shí)施例4，得到化合物（4），收率79%。esi-ms(m/z):662[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：0.91(s,6h),2.28(s,6h),2.31(s,3h),2.34(s,3h),2.65(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,1h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),11.88(s,1h)。
實(shí)施例8
化合物（5）的制備
用161mg（1.1mmol)中間體（ive）與452mg（1.0mmol)中間體（iiic）反應(yīng)，其它操作同實(shí)施例4，得到化合物（5），收率70%。esi-ms(m/z):562[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：1.42-1.54(m,2h),1.64-1.67(m,2h),2.20-2.30(m,2h),2.38(m,1h),3.46(m,1h),3.62(s,2h),3.71(m,1h),3.91(s,9h),3.93(s,3h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.42(s,2h),11.86(s,1h)。
實(shí)施例9
化合物（6）的制備
用163mg（1.1mmol)中間體（ivf）與452mg（1.0mmol)中間體（iiic）反應(yīng)，其它操作同實(shí)施例4，得到化合物（6），收率76%。esi-ms(m/z):564[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：1.01(s,6h),2.05(m,1h),2.68(m,1h),3.61(s,2h),3.63(m,2h),3.91(s,9h),3.93(s,3h),4.41(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.42(s,2h),11.86(s,1h)。
實(shí)施例10
化合物（7）的制備
用233mg（1.1mmol)中間體（ivg）代替117mg（1.1mmol)中間體（iva）與564mg（1.0mmol)中間體（iiia）反應(yīng)，其它操作同實(shí)施例4，得到化合物（7），收率81%。esi-ms(m/z):740[m]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm)：2.23(s,12h),2.75(m,2h),3.09(m,1h),3.56(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.89(d,j=11hz,1h),5.00(s,1h),5.85(s,1h),5.90(s,1h),6.40(s,2h),6.68-6.95(m,4h),11.88(s,1h)。
實(shí)施例11
化合物（8）的制備
n2保護(hù)下，將1mmol的化合物（1）加入到10ml30%乙二胺的dmf溶液中，加熱至40℃，反應(yīng)12h，減壓濃縮，硅膠層析柱純化（淋洗劑：v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得到化合物（8），收率81%，esi-ms(m/z):466[m]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):2.65(m,2h),3.53(m,2h),3.62(s,2h),4.40(d,j=11hz,1h),4.88(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.91(s,1h),6.39(s,2h),8.21(s,1h),8.91(s,2h),10.81(s,1h),11.87(s,1h)。
實(shí)施例12
化合物（9）的制備
n2保護(hù)下，將1mmol的化合物（4）加入到10ml30%乙二胺的dmf溶液中，加熱至40℃，反應(yīng)12h，減壓濃縮，硅膠層析柱純化（淋洗劑：v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得到化合物（9），收率79%，esi-ms(m/z):494[m]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):0.91(s,6h),2.65(m,1h),3.53(m,2h),3.62(s,1h),4.40(d,j=11hz,1h),4.88(d,j=11hz,1h),5.85(s,1h),5.91(s,1h),6.39(s,2h),8.21(s,1h),8.91(s,2h),10.81(s,1h),11.87(s,1h)。
實(shí)施例13
化合物（1-9）鹽酸鹽的制備
分別將1mmol的化合物（1-9）溶于dmf溶液中，0℃下加入飽和hcl-乙酸乙酯溶液，攪拌1h，50℃反應(yīng)1h，蒸除溶劑，分別得到化合物（1-9）的鹽酸鹽。
實(shí)施例14
含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物對(duì)乙肝病毒（hbv）dna的抑制活性
將hepg2細(xì)胞（20萬個(gè)/ml）接種24孔培養(yǎng)板，每孔100ul，37℃,5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁后，每孔給200ul藥液。含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物設(shè)160,80,40ug/ml3個(gè)濃度，每濃度3孔。以等量dmso培養(yǎng)液代替藥液為對(duì)照組，拉米夫定為陽性對(duì)照，濃度設(shè)為80ug/ml，每3天換原濃度藥液，培養(yǎng)6天后，提取hbvdna，經(jīng)熒光定量pcr測(cè)定其dna含量，計(jì)算樣品對(duì)細(xì)胞中hbvdna復(fù)制的抑制率，計(jì)算ic50（表1）。結(jié)果顯示，所述含硝酸酯基二氫楊梅素衍生物對(duì)hbvdna具有抑制作用。