本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類(lèi)含有苯磺酰胺的吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物及其在腫瘤治療領(lǐng)域的用途。

背景技術(shù)：

周期蛋白依賴(lài)性激酶(cyclin-dependentkinase,cdk)是一類(lèi)屬于ser/thr家族的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)性激酶，是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的核心，它與cyclins、細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制因子(ckis)組成細(xì)胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的進(jìn)程。目前已發(fā)現(xiàn)cdk家族有20個(gè)成員，即cdk1-20。部分cdk家族激酶的表達(dá)上調(diào)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。例如，cdk2、cdk4、cdk6、cdk8、cdk11的上調(diào)與乳腺癌、直腸癌的發(fā)展與惡化正相關(guān)(c.r.coxon,j.med.chem.2017,60,1746-1767；p.czodrowski,etal.,j.med.chem.2016,59,9337-9349)。因此，選擇性地抑制cdk的活性，阻止腫瘤細(xì)胞的異常增殖，是腫瘤治療的重要思路之一。

總體上說(shuō)，目前針對(duì)cdk開(kāi)發(fā)的藥物大體上分為兩類(lèi)：活性肽段和小分子抑制劑(c.sánchez-martínez,etal.,bioorganic&medicinalchemistryletters25(2015)3420–3435)。目前已上市和處于臨床研究中的cdk抑制劑中，主要是小分子抑制劑。具體的講，輝瑞公司開(kāi)發(fā)的cdk4/6雙重抑制劑palbociclib，諾華公司開(kāi)發(fā)的cdk4/6抑制劑ribociclib，分別于2015年2月和2017年6月獲fda批準(zhǔn)，用于聯(lián)合來(lái)曲唑治療er+/her2-的晚期乳腺癌。除了已上市的這兩個(gè)藥物，十多個(gè)靶向于cdk的活性小分子目前處于臨床試驗(yàn)中。此類(lèi)藥物的開(kāi)發(fā)對(duì)于腫瘤的分子靶向治療具有重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種對(duì)腫瘤細(xì)胞具有增殖抑制作用的吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物在腫瘤治療中的用途。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供的吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物，或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物或其藥學(xué)上可接受的鹽，具有如下式(i)所示的結(jié)構(gòu)：

其中，x、y各自獨(dú)立的代表n、o、s或so(亞砜基)；

r1代表氫或烷基(如可以是：羥基烷基、氰基烷基、芳基烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基等)；

r2代表氫或烷基(如可以是：羥基烷基、氰基烷基、芳基烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基等)；

本發(fā)明提供的吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物，或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中：

r1選自于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、環(huán)丙基、正丁基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基等；

r2選自于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、乙?；?、丙酰基、羥乙基或羥丙基等。

本發(fā)明提供的吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物，或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物或其藥學(xué)上可接受的鹽，可選自于下述任一化合物：

本發(fā)明提供了上述吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物，或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物或其藥學(xué)上可接受的鹽，在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了上述吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物，或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物或其藥學(xué)上可接受的鹽，在制備預(yù)防和治療食管癌藥物中的應(yīng)用。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所述吡咯并嘧啶類(lèi)衍生物結(jié)構(gòu)新穎，制備方法簡(jiǎn)便。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)明：其對(duì)食管癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖抑制作用，可用于制備抗癌藥物，尤其是抗食管癌藥物。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

實(shí)施例1：2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)

將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(600mg，3.19mmol)放入圓底燒瓶中，加四氫呋喃thf(20ml)使之溶解，再分別加入環(huán)丙胺(218mg，3.83mmol)和n-n-二異丙基乙胺diea(823mg，6.38mmol)，30℃反應(yīng)24h。處理：減壓去除反應(yīng)液，對(duì)剩余物用進(jìn)行柱色譜分離(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)，得白色固體。收率：63％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.90(s,1h),7.66(s,1h),7.53(t,j＝3.0hz,1h),6.35–6.30(m,1h),2.99–2.86(m,1h),0.87–0.79(m,2h),0.58–0.52(m,2h)。esi-msm/z:209[m+h]⁺。

實(shí)施例2：2-氯-n-環(huán)丁基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(2)

制備方法參照實(shí)施例1，其中，用環(huán)丁胺替代環(huán)丙胺，反應(yīng)溫度由30℃提高至回流。得白色固體。收率：80％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.69(s,1h),7.32(t,j＝2.9hz,1h),7.16(d,j＝7.3hz,1h),6.33–6.28(m,1h),4.33–3.15(m,1h),1.80–1.40(m,6h)。esi-msm/z:223[m+h]⁺。

實(shí)施例3：2-氯-n-環(huán)戊基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(3)

制備方法參照實(shí)施例1，其中，用環(huán)戊胺替代環(huán)丙胺，反應(yīng)溫度由30℃提高至回流。得白色固體。收率：85％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.00(s,1h),7.59–7.45(m,1h),7.36(d,j＝6.9hz,1h),6.30(dd,j＝2.9,2.1hz,1h),4.44–4.30(m,1h),2.09–1.95(m,2h),1.81–1.67(m,2h),1.66–1.56(m,2h),1.56–1.41(m,2h)。esi-msm/z:237[m+h]⁺。

實(shí)施例4：2-氯-n-環(huán)己基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(4)

制備方法參照實(shí)施例1，其中，用環(huán)己胺替代環(huán)丙胺，反應(yīng)溫度由30℃提高至回流。得白色固體。收率：91％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.05(s,1h),7.52(t,j＝2.9hz,1h),7.25(d,j＝7.6hz,1h),6.34–6.25(m,1h),4.07–3.87(m,1h),2.05–1.91(m,2h),1.81–1.68(m,2h),1.67–1.55(m,1h),1.46–1.20(m,5h)。esi-msm/z:251[m+h]⁺。

實(shí)施例5：2,4-二氯-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(5)

將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(600mg，3.19mmol)放入圓底燒瓶中，加入n，n-二甲基甲酰胺dmf(5ml)使其溶解，再依次加入碘甲烷(544mg，3.83mmol)和碳酸銫(520mg，1.60mmol)，常溫下攪拌反應(yīng)24h。處理：將反應(yīng)液加入水中，并用乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濃縮。得黃色固體。

收率：91％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.08(d,j＝3.1hz,1h),6.69(d,j＝3.1hz,1h),4.10(s,3h)。esi-msm/z:202[m+h]⁺。

實(shí)施例6：2-氯-n-環(huán)丙基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(6)

制備方法參照實(shí)施例1。將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶替換為2,4-二氯-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(5)。得白色固體，收率：80％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.44(d,j＝3.0hz,1h),6.41(d,j＝7.8hz,1h),6.24(d,j＝3.0hz,1h),3.98(s,3h),3.25–2.12(m,1h),0.90–0.48(m,4h)。esi-msm/z:223[m+h]⁺。

實(shí)施例7：2-氯-n-環(huán)丁基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(7)

制備方法參照實(shí)施例1。分別將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶、環(huán)丙胺替換為2,4-二氯-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(5)和環(huán)丁胺。得白色固體，收率：82％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.40(d,j＝3.0hz,1h),6.32(d,j＝7.8hz,1h),6.19(d,j＝3.0hz,1h),4.33–4.12(m,1h),4.01(s,3h),2.01–1.53(m,6h)。esi-msm/z:237[m+h]⁺。

實(shí)施例8：2-氯-n-環(huán)戊基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(8)

制備方法參照實(shí)施例1。分別將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶、環(huán)丙胺替換為2,4-二氯-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(5)和環(huán)戊胺。得白色固體，收率：84％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.40(d,j＝3.0hz,1h),6.34(d,j＝7.8hz,1h),6.21(d,j＝3.0hz,1h),4.23–4.05(m,1h),4.00(s,3h),2.10–1.90(m,2h),179–1.64(m,2h),1.61–1.50(m,2h),1.52–1.37(m,2h)。esi-msm/z:251[m+h]⁺。

實(shí)施例9：2-氯-n-環(huán)己基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(9)

制備方法參照實(shí)施例1。分別將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶、環(huán)丙胺替換為2,4-二氯-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(5)和環(huán)己胺。得白色固體，收率：87％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.45(d,j＝3.0hz,1h),6.44(d,j＝7.8hz,1h),6.31(d,j＝3.0hz,1h),4.21–4.02(m,1h),3.98(s,3h),2.60–1.40(m,6h),1.25–1.10(m,4h).esi-msm/z:265[m+h]⁺。

實(shí)施例10：2,4-二氯-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(10)

制備方法同實(shí)施例5。將碘甲烷替換為溴乙烷。得白色固體，收率：97％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.18(d,j＝3.2hz,1h),6.73(d,j＝3.2hz,1h),4.52(q,j＝7.2hz,2h),1.50–1.32(m,3h)。esi-msm/z:216[m+h]⁺。

實(shí)施例11：2-氯-n-環(huán)丙基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(11)

制備方法同實(shí)施例1。將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶替換為2,4-二氯-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(10)。得白色固體，收率：77％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.44(d,j＝3.0hz,1h),6.54(d,j＝7.8hz,1h),6.35(d,j＝3.0hz,1h),4.53–4.20(m,3h),1.48-1.28(m3h),0.91–0.73(m,2h),0.60–0.51(m,2h)。esi-msm/z:237[m+h]⁺。

實(shí)施例12：2-氯-n-環(huán)丁基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(12)

制備方法參照實(shí)施例1。分別將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶、環(huán)丙胺替換為2,4-二氯-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(10)和環(huán)丁胺。得白色固體，收率：74％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.42(d,j＝3.0hz,1h),6.44(d,j＝7.8hz,1h),6.25(d,j＝3.0hz,1h),4.55–4.22(m,3h),2.00–1.59(m,6h),1.50-1.32(m,3h).esi-msm/z:251[m+h]⁺。

實(shí)施例13：2-氯-n-環(huán)戊基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(13)

制備方法參照實(shí)施例1，分別將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶、環(huán)丙胺替換為2,4-二氯-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(10)和環(huán)戊胺。得白色固體。收率：75％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.46(d,j＝3.0hz,1h),6.42(d,j＝7.8hz,1h),6.20(d,j＝3.0hz,1h),4.45–4.20(m,3h),2.09–1.95(m,2h),1.81–1.67(m,2h),1.66–1.56(m,2h),1.56–1.30(m,5h)。esi-msm/z:265[m+h]⁺。

實(shí)施例14：2-氯-n-環(huán)己基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(14)

制備方法參照實(shí)施例1，分別將2,4-二氯-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶、環(huán)丙胺替換為2,4-二氯-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶(10)和環(huán)己胺。得白色固體。收率：70％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.44(d,j＝3.0hz,1h),6.40(d,j＝7.8hz,1h),6.21(d,j＝3.0hz,1h),4.40–4.10(m,3h),2.10–1.90(m,2h),1.84–1.68(m,2h),1.67–1.53(m,1h),1.50–1.20(m,8h)。esi-msm/z:279[m+h]⁺。

實(shí)施例15：4-[(4-環(huán)丙氨基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ia)

將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)(79mg，0.38mmol)，4-氨基苯磺酰胺(78mg，0.46mmol)溶于5ml正丁醇中，再滴加1滴濃鹽酸，反應(yīng)液升溫至120℃反應(yīng)10h。處理：減壓濃縮反應(yīng)液，濃縮物用柱色譜分離(洗脫劑：ch2cl2:meoh＝100:10)，得白色固體，收率33％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.72(s,1h),9.89(s,1h),8.78(s,1h),8.02(d,j＝8.9hz,2h),7.74(d,j＝8.9hz,2h),7.49(t,j＝2.8hz,1h),7.24–7.12(m,2h),6.31–6.22(m,1h),3.09–2.98(m,1h),0.95–0.84(m,2h),0.71–0.64(m,2h)。esi-msm/z:345[m+h]⁺。

實(shí)施例16：4-[(4-環(huán)丁氨基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ib)

制備方法參照實(shí)施例15，將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)丁基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(2)。得白色固體。收率：31％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.00(s,1h),10.12s,1h),9.07(s,1h),7.97(d,j＝8.9hz,2h),7.64(d,j＝8.9hz,2h),7.30(t,j＝2.8hz,1h),7.25–7.10(m,2h),6.38–6.32(m,1h),3.10–2.94(m,1h),2.05-1.50(m,6h).esi-msm/z:359[m+h]⁺。

實(shí)施例17：4-[(4-環(huán)戊氨基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ic)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)戊基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(3)。得白色固體，收率49％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.74(s,1h),10.61(s,1h),9.68(s,1h),7.87–7.79(m,4h),7.59(t,j＝2.8hz,1h),7.30(s,2h),6.32(t,j＝2.2hz,1h),4.55–4.42(m,1h),2.09–1.96(m,2h),1.84–1.68(m,4h),1.68–1.59(m,2h)。esi-msm/z:373[m+h]⁺。

實(shí)施例18：4-[(4-環(huán)己氨基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(id)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)己基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(4)。得白色固體，收率：33％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.67(s,1h),10.63(s,1h),9.55(s,1h),7.90–7.78(m,4h),7.59(t,j＝2.9hz,1h),7.32(s,2h),6.36–6.30(m,1h),4.11–3.97(m,1h),2.11–1.99(m,2h),1.89–1.78(m,2h),1.50–1.35(m,4h),1.32–1.23(m,2h)。esi-msm/z:387[m+h]⁺。

實(shí)施例19：4-[(4-環(huán)丙氨基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ie)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)丙基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(6)。得白色固體，收率：34％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.52(s,1h),10.00(s,1h),7.83–7.51(m,4h),7.46(d,j＝2.9hz,1h),7.26(s,2h),6.09(d,j＝2.9hz,1h),4.08–3.93(m,1h),3.89(s,3h),1.00–0.74(m,2h),0.69–0.60(m,2h)。esi-msm/z:359[m+h]⁺。

實(shí)施例20：4-[(4-環(huán)丁氨基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(if)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)丁基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(7)。得白色固體，收率：25％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.22(s,1h),10.60(s,1h),7.94–7.41(m,4h),7.36(d,j＝2.9hz,1h),7.25(s,2h),6.48(d,j＝2.9hz,1h),4.58–4.23(m,1h),4.19(s,3h),2.02–1.49(m,6h)。esi-msm/z:373[m+h]⁺。

實(shí)施例21：4-[(4-環(huán)戊氨基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ig)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)戊基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(8)。得白色固體，收率：28％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.62(s,1h),10.73(s,1h),7.89–7.42(m,4h),7.24(d,j＝2.9hz,1h),7.21(s,2h),6.32(d,j＝2.9hz,1h),4.43–4.13(m,1h),4.24(s,3h),2.04–1.89(m,2h),1.82–1.63(m,4h),1.55–1.43(m,2h)。esi-msm/z:387[m+h]⁺。

實(shí)施例22：4-[(4-環(huán)己氨基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ih)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)己基-5-甲基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(9)。得白色固體，收率：26％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.72(s,1h),10.93(s,1h),7.69–7.23(m,4h),7.05(d,j＝2.9hz,1h),7.19(s,2h),6.22(d,j＝2.9hz,1h),4.52–4.20(m,1h),4.18(s,3h),2.10–1.89(m,2h),1.84–1.67(m,2h),1.59–1.50(m,2h),1.49–1.24(m,4h)。esi-msm/z:401[m+h]⁺。

實(shí)施例23：4-[(4-環(huán)丙氨基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ii)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)丙基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(11)。得白色固體，收率：37％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),7.83(d,j＝8.9hz,2h),7.53(d,j＝8.9hz,2h),7.24(d,j＝3.0hz,1h),7.15(s,2h),6.32(d,j＝3.0hz,1h),6.09(d,j＝7.9hz,1h),4.53–4.27(m,3h),1.33–1.28(m,3h),1.02–0.92(m,2h),0.87–0.63(m,2h)。esi-msm/z:373[m+h]⁺。

實(shí)施例24：4-[(4-環(huán)丁氨基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ij)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)丁基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(12)。得白色固體，收率：34％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.70(s,1h),7.63(d,j＝8.9hz,2h),7.43(d,j＝8.9hz,2h),7.21(d,j＝3.0hz,1h),7.17(s,2h),6.35(d,j＝3.0hz,1h),6.18(d,j＝7.9hz,1h),4.43–4.21(m,3h),1.94–1.32(m,9h)。esi-msm/z:387[m+h]⁺。

實(shí)施例25：4-[(4-環(huán)戊氨基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(ik)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)戊基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(13)。得白色固體，收率：36％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.50(s,1h),7.82(d,j＝8.9hz,2h),7.53(d,j＝8.9hz,2h),7.32(d,j＝3.0hz,1h),7.24(s,2h),6.47(d,j＝3.0hz,1h),6.21(d,j＝7.9hz,1h),4.52–4.26(m,3h),2.12–1.86(m,2h),1.74–1.63(m,4h),1.59–1.46(m,2h)，1.32–1.19(m,3h)。esi-msm/z:401[m+h]⁺。

實(shí)施例26：4-[(4-環(huán)己氨基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-2-基)氨基]苯磺酰胺(il)

制備方法同實(shí)施例15。將2-氯-n-環(huán)丙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(1)替換為2-氯-n-環(huán)己基-5-乙基-5h-吡咯[3,2-d]嘧啶-4-胺(14)。得白色固體，收率：30％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.21(s,1h),7.86(d,j＝8.9hz,2h),7.58(d,j＝8.9hz,2h),7.26(d,j＝3.0hz,1h),7.14(s,2h),6.25(d,j＝3.0hz,1h),6.13(d,j＝7.9hz,1h),4.63–4.28(m,3h),2.23–2.02(m,2h),1.96–1.68(m,2h),1.47–1.42(m,4h),1.39–1.20(m,5h)。esi-msm/z:415[m+h]⁺。

生物學(xué)試驗(yàn)實(shí)施例：

測(cè)試所得化合物在對(duì)人食管癌細(xì)胞ec109和kyse150的抑制率和(或)ic50值。

實(shí)驗(yàn)方法：

(1)細(xì)胞株：選用人食管癌細(xì)胞ec109、kyse150；

(2)將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化后，吹打成單細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板；ec109、kyse150均3×10³細(xì)胞/孔。每孔加入含10％血清的rpmi-1640完全培養(yǎng)基至總體積為100μl，放在二氧化碳培養(yǎng)箱中于37℃進(jìn)行培養(yǎng)；

(3)待培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的待測(cè)化合物，繼續(xù)培養(yǎng)72h；

(4)采用溴化四氮唑藍(lán)(mtt)法測(cè)定化合物對(duì)兩種食管癌細(xì)胞的增殖抑制能力；

(5)酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔o(hù)d值(檢測(cè)波長(zhǎng)：520nm)，并記錄結(jié)果。按下述公式計(jì)算抑制率：

細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率＝(od對(duì)照-od給藥-od空白)/(od對(duì)照-od空白)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：化合物在不同濃度(50或10μm)下對(duì)ec109、kyse150細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率如表1所示。

表1.化合物對(duì)ec109和kyse150細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：本發(fā)明實(shí)施例中制備的具有結(jié)構(gòu)式(i)所示的化合物對(duì)人食管癌細(xì)胞(ec109、kyse150)具有顯著的增殖抑制活性，此類(lèi)化合物可用于抗腫瘤藥物的制備，尤其是抗食管癌藥物的制備，為臨床治療藥物提供了新的選擇。