本發(fā)明涉及熒光探針領(lǐng)域，尤其涉及一種吲哚乙烯類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

小分子探針是指針對(duì)某種特定目標(biāo)生物分子或生物離子開(kāi)發(fā)的探測(cè)器，小分子探針能與特定的靶分子進(jìn)行特異性相互作用，并能被特殊的檢測(cè)技術(shù)所探知。與普通的檢測(cè)技術(shù)相比，探針技術(shù)具有靈敏度高、專一性強(qiáng)、快速準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于分子影像和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

rna(核糖核酸)在生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育及凋亡的整個(gè)過(guò)程中都有重要的調(diào)控作用；在許多疾病的發(fā)生過(guò)程中，rna起著關(guān)鍵作用，如惡性腫瘤的發(fā)生與rna的表達(dá)異常關(guān)系密切。但與dna分析與檢測(cè)技術(shù)相比，rna的分析與檢測(cè)技術(shù)的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用發(fā)展緩慢。

rna熒光探針具有在復(fù)雜的溶液體系中或者活細(xì)胞環(huán)境中高選擇性、特異性地識(shí)別rna的優(yōu)點(diǎn)，在rna分析與檢測(cè)領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景。目前，已經(jīng)商業(yè)化的rna熒光探針只有invitrogen公司出品的rnaselect。該熒光探針在實(shí)際成像應(yīng)用中存在一些缺陷，例如與rna響應(yīng)速度較慢、光致毒性大和光穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，這些缺陷影響其應(yīng)用價(jià)值。因此，開(kāi)發(fā)性能優(yōu)越的rna小分子熒光探針具有很強(qiáng)的市場(chǎng)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種吲哚乙烯類化合物及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明提供的吲哚乙烯類化合物作為rna熒光探針時(shí)，毒性低，響應(yīng)速度快且光穩(wěn)定性強(qiáng)。

本發(fā)明提供了一種吲哚乙烯類化合物，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)，

其中，r1、r3獨(dú)立的選自h、鹵素、羥基、c1～c6的烷氧基、c2～c15的亞胺基、c1～c6的烷基；

r4選自c1～c6的烷基；

r2選自哌啶基、嗎啉基、吡咯基或nr5r6；

r5、r6獨(dú)立的選自h、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2oh、-ch2ch2ch2oh、式(r-1)、式(r-2)、式(r-3)、式(r-4)或式(r-5)，

且r5、r6不同時(shí)為h。

優(yōu)選的，所述r1選自h、f、cl、br、-oh、-och3、-n(ch3)2或c1-c6的烷基。

優(yōu)選的，所述r3選自h、f、cl、br、-oh、-och3、-n(ch3)2或c1-c6的烷基。

優(yōu)選的，所述r4選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。

優(yōu)選的，所述吲哚乙烯類化合物為式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i-d)或式(i-e)，

本發(fā)明還提供了一種吲哚乙烯類化合物的制備方法，包括：

將式(ii)化合物、式(iii)化合物、r2-h反應(yīng)，得到式(i)結(jié)構(gòu)的吲哚乙烯類化合物；

其中，r1、r3獨(dú)立的選自h、鹵素、羥基、c1～c6的烷氧基、c2～c15的亞胺基、c1～c6的烷基；

r4選自c1～c6的烷基；

r2選自哌啶基、嗎啉基、吡咯基或nr5r6；

r5、r6獨(dú)立的選自h、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2oh、-ch2ch2ch2oh、式(r-1)、式(r-2)、式(r-3)、式(r-4)或式(r-5)，

且r5、r6不同時(shí)為h。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)水溶液中的rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中的rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)細(xì)胞中的rna的熒光探針中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種吲哚乙烯類化合物，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)，本發(fā)明提供的化合物通過(guò)在喹啉位引入吲哚-3-甲醛并以此為母體選擇特定的取代基得到一系列式(i)所示結(jié)構(gòu)的吲哚乙烯類化合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用本發(fā)明所述熒光探針標(biāo)記后的熒光圖像顯示，在細(xì)胞質(zhì)和核仁區(qū)有明顯的綠光分布，明確提示所述探針能夠在活細(xì)胞中專一性的成像胞質(zhì)和核仁中的rna，并且在與傳統(tǒng)核仁熒光探針或與經(jīng)rna酶消化實(shí)驗(yàn)后的細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)后也得到進(jìn)一步的證實(shí)?？梢?jiàn)，本發(fā)明提供的熒光探針是一類新型的rna選擇性識(shí)別熒光探針?lè)肿?，與其功能相近的熒光探針比，本發(fā)明所述探針具有低生物毒性、膜通透性好、顯色強(qiáng)、復(fù)染兼容性好、光穩(wěn)定性較強(qiáng)的特點(diǎn)，預(yù)示其作為rna和核仁熒光探針具有廣泛的應(yīng)用，有望開(kāi)發(fā)為rna和核仁相關(guān)的生理和病理學(xué)研究用簡(jiǎn)捷、直觀的生物檢測(cè)試劑。

附圖說(shuō)明

圖1為式(i-a)化合物探針與da21、ds12、ds26、rna五種核酸在1∶1濃度下的熒光譜；

圖2為式(i-a)化合物探針滴定st-dna、ds26、rna的熒光數(shù)據(jù)的擬合曲線；

圖3為式(i-a)化合物探針滴定rna的熒光光譜；

圖4為式(i-a)化合物探針滴定rna的熒光光譜中c與(f-f0)/f0擬合的曲線；

圖5為式(i-a)化合物探針與染料dapi復(fù)染pc3細(xì)胞的細(xì)胞成像圖；

圖6為式(i-a)化合物探針與rnase和dnase的細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)；

圖7為式(i-a)化合物探針與dna和rna凝膠電泳圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種吲哚乙烯類化合物，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)，

其中，r1、r3獨(dú)立的選自h、鹵素、羥基、c1～c6的烷氧基、c2～c15的亞胺基、c1～c6的烷基；

r4選自c1～c6的烷基；

r2選自哌啶基、嗎啉基、吡咯基或nr5r6；

r5、r6獨(dú)立的選自h、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2oh、-ch2ch2ch2oh、式(r-1)、式(r-2)、式(r-3)、式(r-4)或式(r-5)，

且r5、r6不同時(shí)為h。

按照本發(fā)明，所述r1優(yōu)選為h、f、cl、br、-oh、-och3、-n(ch3)2或c1-c6的烷基，更優(yōu)選為h、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。

按照本發(fā)明，所述r3優(yōu)選為h、f、cl、br、-oh、-och3、-n(ch3)2或c1-c6的烷基，更優(yōu)選為h、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。

按照本發(fā)明，所述r4優(yōu)選為甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。

按照本發(fā)明，所述r5、r6優(yōu)選獨(dú)立的選自-ch2ch2oh、-ch2ch2ch2oh、式(r-1)、式(r-2)、式(r-3)、式(r-4)或式(r-5)，

其中，結(jié)構(gòu)式中：中的虛線部分為其與氮的連接部位。

更具體的，所述吲哚乙烯類化合物為式(i-1)、式(i-2)、式(i-3)、式(i-4)或式(i-5)，

本發(fā)明還提供了一種吲哚乙烯類化合物的制備方法，包括：

將式(ii)化合物、式(iii)化合物、r2-h反應(yīng)，得到式(i)結(jié)構(gòu)的吲哚乙烯類化合物；

其中，r1、r3獨(dú)立的選自h、鹵素、羥基、c1～c6的烷氧基、c2～c15的亞胺基、c1～c6的烷基；

r4選自c1～c6的烷基；

r2選自哌啶基、嗎啉基、吡咯基或nr5r6；

r5、r6獨(dú)立的選自h、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2oh、-ch2ch2ch2oh、式(r-1)、式(r-2)、式(r-3)、式(r-4)或式(r-5)，

且r5、r6不同時(shí)為h。

按照本發(fā)明，本發(fā)明將將式(ii)化合物、式(iii)化合物、r2-h反應(yīng)，得到吲哚乙烯類化合物；其中，各個(gè)基團(tuán)的限定與前述化合物中基團(tuán)的限定相同，本發(fā)明對(duì)反應(yīng)的方法沒(méi)有特殊要求，本領(lǐng)域公知的用于該類反應(yīng)的方法均可。

其中，本發(fā)明中，所述式(ii)化合物優(yōu)選按照以下方法制備得到，

將式(iv)化合物與r4i反應(yīng)，得到式(ii)結(jié)構(gòu)的化合物；

其中，r3選自h、鹵素、羥基、c1～c6的烷氧基、c2～c15的亞胺基、c1～c6的烷基。

其中，本發(fā)明對(duì)反應(yīng)的條件沒(méi)有特殊要求，本領(lǐng)域公知的可用于該類反應(yīng)的反應(yīng)條件均可。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)水溶液中的rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中的rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的吲哚乙烯類化合物在制備檢測(cè)細(xì)胞中的rna的熒光探針中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種具有式(i)所示結(jié)構(gòu)的吲哚乙烯類化合物，本發(fā)明提供的化合物通過(guò)在喹啉位引入吲哚-3-甲醛并以此為母體選擇特定的取代基得到一系列式(i)所示結(jié)構(gòu)的吲哚乙烯類化合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用本發(fā)明所述熒光探針標(biāo)記后的熒光圖像顯示，在細(xì)胞質(zhì)和核仁區(qū)有明顯的綠光分布，明確提示所述探針能夠在活細(xì)胞中專一性的成像胞質(zhì)和核仁中的rna，并且在與傳統(tǒng)核仁熒光探針或與經(jīng)rna酶消化實(shí)驗(yàn)后的細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)后也得到進(jìn)一步的證實(shí)?？梢?jiàn)，本發(fā)明提供的熒光探針是一類新型的rna選擇性識(shí)別熒光探針?lè)肿?，與其功能相近的熒光探針比，本發(fā)明所述探針具有低生物毒性、膜通透性好、顯色強(qiáng)、復(fù)染兼容性好、光穩(wěn)定性較強(qiáng)的特點(diǎn)，預(yù)示其作為rna和核仁熒光探針具有廣泛的應(yīng)用，有望開(kāi)發(fā)為rna和核仁相關(guān)的生理和病理學(xué)研究用簡(jiǎn)捷、直觀的生物檢測(cè)試劑。

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1：化合物2(4-氯-1，2-二甲基喹啉)的合成

往25ml圓底燒瓶里稱取4-氯-2-甲基喹啉0.2g(1.1236mmol)，加入碘甲烷，溶劑環(huán)丁砜，將混合物加熱到40～60℃，反應(yīng)15個(gè)小時(shí)后，冷卻，加入無(wú)水乙醚后震蕩，抽濾，固體洗滌數(shù)遍，真空干燥后稱重，薄層色譜法初步表明沒(méi)有副產(chǎn)物，得到0.345g純品2，產(chǎn)率為95.8％。

¹hnmr(400mhz，dmso)δ8.56(d，j＝8.4hz，1h)，8.46(d，j＝8.3hz，1h)，8.22(t，j＝8.1hz，1h)，8.01(t，j＝7.9hz，1h)，7.55(s，j＝7.4hz，1h)，4.20(s，3h)，3.74(s，1h)，2.68(s，3h)。

實(shí)施例2：化合物(i-a)的合成

稱取0.319g(0.001mol)的化合物2，加入到裝有10ml乙醇的圓底燒瓶中，再加入0.217g，即1.5倍摩爾量的吲哚-3-甲醛，室溫條件下攪拌5分鐘后加入1ml哌啶，在80℃下反應(yīng)5h，冷卻至室溫，向反應(yīng)后溶液中加入10ml乙酸乙酯，振蕩后抽濾，并用少量乙醇洗滌沉淀，真空干燥后得到化合物(i-a)為黃褐色固體0.409g，其結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率為85.1％：1hnmr(400mhz，dmso)δ11.82(s，1h)，8.27(d，j＝8.8hz，1h)，8.11(d，j＝8.3hz，1h)，8.05-7.98(m，2h)，7.74(t，j＝7.6hz，1h)，7.63(dd，j＝11.8，9.1hz，2h)，7.51-7.43(m，2h)，7.25(t，j＝7.6hz，1h)，7.06(t，j＝7.5hz，1h)，6.98(s，1h)，4.23(s，3h)，3.76(s，4h)，1.84(s，4h)，1.78(s，2h)。

實(shí)施例3：化合物(i-b)的合成

本實(shí)施例的制備方法除了用嗎啉代替哌啶外，其余同實(shí)施例二，產(chǎn)物為紅褐色固體即為化合物(i-b)，其結(jié)構(gòu)式如下，產(chǎn)率為78.2％：¹hnmr(400mhz，dmso)δ12.03(s，1h)，8.30(dd，j＝12.3，3.2hz，2h)，8.18(t，j＝5.2hz，3h)，8.02(t，j＝7.5hz，1h)，7.73(t，j＝7.6hz，1h)，7.58-7.51(m，2h)，7.43(d，j＝15.7hz，1h)，7.32-7.24(m，2h)，4.27(s，3h)，3.97-3.88(m，4h)，3.72(d，j＝4.2hz，4h)。

實(shí)施例4：化合物(i-c)的合成

本實(shí)施例的制備方法除了用呲咯代替哌啶外，其余同實(shí)施例二，產(chǎn)物為黃棕色固體即為化合物(i-c)，其結(jié)構(gòu)式如下，產(chǎn)率為76.8％：¹hnmr(400mhz，dmso)δ11.85(s，1h)，8.49(d，j＝8.5hz，1h)，8.17-8.09(m，2h)，8.01(dt，j＝15.8，5.3hz，3h)，7.65(t，j＝7.7hz，1h)，7.51(d，j＝7.7hz，1h)，7.33(d，j＝15.7hz，1h)，7.28-7.20(m，2h)，7.00(s，1h)，4.11(s，3h)，4.01(s，4h)，2.06(s，4h)。

實(shí)施例5：化合物(i-d)的合成

本實(shí)施例的制備方法除了用1-(2-氨乙基)哌啶烷代替哌啶外，其余同實(shí)施例二，產(chǎn)物為黃褐色固體即為化合物(i-d)，其結(jié)構(gòu)式如下，產(chǎn)率為78.2％：¹hnmr(400mhz，dmso)δ11.91(s，1h)，8.74(s，1h)，8.49(d，j＝8.1hz，1h)，8.18(d，j＝8.8hz，1h)，8.10(dd，j＝14.9，11.3hz，3h)，8.03-7.97(m，1h)，7.73(t，j＝7.7hz，1h)，7.53(d，j＝7.1hz，1h)，7.38(d，j＝15.8hz，1h)，7.30-7.21(m，2h)，7.15(s，1h)，4.13(d，j＝11.7hz，3h)，3.78(s，2h)，2.66(d，j＝21.8hz，2h)，1.50(s，4h)，1.38(d，j＝4.2hz，2h)。

實(shí)施例6：化合物(i-e)的合成

本實(shí)施例的制備方法除了用3-氨基-1-丙醇代替哌啶外，其余同實(shí)施例二，產(chǎn)物為深黃色固體即為化合物(i-e)，其結(jié)構(gòu)式如下，產(chǎn)率為81.2％：¹hnmr(400mhz，dmso)δ11.90(s，1h)，8.87(s，1h)，8.50(d，j＝8.2hz，1h)，8.18(d，j＝8.8hz，1h)，8.14-8.11(m，1h)，8.11-8.02(m，2h)，7.99(t，j＝7.7hz，1h)，7.72(t，j＝7.6hz，1h)，7.55-7.49(m，1h)，7.37(d，j＝15.8hz，1h)，7.29-7.22(m，2h)，7.15(s，1h)，4.78(s，1h)，4.14(s，3h)，3.71(s，2h)，3.61(d，j＝4.4hz，2h)，2.00-1.86(m，2h)。

實(shí)施例7：式(i-a)化合物熒光探針對(duì)不同核酸選擇性的熒光光譜實(shí)驗(yàn)

將5mm的式(i-a)化合物儲(chǔ)備液稀釋成5um的濃度，再加入不同種類的核酸用熒光分光光度計(jì)(狹縫寬度10nm，掃描速度400nm/min，激發(fā)波長(zhǎng)455nm)測(cè)出其各自的熒光強(qiáng)度，結(jié)果見(jiàn)圖1，圖1為式(i-a)化合物探針與da21、ds12、ds26、rna五種核酸在1∶1濃度下的熒光譜；從圖中可以看出，式(i-a)化合物熒光探針與rna的結(jié)合之后熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，而對(duì)其他的雙鏈、單鏈和g-四鏈體dna熒光強(qiáng)度較弱。

選擇性實(shí)驗(yàn)中所使用的核酸

實(shí)施例8：式(i-a)化合物熒光探針對(duì)不同核酸的熒光滴定實(shí)驗(yàn)

將5mm的化合物儲(chǔ)備液稀釋成5μm的濃度，放置于熒光分光光度計(jì)中，逐漸增加溶液中不同核酸的濃度，并進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定。測(cè)定條件為：狹縫寬度10nm，掃描速度400nm/min，激發(fā)波長(zhǎng)455nm；結(jié)果見(jiàn)圖2，圖2為式(i-a)化合物探針滴定st-dna、ds26、rna的熒光數(shù)據(jù)的擬合曲線；從圖中可以看出，隨著核酸濃度的增加，熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，且該熒光探針與rna相結(jié)合熒光強(qiáng)度較強(qiáng)，說(shuō)明其對(duì)rna有明顯的選擇性。

熒光滴定實(shí)驗(yàn)中所使用的核酸

實(shí)施例9：式(i-a)化合物熒光探針對(duì)rna檢測(cè)限的測(cè)定

將5mm的化合物儲(chǔ)備液稀釋成5μm的濃度，再在熒光分光光度計(jì)(狹縫寬度10nm，掃描速度200nm/min，激發(fā)波長(zhǎng)455nm)掃描，再往其中慢慢加入rna做到使其飽和，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3，圖3為式(i-a)化合物探針滴定rna的熒光光譜，其中，圖中，從下到上依次為加入rna量增加的曲線，從圖3可以看出，隨著rna的增多，熒光強(qiáng)度不斷增加，說(shuō)明化合物能與rna相結(jié)合，且產(chǎn)生較強(qiáng)熒光。

檢測(cè)限的計(jì)算公式

lod＝k×sb/m

lod(化合物的結(jié)合常數(shù))，m是濃度c與(f-f0)/f0的所做直線的斜率，sb為用儀器空白多次測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)偏差，k值按照國(guó)際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)建議通常取為3，其中，c與(f-f0)/f0擬合的曲線見(jiàn)圖4，圖4為式(i-a)化合物探針滴定rna的熒光光譜中c與(f-f0)/f0擬合的曲線；通過(guò)計(jì)算可知，式(i-a)化合物熒光探針對(duì)rna檢測(cè)限lod為8μg/l。

實(shí)施例10：式(i-a)化合物熒光探針的細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)

先將細(xì)胞接種于6孔板中，使細(xì)胞的密度約為5000個(gè)/ml，然后在37℃、5％co2環(huán)境中培養(yǎng)70h。接著棄去上步6孔板中的細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的1×pbs洗3次，然后再加入預(yù)冷的純甲醇1.5ml常溫避光放置2min，最后棄去純甲醇并再用預(yù)冷的1×pbs洗3次，加入1ml的5μm的化合物然后放置20min。棄去上步6孔板中的化合物溶液，用預(yù)冷的1×pbs洗3次，在上述6孔板中加入1μm的dapi溶液1ml并37℃放置2min，然后再用預(yù)冷的1×pbs洗6次，每次浸泡5min。在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞染色情況。

結(jié)果見(jiàn)圖5，圖5為式(i-a)化合物探針與染料dapi復(fù)染pc3細(xì)胞的細(xì)胞成像圖；從圖中可知，本發(fā)明的熒光探針作用于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的rna，同時(shí)也證明了該系列熒光配體能夠在細(xì)胞體系對(duì)rna進(jìn)行成像和檢測(cè)。

實(shí)施例11：式(i-a)化合物熒光探針的rnase與dnase細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)

先將細(xì)胞接種于6孔板中，使細(xì)胞的密度約為5000個(gè)/ml，然后在37℃、5％co2環(huán)境中培養(yǎng)72h。接著棄去上步6孔板中的細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的1×pbs洗3次，然后再加入預(yù)冷的純甲醇1.5ml常溫避光放置2min，最后棄去純甲醇并再用預(yù)冷的1×pbs洗3次，加入1ml的5um的化合物然后放置20min。棄去上步6孔板中的化合物溶液，用預(yù)冷的1×pbs洗3次，在六孔板中分別加入1mldnase，dnase-freernase的溶液并37℃，5％co2培養(yǎng)3h.棄去6孔板中的酶溶液，再用預(yù)冷的1×pbs洗3次，每次浸泡5min。在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞染色情況，結(jié)果見(jiàn)圖6，圖6為式(i-a)化合物探針與rnase和dnase的細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)，其中，圖中，a為未加酶的熒光圖，b為加dna酶后的熒光成像，c為加rna酶后的熒光成像，加入dna酶后，熒光強(qiáng)度無(wú)明顯變化，加入rna酶后，rna水解，熒光幾乎全部消失，說(shuō)明該熒光探針選擇性的結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的rna，并產(chǎn)生熒光。

實(shí)施例12：核酸凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

先配制1000ml的1×tae電泳緩沖液，分別稱取0.2g的biowestagarose(西班牙瓊脂糖)和20ml電泳緩沖液于錐形瓶中，微波爐加熱煮沸，將煮好的凝膠放入65℃的水浴鍋中，待凝膠冷卻至65℃時(shí)，加入5mm的化合物2ul搖勻，灌制凝膠，待凝膠冷卻之后取出梳子和隔板，放入電泳槽中，緩沖液淹沒(méi)過(guò)膠1-2mm為止，dna樣品配成5m(混合液中上樣緩沖液為1×)，rna配成5mg/l，分別取10ul加入凝膠點(diǎn)樣孔中，將整個(gè)電泳儀接通，100v電壓跑15min，取出凝膠塊，將其置于凝膠電泳儀上觀察。

結(jié)果見(jiàn)圖7，圖7為式(i-a)化合物探針與dna和rna凝膠電泳圖；從圖中可以看出，式(i-a)化合物與rna結(jié)合可產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光現(xiàn)象，而對(duì)雙鏈ds26，熒光較弱，說(shuō)明其具有較好的選擇性。

以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。