本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一組吡唑酰胺類衍生物及其在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病，預(yù)計(jì)2020年，全世界癌癥發(fā)病率將增加50％，每年將增加1500萬(wàn)新病例。全國(guó)腫瘤登記中心發(fā)布的《2012年中國(guó)腫瘤登記年報(bào)》表明，中國(guó)近20年來(lái)，每年新發(fā)腫瘤病例約312萬(wàn)例，平均每天8550人。目前中國(guó)的腫瘤發(fā)病率以每年3％-5％的速度增長(zhǎng)。

從病種看，全國(guó)惡性腫瘤發(fā)病第一位的是肺癌，其次為胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌和食管癌等消化道腫瘤。消化道腫瘤是惡性腫瘤中常見的一組腫瘤。在河南省，具有明顯地域特征的上消化道腫瘤(主要包括食管癌和胃癌)的發(fā)病率和死亡率目前仍居各類惡性腫瘤的首位，盡管臨床上通過(guò)早期診斷和手術(shù)治療已經(jīng)取得了明顯的療效，但是晚期疾病的防治及如何更好地延長(zhǎng)病人的存活率目前仍為困擾臨床醫(yī)生的一大難題。

cdk11是一種具有高度同源性且含有pitslre基因序列的cdks，目前已發(fā)現(xiàn)有20余種亞型。cdk11作為cdks的一個(gè)重要成員，其在食管癌、胃癌、宮頸癌、多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)腸癌等惡性腫瘤中高表達(dá)且發(fā)揮重要的作用。抑制cdk11的活性可對(duì)上述腫瘤的發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生抑制作用，因此，cdk11可能是抗腫瘤的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一組吡唑酰胺類衍生物及其在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一組吡唑酰胺類衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體物，其結(jié)構(gòu)如通式(i)所示：

r1選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環(huán)烷基、6-10元芳基、c1-c4烷基取代的6-10元芳基、5-10元雜芳基、c1-c4烷基取代的5-10元雜芳基、5-10元飽和或部分飽和的雜環(huán)基、或c1-c4烷基取代的5-10元飽和或部分飽和的雜環(huán)基；所述雜芳基、雜環(huán)基中含有1-3個(gè)選自n、o和s的雜原子；當(dāng)r1為芳基、雜芳基或雜環(huán)基時(shí)，任選1-3個(gè)r11取代；

r11為1-3個(gè)相同或不同的氫、鹵素、羥基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基、-c1-c4鏈烷基、-c1-c4烷硫基、或-c1-c4烷氧基甲基；

r2選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環(huán)烷基，或與r1形成3-6元飽和或部分飽和的雜環(huán)，所述3-6元飽和或部分飽和的雜環(huán)任選1-3個(gè)r21取代；

r21為1-3個(gè)相同或不同的氫、鹵素、羥基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、或巰基；

r3選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、或-c3-c6的環(huán)烷基；

r4選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環(huán)烷基、或-cor41，r41為-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、或-c3-c6的環(huán)烷基。

具體的，本發(fā)明優(yōu)選提供定義如下的通式(i)所述的吡唑酰胺類衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體物，r1選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環(huán)烷基、或

r11為1-3個(gè)相同或不同的氫、羥基、巰基、氨基、鹵素、三氟甲基、或三氟甲氧基；

r2選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基，或與r1形成3-6元飽和或部分飽和雜環(huán)，所述3-6元飽和或部分飽和雜環(huán)任選1-3個(gè)r21取代；

r21為1-3個(gè)相同或不同的氫、鹵素、羥基、氨基。

進(jìn)一步的，本發(fā)明優(yōu)選提供定義如下的通式(i)所述的吡唑酰胺類衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體物，r1選自：-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環(huán)烷基、或

r11為1-3個(gè)相同或不同的選自氨基、鹵素、三氟甲基或三氟甲氧基的取代基；

r2選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基，或與r1形成3-6元飽和雜環(huán)，所述3-6元飽和雜環(huán)任選1-3個(gè)r21取代；

r21為1-3個(gè)相同或不同的選自鹵素、羥基、氨基的取代基。

本發(fā)明上述的吡唑酰胺類衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體物，可以優(yōu)選為下述化合物中的一種或兩種以上，但下述化合物并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制；其中下述化合物分別與本申請(qǐng)說(shuō)明書表一中的化合物1至52相對(duì)應(yīng)，具體列舉如下：

n-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,n-二甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)戊基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)己基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丁基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-n-(3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1h-吡唑-4-基)苯甲酰胺、

n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,1-二甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,n,1-三甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丙基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)丙基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)戊基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)己基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丁基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(1-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲酰胺、

1-甲基-n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,1-二甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,n,1-三甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丙基-1-甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)丙基-1-甲基-4-(3-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)戊基-1-甲基-4-(3-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)己基-1-甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丁基-1-甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(1-甲基-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲酰胺、

1-甲基-n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,1-二甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n,n,1-三甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丙基-1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)丙基-1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)戊基-1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-環(huán)己基-1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-異丁基-1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

n-(1-甲基-3-(4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲酰胺、

1-甲基-n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺、

1-甲基-n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺。

按照本發(fā)明所屬領(lǐng)域的常規(guī)方法，本發(fā)明通式(i)所示的吡唑酰胺類衍生物可以與酸生成藥學(xué)上可接受的鹽?？伤幱眉映甥}包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸加成鹽，與下列酸加成的鹽特別優(yōu)選的是：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來(lái)酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。

此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明衍生物的前體物(前藥)。本發(fā)明衍生物的前藥是通式(i)的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒(méi)有活性，但是給藥后，在生理?xiàng)l件下(例如通過(guò)代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的生物活性形式。

本發(fā)明中“鹵素”是指氟、氯、溴或碘代；“環(huán)烷基”是指取代或未取代的環(huán)烷基；“芳基”是指無(wú)取代基或連有取代基的單環(huán)或多環(huán)的環(huán)狀芳香體系；“雜芳基”是指含有一個(gè)或多個(gè)選自n、o、s雜原子的單環(huán)或多環(huán)的環(huán)狀體系。

本發(fā)明還提供了上述的吡唑酰胺類衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其還可以用作cdk11蛋白激酶抑制劑。本發(fā)明提供了上述吡唑類衍生物的藥理活性實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)了其對(duì)cdk11酶的抑制活性，試驗(yàn)結(jié)果表明，部分化合物對(duì)cdk11激酶有較好的抑制活性，具有重要的進(jìn)一步研究?jī)r(jià)值。

進(jìn)一步的，本發(fā)明提供了以上述的吡唑酰胺類衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或前體物為有效成份，與藥學(xué)上可接受的一種或多種載體組成的藥物組合物。

本發(fā)明還提供了上述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，該藥物組合物還可以用作cdk11蛋白激酶抑制劑。

目前，臨床上還沒(méi)有上市的cdk11抑制劑，本發(fā)明在參考與cdk11蛋白晶體結(jié)構(gòu)相接近的cdk4/6蛋白酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)并合成了一系列新的吡唑酰胺類衍生物，經(jīng)初步藥理活性測(cè)試發(fā)現(xiàn)，該類化合物對(duì)cdk11酶具有良好的抑制作用。迄今為止，尚未見有關(guān)本發(fā)明衍生物在抑制cdk11酶活性、以及制備抗腫瘤(如食管癌、胃癌、宮頸癌、多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)腸癌等惡性腫瘤)藥物中應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

本發(fā)明通式(i)所示衍生物可參照下述合成路線進(jìn)行制備。制備過(guò)程中所用原料可通過(guò)下述合成路線中描述的方式、或采用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法制備、或直接商購(gòu)獲得。

本發(fā)明通式(i)所示衍生物，可按照上述路線合成。該路線采用匯聚式合成方式，先分別合成片段a和片段b，再經(jīng)縮合、水解、縮合等常規(guī)反應(yīng)后得到目標(biāo)化合物。

以下實(shí)施例在合成方法上具有代表性，本發(fā)明通式(i)所示衍生物(尤其是表一中的化合物1至52)均可參照合成路線以及實(shí)施例的制備方法合成得到。

實(shí)施例1化合物1的制備：n-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

步驟a：4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

將4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸(3.0g，19.10mmol)加入含有15ml甲醇的50ml茄型瓶中，冰浴下緩慢滴加socl2(1.8ml，24.83mmol)，加畢后轉(zhuǎn)移至室溫反應(yīng)過(guò)夜，次日tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢。將反應(yīng)液減壓濃縮除去未反應(yīng)完全的甲醇和socl2，粗品用30ml石油醚勻漿、抽濾得目標(biāo)產(chǎn)物粗品(2.93g，89.6％)，粗品不經(jīng)純化直接投下一步反應(yīng)。

¹hnmr(400mhz,dmso)δ14.45(s,1h),8.96(s,1h),3.90(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z172.13。

步驟b：4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

將4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(1.0g，5.40mmol)加入含有20ml甲醇的氫化反應(yīng)瓶中，加入pd/c催化劑(10％，0.1g)，40psi氫氣壓力下反應(yīng)0.5h，tlc檢測(cè)顯示反應(yīng)完畢，抽濾，濾除pd/c，減壓濃縮得到目標(biāo)物粗品(0.79g，96.3％)，粗品不經(jīng)純化直接投下一步反應(yīng)。

¹hnmr(400mhz,dmso)δ12.85(s,1h),7.11(s,1h),4.88(s,2h),3.79(s,3h)；lc-ms(esi,m+na⁺)m/z164.21。

步驟c：3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯的制備

將3-醛基苯甲酸甲酯(2.0g，12.18mmol)、n-甲基哌嗪(1.22g，12.18mmol)加入50ml茄型瓶中，加入ch2cl215ml，冰浴下分批加入nabh(oac)3(5.16g，24.36mmol)，加畢后將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移至室溫，過(guò)夜反應(yīng)，次日tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢，反應(yīng)液加入20ml飽和碳酸氫鈉，ch2cl2萃取(3×30ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓濃縮得目標(biāo)產(chǎn)物粗品(2.53g，83.5％)。

¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.89(s,1h),7.86–7.84(m,1h),7.57(d,j＝7.6hz,1h),7.48(t,j＝7.6hz,1h),3.86(s,3h),3.51(s,2h),2.50–2.16(m,8h),2.15(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z249.31。

步驟d：4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

將3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯(3.5g，14.09mmol)加入50ml茄型瓶中，加入meoh10ml，h2o20ml，冰浴下加入naoh(1.41g，35.24mmol)，加畢將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移至室溫，反應(yīng)2.5h，tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢，將反應(yīng)體系用6n鹽酸調(diào)ph至3-4，減壓濃縮除去溶劑，得3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸和nacl的混合物，加入dmf20ml，4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(1.99g，14.09mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽edchcl(3.22g，16.91mmol)，1-羥基苯并三唑hobt(2.28g，16.91mmol)，加畢室溫反應(yīng)10h，tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢，將dmf蒸干后，加飽和碳酸氫鈉，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，ch2cl2:meoh＝15:1柱層析，得目標(biāo)產(chǎn)物(3.01g，59.7％)。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.66(s,1h),9.86(s,1h),8.31(s,1h),7.86(s,1h),7.80–7.78(m,1h),7.55–7.50(m,2h),3.55(s,2h),2.45–2.28(m,8h),2.20–2.17(m,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z358.41。

步驟e：化合物1的制備

將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(0.4g，1.12mmol)加入10ml茄型瓶中，加入meoh1ml，h2o3ml，naoh(0.13g，3.36mmol)，反應(yīng)液室溫反應(yīng)2.5h后tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢，減壓濃縮除去溶劑，乙醚(3×2ml)萃取，水相用6nhcl調(diào)ph＝3-4，水相用乙酸乙酯(3×5ml)萃取，有機(jī)相合并，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸粗品，粗品不經(jīng)純化，直接加入dmf8ml，甲胺醇溶液(2.0m于甲醇中)(1.68ml，3.36mmol)，edchcl(0.32g，1.68mmol)，hobt(0.23g，1.68mmol)，加畢室溫反應(yīng)過(guò)夜，次日tlc檢測(cè)顯示反應(yīng)完全，減壓濃縮除去dmf，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，ch2cl2:meoh＝15:1柱層析得化合物1(0.15g，26.0％)。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.53(s,1h),7.83–7.80(m,1h),7.70–7.69(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.51(s,1h),7.26(t,j＝7.5hz,1h),6.75(s,1h),3.52(s,1h),3.14(s,3h),2.50–2.47(m,4h),2.35–2.33(m,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z357.32。

實(shí)施例2化合物2的制備：n,n-二甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

制備方法參照實(shí)施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為二甲胺醇溶液。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(s,1h),7.81–7.79(m,1h),7.72–7.70(m,1h),7.57–7.54(m,1h),7.26(t,j＝7.4hz,1h),6.86(s,1h),3.53(s,1h),3.21(s,6h),2.53(t,j＝5.2hz,4h),2.32(t,j＝5.2hz,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z393.35。

實(shí)施例3化合物3的制備：n-異丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

制備方法參照實(shí)施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為異丙胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.34(s,1h),10.82(s,1h),8.32(s,1h),8.28(d,j＝8.4hz,1h),7.86–7.85(m,1h),7.77–7.74(m,1h),7.54–7.52(m,2h),4.24–4.14(m,1h),3.57(s,2h),2.51–2.20(m,8h),2.20(s,3h),1.20(d,j＝6.6hz,6h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z385.30。實(shí)施例4化合物4的制備：n-環(huán)丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

制備方法參照實(shí)施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為環(huán)丙胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.33(s,1h),10.77(s,1h),8.58(d,j＝4.5hz,1h),8.31(s,1h),7.84(s,1h),7.77–7.75(m,1h),7.55–7.52(m,2h),3.57(s,2h),2.92–2.85(m,1h),2.49–2.28(m,8h),2.21(s,3h),0.70–0.66(m,4h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z383.19。

實(shí)施例5化合物9的制備：n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

制備方法參照實(shí)施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為4-甲基-3-三氟甲基苯胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.58(s,1h),10.65(s,1h),10.45(s,1h),8.42(s,1h),8.28(d,j＝2.2hz,1h),8.06(dd,j＝8.3,2.2hz,1h),7.88–7.87(m,1h),7.80–7.77(m,1h),7.55–7.53(m,2h),7.42(d,j＝8.3hz,1h),3.57(s,2h),2.52–2.15(m,11h),2.15(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z501.19。

實(shí)施例6化合物18的制備：n-環(huán)戊基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

步驟a：中間體1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

將4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(22.10g，129.16mmol)加入500ml茄型瓶中，加入200ml四氫呋喃，冰浴下分批加入60％nah(6.72g，167.90mmol)，加畢后冰浴攪拌30min，冰浴下滴加mei(12.1ml，193.73mmol)，加畢后室溫反應(yīng)6.0h，tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液緩慢到入冰水中，抽濾得目標(biāo)產(chǎn)品(20.1g，84.1％)。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(s,1h),3.95(s,3h),3.94(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z186.16。

步驟b：中間體1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

將1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(5.0g，27.01mmol)加入含有50ml甲醇的氫化反應(yīng)瓶中，加入pd/c(10％，0.5g)，40psi氫氣壓力下反應(yīng)1.0h，tlc檢測(cè)顯示反應(yīng)完畢，抽濾，濾除pd/c，減壓濃縮得到目標(biāo)物粗品(3.72g，88.7％)，粗品不經(jīng)純化直接投下一步反應(yīng)。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ6.42(s,1h),3.92(s,3h),3.83(s,3h),3.50(s,2h)；lc-ms(esi,m+na⁺)m/z178.19。

步驟c：中間體1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

制備方法參照實(shí)施例1，其中，步驟d中將4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯替換為1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(s,1h),7.82–7.80(m,1h),7.69–7.68(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.54(s,1h),7.32(t,j＝7.5hz,1h),3.93(s,3h),3.80(s,3h),3.52(s,1h),2.45(t,j＝5.2hz,4h),2.31(t,j＝5.2hz,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z372.31。

步驟d：化合物18的制備

制備方法參照實(shí)施例1，其中，步驟e中將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、甲胺醇溶液替換為1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、環(huán)戊胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),7.83–7.80(m,1h),7.70–7.68(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.30–7.27(m,2h),6.40(s,1h),4.08–4.02(m,1h),3.87(s,3h),3.54(s,1h),2.49–2.47(m,4h),2.35–2.33(m,4h),2.24–2.13(m,5h),1.76–1.56(m,5h)；lc-ms(esi,m+na+)m/z447.30。

實(shí)施例7化合物23的制備：1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

制備方法參照實(shí)施例6，其中，步驟d中，將環(huán)戊胺替換為2,3-二氯苯胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.23(s,1h),8.58(s,1h),7.76–7.74(m,2h),7.57(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),7.55–7.46(m,1h),7.37(t,j＝7.5hz,1h),7.29–7.22(m,2h),7.05(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),3.91(s,3h),3.52(s,1h),2.49(t,j＝5.2hz,4h),2.38(t,j＝5.2hz,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z501.21。

實(shí)施例8化合物30的制備：n-環(huán)丙基-1-甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

步驟a：中間體3-((4-乙?；哙?1-基)苯甲酸甲酯的制備

參照實(shí)施例1中步驟c的合成方法，其中，將n-甲基哌嗪替換為n-乙?；哙骸?/p>

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.90–7.88(m,1h),7.83–7.81(m,1h),7.55–7.51(m,1h),7.21(t,j＝7.5hz,1h),3.92(s,3h),3.60(t,j＝5.2hz,4h),3.50(s,1h),2.67(t,j＝5.2hz,4h),1.99(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z277.19。

步驟b：中間體1-甲基-4-(3-((4-乙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

參照實(shí)施例1中步驟d的制備方法，將4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯替換為1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(s,1h),7.84–7.82(m,1h),7.72–7.69(m,1h),7.59–7.55(m,1h),7.54(s,1h),7.30(t,j＝7.5hz,1h),3.91(s,3h),3.86(s,3h),3.61–3.59(m,4h),3.54(s,1h),2.67–2.65(m,4h),2.01(s,3h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z400.32。

步驟c：化合物30的制備

參照實(shí)施例1中步驟e的制備方法，將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、甲胺醇溶液替換為1-甲基-4-(3-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、環(huán)丙胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,1h),7.85–7.83(m,1h),7.71–7.70(m,1h),7.59–7.56(m,1h),7.38(t,j＝7.4hz,1h),7.29(s,1h),6.25(s,1h),3.42(s,3h),3.61(t,j＝5.2hz,4h),3.50(s,1h),2.68(t,j＝5.2hz,4h),2.53–2.46(m,1h),1.99(s,3h),0.81–0.73(m,2h),0.79–0.65(m,2h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z425.19。

實(shí)施例9化合物34的制備：n-(1-甲基-3-(4-乙?；哙?1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲酰胺、

參照實(shí)施例8中的制備方法，其中，步驟c中將環(huán)丙胺替換為4-甲基哌啶。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),7.85–7.83(m,1h),7.72–7.70(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.38–7.33(m,1h),7.27(s,1h),4.21–4.15(m,2h),3.92(s,3h),3.65–3.62(m,4h),3.55(s,1h),3.01–2.95(m,2h),2.67(t,j＝5.2hz,4h),2.01(s,3h),1.83–1.74(m,2h),1.58–1.45(m,3h),1.01(d,j＝6.5hz,3h)；lc-ms(esi,m+na⁺)m/z489.25。

實(shí)施例10化合物45的制備：n-環(huán)己基-1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

步驟a：中間體(3-((4-環(huán)丙?；哙?1-基)甲基)苯甲酸甲酯的制備

參照實(shí)施例1中步驟c的合成方法，其中，將n-甲基哌嗪替換為n-環(huán)丙?；哙?。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.91–7.88(m,1h),7.81–7.78(m,1h),7.55–7.53(m,1h),7.32(t,j＝7.5hz,1h),3.98(s,3h),3.61(t,j＝5.2hz,4h),3.50(s,1h),2.63(t,j＝5.2hz,4h),1.85–1.80(m,1h),1.10–1.04(m,2h),0.96–0.90(m,2h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z303.20。

步驟b：中間體1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制備

參照實(shí)施例1中步驟d的制備方法，其中，將(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯、4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯替換為(3-((4-環(huán)丙?；哙?1-基)甲基)苯甲酸甲酯、1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),7.85–7.82(m,1h),7.71–7.69(m,1h),7.61–7.55(m,1h),7.54(s,1h),7.38(t,j＝7.4hz,1h),3.95(s,3h),3.82(s,3h),3.60(t,j＝5.2hz,4h),3.54(s,1h),2.63(t,j＝5.2hz,4h),1.84–1.78(m,1h),1.11–1.07(m,2h),0.93–0.89(m,2h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z426.18。

步驟c：化合物45的制備

參照實(shí)施例1中步驟e的制備方法，將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、甲醇胺溶液替換為1-甲基-4-(3-((4-環(huán)丙?；哙?1-基)甲基)苯甲酰胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、環(huán)己胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(s,1h),7.86(d,j＝7.5hz,1h),7.70(s,1h),7.62(d,j＝7.5hz,1h),7.32–7.27(m,2h),6.43(s,1h),3.92–3.89(m,4h),3.60(s,4h),3.56–3.52(m,2h),2.68(s,4h),2.30–2.24(m,2h),1.85–1.74(m,6h),1.67–1.58(m,1h),1.49–1.42(m,2h),1.09–1.07(m,2h),0.92–0.90(m,2h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z493.25。

實(shí)施例11化合物51的制備：1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-環(huán)丙烷甲酰基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰胺基)-1h-吡唑-3-酰胺

參照實(shí)施例10中的制備方法，其中，步驟c中，將環(huán)己胺替換為2,3-二氯苯胺。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.23(s,1h),8.61(s,1h),7.86–7.82(m,2h),7.73–7.69(m,2h),7.59–7.56(m,1h),7.49–7.47(m,1h),7.35–7.29(m,2h),3.95(s,3h),3.62(t,j＝5.2hz,4h),3.55(s,1h),2.63(t,j＝5.2hz,4h),1.83–1.78(m,1h),1.11–1.06(m,2h),0.93–0.89(m,2h)；lc-ms(esi,m+h⁺)m/z555.23。

除以上實(shí)施例所列化合物外，參照合成路線以及與上述實(shí)施例類似的方法，還制備得到其它一系列相關(guān)化合物(見表一)，本發(fā)明對(duì)該系列衍生物進(jìn)行了藥理活性實(shí)驗(yàn)研究。

應(yīng)用試驗(yàn)：本發(fā)明通式i所示衍生物的藥理活性測(cè)試

本發(fā)明所述化合物采用thermofisher公司的lanthascreen技術(shù)測(cè)定。該檢測(cè)體系包含有帶有g(shù)st標(biāo)簽的cdk11蛋白激酶、eu標(biāo)記的anti-gst的抗體、及熒光標(biāo)記的atp類似物tracer，其中熒光標(biāo)記的atp類似物tracer能夠和蛋白激酶的atp結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合，eu標(biāo)記的anti-gst的抗體能和帶有g(shù)st標(biāo)簽的cdk11蛋白激酶結(jié)合。如果檢測(cè)體系中沒(méi)有任何激酶抑制劑，則能夠產(chǎn)生fret(fluorescenceresonanceenergytransfer)信號(hào)；如果檢測(cè)體系中包含有蛋白激酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，則抑制劑會(huì)取代熒光標(biāo)記的atp類似物tracer，從而使fret信號(hào)降低；依據(jù)此，就可以判斷出測(cè)試化合物是否是某一個(gè)激酶的抑制劑，并測(cè)定出化合物的抑制活性。具體試驗(yàn)步驟為：取4μl空白對(duì)照液、及4μl0.1μm的待測(cè)化合物分別于384孔板中，每組設(shè)置三個(gè)復(fù)孔，每孔中加入8μl的酶/抗體溶液，然后每孔加入4μltracer，室溫孵育60min后，多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)665nm和615nm的熒光值，根據(jù)酶標(biāo)儀信號(hào)強(qiáng)度計(jì)算化合物對(duì)激酶的抑制活性。

表一中的初步藥理活性結(jié)果顯示：0.1μm濃度下化合物具有良好cdk11蛋白激酶抑制活性，其中化合物3，6，8，9，13，14，15，16，23，25，30，31，32，50的抑制活性均在90％以上。鑒于尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)cdk11酶抑制劑的研究報(bào)道，因此通式i的化合物具有良好的研發(fā)前景。

表一：化合物1-52對(duì)cdk11蛋白激酶抑制活性測(cè)試結(jié)果