本發(fā)明是申請?zhí)枮?01480038496.x的母案的分案申請，該母案的申請日為2014年7月9日，發(fā)明名稱為“噻唑內(nèi)鹽類化合物、其制備方法及用途”。本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，涉及噻唑內(nèi)鹽類化合物的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：晚期糖基化終產(chǎn)物(advancedglycationendproducts，ages)是隨著人體衰老、糖尿病發(fā)展，體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂蛋白或者核酸等大分子在生理環(huán)境中，經(jīng)非酶催化、自發(fā)的與葡萄糖或其它還原性單糖反應(yīng)生成的穩(wěn)定的共價加成產(chǎn)物。ages交聯(lián)結(jié)構(gòu)的形成是一緩慢過程，首先大分子末端還原性氨基和葡萄糖分子中的醛基進行加成形成可逆的早期糖基化產(chǎn)物(schiffbases，希夫堿)；經(jīng)過數(shù)天時間，不穩(wěn)定的希夫堿逐漸發(fā)生重排反應(yīng)形成更加穩(wěn)定的amadori型早期糖基化產(chǎn)物。aamadori產(chǎn)物再經(jīng)過一系列機理還不充分為人所知的脫氫、氧化和重排反應(yīng)形成ages。由于ages具有交聯(lián)性，它可以與蛋白質(zhì)、脂肪和核酸等大分子物質(zhì)以糖基化作用形成的二羰基鍵為橋梁連接成具有更大分子量的物質(zhì)——ages交聯(lián)結(jié)構(gòu)。ages通過形成交聯(lián)結(jié)構(gòu)使體內(nèi)膠原蛋白老化，加速動脈硬化，改變基質(zhì)成分，引起血小板聚集，造成血管彈性減小、血管順應(yīng)性降低并產(chǎn)生異常脂蛋白代謝從而影響心血管系統(tǒng)的功能。因此，ages與糖尿病和機體老化的許多并發(fā)癥密切相關(guān)，如腎功能減退、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、中風(fēng)、阿爾茨海默癥、皮膚老化、視網(wǎng)膜病變、白內(nèi)障、心血管疾病和動脈硬化等。目前，已經(jīng)有一些抑制ages累積的治療方法。中國發(fā)明專利cn101684106b中披露了一類噻唑鎓鹽化合物，如下面的式a所示的3-羧甲基-4-甲基-溴化噻唑鎓鹽：其中：m是na或kx是br、cl或i；式a類化合物在體內(nèi)能夠顯著減少長期糖尿病大鼠主動脈、左心室心肌、腎臟ages熒光含量，同時提高心肌膠原、尾膠原溶解性，且能夠提高糖尿病大鼠主動脈順應(yīng)性，降低總外周阻力，增加心輸出量，顯著改善左心室功能。因此該化合物可以裂解已經(jīng)形成的ages交聯(lián)，重構(gòu)血管結(jié)構(gòu)，逆轉(zhuǎn)糖尿病誘發(fā)的心血管系統(tǒng)硬化及功能紊亂，是一類新型的ages裂解劑。但是，在后續(xù)的研究中發(fā)現(xiàn)，式a類化合物的理化性質(zhì)不穩(wěn)定，在規(guī)模化生產(chǎn)中產(chǎn)品質(zhì)量不好控制，樣品在室溫中保存不穩(wěn)定，易吸潮變色，不適合作為一種藥物的存在形式進一步發(fā)展。例如：①經(jīng)多次試驗，各批次式a類化合物的元素分析結(jié)果差異很大，且都與理論值相差較遠(超過了千分之三的誤差限)。②質(zhì)量不穩(wěn)定，放置(溫度40℃，濕度75％，常壓)3個月后易吸潮，結(jié)塊，變色，見附圖1a和圖1b。不拘于理論的限制，本發(fā)明人在仔細分析x-射線衍射和元素分析的結(jié)果后發(fā)現(xiàn)，這個同時具有季銨鹽結(jié)構(gòu)和羧酸鹽結(jié)構(gòu)的化合物很難獨立穩(wěn)定的以分子形式存在，可能因為分子中的na和br極易以nabr形式結(jié)合，從而導(dǎo)致了式a類化合物具有明顯的成藥性缺陷。式a類化合物在體外和體內(nèi)呈現(xiàn)很好的藥理活性和良好的藥代動力學(xué)性質(zhì)，但是其以溴鎓鹽的形式存在理化性質(zhì)不穩(wěn)定，不適合作為藥用。因此，亟需開發(fā)新的穩(wěn)定有效的噻唑內(nèi)鹽類化合物。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究和創(chuàng)造性的勞動，得到了式ⅰ所示的噻唑內(nèi)鹽類化合物。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，式ⅰ化合物結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，理化性質(zhì)優(yōu)良，具有很好的藥理作用；大規(guī)模化生產(chǎn)可以得到質(zhì)量穩(wěn)定、可控可靠的樣品，適合作為藥物發(fā)展。由此提供了下述發(fā)明：本發(fā)明的一個方面涉及式ⅰ所示的化合物或其可藥用鹽，其中：n為0、1、2或3。根據(jù)本發(fā)明任一項所述的式i化合物或其可藥用鹽，其中，所述式i化合物選自：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)，和3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)。3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽可以是直接合成產(chǎn)物。3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物可以是3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽的單晶培養(yǎng)產(chǎn)物。所述的式i化合物的單晶(n＝1、2或3)的制備方法，包括下述步驟：將3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)加入甲醇溶解，然后滴加乙酸乙酯，靜置，得到單晶；具體地，每毫克3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽使用0.05ml甲醇，0.3ml乙酸乙酯。在本發(fā)明的一個實施方案中，單晶的制備方法可以為：取3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽白色結(jié)晶2mg，加0.1ml甲醇，待顆粒溶解后滴加0.6ml乙酸乙酯，靜置，待晶粒緩慢生長為單晶。在本發(fā)明的一個實施方案中，其為化合物3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)的一種晶型，其x射線粉末衍射譜圖在12.6，13.3，14.9，18.5，19.1，27.0，27.7，28.8，29.8，32.1，40.8，42,8，45.2，47.9，52.6，54.8，55.6，59.0(2θ/℃)處顯示出特征衍射峰(詳見附圖4)。在本發(fā)明的一個實施方案中，其為化合物3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)的一種晶型，其x射線粉末衍射譜圖在11.8，15.2，16.7，18.9，19.3，19.8，21.0，23.8，24.5，25.2，26.4，26.9，28.6，29.3，31.3，31.9，32.1，34.1，34.7，35.0，35.6，38.9，40.1，40.6，43.1，45.9，46.7，48.1，49.0(2θ/℃)處顯示出特征衍射峰(詳見附圖5)。本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明任一項所述的式i化合物的制備方法，包括下述步驟：將化合物a與1,2-環(huán)氧丙烷反應(yīng)得到化合物b，其中化合物a結(jié)構(gòu)式中的x為氯、溴或碘。根據(jù)本發(fā)明任一項所述的制備方法，其中化合物a通過下述步驟制得：將4-甲基噻唑與氯乙酸、溴乙酸或碘乙酸反應(yīng)，得化合物a，化合物b即為3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)。根據(jù)本發(fā)明任一項所述的制備方法，其中化合物a和/或化合物b通過重結(jié)晶進行分離純合；具體地，重結(jié)晶所用溶劑獨立地選自丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚和正己烷中的任意一種溶劑或者多種溶劑的混合物。在本發(fā)明的一個實施方案中，制備方法為：15.6g4-甲基噻唑溶于50ml無水丙酮中，加入21g溴乙酸，攪拌3小時，過濾，得固體，乙醇重結(jié)晶得到白色固體，干燥，共得到26g，產(chǎn)率72％。10g3-羧甲基-4-甲基-噻唑溴化鎓鹽白色固體溶于50ml蒸餾水中，隨后加入7.31g1,2-環(huán)氧丙烷，室溫攪拌12小時，反應(yīng)畢，用30ml二氯甲烷萃取反應(yīng)液，萃取三次，棄去二氯甲烷層；將水層減壓蒸干,得淺黃色油狀物。向油狀物中加入適量丙酮，析出淡黃色顆粒；用乙醇-乙醚體系重結(jié)晶(其中最優(yōu)選重結(jié)晶比例為:1g黃色顆粒加熱溶于4.5ml乙醇，然后加2ml乙醚)，得白色晶體5.15g，產(chǎn)率78％。在本發(fā)明的一個實施方案中，制備方法如下：本發(fā)明人經(jīng)過大量的創(chuàng)造性的合成設(shè)計和實踐探索，得到化合物3和物4(附圖2)，經(jīng)過對這兩個化合物的化學(xué)性質(zhì)和體內(nèi)藥代動力學(xué)性質(zhì)的考察，最終確定兩性離子類化合物4(3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽，c6h7no2s)才是這一結(jié)構(gòu)類型的最穩(wěn)定形式。本發(fā)明的再一方面涉及一種組合物，其包含一種或者多種本發(fā)明任一項所述的式i化合物或其可藥用鹽，以及任選的一種或多種藥學(xué)上或者化妝品中可接受的輔料；可選地，其還包含一種或幾種降血壓藥物；具體地，所述降血壓藥物為硝苯地平?？蛇x地，所述組合物為口腔清潔制劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述組合物為藥物組合物。所述藥物組合物可以根據(jù)不同給藥途徑而制備成各種形式。本發(fā)明的藥物組合物包括有效劑量的本發(fā)明式ⅰ、其水合物或其可藥用鹽以及一種或多種適宜的可藥用載體。這里的藥用載體包括但不限于：離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛脂。本發(fā)明的化合物是一類強效交聯(lián)蛋白裂解劑，具有很好的裂解糖基化老化蛋白的能力，因此可以用于但不局限于(i)增加皮膚彈性或者減少皮膚皺紋，(ii)治療糖尿病，(iii)治療或緩解糖尿病的后遺癥，(iv)治療或緩解腎臟損傷，(v)治療或緩解血管損傷，(vi)治療或緩解高血壓，(vii)治療或緩解視網(wǎng)膜病變，(viii)治療或緩解晶狀體蛋白損傷，(ix)治療或緩解白內(nèi)障，(x)治療或緩解周圍神經(jīng)病，(xi)治療或緩解骨關(guān)節(jié)炎，(xii)與降壓藥聯(lián)用治療糖尿病伴隨的高血壓。本發(fā)明的化合物能夠很好的改善心血管系統(tǒng)的硬化。本發(fā)明的化合物能夠很好增強老年及糖尿病心血管藥物治療敏感性。本發(fā)明的化合物具有治療慢性心衰的作用。發(fā)生在口腔中的非酶促反應(yīng)可以導(dǎo)致牙齒著色。目前所使用的抗蛀蝕劑可以加速這種碳基化反應(yīng)進一步導(dǎo)致了牙齒的著色。最近有一類具有抗蛀蝕功能的陽離子殺菌劑用于常規(guī)口腔清洗。這些陽離子抗菌劑有阿萊西丁，十六烷基吡啶氯酸鹽等等。而這些制劑可以加速糖基化反應(yīng)中關(guān)鍵的一步maillard反應(yīng)，進而加速牙齒的著色(nordbo,j.dent.res.,58:1429(1979))。并且有報道在體外觀察到了洗必泰和潔而滅能夠催化糖基化反應(yīng)(褐化反應(yīng))。由于maillard反應(yīng)，洗必泰加入糖和氨基酸的混合物中加速了色素的形成?；谏鲜鲈?，本發(fā)明所涉及的化合物及其藥物組合物可以用于口腔。特別是用作口腔清洗液和牙膏中的添加劑。在有關(guān)本發(fā)明化合物的上述用途中，可以采用無毒且藥學(xué)上可接受的載體的適當(dāng)形式應(yīng)用于潔口液和牙膏中。本發(fā)明化合物的藥物組合物可以以下面的任意方式施用：口服，噴霧吸入，直腸用藥，鼻腔用藥，頰部用藥，局部用藥，非腸道用藥，如皮下，靜脈，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)，鞘內(nèi)，心室內(nèi)，胸骨內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸入，或借助一種外植儲器用藥。其中優(yōu)選口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥方式。當(dāng)口服用藥時，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的載體一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。如果需要，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。當(dāng)局部用藥時，特別是治療局部外敷容易達到的患面或器官，如眼睛、皮膚或下腸道神經(jīng)性疾病時，可根據(jù)不同的患面或器官將本發(fā)明化合物制成不同的局部用藥制劑形式，具體說明如下:當(dāng)眼部局部施用時，本發(fā)明化合物可配制成一種微粉化懸浮液或溶液的制劑形式，所使用載體為等滲的一定ph的無菌鹽水，其中可加入也可不加防腐劑如氯化芐基烷醇鹽。對于眼用，也可將化合物制成膏劑形式如凡士林膏。當(dāng)皮膚局部施用時，本發(fā)明化合物可制成適當(dāng)?shù)能浉?、洗劑或霜劑制劑形式，其中將活性成分懸浮或溶解于一種或多種載體中。軟膏制劑可使用的載體包括但不限于:礦物油，液體凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蠟和水；洗劑或霜劑可使用的載體包括但不限于：礦物油，脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，吐溫60，十六烷酯蠟，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，芐醇和水。本發(fā)明化合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液或無菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。本發(fā)明的再一方面涉及本發(fā)明任一項所述的式i化合物或其可藥用鹽在制備用于治療和/或緩解和/或預(yù)防和/或輔助治療蛋白質(zhì)老化相關(guān)疾病或癥狀的產(chǎn)品例如藥物中用途；具體地，所述蛋白質(zhì)老化相關(guān)疾病或癥狀選自如下的任意一種或者幾種：i皮膚彈性減小或者皮膚皺紋增加，ii糖尿病，iii糖尿病后遺癥，iv腎臟損傷，v血管損傷，vi高血壓，vii視網(wǎng)膜病變，viii晶狀體蛋白損傷，ix白內(nèi)障，x周圍神經(jīng)病，xi骨關(guān)節(jié)炎，xii糖尿病伴隨的高血壓。本發(fā)明的再一方面涉及本發(fā)明任一項所述的式i化合物或其可藥用鹽在制備用于動物體內(nèi)牙齒著色的逆轉(zhuǎn)劑、用于防止或逆轉(zhuǎn)牙齒著色的口腔用制劑、蛋白保鮮劑或動物蛋白保鮮劑、交聯(lián)蛋白裂解劑、裂解晚期糖基化終產(chǎn)物的藥物、降低血漿中bnp含量和/或mcp-1含量的藥物、改善心血管系統(tǒng)硬化的藥物、增強糖尿病和心血管治療敏感性的藥物、治療和/或預(yù)防和/或輔助治療慢性心衰的藥物中的用途。本發(fā)明的再一方面涉及選自如下(1)－(7)項中任意一項的方法，其特征在于，所述方法包括使用或給予有效量的本發(fā)明任一項所述的式i化合物或其可藥用鹽或者本發(fā)明的組合物的步驟：(1)一種在體內(nèi)或體外裂解晚期糖基化終產(chǎn)物(ages)的方法；(2)一種改善心血管系統(tǒng)硬化的方法；(3)一種增強糖尿病和心血管藥物治療敏感性的方法；(4)一種治療和/或預(yù)防和/或輔助治療慢性心衰的方法；(5)一種防止或者逆轉(zhuǎn)動物體內(nèi)牙齒著色的方法；(6)一種植物蛋白或動物蛋白保鮮的方法；(7)一種治療和/或緩解和/或預(yù)防和/或輔助治療蛋白質(zhì)老化相關(guān)疾病或癥狀的方法；具體地，所述蛋白質(zhì)老化相關(guān)疾病或癥狀選自如下的任意一種或者幾種：i皮膚彈性減小或者皮膚皺紋增加，ii糖尿病，iii糖尿病后遺癥，iv腎臟損傷，v血管損傷，vi高血壓，vii視網(wǎng)膜病變，viii晶狀體蛋白損傷，ix白內(nèi)障，x周圍神經(jīng)病，xi骨關(guān)節(jié)炎，xii糖尿病伴隨的高血壓。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述方法是非治療目的的。需要指出的是，本發(fā)明化合物的使用劑量和使用方法取決于諸多因素,包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營養(yǎng)狀況、化合物的活性強度、服用時間、代謝速率、病癥的嚴(yán)重程度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0.01－100mg/kg體重/天，其中最優(yōu)劑量在20mg/kg－30mg/kg體重/天。本發(fā)明中，術(shù)語“有效量”是指是指可在受試者中實現(xiàn)治療、預(yù)防、減輕和/或緩解本發(fā)明所述疾病或病癥的劑量。術(shù)語“受試者”可以指患者或者其它接受本發(fā)明組合物以治療、預(yù)防、減輕和/或緩解本發(fā)明所述疾病或病癥的動物，特別是哺乳動物，例如人、狗、猴、牛、馬等。術(shù)語“疾病和/或病癥”是指所述受試者的一種身體狀態(tài)，該身體狀態(tài)與本發(fā)明所述疾病和/或病癥有關(guān)。發(fā)明的有益效果本發(fā)明的式ⅰ化合物、其水合物或其可藥用鹽具有跟cn101684106b中披露的優(yōu)選化合物3-羧甲基-4-甲基-溴化噻唑鎓鈉鹽(見式a)相當(dāng)?shù)腶ges裂解活性和更穩(wěn)定的藥物代謝動力學(xué)的性質(zhì)；并且產(chǎn)品質(zhì)量更易控制，更適合用于制藥業(yè)和/或化妝品行業(yè)。附圖說明圖1：式a類化合物(m＝na，k＝br)放置三個月前后外觀對比。圖1a，新制得的式a化合物；圖1b，式a化合物放置(溫度40℃，濕度75％，常壓)3個月后。圖2：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)的x-單晶衍射結(jié)構(gòu)圖。圖3：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)的分子晶胞堆積圖。圖4：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)x-射線粉末衍射圖。圖5：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)x-射線粉末衍射圖。圖6：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的收縮壓動態(tài)曲線(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12)。圖7：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的收縮壓變異系數(shù)(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.*p<0.05,#p<0.01vs.正常組；**p<0.01vs.model)。圖8：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的舒張壓動態(tài)曲線。圖9：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的脈壓差動態(tài)曲線。圖10：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的心率動態(tài)曲線。圖11：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的收縮壓動態(tài)曲線(m平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.##p<0.01vs.model組；**p<0.01vs.硝苯地平組)。圖12：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的收縮壓壓降幅度動態(tài)曲線(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.##p<0.01vs.model組；*p<0.05,**p<0.01vs.硝苯地平組)。圖13：11:00-15:00時間段內(nèi)不同組的收縮壓變異系數(shù)動態(tài)曲線(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.**p<0.01vs.model組)。圖14：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的舒張壓動態(tài)曲線(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.##p<0.01vs.model組；*p<0.05,**p<0.01vs.硝苯地平組.)。圖15：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的脈壓差動態(tài)曲線(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.**p<0.01vs.硝苯地平組)。圖16：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的心率動態(tài)曲線。圖17：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的射血時間動態(tài)曲線(m平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.*p<0.05vs.硝苯地平組)。圖18：10:00-20:00時間段內(nèi)不同組的肌耗氧指數(shù)動態(tài)曲線(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝12.*p<0.05vs.硝苯地平組)。圖19：不同治療組的血漿6-酮-前列腺素含量(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝9-11.*p<0.05vs.正常組；**p<0.01vs.model組；##p<0.05vs.硝苯地平組)。圖20：不同治療組的血漿txb2含量(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝9-11.*p<0.01vs.正常組；**p<0.01vs.model組)。圖21：不同治療組的txb2/6-keto-pgi1a值(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝9-11.*p<0.01vs.正常組；**p<0.01vs.model組；$$p<0.05vs.硝苯地平組)。圖22：不同治療組的血漿mcp-1含量(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝9-11.*p<0.05vs.正常組；##p<0.01vs.model組)。圖23：不同治療組的血漿bnp含量(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,n＝9-11.*p<0.05vs.正常組；△△p<0.05,**p<0.01vs.model組；##p<0.01vs.硝苯地平組)。具體實施方式下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下面的實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品?；衔锶埸c由sry-1型熔點儀測定，溫度未經(jīng)校正。1h-nmr及13c-nmr光譜由brukerarx400型核磁儀測定；質(zhì)譜由api-150exlc/ms高分辨質(zhì)譜儀測定；x-射線單晶衍射由rigakusaturn944ccd衍射儀測定；x-射線粉末衍射由brukerd8advance衍射儀測定。實施例1：3-羧甲基-4-甲基-噻唑溴化鎓鹽(化合物a)的制備15.6g4-甲基噻唑溶于50ml無水丙酮中，加入21g溴乙酸，攪拌3小時，過濾，得固體，乙醇重結(jié)晶得到白色固體，干燥，共得到26g，產(chǎn)率72％，mp＝240.6－241.6℃。ms[m]+＝158.2m/e；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)，2.48(d,3h)；5.55(s,2h)；8.09(d,1h)；10.25(d,1h)；14.05(brs,1h)。實施例2：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)的制備10g3-羧甲基-4-甲基-噻唑溴化鎓鹽白色固體溶于50ml蒸餾水中，隨后加入7.31g1,2-環(huán)氧丙烷，室溫攪拌12小時，反應(yīng)畢，用30ml二氯甲烷萃取反應(yīng)液，萃取三次，棄去二氯甲烷層；將水層減壓蒸干,得淺黃色油狀物。向油狀物中加入適量丙酮，析出淡黃色顆粒；用乙醇-乙醚體系重結(jié)晶(其中最優(yōu)選重結(jié)晶比例為:1g黃色顆粒加熱溶于4.5ml乙醇，然后加2ml乙醚)，得白色晶體5.15g，產(chǎn)率78％，mp＝169℃。ms:158[m+h]+，315[2m+h]+，472[3m+h]+；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)，2.41(d,3h),4.76(s,2h),7.90(d,1h),9.97(d,1h)；13c-nmr(methanol-d4),δ12.98,56.71,121.47,148.36,169.71；元素分析anal.calcdforc6h7no2s(157.2):c,45.85；h,4.49；n,8.91％found:c,45.74；h,4.51；n,8.87％。進行x-單晶衍射測定晶體結(jié)構(gòu)。化合物3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)的一種晶型，其x射線粉末衍射譜圖在12.6，13.3，14.9，18.5，19.1，27.0，27.7，28.8，29.8，32.1，40.8，42,8，45.2，47.9，52.6，54.8，55.6，59.0(2θ/℃)處顯示出特征衍射峰(詳見附圖4)。實施例3：3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)的制備取實施例2制得的3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽(n＝0)2g，于20℃溶于100ml甲醇和1ml水的混合溶劑中，待完全溶解后緩慢加入300ml乙酸乙酯溶液，混合均勻后于5℃靜置12小時，析出的晶體即為3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)。x-單晶衍射測定晶體結(jié)構(gòu)實驗：取3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽白色結(jié)晶2mg，加0.1ml無水甲醇，待顆粒溶解后滴加0.6ml乙酸乙酯，靜置，待晶粒慢慢長大生長為單晶(3-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物，n＝1)。進行x-單晶衍射測定晶體結(jié)構(gòu)?；衔?-甲基羰氧基-4-甲基-噻唑內(nèi)鹽一水合物(n＝1)的一種晶型，其x射線粉末衍射譜圖在11.8，15.2，16.7，18.9，19.3，19.8，21.0，23.8，24.5，25.2，26.4，26.9，28.6，29.3，31.3，31.9，32.1，34.1，34.7，35.0，35.6，38.9，40.1，40.6，43.1，45.9，46.7，48.1，49.0(2θ/℃)處顯示出特征衍射峰(詳見附圖5)。結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)：c6h7no2s·h2o，mr＝175.20，斜方晶系，空間群p-1，晶體學(xué)參數(shù)：alpha＝90deg.，beta＝90deg.,gamma＝90deg.。單晶結(jié)構(gòu)圖見附圖2。分子晶胞堆積圖見附圖3。實施例4：穩(wěn)定性試驗按照中國藥典2010年版附錄要求取樣品(按照實施例2制備)三批，模擬上市包裝(藥品包裝采用固體藥用高密度聚乙烯袋，)在rt40℃，rh75％(nacl飽和溶液)條件放置進行加速試驗，1、2、3、6個月后，分別取樣考察式i和式a化合物，并與0天數(shù)據(jù)比較，結(jié)果見表1、表2。取按照實施例3制備的化合物一批，模擬上市包裝(藥品包裝采用固體藥用高密度聚乙烯袋，)在rt40℃，rh75％(nacl飽和溶液)條件放置1、2、3個月后，取樣與0天數(shù)據(jù)比較，結(jié)果見表3。按照中國藥典2010年版附錄要求取式a化合物三批，模擬上市包裝(藥品包裝采用固體藥用高密度聚乙烯袋)在rt40℃，rh75％(nacl飽和溶液)條件放置1、2、3個月后，取樣與0天數(shù)據(jù)比較，結(jié)果見表1、表4。表1：實施例2制備的式i化合物(n＝0)與式a化合物(m＝na,k＝br)的質(zhì)量穩(wěn)定性比較表2：實施例2制備的式i化合物加速試驗含量考察結(jié)果表3：實施例3化合物加速試驗含量考察結(jié)果表4：式a化合物(m＝na，k＝br)加速試驗含量考察結(jié)果由上面的數(shù)據(jù)可見，本發(fā)明所涉及的實施例2化合物和實施例3化合物的穩(wěn)定性均顯著優(yōu)于已有的式a化合物，具有更好的成藥潛力。實施例5：體外裂解紅細胞表面交聯(lián)igg(免疫球蛋白g)的實驗由于紅細胞表面交聯(lián)igg是較為典型的ages交聯(lián)結(jié)構(gòu)，所以測定化合物對紅細胞表面交聯(lián)igg的裂解程度是公認較優(yōu)的評價化合物對ages交聯(lián)結(jié)構(gòu)裂解能力的方法(bruceh.r.wolffenbuttel,breakersofadvancedglycationendproductsrestorelargearterypropertiesinexperimentaldiabetes,natl.acad.sci.u.s.a.1998,95,4630.)。血細胞處理方法：16周糖尿病大鼠麻醉后頸總動脈取血，加肝素抗凝，4℃，1000g離心3分鐘，取下層rbc(紅細胞)；0.1mol/lpbs(ph7.4)洗三次，每次4℃1000g離心3分鐘；取下層rbc用于實驗。體外給藥方法：以0.1mol/l等滲pbs(磷酸緩沖液)(ph7.4)為陰性對照，各受試化合物以其為溶劑配制成不同濃度藥液。每900μl藥液或溶劑對照中加入100μlrbc，37℃輕微振搖16-18小時；1000g，4℃離心3分鐘，棄上清，0.1mol/lpbs(ph7.4)洗板4次除去殘留化合物；1000g，4℃離心3分鐘，取下層rbc1∶100稀釋用于elisa測定。rbc表面交聯(lián)igg含量免疫吸附法測定流程：multiscreen-ha0.45μm96孔板(millipore)，以superblock封閉(300μl/孔)，37℃1小時；然后在5mmhg負壓的條件下抽干，pbst滿孔洗板3次，0.1mpbs(ph7.4)洗板2次，每次振板1分鐘；加入待測rbc(50μl/孔)，另設(shè)pbs本底對照孔(od0)；負壓抽干；0.1mol/lpbs(ph7.4)150μl洗四次，每次振板1分鐘。負壓抽干后加入1∶500稀釋的羊抗小鼠igg-hrp(50μl/孔)，室溫靜置2小時，抽干；0.1mol/lpbs(ph7.4)150μl/孔洗3次，每次振板1分鐘；抽干；加鄰苯二胺(opd)底物顯色液(100μl/孔)，室溫避光放置30分鐘，2mol/lh2so4(100μl/孔)終止反應(yīng)；快速吸出反應(yīng)液(150μl/孔)轉(zhuǎn)入普通96孔酶標(biāo)板，于490nm下測定od值。受試化合物裂解率的計算：校正od＝待測rbc樣品的od平均值-無rbc的pbs本底孔的od平均值，藥物裂解率以od490nm值降低的百分率表示：(pbs孔od490nm－受試化合物od490nm)/pbs孔od490nm×100％。實驗結(jié)果見表5：表5：實施例2化合物對紅細胞表面交聯(lián)igg的裂解率表5結(jié)果顯示，實施例2化合物在不同濃度下對紅細胞表面交聯(lián)igg均有較高的裂解率。實施例6：實施例2化合物對糖尿病伴高血壓大鼠24小時尿量/飲水量的影響1.實驗方法：(1)分組及給藥方式參照大鼠體重，血壓均勻分組：未給藥的糖尿病伴高血壓模型組(model組)，硝苯地平組，實施例2化合物+硝苯地平組。同時設(shè)定同周齡的單純糖尿病組和正常對照組。實施例2化合物(36mg/kg)用蒸餾水溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，灌胃給藥，每日一次，持續(xù)5周。于給藥3周后，將植入子埋置于大鼠腹主動脈，恢復(fù)1周，監(jiān)測血壓3天，待血壓基本穩(wěn)定，每天上午10:00灌胃給予硝苯地平(0.75mg/kg)1次，連續(xù)7天。(2)硝苯地平溶液的配制硝苯地平粉末置于5mlep管內(nèi)，加入適量cmc-na，放入4顆鋼珠，渦旋5-10分鐘，待硝苯地平完全混懸之后，定容，再混懸。(3)大鼠飲水量及尿量測定給藥第3周，將各組大鼠單獨置于代謝籠飼養(yǎng)，記錄給藥第19、20、21天的24小時飲水量和尿量。(4)實施例2化合物聯(lián)用硝苯地平血壓監(jiān)測手術(shù)方法同(1)、(2)、(3)所述，大鼠術(shù)后恢復(fù)1周，將鼠籠置于dsi接收器上，設(shè)定需監(jiān)測參數(shù)和通道，用磁開關(guān)打開植入子，調(diào)試結(jié)束后，開始記錄生物信號，連續(xù)3天后，于每天上午10:00給予硝苯地平和實施例2化合物，動態(tài)監(jiān)測記錄10:00-20:00時間段內(nèi)大鼠心血管參數(shù)，連續(xù)7天(在此期間，鹽水濃度嚴(yán)格控制在1％)。(5)大鼠血管活性物質(zhì)含量測定方法txb2、6-keto-pgf1a測定方法：取全血，加40μl消炎痛edta-na抗凝，4℃，3500rmp/min，15分鐘，分離血漿，-70℃保存。由北京華英生物科技有限公司采用放射免疫法測定。bnp、mcp-1測定方法：取全血，加40μledta-na抗凝，1000g/min，10分鐘，分離血漿，-70℃保存。由華英生物科技有限公司采用放射免疫法測定。(6)統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以mean±sd(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，應(yīng)用spss2.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學(xué)處理，以p<0.01為有顯著性差異。給予實施例2化合物第3周，24小時大鼠v尿/v飲。2.實驗結(jié)果結(jié)果如表6所示：表6：不同組飲水量和尿量的測量結(jié)果(mean±sd,n＝12)model實施例2化合物v飲(ml)369.3±122.7375.0±123.6v尿(ml)302.9±101.8318.3±106.0v尿/體重(ml/g)0.82±0.310.88±0.31v飲/體重(ml/g)1.00±0.781.03±0.34v尿/v飲0.79±0.060.86±0.05**p<0.01vs.model。實施例6的實驗結(jié)果表明，實施例2化合物能明顯增加大鼠的飲水量和尿量。實施例7：實施例2化合物對糖尿病伴高血壓大鼠血壓的影響給予實施例2化合物4周后，model組大鼠10:00-20:00時間段內(nèi)的平均收縮壓與正常對照組(nc組)相比顯著升高。實施例2化合物組在10:00-20:00時間段內(nèi)的平均收縮壓相比model組顯著下降(169.8±15.8mmhgvs.181±14.9mmhg，p<0.05)(詳見附圖6)。給予實施例2化合物4周后，糖尿病組大鼠在10:00-20:00時間段內(nèi)的收縮壓變異系數(shù)(cv)與nc組比較明顯增加(p<0.05)，model組大鼠的收縮壓cv進一步顯著增加(p<0.01)；與model組相比，實施例2化合物組大鼠的收縮壓cv顯著降低(p<0.01)(詳見附圖7)。給予實施例2化合物4周后，model組大鼠10:00-20:00時間段內(nèi)的平均收縮壓與nc組相比顯著升高。相比model組，實施例2化合物組在10:10-20:00時間段內(nèi)的平均舒張壓均顯著降低(123.1±13.4mmhgvs.132.3±12.7mmhg)(詳見附圖8)。給予實施例2化合物4周后，model組大鼠在10:00-20:00時間段內(nèi)的脈壓差均值與nc組相比，顯著上升(p<0.01)。實施例2化合物組與model組相比均無明顯變化(46.5±5.7mmhgvs.49.7±3.5mmhg)(詳見附圖9)。給予實施例2化合物4周后，model組大鼠10:00-20:00時間段內(nèi)心率均值與nc組相比顯著下降(p<0.01)。實施例2化合物組大鼠與model組相比均無明顯變化(255±17vs.257±13beats/min)(詳見附圖10)。實施例7的結(jié)果表明實施例2化合物具有穩(wěn)定血壓的作用，符合糖尿病伴高血壓的治療原則，可作為抗高血壓聯(lián)合用藥中增強血壓穩(wěn)定性的輔助用藥。實施例8：實施例2化合物聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血壓的影響10:00給予硝苯地平后，各給藥組收縮壓迅速下降，1.5小時達到降壓最大值；硝苯地平組的收縮壓在給藥2小時后開始回升，10小時后收縮壓基本接近model組；實施例2化合物+硝苯地平組的收縮壓在達到最低值后可保持平穩(wěn)5小時，而后緩慢恢復(fù)。實施例2化合物+硝苯地平組相比硝苯地平組的平均收縮壓在給藥后1小時(135.8±12.5mmhgvs.155.2±14.9，p<0.01)顯著下降；5小時(135.0±11.4mmhgvs.166.0±15.0mmhg，p<0.01)，10小時(152.2±10.4mmhgvs.179.0±14.1mmhg，p<0.01)，均顯著下降(詳見附圖11)。給藥后1.5小時，實施例2化合物+硝苯地平組的降壓幅度δsbp顯著高于硝苯地平組(37.1±13.5mmhgvs.25.3±9.3mmhg，p<0.05)。給藥后5小時，實施例2化合物+硝苯地平組的δsbp顯著高于硝苯地平組(30.9±12.5mmhgvs.15.9±9.3mmhg，p<0.01),給藥后10小時，實施例2化合物+硝苯地平組的δsbp顯著高于硝苯地平組(19.4±6.4mmhgvs.1.19±3.5mmhg，p<0.01)(詳見附圖12)。給藥后1小時至5小時，與model組相比，硝苯地平組收縮壓變異系數(shù)(cv)無明顯變化(0.047±0.017vs.0.051±0.012)，實施例2化合物+硝苯地平組的cv顯著降低(0.019±0.006vs.0.051±0.012，p<0.01)(詳見附圖13)。10:00給藥后，各給藥組舒張壓迅速下降，1.5小時后基本接近最大降壓幅度，然后慢慢回升。給藥后1.5小時，實施例2化合物+硝苯地平組的平均舒張壓相比硝苯地平組顯著下降(95.8±14.5mmhgvs.111.2±15.3，p<0.05)。給藥后5小時，實施例2化合物+硝苯地平組的平均收縮壓相比硝苯地平組顯著下降(96.6±12.3mmhgvs.115.9±15.7mmhg，p<0.01)。給藥后10小時，硝苯地平組舒張壓基本接近model組，實施例2化合物+硝苯地平組的平均收縮壓相比硝苯地平組顯著下降(106.1±16.4mmhgvs.130.1±14.8mmhg，p<0.01)(詳見附圖14)。10:00給藥后，實施例2化合物+硝苯地平組的脈壓差(ph)迅速下降，11:00達到降壓最大值；硝苯地平組的ph輕微下降，1小時后開始回升，10小時后基本接近model組；實施例2化合物+硝苯地平e組ph在1小時達到最低值后緩慢回升。給藥后1小時，實施例2化合物+硝苯地平組的平均脈壓差相比硝苯地平組顯著下降(40.2±4.5vs.46.9±2.9mmhg，p<0.01)。給藥后5小時，實施例2化合物+硝苯地平組的平均脈壓差相比硝苯地平組顯著下降(40.6±4.9vs.48.1±5.1mmhg，p<0.01)。給藥后10小時，實施例2化合物+硝苯地平組的平均脈壓差相比硝苯地平組無明顯變化(45.6±5.8vs.48.7±5.2mmhg)(詳見附圖15)。10:00給藥后，各給藥組心率(hr)迅速上升，20分鐘后達到最大值，然后緩慢下降，給藥后8小時，各給藥組心率基本恢復(fù)到給藥前。給藥后，實施例2化合物+硝苯地平組的心率相比硝苯地平組無顯著性差異(詳見附圖16)。10:00給藥后，各給藥組射血時間(et)迅速下降，20分鐘達到最低值，而后緩慢上升，5小時時，硝苯地平組et基本恢復(fù)到給藥前，10小時時，硝苯地平組et值與mc組基本相當(dāng)。給藥20分鐘時，實施例2化合物+硝苯地平組的et與硝苯地平組相比顯著下降(67.3±5.3msvs.71.8±4.2ms)，而后et緩慢上升，在8-10小時時有一個快速上升的階段，在10小時et值與mc組基本相當(dāng)；在給藥5小時時，實施例2化合物+硝苯地平組的et相比硝苯地平組顯著降低(74.2±5.2msvs.81.1±5.0ms,p<0.05)，該效應(yīng)維持4小時(詳見附圖17)。肌耗氧指數(shù)(myocardialoxygenconsumptionindex，moci)反映心肌總耗氧量。給藥后1小時，與model組相比，硝苯地平組moci有所下降，但無顯著性差異(3772.7±444.7vs.4255.0±416.1，p＝0.36),實施例2化合物+硝苯地平組moci顯著下降(3128.4±238.7vs.4255.0±416.1，p<0.05)。給藥后5小時，相比model組，硝苯地平組moci有所下降，但無顯著性差異,實施例2化合物+硝苯地平組moci顯著下降(p<0.05)。給藥后10小時，硝苯地平組moci恢復(fù)到給藥前，實施例2化合物+硝苯地平組moci低于model組和硝苯地平組，但無顯著性差異(詳見附圖18)。實施例8的結(jié)果表明，實施例2化合物可明顯增強硝苯地平對心臟的作用；實施例2化合物與硝苯地平聯(lián)用，能顯著降低糖尿病伴高血壓大鼠的血壓。實施例9：實施例2化合物聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血管活性分子含量的影響①實施例2化合物聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血漿6-酮-前列腺素含量的影響血漿6-酮-前列腺素是前列環(huán)素(pg12)的代謝物，反映了血漿中pg12的含量。糖尿病組、model組大鼠血漿中6-酮-前列腺素含量與正常組相比顯著下降(78.15±5.6,77.62±8.67vs.85.41±4.36pg/ml，p<0.05)。實施例2化合物+硝苯地平組大鼠與model組相比顯著升高(87.21±6.90vs.77.62±8.67pg/ml，p<0.01)，與硝苯地平組相比也顯著升高(p<0.05)(詳見附圖19)。②ages裂解劑聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血漿txb2含量的影響txb2是txa2的代謝產(chǎn)物，反應(yīng)血漿中txa2的含量。與正常組相比，糖尿病組、model組大鼠的txb2含量顯著上升(93.14±10.99、104.19±11.68vs.64.88±7.24，p<0.01)。實施例2化合物+硝苯地平組、硝苯地平組txb2含量相比model組有顯著下降(73.64±12.27、80.88±15.31vs.104.19±11.68pg/ml，p<0.01)；實施例2化合物+硝苯地平組txb2含量相比硝苯地平組，無顯著性差異(詳見附圖20)。③實施例2化合物聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血漿txb2/6-keto-pgi1a值的影響txb2/6-keto-pgi1a比值反映血漿中txa2/pgi2的水平。與正常組相比，糖尿病組、model組大鼠的txb2/6-keto-pgi1a顯著上升(1.15±0.15、1.18±0.16vs.0.80±0.10，p<0.01)；實施例2化合物+硝苯地平組的txb2/6-keto-pgi1a相比model組顯著下降(0.93±0.13vs.1.18±0.16，p<0.01)；硝苯地平組相比model組略有下降(1.06±0.14vs.1.18±0.16)，無顯著性差異；實施例2化合物+硝苯地平組的txb2/6-keto-pgi1a相比硝苯地平組顯著下降(0.93±0.13vs.1.06±0.14，p<0.05)(詳見附圖21)。④實施例2化合物聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血漿mcp-1含量的影響與正常組相比，糖尿病組、model組大鼠血漿mcp-1含量均顯著上升(75.9±9.7、77.4±9.5vs.66.9±7.3pg/ml，p<0.05)；實施例2化合物+硝苯地平組的血漿mcp-1含量相比model組顯著降低(64.0±14.2vs.77.4±9.5pg/ml，p<0.01)；硝苯地平組血漿中mcp-1含量相比model組略有降低(70.7±8.8vs.77.4±9.5pg/ml)，但無顯著性差異；實施例2化合物+硝苯地平組血漿中mcp-1含量相比硝苯地平組顯著降低(p<0.05)(詳見附圖22)。⑤實施例2化合物聯(lián)合硝苯地平對糖尿病伴高血壓大鼠血漿bnp含量的影響與正常組相比，model組大鼠血漿bnp含量均顯著上升(16.7±2.0vs.14.3±2.1pg/ml，p<0.05)；實施例2化合物+硝苯地平組的血漿bnp含量相比model組顯著降低(12.2±3.5vs.16.7±2.0pg/ml，p<0.01)；硝苯地平組血漿中bnp含量相比model組顯著降低(14.6±2.4vs.16.7±2.0pg/ml，p<0.05)；實施例2化合物+硝苯地平組血漿中mcp-1含量相比硝苯地平組顯著降低(p<0.05，p<0.01)(詳見附圖23)。實施例9的結(jié)果表明實施例2化合物導(dǎo)致txa2/pgi2比值降低，造成舒張血管，減少血栓的產(chǎn)生，延緩血管粥樣硬化的進程，起到血管保護作用。ages裂解劑還可降低糖尿病伴高血壓大鼠血漿中的bnp含量，同時也可顯著降低糖尿病伴高血壓大鼠血漿中mcp-1的含量。盡管本發(fā)明的具體實施方式已經(jīng)得到詳細的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解。根據(jù)已經(jīng)公開的所有教導(dǎo)，可以對那些細節(jié)進行各種修改和替換，這些改變均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。當(dāng)前第1頁12