本發(fā)明涉及飼用抗生素制備技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法。

背景技術(shù)：

阿維拉霉素主要抑制革蘭陽性菌，具有穩(wěn)定而良好的促生長和預(yù)防動物疾病的雙重效果，安全性高、殘留極低、無交叉耐藥性、對環(huán)境無影響等優(yōu)點(diǎn)，能夠提高豬和肉雞的平均日增重。眾多的國家和地區(qū)如拉丁美洲、亞洲和歐洲均允許將阿維拉霉素作為一種抗菌促生長劑添加于豬雞飼料中。

阿維拉霉素為中性，呈無色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為181～182℃，微溶于水，易溶于丙酮、丙醇、乙酸乙酯、苯和乙醚等有機(jī)溶劑中。阿維拉霉素約有a、a′、b、c、d1、d2、e、f、g、h、i、j、k等十多個(gè)組分，其中a組分活性最高。

現(xiàn)有的阿維拉霉素預(yù)混劑生產(chǎn)工藝主要有兩種：一是發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥，干燥品加入載體稀釋混合得到阿維拉霉素預(yù)混劑，該工藝噴霧干燥的發(fā)酵液中含有90％以上的水分，噴霧干燥能耗高，生產(chǎn)成本高。二是發(fā)酵液用甲醇等有機(jī)溶劑粗提、樹脂吸附得到原料藥，加入玉米粉和米糠油得到阿維拉霉素預(yù)混劑，過程大量使用有機(jī)溶媒和酸堿，工藝復(fù)雜能耗成本高，對環(huán)境污染危害大。為此，我們提出一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法投入使用，以解決上述問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法，已解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法，該阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法的具體步驟如下：

s1：將綠色產(chǎn)色鏈霉菌的袍子斜面中加入3～5ml的無菌生理鹽水，用接種棒子將袍子刮下，轉(zhuǎn)入無菌離心管中，并采用無菌脫脂棉過濾，得到單袍子懸液；

s2：取新鮮制備的單袍子懸液，均勻涂布在小鐵片上，在自然狀態(tài)下照射30～240s進(jìn)行artp照射；

s3：照射完成后將小鐵片上的單袍子用無菌水洗下后稀釋涂布與高氏一號平板上，28℃培養(yǎng)3～7d；

s4：用無菌生理鹽水將平板上的袍子洗下，接種于裝有100ml的種子培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，28℃，220rpm下震蕩培養(yǎng)48～54h；

s5：移取步驟s4中制備的種子液3～5ml到10ml的無菌離心管中，5000～7000rpm，8～16min，離心棄上清液，收集阿拉霉素菌絲體；

s6：在步驟s5中的無菌離心管中加入3～7ml的無菌水，震蕩均勻后倒入裝有一定量的玻璃碎片和10ml蒸餾水的100ml滅菌三角瓶中，在220～300rpm，震蕩30～50min，使成團(tuán)的阿拉霉素菌絲打碎并分散；

s7：震蕩結(jié)束后，利用移液槍吸取4～7ml的菌液到10ml的無菌離心管中，5000～7000rpm離心10～20min，棄上清液；

s8：隨后在步驟s7中的無菌離心管中加入4～7ml的高滲溶液，洗滌菌絲，離心后棄上清液，得到阿拉霉素菌絲體；

s9：將阿拉霉素菌絲體經(jīng)過干燥后得到阿拉霉素干燥菌絲，經(jīng)過粉碎處理后，得到阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉；

s10：根據(jù)阿維拉霉素菌絲體干燥品純度及成品要求含量，向阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉中加入粉狀載體以調(diào)節(jié)其含量，混合均勻，得到粉狀阿維拉霉素預(yù)混劑。

優(yōu)選的，所述步驟s5中，阿拉霉素菌絲體的含水量為50～60％。

優(yōu)選的，所述步驟s8中，高滲溶液：蔗糖10.3g、硫酸鉀0.025g、六水氯化鎂0.202g、微量元素溶液0.2ml，用去離子水定容至88ml，滅菌處理后再加入單獨(dú)滅菌的0.5％磷酸二氫鉀和氯化鈣各10ml。

優(yōu)選的，所述步驟s9中，采用沸騰床進(jìn)行干燥，干燥時(shí)控制進(jìn)風(fēng)溫度為100～150℃，出風(fēng)溫度為35～70℃。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明所需工序少，工時(shí)短，不涉及有機(jī)溶劑，收率在98％以上，生產(chǎn)過程不產(chǎn)生抗生素菌渣等危險(xiǎn)固廢，對環(huán)境污染小，且生產(chǎn)成本大幅降低。

具體實(shí)施方式

下面對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例一

一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法，該阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法的具體步驟如下：

s1：將綠色產(chǎn)色鏈霉菌的袍子斜面中加入3ml的無菌生理鹽水，用接種棒子將袍子刮下，轉(zhuǎn)入無菌離心管中，并采用無菌脫脂棉過濾，得到單袍子懸液；

s2：取新鮮制備的單袍子懸液，均勻涂布在小鐵片上，在自然狀態(tài)下照射30s進(jìn)行artp照射；

s3：照射完成后將小鐵片上的單袍子用無菌水洗下后稀釋涂布與高氏一號平板上，28℃培養(yǎng)3d；

s4：用無菌生理鹽水將平板上的袍子洗下，接種于裝有100ml的種子培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，28℃，220rpm下震蕩培養(yǎng)48h；

s5：移取步驟s4中制備的種子液3～5ml到10ml的無菌離心管中，5000rpm，8min，離心棄上清液，收集阿拉霉素菌絲體，且阿拉霉素菌絲體的含水量為50～60％；

s6：在步驟s5中的無菌離心管中加入3ml的無菌水，震蕩均勻后倒入裝有一定量的玻璃碎片和10ml蒸餾水的100ml滅菌三角瓶中，在220rpm，震蕩30min，使成團(tuán)的阿拉霉素菌絲打碎并分散；

s7：震蕩結(jié)束后，利用移液槍吸取4ml的菌液到10ml的無菌離心管中，5000rpm離心10min，棄上清液；

s8：隨后在步驟s7中的無菌離心管中加入4ml的高滲溶液，洗滌菌絲，離心后棄上清液，得到阿拉霉素菌絲體，其中高滲溶液：蔗糖10.3g、硫酸鉀0.025g、六水氯化鎂0.202g、微量元素溶液0.2ml，用去離子水定容至88ml，滅菌處理后再加入單獨(dú)滅菌的0.5％磷酸二氫鉀和氯化鈣各10ml；

s9：采用沸騰床進(jìn)行干燥，干燥時(shí)控制進(jìn)風(fēng)溫度為100℃，出風(fēng)溫度為35℃，將阿拉霉素菌絲體經(jīng)過干燥后得到阿拉霉素干燥菌絲，經(jīng)過粉碎處理后，得到阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉；

s10：根據(jù)阿維拉霉素菌絲體干燥品純度及成品要求含量，向阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉中加入粉狀載體以調(diào)節(jié)其含量，混合均勻，得到粉狀阿維拉霉素預(yù)混劑。

實(shí)施例二

一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法，該阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法的具體步驟如下：

s1：將綠色產(chǎn)色鏈霉菌的袍子斜面中加入5ml的無菌生理鹽水，用接種棒子將袍子刮下，轉(zhuǎn)入無菌離心管中，并采用無菌脫脂棉過濾，得到單袍子懸液；

s2：取新鮮制備的單袍子懸液，均勻涂布在小鐵片上，在自然狀態(tài)下照射240s進(jìn)行artp照射；

s3：照射完成后將小鐵片上的單袍子用無菌水洗下后稀釋涂布與高氏一號平板上，28℃培養(yǎng)3～7d；

s4：用無菌生理鹽水將平板上的袍子洗下，接種于裝有100ml的種子培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，28℃，220rpm下震蕩培養(yǎng)54h；

s5：移取步驟s4中制備的種子液3～5ml到10ml的無菌離心管中，7000rpm，16min，離心棄上清液，收集阿拉霉素菌絲體，且阿拉霉素菌絲體的含水量為50～60％；

s6：在步驟s5中的無菌離心管中加入7ml的無菌水，震蕩均勻后倒入裝有一定量的玻璃碎片和10ml蒸餾水的100ml滅菌三角瓶中，在300rpm，震蕩50min，使成團(tuán)的阿拉霉素菌絲打碎并分散；

s7：震蕩結(jié)束后，利用移液槍吸取7ml的菌液到10ml的無菌離心管中，7000rpm離心20min，棄上清液；

s8：隨后在步驟s7中的無菌離心管中加入7ml的高滲溶液，洗滌菌絲，離心后棄上清液，得到阿拉霉素菌絲體，其中高滲溶液：蔗糖10.3g、硫酸鉀0.025g、六水氯化鎂0.202g、微量元素溶液0.2ml，用去離子水定容至88ml，滅菌處理后再加入單獨(dú)滅菌的0.5％磷酸二氫鉀和氯化鈣各10ml；

s9：采用沸騰床進(jìn)行干燥，干燥時(shí)控制進(jìn)風(fēng)溫度為150℃，出風(fēng)溫度為70℃，將阿拉霉素菌絲體經(jīng)過干燥后得到阿拉霉素干燥菌絲，經(jīng)過粉碎處理后，得到阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉；

s10：根據(jù)阿維拉霉素菌絲體干燥品純度及成品要求含量，向阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉中加入粉狀載體以調(diào)節(jié)其含量，混合均勻，得到粉狀阿維拉霉素預(yù)混劑。

實(shí)施例三

一種阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法，該阿維拉霉素預(yù)混劑的制備方法的具體步驟如下：

s1：將綠色產(chǎn)色鏈霉菌的袍子斜面中加入4ml的無菌生理鹽水，用接種棒子將袍子刮下，轉(zhuǎn)入無菌離心管中，并采用無菌脫脂棉過濾，得到單袍子懸液；

s2：取新鮮制備的單袍子懸液，均勻涂布在小鐵片上，在自然狀態(tài)下照射200s進(jìn)行artp照射；

s3：照射完成后將小鐵片上的單袍子用無菌水洗下后稀釋涂布與高氏一號平板上，28℃培養(yǎng)5d；

s4：用無菌生理鹽水將平板上的袍子洗下，接種于裝有100ml的種子培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，28℃，220rpm下震蕩培養(yǎng)50h；

s5：移取步驟s4中制備的種子液3～5ml到10ml的無菌離心管中，6000rpm，12min，離心棄上清液，收集阿拉霉素菌絲體，且阿拉霉素菌絲體的含水量為50～60％；

s6：在步驟s5中的無菌離心管中加入5ml的無菌水，震蕩均勻后倒入裝有一定量的玻璃碎片和10ml蒸餾水的100ml滅菌三角瓶中，在280rpm，震蕩40min，使成團(tuán)的阿拉霉素菌絲打碎并分散；

s7：震蕩結(jié)束后，利用移液槍吸取5ml的菌液到10ml的無菌離心管中，6000rpm離心15min，棄上清液；

s8：隨后在步驟s7中的無菌離心管中加入5ml的高滲溶液，洗滌菌絲，離心后棄上清液，得到阿拉霉素菌絲體，其中高滲溶液：蔗糖10.3g、硫酸鉀0.025g、六水氯化鎂0.202g、微量元素溶液0.2ml，用去離子水定容至88ml，滅菌處理后再加入單獨(dú)滅菌的0.5％磷酸二氫鉀和氯化鈣各10ml；

s9：采用沸騰床進(jìn)行干燥，干燥時(shí)控制進(jìn)風(fēng)溫度為120℃，出風(fēng)溫度為50℃，將阿拉霉素菌絲體經(jīng)過干燥后得到阿拉霉素干燥菌絲，經(jīng)過粉碎處理后，得到阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉；

s10：根據(jù)阿維拉霉素菌絲體干燥品純度及成品要求含量，向阿維拉霉素菌絲體細(xì)粉中加入粉狀載體以調(diào)節(jié)其含量，混合均勻，得到粉狀阿維拉霉素預(yù)混劑。

綜合以上所述，本發(fā)明的最佳實(shí)施例為實(shí)施例三，其制備工序少，工時(shí)短，不涉及有機(jī)溶劑，收率在98％以上，生產(chǎn)過程不產(chǎn)生抗生素菌渣等危險(xiǎn)固廢，對環(huán)境污染小，且生產(chǎn)成本大幅降低。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。