本發(fā)明涉及食藥用菌栽培領(lǐng)域，具體涉及一種通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)基來(lái)促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的方法。
背景技術(shù)：
羊肚菌是一種珍貴的多年生大型藥用真菌，由于大多生長(zhǎng)在桑屬植物上且子實(shí)體為黃褐色而得名。羊肚菌的藥物功效最早見(jiàn)于《本草綱目》、《藥性論》記載羊肚菌味苦、性寒。在我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥中用于治療痢疾、盜汗、血崩、脫肛瀉血等癥狀。最新研究表明，羊肚菌還具有獨(dú)特的抗癌功效，是目前國(guó)際公認(rèn)的生物治癌藥劑中有效率最高的一種藥用真菌。羊肚菌的主要藥理活性成分是羊肚菌多糖，對(duì)羊肚菌進(jìn)行人工培養(yǎng)的主要目的是獲得羊肚菌多糖入藥或用于保健品制劑生產(chǎn)，羊肚菌多糖一般通過(guò)發(fā)酵液、菌絲體和子實(shí)體提取途徑獲得。由于羊肚菌的使用量日益加大，加上日韓兩國(guó)對(duì)我國(guó)野生羊肚菌掠奪式的收購(gòu)，導(dǎo)致野生羊肚菌的資源瀕臨枯竭；而我國(guó)對(duì)于羊肚菌的研究才剛剛起步，現(xiàn)階段針對(duì)羊肚菌菌的合適的母種培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基配方以及人工栽培技術(shù)還亟待完善。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有培養(yǎng)基配方的缺陷，提供一種能夠促進(jìn)羊肚菌菌菌絲生長(zhǎng)的方法，以解決羊肚菌菌菌絲供應(yīng)不足的缺陷，提高羊肚菌多糖的產(chǎn)量。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基配方如下：麥芽糖16-20g/l；酒石酸銨0.25-0.30g/l；kh2po40.8-1.2g/l；mgso4?7h2o0.3-0.5g/l；vb18-12mg/l；瓊脂18-22g/l。
其配置方法為：稱取麥芽糖、酒石酸銨、kh2po4、mgso4?7h2o、vb1，溶解于1l水中加入，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加入瓊脂后加熱攪拌直至瓊脂融化；分裝入三角瓶中，在瓶口用封口膜密封好，121℃滅菌30min備用。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用上述促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行羊肚菌培養(yǎng)的方法，其具體步驟如下：
（1）接種：待培養(yǎng)基溫度降至36-40℃時(shí)，接種羊肚菌，按菌絲與培養(yǎng)料體積為1：50接種封口膜密封后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
（2）菌絲生長(zhǎng)：羊肚菌在上述培養(yǎng)基上共生長(zhǎng)10天，接種第三天開始劃線用簽字筆在培養(yǎng)皿上描繪最外圈的菌絲并用尺子測(cè)量直徑，之后每24小時(shí)劃一次線，共劃6次線；同時(shí)，觀察菌絲顏色、粗細(xì)、濃密程度和菌落長(zhǎng)勢(shì)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
本發(fā)明優(yōu)化了羊肚菌培養(yǎng)基的碳源和氮源使其更符合羊肚菌生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)需求，加快了羊肚菌菌菌絲生長(zhǎng)速率，降低生產(chǎn)羊肚菌多糖的成本；
采用麥芽糖作為培養(yǎng)羊肚菌菌絲培養(yǎng)基的碳源，其來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉，且麥芽糖作為一種可食用多糖添加到培養(yǎng)基中安全無(wú)有害物質(zhì)。酒石酸銨不僅可以提供豐富的氮源，還可以有效的控制培養(yǎng)基中的碳氮比，使羊肚菌處于一種最佳的生長(zhǎng)環(huán)境。
采用優(yōu)化后的培養(yǎng)基不僅可以提高羊肚菌菌菌絲生長(zhǎng)速度還可防止由于菌絲生長(zhǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致的菌種退化。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1碳源、氮源的優(yōu)化試驗(yàn)
碳源：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加2％的葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、可溶性淀粉、玉米粉、面粉作為碳源，配成七種不同碳源的培養(yǎng)基以基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為無(wú)碳源對(duì)照組，研究不同碳源對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響。
研究發(fā)現(xiàn)麥芽糖為羊肚菌菌最適碳源。以麥芽糖作為碳源的作用效果最好，菌絲生長(zhǎng)速率為2,89mm/d，菌絲直徑為42.59mm，菌絲生長(zhǎng)指數(shù)有13.50。從菌絲生長(zhǎng)指數(shù)上分析，麥芽糖的菌落直徑比對(duì)照組有明顯的增長(zhǎng)。
氮源：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加0.3％的蛋白胨、酵母粉、黃豆粉、酒石酸銨、硫酸銨、硝酸銨作為氮源，配成六種不同氮源的培養(yǎng)基，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為無(wú)氮源對(duì)照組，研究不同氮源對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響。
發(fā)現(xiàn)酒石酸銨為羊肚菌最適氮源。以酒石酸銨作為氮源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速率可為2.52mm/d。
實(shí)施例2
一種促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方如下：麥芽糖16g/l；酒石酸銨0.25g/l；kh2po40.8g/l；mgso4?7h2o0.3g/l；vb18mg/l；瓊脂18g/l。
其配置方法為：稱取麥芽糖、酒石酸銨、kh2po4、mgso4?7h2o、vb1，溶解于1l水中加入，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加入瓊脂后加熱攪拌直至瓊脂融化；分裝入三角瓶中，在瓶口用封口膜密封好，121℃滅菌30min備用。
羊肚菌培養(yǎng)：
（1）接種：待培養(yǎng)基溫度降至36℃時(shí)，接種羊肚菌，封口膜密封后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
（2）菌絲生長(zhǎng)：羊肚菌在上述培養(yǎng)基上共生長(zhǎng)10天，接種第三天開始劃線，之后每24小時(shí)劃一次線，共劃6次線；同時(shí)，觀察菌絲顏色、粗細(xì)、濃密程度和菌落長(zhǎng)勢(shì)。
實(shí)施例3
一種促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方如下：麥芽糖18g/l；酒石酸銨0.28g/l；kh2po41.0g/l；mgso4?7h2o0.4g/l；vb110mg/l；瓊脂20gg/l。
其配置方法為：稱取麥芽糖、酒石酸銨、kh2po4、mgso4?7h2o、vb1，溶解于1l水中加入，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加入瓊脂后加熱攪拌直至瓊脂融化；分裝入三角瓶中，在瓶口用封口膜密封好，121℃滅菌30min備用。
羊肚菌培養(yǎng)：
（1）接種：待培養(yǎng)基溫度降至38℃時(shí)，接種羊肚菌，封口膜密封后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
（2）菌絲生長(zhǎng)：羊肚菌在上述培養(yǎng)基上共生長(zhǎng)10天，接種第三天開始劃線，之后每24小時(shí)劃一次線，共劃6次線；同時(shí)，觀察菌絲顏色、粗細(xì)、濃密程度和菌落長(zhǎng)勢(shì)。
實(shí)施例4
一種促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方如下：麥芽糖20g/l；酒石酸銨0.30g/l；kh2po41.2g/l；mgso4?7h2o0.5g/l；vb112mg/l；瓊脂22g/l。
其配置方法為：稱取麥芽糖、酒石酸銨、kh2po4、mgso4?7h2o、vb1，溶解于1l水中加入，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加入瓊脂后加熱攪拌直至瓊脂融化；分裝入三角瓶中，在瓶口用封口膜密封好，121℃滅菌30min備用。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用上述促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行羊肚菌培養(yǎng)的方法，其具體步驟如下：
（1）接種：待培養(yǎng)基溫度降至40℃時(shí)，接種羊肚菌，封口膜密封后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
（2）菌絲生長(zhǎng)：羊肚菌在上述培養(yǎng)基上共生長(zhǎng)10天，接種第三天開始劃線，之后每24小時(shí)劃一次線，共劃6次線；同時(shí)，觀察菌絲顏色、粗細(xì)、濃密程度和菌落長(zhǎng)勢(shì)。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。