本發(fā)明涉及的是基因工程的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及的是一種玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

玉米在人類的各類生產(chǎn)生活中占據(jù)著重要的位置，它不僅是主要的糧飼作物，更是各類生產(chǎn)中主要的淀粉來源。我國研究人員在提高玉米產(chǎn)量上做出了重要的貢獻，但對改善玉米品質(zhì)方面的研究較少淀粉作為植物種子胚乳的主要組成成分，其含量和品質(zhì)直接影響著種子的品質(zhì)。因此，研究淀粉合成的調(diào)控對于提高種子的品質(zhì)具有重要意義。

淀粉根據(jù)結(jié)構(gòu)不同分為直鏈淀粉和支鏈淀粉，淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例以及支鏈淀粉的分支鏈結(jié)構(gòu)決定著玉米品質(zhì)，同時直鏈淀粉和直鏈淀粉之間的比例還決定著淀粉的用途，高直鏈和低支鏈的淀粉可以用于食品、醫(yī)藥、環(huán)保、紡織等領(lǐng)域，而低直鏈和高支鏈的淀粉可用在食品行業(yè)。

目前，水稻、玉米、小麥淀粉代謝途徑中控制四個關(guān)鍵酶(agpase、ss、sbe、dbe)的一些基因已經(jīng)被克隆出來了，通過控制關(guān)鍵酶基因表達，能調(diào)控淀粉直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的變化。在對高直鏈玉米酶活測定發(fā)現(xiàn)，ss和sbe酶活性低于普通玉米，而gbssi酶活性高于普通玉米。對控制高直鏈淀粉ae基因研究發(fā)現(xiàn)，與普通玉米比較，高直鏈玉米基因的第9個外顯子缺失，cdna序列有堿基差異。在對小麥籽粒淀粉研究中發(fā)現(xiàn)，gbss在灌漿中前期與淀粉積累速率相關(guān)不顯著，而灌漿后期呈顯著相關(guān)；rna干涉水稻osbp-5基因能降低wx基因的表達水平，導致成熟種子中直鏈淀粉含量的降低；flo2(flouryendosperm2)基因能編碼肽重復序列結(jié)構(gòu)域，調(diào)控水稻籽粒的大小和淀粉質(zhì)量；rsr1(ricestarchregulator1)基因在淀粉合成途徑中起著負調(diào)控作用，該基因的缺失提高淀粉合成基因的表達，其突變體中直鏈淀粉增加，種子尺寸變大，產(chǎn)量提高；水稻的osbzip58基因，含有基本的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，能調(diào)控種子儲藏蛋白的合成，同時還能綁定wx和sbei基因啟動子，參與淀粉生物合成控制淀粉含量。盡管對于主效基因在淀粉合成途徑中的功能也有大量報道，然而對于其分子調(diào)控機制仍不清楚。淀粉的含量是由多個主效基因控制的復雜生物學性狀，那么這些主效基因是如何被調(diào)控表達？調(diào)控的分子機理又是怎么樣的呢？這些問題都還不清楚。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a及其應(yīng)用，以提供一種新的能夠調(diào)控玉米合成相關(guān)基因表達水平，改變玉米直鏈淀粉與支鏈淀粉含量及其平衡度的調(diào)控基因。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a，所述基因具有如seqidno.1所示的核苷酸序列，全長810bp，共編碼269個氨基酸。

本發(fā)明還提供了上述玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a在調(diào)節(jié)玉米籽粒直鏈淀粉含量和玉米直鏈淀粉/總淀粉比例中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了上述玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a的編碼蛋白，所述編碼蛋白具有如seqidno.2所示的氨基酸序列。

本發(fā)明還提供了一種植物過量表達載體，所述植物過量表達載體為多克隆位點區(qū)域依次連接有35s啟動子、如權(quán)利要求1所述的zmend1a基因和終止子的pzz00005植物表達載體。

本發(fā)明還提供了一種遺傳工程化的宿主細胞，所述宿主細胞含有上述過量表達載體，或其基因組中整合有外源的上述zmmikc2a基因的正向或反向序列。

本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點：本發(fā)明提供了一種玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a及其應(yīng)用，該基因能提高玉米直鏈淀粉的含量，改變籽粒中淀粉顆粒大小，調(diào)控淀粉合成相關(guān)基因表達水平；該基因的發(fā)現(xiàn)不僅為玉米淀粉合成調(diào)控機理提供新證據(jù)，也為創(chuàng)建玉米優(yōu)質(zhì)新品種奠定理論基礎(chǔ)，為利用基因工程技術(shù)調(diào)節(jié)改善玉米直鏈和支鏈淀粉含量的平衡度提供了新的途徑。

附圖說明

圖1為zmend1a基因不同組織表達模式分析結(jié)果柱狀圖；

圖2為基礎(chǔ)載體圖譜，其中，圖2a為pcambia1301載體，圖2b為pzz00005載體；

圖3為zmmikc2a基因過表達植株和野生型植株籽粒大小和千粒重測定結(jié)果，其中圖3a為籽粒大小對比圖，圖3b為千粒重測定結(jié)果柱狀圖；wt為野生型植株，l1-8為過表達植株；虛線為過表達植株千粒重均值；

圖4為zmmikc2a基因過表達植株和野生型植株籽粒直鏈淀粉和總淀粉含量柱狀圖；其中圖4a為直鏈淀粉含量柱狀圖，圖4b為總淀粉含量柱狀圖；wt為野生型植株，l1、l2、l5、l8為過表達植株；虛線為過表達植株籽粒直鏈淀粉和總淀粉含量均值；

圖5為zmmikc2a基因過表達植株和野生型植株籽粒掃描電鏡圖；其中wt為野生型植株，zmmikc2a為過表達植株；a為bar為100μm下的掃描電鏡圖，b為bar為30μm下的掃描電鏡圖。

圖6為zmmikc2a基因過表達植株籽粒中淀粉合成相關(guān)基因表達分析結(jié)果圖。

具體實施方式

下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明，本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。

實施例1

1、材料

本實施例所用方法如無特別說明均為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知曉的常規(guī)方法，所用的試劑等材料，如無特別說明，均為市售購買產(chǎn)品。

2、方法

2.1zmmikc1a基因不同組織表達模式分析

分不同時期取玉米根(r)、莖(s)、葉(l)、雄穗(t)、花絲(c)、苞葉(st)、12d胚乳(en12)、12d胚(em12)、14d胚乳(en14)、14d胚(em14)、16d胚乳(en16)、16d胚(em16)、18d胚乳(en18)、18d胚(em18)、20d胚乳(en20)、20d胚(em20)，每個樣取完后，迅速放入液氮速凍，然后凍存于-70℃冰箱，用于后期rna時提取使用。rna的提取步驟參考e.z.n.a.tmmagsi植物rna提取試劑盒和使用核酸自動提取儀。熒光定量pcr引物見表1，以α-qtubulin(f:aggcttgtctcccaggtcatc；r:gttggtctggaactcgttcaca)作為內(nèi)參基因，定量反應(yīng)使用的是roche定量試劑盒，反應(yīng)體系為25μl，各組分為染料混合液9.5μl，cdna模板為2μl，上下游引物各(10μmol/l)各0.5μl，最后補去離子水至25μl。pcr反應(yīng)參數(shù)如下：95℃，10min；95℃，15s；60℃，1min，共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，對產(chǎn)物進行加熱，獲得產(chǎn)物的溶解曲線。采用2^–δδct[δct＝ct目標基因–ct內(nèi)參基因.δδct＝δct處理后–δct對照]法進行數(shù)據(jù)處理。

實驗測定三次生物學重復，至少三次實驗操作重復，測定結(jié)果如圖1所示，zmmikc1a基因在花絲、授粉后16天和授粉后18天表達量較高，特別是花絲中，表達量最高。

2.2zmmikc2a基因的克隆

選取玉米b73品種授粉后16天的籽粒胚乳，提取玉米胚乳rna并反轉(zhuǎn)錄成cdna，以玉米胚乳cdna為模板，根據(jù)玉米b73基因組數(shù)據(jù)庫公布的基因序列，結(jié)合pcambia1301植物表達載體的多克隆位點設(shè)計引物，進行pcr擴增，獲得pcr擴增產(chǎn)物。

引物序列為：

mikc2a-f-1：5′-cgcggatccatgggtaggggaaggattga-3′

mikc2a-r-1：5′-aactgcagttagaactgatgatgagggttattg-3′

pcr反應(yīng)程序為：98℃，預(yù)變性10min；98℃，變性20s；60℃，退火20s；72℃，延伸2min，30個循環(huán)；72℃，復性10min；10℃保存。

將pcr擴增產(chǎn)物用質(zhì)量比為2％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，將與目的基因長度一致的電泳條帶進行切膠回收，回收片段連接至peasy-t1載體(購于全式金生物技術(shù)有限公司，獲得連接產(chǎn)物。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)trans5α細胞中，并提取質(zhì)粒，以提取的質(zhì)粒做模板，以mikc2a-f-1、mikc2a-r-1為引物進行pcr擴增驗證，同時用bamhi和psti雙酶切質(zhì)粒進行檢測，篩選陽性克隆子，將陽性克隆子送去華大生物公司進行測序，測序結(jié)果使用mega4.0軟件比對，結(jié)果與預(yù)測一致。獲得的重組質(zhì)粒命名為t-mikc2a。

2.3zmmikc2a基因過量表達載體的構(gòu)建

以pcambia1301(購于上海捷蘭生物技術(shù)有限公司，載體圖譜如圖2a所示)為原始載體，在其多克隆位點的ecori和saci酶切位點之間連接一個35s啟動子，并在sphi和hindiii酶切位點之間加上一段nos終止子，獲得改造的載體p1。用bamhi和psti雙酶切t-end1a得到小的目的片段，同時用bamhi和psti雙酶切p1得到大的目的片段，將上述兩片段使用t4連接酶連接，構(gòu)建獲得載體p1-zmmikc2a。

以p1-zmmikc2a為模板，以mikc2a-f-2和mikc2a-r-2為上下游引物進行pcr擴增，得到hindiii-35s+zmend1a+nos-pmei片段，分別用hindiii和pmei雙酶切pzz00005基礎(chǔ)載體(載體pzz00005購于中國種子集團有限公司，載體圖譜如圖2b所示)和hindiii-35s+zmend1a+nos-pmei片段，將上述兩片段使用t4連接酶連接，構(gòu)建獲得載體p2-zmmikc2a。

引物序列為：

mikc2a-f-2：cccaagcttcgacactctcgtctactccaag

mikc2a-r-2：agctttgtttaaaccccgatctagtaacatagatgacac

2.4農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)zmmikc2a基因玉米的獲得及鑒定

將p2-zmmikc2a轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌ag10中，獲得重組農(nóng)桿菌ag10/p2-zmmikc2a，具體參見文獻：methodsinmolecularbiology，vol.343：agrobacteriumprotocols，2/e，volume1。

農(nóng)桿菌介導對目的玉米的轉(zhuǎn)化(玉米原位轉(zhuǎn)化技術(shù))：

原位轉(zhuǎn)化液的配制：1/4ms培養(yǎng)基中加2％(質(zhì)量)蔗糖，0.05％(質(zhì)量)silwet-77(表面活性劑)，2mg/l6-ba，1ng/l2,4-d以及10mg/l乙酰丁香酮。每100ml培養(yǎng)基中加4ml農(nóng)桿菌ag10/p2-zmmikc2a菌液，于28℃，250rpm培養(yǎng)24小時。

將玉米須剪去，用5ml的注射器將菌液從玉米的下部1/3處直接注入玉米棒中，注入的量以玉米須處有菌液滲出為宜。經(jīng)過兩個月的生長，收獲玉米粒。

將玉米粒曬干，播種，待幼苗長到3-4葉期時用配制的0.01％(質(zhì)量)除草劑basta和quickstixpat/bar蛋白檢測試紙條(as013ls)檢測表達載體p2-zmmikc2a上所含的bar基因蛋白，篩選陽性轉(zhuǎn)基因植株，獲得42株獨立轉(zhuǎn)化事件的玉米苗。

上述42株獨立轉(zhuǎn)化事件的玉米苗成熟后，以其葉片總dna為模板，使用quickstixpat/bar蛋白檢測試紙條(as013ls)檢測表達載體p2-zmmikc2a上所含的bar基因蛋白，同時使用zmmikc2a目的基因進行pcr檢測(引物為mikc2a-f-1和mikc2a-r-1)，鑒定轉(zhuǎn)基因植株，鑒定時，以野生型目的玉米植株為陰性對照。

pcr反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性10min；94℃變性30s，60℃退火20s，72℃延伸2min，30個循環(huán)；72℃總延伸10min。

結(jié)果，檢測出18株陽性玉米植株，即為t0代轉(zhuǎn)基因玉米植株，命名為l1-18。t0代轉(zhuǎn)基因玉米植株成熟后，收獲t1代轉(zhuǎn)基因玉米種子，t1代轉(zhuǎn)基因玉米種子自交繁殖得到t2代轉(zhuǎn)基因玉米種子。依次類推，獲得zmmikc2a基因過量表達的轉(zhuǎn)基因玉米株系。

2.5zmmikc2a基因過表達植株的籽粒質(zhì)量檢測分析

2.5.1籽粒大小和百粒重測定

取8株獨立轉(zhuǎn)化事件轉(zhuǎn)基因株l1-8的t3代籽粒進行大小和百粒重測定，并以野生型玉米wt籽粒做對照。

結(jié)果如圖3所示，其中，圖4a可看出，轉(zhuǎn)基因玉米籽粒大小變化不明顯，圖4b可看出，轉(zhuǎn)基因玉米籽粒千粒重除l1和l5稍小外，其它幾個株系和野生型無明顯差別。

2.5.2直鏈淀粉和總淀粉含量的測定

取4株獨立轉(zhuǎn)化事件轉(zhuǎn)基因株l1、l2、l5、l8的t3代籽粒進行直鏈淀粉和總淀粉測定，并以野生型玉米籽粒做對照，每次實驗測定至少重復三次，測定方法如下：

直鏈淀粉測定時，首先對籽粒中淀粉進行提純，將烘干去硬殼和胚的玉米種子在室溫下用0.4％(質(zhì)量分數(shù))的naoh溶液浸泡48h，料液(樣本比0.4％的naoh溶液)比為1:3，洗滌后再用0.4％的naoh溶液浸泡24h，反復水洗至種子表面不再黏滑為止，瀝干水分，用膠體磨粉碎，淀粉乳過篩(200目)，離心(3000r/min,20min)，取下層白色沉淀,即為淀粉,將淀粉反復漂洗離心，40℃鼓風干燥，粉碎，過篩(200目)，即得淀粉純品，用于直鏈淀粉的測定。直鏈淀粉的測定采用愛爾蘭megazyme公司生產(chǎn)的直鏈淀粉/支鏈淀粉分析試劑盒(貨號：k-amyl)，測定方法可參見試劑盒說明書，在此不做詳細描述。

總淀粉測定時，先將烘干的種子去硬殼和胚，再使用組織研磨儀將其研磨成粉末，40℃過夜烘干，過0.5mm篩(35目)。總淀粉測定采用愛爾蘭megazyme公司生產(chǎn)的總淀粉測定試劑盒(貨號：k-tsta)，具體為：將研磨后樣品(準確稱量～100mg)加入到試管中(16×120mm)，確保全部樣品位于試管底部；加入0.2ml乙醇溶液(80％v/v)，用漩渦混合器混合；放入攪拌架子，加入2ml的2mol/l的koh至每個試管中，冰水混合浴中攪拌20min左右，重懸粉末和溶解抗性淀粉(注意：不要使用渦旋儀混勻，會使淀粉乳化，確保加入koh時，試管處于劇烈震蕩狀態(tài)。這是為了避免淀粉形成團塊難以溶解)；當試管在磁力攪拌器上攪拌時，加入8ml的1.2mol/l醋酸鈉緩沖液(ph3.8)至每個試管。立即加入0.1ml耐熱α-淀粉酶(試劑盒配置溶液)和0.1ml淀粉葡糖苷酶(試劑盒配置溶液)，充分混合，在50℃下孵育；孵育30min，間斷混勻；樣品淀粉含量>10％：將全部的溶液轉(zhuǎn)移到100ml的容量瓶中,用洗瓶沖洗試管,并也倒入容量瓶中,然后用蒸餾水調(diào)整溶液體積至100ml,充分混勻。取部分溶液離心(1800rpm,10min)；轉(zhuǎn)移兩份稀釋的樣品溶液(0.1ml)到圓底試管中(16×100mm)；加入3.0mlgopod溶液(試劑盒配置溶液)到每一個試管中(包括葡萄糖對照和試劑空白對照),然后在50℃下孵育20min；葡萄糖對照包括0.1ml葡萄糖標準溶液(1mg/ml)+3.0mlgopod溶液。試劑空白對照：0.1ml蒸餾水+3.0mlgopod溶液；相對于試劑空白在510nm下測定每一個樣品和葡萄糖質(zhì)控的吸光度。計算公式如下：

δa＝相對于試劑空白所讀取的吸光度；fv＝總體積(例如100ml或10ml)；0.1＝樣品分析體積；1/1000＝轉(zhuǎn)化從μg至mg；100/w＝淀粉作為干粉重量的比例；w＝干粉重量；162/180＝d葡萄糖轉(zhuǎn)化為脫氫葡萄糖；淀粉％(占干物質(zhì)比重)＝淀粉％×100/100-水分含量(％)。

測定結(jié)果如圖4所示,圖中可以看出，zmmikc2a轉(zhuǎn)基因玉米籽粒中的直鏈淀粉含量提高顯著，幅度在3.93％-11.42％(圖4a)，總淀粉含量幾乎不變(圖4b)，直鏈淀粉/總淀粉比例顯著上調(diào)。該結(jié)果說明了zmmikc2a基因能直接或間接影響淀粉合成過程中直鏈淀粉相關(guān)基因的表達，對直鏈淀粉表達起正調(diào)控作用。

2.5.3玉米籽粒淀粉顆粒掃描電鏡觀察

掃描電鏡具體實驗操作方法如下：

①取曬干的種子，去殼；使用鋒利的切割刀，將種子從中間縱切成兩半，分別標號裝到離心管中；

②向離心管中加入質(zhì)量比2.5％的戊二醛溶液，4℃過夜固定，倒掉固定液后，用0.1mol/l的ph7.0的磷酸緩沖液漂洗種子3次，每次15min；再用質(zhì)量比1％的鋨酸溶液固定，常溫下，1-2h，倒掉固定液后，用0.1mol/l的ph7.0磷酸緩沖液漂洗種子3次；

③從離心管中吸去磷酸緩沖液，加入梯度濃度的乙醇溶液分別對種子進行脫水處理。乙醇梯度濃度(質(zhì)量比)分別為：30％，50％，70％，80％和90％，每種濃度處理20min，再用純乙醇洗脫2次，每次20min；

④吸去離心管中的純乙醇，用乙醇和醋酸異戊酯混合液(v:v＝1:1)處理種子30min(間隔搖動溶液)，再用純醋酸異戊酯溶液處理種子1-2h；

⑤使用臨界干燥法，將種子從醋酸異戊酯溶液中挑到樣品籠中，用濾紙吸去樣品籠外圍的溶液后，移入到儀器的樣品杯中，蓋蓋，擰緊(注：在裝樣前，先打開儀器的電源，將溫度設(shè)定為0℃預(yù)處理10-15min)；

⑥打開co2排氣閥和儀器的進氣閥，向樣品杯中注入液體co2，當co2的量到樣品杯的50％時，關(guān)閉進氣閥，靜止15-20min；

⑦再打開儀器排氣流量計閥門和進氣閥，10min后關(guān)閉排氣閥；當充入的co2到樣品杯的80％左右時，關(guān)閉進液閥；

⑧加溫置換：將儀器溫度調(diào)至20℃，放置15-20min后，杯中的co2會逐漸氣化，當杯中的氣壓升到約為7000pa時，醋酸異戊酯會與co2充分置換；

⑨氣化：將溫度調(diào)至35-40℃時，杯內(nèi)的co2達到臨界點；當壓力達到7134pa時，5min后，打開流量計的排氣閥，以1.0-1.51/min的速度排氣，45-60min后結(jié)束排氣，樣品杯的壓力降為0，當溫度降至室溫后，即可取出樣品；

⑩鍍膜：將種子非觀察面，用導電膠粘貼到樣品臺上，膠風干后，進行鍍膜，本實驗采用離子濺射鍍膜法：裝置由真空泵和真空罩兩部分組成，真空罩內(nèi)有陰陽極，陰極面裝黃金靶，種子裝在陽極面的樣品座上。當真空罩中的真空度抽到1-10pa時，在陰陽極之間加上2000v的直流電壓，此時會產(chǎn)生弧光放電電場(在電場的作用下，真空罩里的殘余氣體分子會被電離為正離子和電子，正離子被陽極吸引轟擊黃金靶，激發(fā)出黃金顆粒和電子，并被陽極吸引附著在種子表面形成導電膜)；置于掃描電鏡下觀察，拍照。

掃描電鏡結(jié)果如圖5所示，圖中可發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因玉米淀粉顆粒小于野生型材料，說明zmmikc2a基因過量表達減小了玉米籽粒中淀粉顆粒尺寸。

2.5.4轉(zhuǎn)基因玉米籽粒中相關(guān)淀粉合成基因的表達變化分析

分別取野生型玉米和轉(zhuǎn)基因玉米t3代植株授粉后5d、10d、15d、20d和25d的種子，樣品取完后立即放入液氮速凍，凍存于-80℃冰箱中，備用。利用e.z.n.a.tmmagsi植物總rna提取試劑盒提取樣品rna，并反轉(zhuǎn)錄成cdna，以cdna為模板，以a-tubulin為內(nèi)參基因，利用roche熒光定量試劑盒，選擇11種已知的玉米淀粉合成相關(guān)基因進行實時熒光定量pcr檢測，具體為：

熒光定量pcr擴增使用的引物：

①內(nèi)參基因引物：

a-tubulin-f：5’-gggattgccgatcgtatgag-3’

a-tubulin-r：5’-agccaccgatccagacact-3’

②熒光定量pcr擴增玉米淀粉合成相關(guān)基因的引物：

熒光定量pcr反應(yīng)體系為：

熒光定量pcr反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性10min，95℃變性15s，60℃退火1min，共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，對產(chǎn)物進行加熱，獲得產(chǎn)物的溶解曲線。采用2^–δδct[δct＝ct目標基因–ct內(nèi)參基因.δδct＝δct處理后–δct對照]法進行數(shù)據(jù)處理。

以野生型材料授粉后5d的表達量作為對照，每次基因6次生物學重復和3次實驗操作，結(jié)果如圖6所示，圖中可以看出，zmagpl1在整個時期表達水平都高于對照組材料；zmagps1a-1、zmbeiib、zmisa1、zmssiia、zmssiiia和zmgbssia在10-20d時間內(nèi)表達水平高于對照組材料；zmbeiia、zmgbssiia和zmpul在20d時表達水平高于對照組材料，其它時期不變；而zmphol基因除15d表達水平高于對照組材料外，其它時期都低于對照組材料。上述結(jié)果進一步說明了，zmmikc1a基因的轉(zhuǎn)入對淀粉合成相關(guān)基因產(chǎn)生了很大的影響，大部分基因表達水平提高，從而使籽粒中淀粉含量和淀粉顆粒發(fā)生改變。

以上為本發(fā)明一種詳細的實施方式和具體的操作過程，是以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進行實施，但本發(fā)明的保護范圍不限于上述的實施例。

sequencelisting

<110>安徽省農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所

<120>一種玉米淀粉合成調(diào)控基因zmmikc2a及其應(yīng)用

<130>/

<160>2

<170>patentinversion3.3

<210>1

<211>810

<212>dna

<213>zeamays

<400>1

atgggtaggggaaggattgagatcaagaggatcgagaacaacacgagccggcaggtcacc60

ttctgcaagcgccgcaatgggctcctcaagaaggcgtatgagctctccgtcctctgcgac120

gctgaggtggccctcatcgtcttctctagccgtggtcgcctctacgagtatgccaacaac180

agtgtcaaggctactattgagaggtacaagaaggcacacaccgttggctcttcctctggg240

ccaccgctcctagagcacaatgcccagcaattctaccagcaagaatcagcaaaactgcgc300

aaccagatccagatgctgcaaaacactaacaggcacttggttggtgattccgtgggaaac360

ctgtcactcaaggagctgaagcagctggagagccgccttgagaaaggcatctctaagatc420

agggccaggaagagtgagctgctggctgcggagatcagttacatggccaaaagggagact480

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