欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

一種鯽魚冠狀病毒HB93的數(shù)字RT?PCR檢測引物及應(yīng)用的制作方法

文檔序號:11319605閱讀:981來源:國知局
一種鯽魚冠狀病毒HB93的數(shù)字RT?PCR檢測引物及應(yīng)用的制造方法與工藝

本發(fā)明屬于病毒分子檢測技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物及應(yīng)用。



背景技術(shù):

國際病毒分類委員會(internationalcommitteeontaxonomyofviruses,ictv)于2012年發(fā)表了最新的病毒分類第九次報(bào)告,將套式病毒目(nidovirales)中的冠狀病毒科(coronaviridea)中新設(shè)冠狀病毒亞科(coronavirinea)和環(huán)曲病毒亞科(torovirinae)。

冠狀病毒科是一類線形單股正鏈rna病毒,最早于1937年從雞身上分離出來,almeida等對這些病毒進(jìn)行了形態(tài)學(xué)研究,電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)這些病毒的包膜上有形似日冕的棘突,故提出命名這類病毒為冠狀病毒[1]。1975年,國際病毒命名和分類委員會正式命名了冠狀病毒科。2002-2003年期間,自我國局部地區(qū)發(fā)生的非典型肺炎,即由冠狀病毒屬的嚴(yán)重急性呼吸綜合征病毒(sars-cov)引起,世界上有30多個(gè)國家和地區(qū)相繼報(bào)道出現(xiàn)病例,病死率超過10%。2012年,中東地區(qū)開始出現(xiàn)新型冠狀病毒,病死率超過50%,引起了世界范圍的廣泛關(guān)注,造成社會對冠狀病毒的恐慌。因此,對冠狀病毒進(jìn)行深入研究具有重要意義。

目前對冠狀病毒科的研究主要集中在冠狀病毒亞科,而對環(huán)曲病毒亞科研究甚少。其中,2006年鳊魚病毒屬(bafinivirus)的中的鳊魚病毒(whitebreamvirus)由schützeh等科學(xué)家在鳊魚體內(nèi)發(fā)現(xiàn),這也是目前ictv分類中確定的唯一以水生動物為宿主的冠狀病毒。

目前鯽魚冠狀病毒(cruciancarpbafinivirus,ccbv)尚無公開報(bào)道,更也無有效的檢測方法。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明的目的在于提供了一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物,所述的引物如下:

f:5'-ctatggaatggaagaaacacgac-3'

r:5'-gagagttgatgtcatagctacaag-3'

p:5'-fam-ctgggacaacaccaaaaccacctaag-tamra-3'。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供了一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物的應(yīng)用。所述的引物可用于制備檢測鯽魚冠狀病毒的檢測試劑盒。

為了達(dá)到上述目的,本發(fā)明采取以下技術(shù)措施:

一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物,所述的引物如下:

f:5'-ctatggaatggaagaaacacgac-3'

r:5'-gagagttgatgtcatagctacaag-3'

p:5'-fam-ctgggacaacaccaaaaccacctaag-tamra-3'。

一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物的應(yīng)用,包括利用上述引物制備檢測鯽魚冠狀病毒的檢測試劑盒。

優(yōu)選的,當(dāng)制備成試劑盒時(shí),該試劑盒的非診斷性檢測方法包括:

一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測方法,步驟包括:

1)提取待測樣品的rna并逆轉(zhuǎn)錄為cdna;

2)微滴pcr

擴(kuò)增體系:2×supermix10μl、10μm上下游引物各0.8μl、10μm探針0.4μl、cdna模板2μl、ddh2o補(bǔ)足至20μl。

反應(yīng)體系:50℃熱激活300s;95℃預(yù)變性300s;95℃變性15s,60℃退火及延伸60s,共50個(gè)循環(huán);在60℃下采集熒光信號。

3)結(jié)果判定

(1)在利用數(shù)字pcr進(jìn)行擴(kuò)增的過程中,陽性孔的判定方法為:出現(xiàn)明顯區(qū)別于陰性反應(yīng)孔的擴(kuò)增信號,這個(gè)反應(yīng)孔記為陽性擴(kuò)增孔;陽性樣品的判定方法為:在相同樣品的三個(gè)平行組里面,至少出現(xiàn)一個(gè)組還有陽性擴(kuò)增孔,就說明檢測樣品中含有靶向病毒成分;

(2)陽性質(zhì)控品反應(yīng)孔中產(chǎn)生陽性結(jié)果以及陰性質(zhì)控品反應(yīng)孔中產(chǎn)生陰性結(jié)果時(shí),該實(shí)驗(yàn)視為有效實(shí)驗(yàn),否則實(shí)驗(yàn)無效,需要重新更換反應(yīng)試劑,并重新進(jìn)行;

(3)當(dāng)待測樣品反應(yīng)管中為陰性結(jié)果時(shí),則說明未檢測到鯽魚冠狀病毒核酸;待測樣品反應(yīng)管中為陽性結(jié)果,則說明待測樣品中含有鯽魚冠狀病毒核酸。

以上所述反應(yīng)體系適合于從病魚組織、細(xì)胞中提取得到的rna樣品,并逆轉(zhuǎn)錄成cdna,可以實(shí)現(xiàn)對鯽魚冠狀病毒的精準(zhǔn)檢測。

在本發(fā)明所提供的方法中,可以利用本領(lǐng)域常規(guī)的數(shù)字pcr儀器完成檢測過程。

與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):

利用本發(fā)明所提供的數(shù)字rt-pcr檢測方法和試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對含鯽魚冠狀病毒樣品的精準(zhǔn)檢測,靈敏度可以達(dá)到2個(gè)拷貝。此外,該方法步驟簡便易于操作,因此在實(shí)際應(yīng)用中具有很大的靈活性,是一種檢測鯽魚冠狀病毒的有效方法。

附圖說明

圖1為本發(fā)明提供的引物的特異性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。

圖2為本發(fā)明提供的引物的靈敏度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。

具體實(shí)施方式

以下將對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)的說明。應(yīng)當(dāng)理解的是,此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明,并不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明所述技術(shù)方案,如未特別說明,均為本領(lǐng)域的常規(guī)方案,所用試劑或原料,如未特別說明,均購自商業(yè)渠道或是已公開。

實(shí)施例1:

一種鯽魚冠狀病毒hb93(本發(fā)明或稱為ccbv-hb93),其分離過程如下:

1)將攜帶病毒的鯽魚肝、腦、脾、腎等組織取出并碾磨后,培養(yǎng)基稀釋100倍,2000rpm離心后取上清過濾,接種到草魚性腺細(xì)胞(grasscarpovarycellline,gco)單層,25℃培養(yǎng)7天,產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)(cpe),可見gco細(xì)胞收縮變圓、折光度增加,部分細(xì)胞開始脫落,細(xì)胞單層開始破裂。

培養(yǎng)基:m199,10%胎牛血清,ph7.0~7.2

2)收集病變細(xì)胞,利用透射電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

3)收集病毒,對其進(jìn)行全基因組測序,序列為seqidno.1所示。

鯽魚冠狀病毒的形態(tài)特征:病毒呈棒狀,四周有明顯的日冕狀棘突結(jié)構(gòu),與典型的冠狀病毒形態(tài)相符,該病毒已于2017年5月11日送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行保藏,分類命名:鯽魚冠狀病毒(cruciancarpbafinivirus)hb93,保藏編號:cctccno:v201722,地址:中國武漢武漢大學(xué)。

實(shí)施例2:

一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物,所述的引物如下:

f:5'-ctatggaatggaagaaacacgac-3'

r:5'-gagagttgatgtcatagctacaag-3'

p:5'-fam-ctgggacaacaccaaaaccacctaag-tamra-3'。

實(shí)施例3:

利用鯽魚冠狀病毒數(shù)字rt-pcr檢測引物和探針對鯽魚冠狀病毒的檢測,方法包括:

1.鯽魚組織或感染細(xì)胞總rna的提取及cdna的合成:采用提取待測樣品的總rna。配置逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系:3μl總rna,oligo(dt)18primer1μl,滅菌雙蒸水8μl,混勻65℃5min后立刻冰?。粚?×reactionbuffer4μl,rnase抑制劑1μl,5mmdntps2μl,m-mlv逆轉(zhuǎn)錄酶1μl加入冰浴的反應(yīng)液中,混勻后,42℃1h,95℃5min,將獲得cdna模板通過紫外分光光度法測定濃度和純度,稀釋至50ng/μl待用。

2.數(shù)字pcr擴(kuò)增反應(yīng)

1)配制微滴pcr反應(yīng)體系:微滴pcr擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)體系,以20μl計(jì):10μl2×supermix,10μm上下游引物各0.8μl,10μm探針0.4μl,cdna模板2μl,ddh2o補(bǔ)足至20μl。

2)在微滴pcr的生成芯片上,加入步驟1)中的20μl微滴pcr反應(yīng)體系,再加入70μl的微滴生成用油,進(jìn)行微滴生成步驟,完成微滴生成步驟后,將微滴化的反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移至96孔板中,封膜。

3)將封膜后的96孔板放入pcr擴(kuò)增儀中,pcr擴(kuò)增程序?yàn)?0℃熱激活300s;95℃預(yù)變性300s;95℃變性15s,60℃退火及延伸60s,共50個(gè)循環(huán);

完成pcr擴(kuò)增后,將微滴吸入流式熒光檢測器中,在60℃下進(jìn)行熒光檢測。

出現(xiàn)明顯區(qū)別于陰性反應(yīng)孔的擴(kuò)增信號,這個(gè)反應(yīng)孔記為陽性擴(kuò)增孔;陽性樣品的判定方法為:在同一組的三個(gè)平行組里面,至少出現(xiàn)一個(gè)組還有陽性擴(kuò)增孔,就說明檢測樣品中含有鯽魚冠狀病毒核酸。陽性質(zhì)控品反應(yīng)孔中產(chǎn)生陽性結(jié)果以及陰性質(zhì)控品反應(yīng)孔中產(chǎn)生陰性結(jié)果時(shí),該實(shí)驗(yàn)視為有效實(shí)驗(yàn),否則實(shí)驗(yàn)無效,需要重新更換反應(yīng)試劑,并重新進(jìn)行;當(dāng)待測樣品反應(yīng)管中為陰性結(jié)果時(shí),則說明未檢測到鯽魚冠狀病毒核酸;待測樣品反應(yīng)管中為陽性結(jié)果,則說明待測樣品中含有鯽魚冠狀病毒核酸。

實(shí)施例4:

鯽魚冠狀病毒數(shù)字rt-pcr引物特異性實(shí)驗(yàn)

利用實(shí)施例3所述的方法,對表1中的待檢病毒樣品進(jìn)行檢測,同時(shí)設(shè)置陰性對照組(雙蒸水)和陽性對照組(ccbv-hb93),待檢病毒樣品具體為:鯉春病毒血癥病毒(svcv),草魚呼腸孤病毒873(gcrv-873),草魚呼腸孤病毒9014(gcrv-9014),草魚呼腸孤病毒104(gcrv-104),傳染性造血器官壞死病毒(ihnv),傳染性胰腺壞死病毒(ipnv),病毒性出血性敗血癥病毒(vhsv)。

表1鯽魚冠狀病毒rt-pcr檢測試劑盒特異性試驗(yàn)

結(jié)果如表1所示,僅陽性對照組(ccbv-hb93)可檢測到擴(kuò)增信號(圖1),其余組均無擴(kuò)增信號,說明鯽魚冠狀病毒數(shù)字rt-pcr檢測引物具備很強(qiáng)的特異性。

實(shí)施例5:

鯽魚冠狀病毒數(shù)字rt-pcr引物靈敏度實(shí)驗(yàn):

本實(shí)驗(yàn)采用鯽魚冠狀病毒陽性樣品ccbv-hb93的cdna進(jìn)行10倍梯度稀釋。通過實(shí)施例3給出的檢測方法進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示本體系在2個(gè)拷貝的模板量下,可以產(chǎn)生穩(wěn)定的擴(kuò)增,即本數(shù)字pcr的檢測方法在擴(kuò)增體系為20ul時(shí),最低可檢測到為2個(gè)拷貝(圖2)。

雖然,上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述,但在本發(fā)明基礎(chǔ)上,可以對之作一些修改或改進(jìn),這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此,在不

偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn),均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。

sequencelisting

<110>湖北出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院安徽出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心中華人民共和國龍巖出入境檢驗(yàn)檢疫局

<120>一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物及應(yīng)用

<130>一種鯽魚冠狀病毒hb93的數(shù)字rt-pcr檢測引物及應(yīng)用

<160>4

<170>patentinversion3.1

<210>1

<211>26000

<212>dna

<213>人工序列

<400>1

ttgaattaccaataaactaccacccgctatcatagcactagacactagcgaactgctagc60

ttcctccaagctgcacaacgcaaactgtctttttaactctcctaacctcgaacgcagcgc120

aggtaccctcacccggaccacgcgtgtgcccttgactggaaaccctaccttcgatcaggc180

cttcgaacgcagcaaaggtaccctcacccggaccacttgtgtgcccctacgcctgctctt240

acgtagccccatcctacccacccgccaactcttaacctatcagctttgcccaccgtgacg300

actagacgtgatctaactgctactaccaatcctattacaaccaacttgcccaccaagacg360

actagagagtgacgtaactgctactgcctaaggcactaccagcgaaatcataatctgctc420

ctcttgacccaagacggtttggaacggtgctactagtgaactcacttctgctccttgcga480

cccaaagacggttattatttggaaaacctcttacagactagagtcttgaatctccactgc540

tactgtcgaagtcggtgtgctgcctttataaagccggtgaactgctactgttcttagaac600

attatcaggaatcctgctgaattttgtcagctatccctccaagcgctactagtggtctct660

tacctctactctgcccctttacctactcaatataacttaaatctcttctagaatcgcgct720

agcgcaaaccttcaccggtaaccgccagaacgtcctacaagctctcaaccaccggcactt780

tgttgctaaatcctacgtgcaagcatctttttgctataacatccacgttcgaaaatcaac840

aaaaatgcccaacatgcgaatccgcaagattgctcctaaagccgctgttaaaccaaccca900

tagcggcccaagagtggtctccaatcccgcaagctgccacatttacatcggaccccaact960

gcgtgctcacaactacccgagcgtgctaaagggttcctttaaggctgccagcgcggaaac1020

cataacagctatcaacctaattgccaccgtccgcaaggatgctggtatttcaggtcaata1080

tgctgggaagatgggttatgaccccgagatgggacttttcgtttccgtcgaaggtgttcg1140

tgctctccaagcttccaaactccaaactgcccttaaggcaattaaaaagggtactagacc1200

ctttggccttttcaggcctaaacagagtgtgactaacacccacgctcaaaatttgctagc1260

cctccaccgtgctagctccaccggcccttggaccaaacacttaccatctcaaggtcccat1320

aggtaactgcctcgcagaattcatgcaggagtacactaccacaattccaccatttgatag1380

tgtcctcactgaaaacggttggcaatacgctgtcacgattgacggtgtgactaaatctcg1440

cctcccgtacaccgaaattcgccgcggtggttatgaatttaaaacaactaattaccacat1500

cggtgcaatccaggttactgccaaccacattggcaaagtaaaccctggagatactaaatt1560

ggactgtcaatatttcatgttgacacgtaatcaaaagccccaaaacttcactgctgagca1620

actcgaaggaaacatccataacatcatcttcgacctcagtcatgaaactggcaaacccaa1680

actctatggaatggaagaaacacgacaatgggctgggacaacaccaaaaccacctaagaa1740

aaagcttagacttgtagctatgacatcaactctcagtgccactccatcaaccacacaccc1800

agcgcccctaacaaccacacgcgcaccacttaaaacacacatttcaattggcccgcacaa1860

ctgcaccatcatagatattaataaagcccaattcgcctttgataactacacttctcaact1920

ccctaactcttgtgttcaccgtgccaacaaagctgtttgcgccggtttgaatggctgatc1980

ctttccttttcctacccactttaactacctctctaaagtagaaacatctaaaggaactta2040

tcaattggggtacattttagccccaaaactacggcccctgctatccaattctacgtcttg2100

caatttcagaaccacgtctacctacgtcttctccccatgcctatgaacctttctttccgc2160

actatctgcgacattgaaaccgcccacggtcaaccacacccaacttacacaagcccagac2220

tggcgcgtgtattacctcgcaaagtacgatcccaccaaagtactcagagttcaagttgtt2280

gattgggcaggttcagataccattactgaagatcatgtcaccctcttcccacgccgacac2340

attatgactaaagttttgaaaaacgaccaaactaaagttaactacatcgacccaactaaa2400

gatgcagcaacaacacccttcacaattgaaacagttgaaggaggcaaagttgaagtactc2460

tccgccaacgtcatccgtcaaattaacattgaaactggtcgcggcaagaaacgtaaaaca2520

gctaaattagatgtaaaaatttcaattagagttaaagctactaaaacccgcacaacaatt2580

cacgtcttcataacccaagcaaaagatgaaagcaaaatcgtcactccaacctcagaaatg2640

cagggagtagttgacgttttaatttccagagcatgtgtcctctcacaacacgcaggacct2700

gacatgacttatgaactgcacacacctgacggttcttgcactaaccccctcgttcaattc2760

tttgaagaagaaggcgaggttcctgaagatgtttacgatctcttcccatctgtagaacgt2820

aacgctgaaggcttagttatgtgcatgccagaaggttttgccctcatctctggttgcatt2880

cctcatccacttgcttactatgctgacaagtacggtcaaacactcgtacctgaattcaaa2940

gtgacaagaactcacgttgaacgcggccccattccaccatcacggtccatttactacaca3000

ttcatcccaattaatgtagactccatcccacccttcggacacacctacaaatccctcgcc3060

aaacttaacacatttaacctgggttgggaagatcaagacatgttagataacgctgacacc3120

ctccttccatgtctcttagaaaatgaaaacatgaaacttcacctaacatggaaaatcatc3180

gcccgtgacttctcagataacaccactgaaacagcccttactacctacactgattttaca3240

actagtgatttcaccccagccaaccaaacaggatccagctctcaatcccttagctctcca3300

cctctttcccaactctcttcccacaaatctcttgctaacctctcagaaactggctcaata3360

gataacatcccggaaaacacccctgaaacaatccaagaagaagaagatatcgaagaggaa3420

gtaacatctcctgttcaacccacactcaacacactccaagaacaagctactctcaacgaa3480

tccattcaatcactcgttgaatcagttgattctgatgtcccttacacctgggaacaacgt3540

gttgaagaaagtgaggttgcaactattgatttacaagctgtagaattagatcaaacaccc3600

actcccaccactctctcaacagaagcagtgcaagaatgggtcaacgcaacatcacctgac3660

cttgctacagtagactggaacagtgcaataactgaacaggaaaccacagtaacttcacta3720

atagaagaaatctccctacgccccaacaccaacaacaccggctataacttgtttaaacct3780

aaccaacgtaacaacaacagcccatcagactacctatcacgaacaacatcagcaaccaaa3840

cactgcttaattaacggtcttacttcaggttccaccatccttgaagtcggatgcggatat3900

ggtaaagaattccacaaatacaagaactctaacatcaaagtcgttgctttggaacctcac3960

catgaacgctacaccgaagccgcgaagaaactaccaccaaattctaccatttacaacaag4020

accctagaagaatacaaccaaattgtcattaaagaacaaattgacgccctagtttccttt4080

aacgccattcattacagtacagttactgaagctcttaaagcatgtaaccttgccaaagat4140

caagttgtcattttaacaccaaatcatgataaacttaaagctcttcacgatagtaacaca4200

accatcacaaattacaaaattgaacttgctaataacaaatttacatttacaatcggccaa4260

aacacctacagcgaaaactacttctcacttcaggatttcatgattggaatgcatgccagc4320

aacttcatgctttcttcccgctcttgtactctgcttgaacatgttaacaccttcaatgcc4380

cacctcttaattgacgccacaacagaaacaactaccctgctagacgcctatgaagtactc4440

gtcttcataaaatttagaccactgctcctcacctactccaacaccgctcttgcaactaac4500

aactcaagaacaatccgcagtgcactctcacgtcttattaacttccgtgtcgcaccttct4560

aaaacaacatcacaggtacatgttcacatcctcacccgcaacgaccacgcaaccacagaa4620

caagaacatctagacttagcaaatattgaaattgcccacatgaacccaaaaccagtaatt4680

atctttgtaacttcttcccgatccaaacataactacaccaccccaactgtcttcttcgac4740

tttgctacactatcagcccccaccctcccagaacagcttaaaccactcactgatctagcc4800

ctcgcaatccaacacactgctaccaaaactccaacaacagtacttacaactgccccagag4860

gacccaaaaaccctcccagcagcacccacctcctttacaaaaccttcccgtaaacgctac4920

cactgcttccacgatttaaccaccctaccagttaacaaaaatttcatcttagttaacgca4980

ggtaacccccacttaaaatcaggtggtggaataactaaagccgtctataatcgctacggc5040

caaggattcatgcaaactaacaacagcatgcatgctacacaattacctcttgaagttggt5100

gacgtcttggaatacccctctgaccgtaacaacctgattaacgtgacagccccctgcatc5160

aacatcaaacacgcagattacaaaggcccacaaccagcccacgcactactagcaacatat5220

aacgcaattatcaactacgttgaacgtaagtacgataatggtgacgagaaacacgtcttc5280

attcctctacttggtgctggatactacggttggtcacagatccaaagccttcaagctttt5340

ctatccgcgactgataatagtttccgcaacacatatgttctactcctacacccatcatct5400

gtagatgttgaaacagctgaagtatttgcaaaaatgctcgccactactaacccacactac5460

taccatgttgagggcatagctaaagttaatgccaactcttgcgttctgcgtgcccacatt5520

gaccttgcccgcaaaacatcttaccctcaacctagcttaggattaatcggcgcttactgg5580

atgtacacctgccccaccctggccgccccattgatacaagctggcatgcacggtcccaac5640

acctggactcctggcagctttattgatactagtattgctgaaatgactgctcgcgcttac5700

aaaataaatcttgtttgcgacggttgcttcactgatatcatcaatttcaatcccgaccaa5760

ggtttaatctgcaatacctgtaagacacctgtcactctccggacaaactattatcgccca5820

cgcctcccacacatgattaaaaatagtcacggacaacccatccctaacattattctggat5880

ggaatctaccacatggccacgcaccaattgttcctaaattcggtactctttaaaaattca5940

catgctttcacaattaacaacctaagtgaatgtgatctcccaacaactacagcagtagca6000

acctacttttacaaaccttcagatgctttaaacttcttcctgaactttaactctgctatt6060

tctgctaacgtaacttatacatcagaacagataacacaagctcaaaccacccctcaactc6120

accactgatgatgactactcggacttggacattgacacaattaaccctacacctactact6180

ttaccacgcgtcccaacaccgctttcaattagtgatagtagcgaagatatctcactctcc6240

gatgacacccacaccgtagcatcccatcacgcttcacaaatgtccataacagccgacata6300

actagtgatagatatagctctacaaactctctagctatctcagaagatataacatttcaa6360

acaggtgacggtgaaacaacaacttcacttctgactgattcggtcctatactactctgtc6420

gttacagtcttacaactacgtaaagcagaggattgtgtagaacctgctgtagaaactatt6480

aacctaagacccaactcatcacttcataccttgacacatgacacaaacgccatcgaccaa6540

ctttacatccaagtggcttctgatgcttcaaatcacactgtaatcaataacaccacactt6600

gaatctatttctaaaacgatgtgtgtgaaaaactccttgtacacccttcttactaactca6660

aagtgtataagtcaccacatcatagttacaggatatgaccaacatgctcatgaaacacat6720

accattaaaagcgtcacgcgccaaactatgctcgccatccaacctctcgtacaactcacg6780

cccacacacgtttacagcacacttgaagaagatatttccaccatctttcaaactgtcgtc6840

ctagaacatgtcaaccacactaagctttccacttataacaccaagctacactacgcaact6900

acagtaccaacaaacctactcatcgatggaacaatcgaagatgttcaaggtaagctgcgc6960

gaagttgatttcggcattgttgttccttaccagtgtgaagttgacgagcaaattgaatac7020

acaaatgcaattggcgacttactctaccaaaacacaaatcaccactcaccactagtgacc7080

tttgtttctatcgacaaatcttttactaaacgtatttttaattctttaaagtttcaaact7140

ctacagaacctatggctctaccttattaccctacaagtatttttcacagttaaaggaatt7200

ggcttcggcttcagctcaacggaaccaaacacacaactcatgaacggtctctggatacaa7260

tacggcatcttctacttccaagtacacctccaaaccctcatcacccacccagtgaaaaat7320

ggctacagactactttcattaccaatcatgctatacaacaaaggcaaaagattcaccgaa7380

cgttcagtccaaacaatgacgggagaaatcgttaacatacgaaaaccctcgccatcaaac7440

gctgtacaaaaatacggcattaacacccgacttgaatacgttgacatcttcgatctcctc7500

cactatacacctggatacatcgcatttaatttcgccttgttgtaccttttttctggtaat7560

ggttacataacattcttagcctacaccattcaattcttcactgctcgtgacatttacaga7620

ctctctaaacacctttacacagtctcaaaactcactaccttcctctcgaaattcaaaaca7680

gcaaccacccgccacgtcttgtacgcaactaatcaagtaaataaccgttccctccacctt7740

acccttggatccacaacagttgacttacttagctttacaagcaaagcagtttttctcgcc7800

ctgtgctcttctttcatttcatggcatttcggattagctcttgccggcggccactctggt7860

gaagactactctcgaccaccctaccatgcaatatttcaacacgcactccgcactttcgga7920

cttatccctcctaaagaacattactatagctacccttccctagcttcagcttgcgcagac7980

tcctcagctccactttgcttcctgggaacaccatttaactttcacttcccatcatcctac8040

acacaagcagcatccatgactactgaacacgtagtaccattttggattcaactaatcatc8100

ctagccccaccatcgcttttcctagttgtcatcccgtggctgatcacaatgttcatctca8160

ccagtattaacatttaaccaacttttgctccctgcactcgccgtacatttcttagctatc8220

tatgtaagttacctttactattttaagaaatcatgctgtcattctcacacatgccttaaa8280

cacgctaaattagaccgccccatccaaattaaaggcctctttgatttatccatgtacttc8340

aatcacaataaactttgcccccgccacaacttctactgtaataatgctgacgaacccggc8400

cacacacttggacccgtcctagcagctcacatcactgaattttaccatcttaaacctggc8460

actattaagcccgatgtcgccctagtacacacagaacaccacgcttctctgagtcgcaaa8520

gaattgaagaaacacgacgacccaaccgattgtgtctggaccgccccacaaggcgctgct8580

gatactctcgtctacgaagcttacgctcatttgaaaggagtccaaattcgcattgatgcc8640

aacaccgatacaacaactcgtagcatgcctattcccatgggcgctaagacaacatcttct8700

ccagctacaggtgttatcaacacaaaagttctcggccatcttaaaagacattgtaaaaac8760

ccggctctccaatcttacctatcaggatacgtcggcgcccctaacgccaaaaccactatc8820

atgcccattacgctctttaaacatttgcctgaaggccttaagaaatacgccatcaaaaac8880

atcaccttctcaattaacatgctaaccgataactctaactcaggtttcattccagaaggc8940

atacacaacccaaacaacctcccaaccaagactttcctggtcaaatctattgatcaaaca9000

atctttgaccaactccaccctgaaacacaagctatgcttaaagacgaataccacattaaa9060

cttcatgacataacatctcaattttacgaagttatttcttcaatgatgtcctacgaaagt9120

ttcatcttcgcactcatcatcgtcttatccgtctttctcggtttcatctcctacagctct9180

accattactgccaccacatccctacatgccggcttgaaccccaccatgcgcggatccacc9240

acaggtaaaccattcatccaaccagttacttaccccaactccattctaatccctctgaca9300

tcttcccaatataatgtattcagactacaaaacggaactctctacttcacttctcaaata9360

actgctccaacctgtaccgttaaactaccaaacccctacattggcttaaccacagaaaaa9420

ttctatgaatgctcatctgccctcctccacatgcccttcatggttcatcttggcggtgtg9480

aaaattgcttaccttagagccggtgttgcctataacatgccaacatactcagagacacca9540

caaactagtaaactctgtgttctcactgcactctcaaagacgaaatgctttaacatccta9600

ccaggcggtttccacaccccagtgctagccatcctcgtttcaacttgtgcacttctggca9660

acggtcctcttctacctttacctactccagatctttaaattctacaccaactcagtcttg9720

atggtggttgccattcaaattgcaactatcttcctcttcatgctatccccagctcttgct9780

ctaacacttcaactggtctgtctcatgtacctttaccataactggatggttgccatgatt9840

aacatcgcaaacctcgcagttctagcccacacaacatttggcatggtactcatcttcatc9900

tacgcgctctacagactttacaaagtctaccaagttacatcaaccgctgcagttacaatt9960

aacgcaactggtgaaatgcgcttccacggaactcttgatgaagttgctctctgcaccttt10020

ccaattagctctgcaagtgtttaccaaatcatgtctgacctcagcttagattacattaaa10080

ctggccagctacaaaacatcttataaccgtgctacccgtaacctggttaacatgatgcaa10140

agatatattctcgatacctccatcccagctatactctatgacggctcagtaacaactggc10200

atcatgcaacaatccctagttagacttaaatccctagttacaacagtttacaaggataac10260

tactccaacatctgcaaaattttatcaacaacccactcacgatcaacattctgcgtcgga10320

actttccttaacccaaccactgttatcacttgctcccacggaatcttagcaaactctact10380

attaccgtctcccacaagtcaactatttatgaagcaacaattgaatcacaacgcaatgat10440

atcacaattcttaaactcacaacaccaaactccgcaatcactcacaccatcgagtgccat10500

tcaccaaatgacgctgatctcgaaaatatgcaaattaactacacccaatttgttactttc10560

gctgataaagatcactcagatgccatagccatgaacaacacaacctatttaccatctggt10620

cacttctttgctatcggaactgaatctggcgaatctggcagtccctacttctttaacaac10680

aaacttgtaggaattcactacggagttaacacctgtgatcaatttatgctcgcctctaaa10740

cctgatggcagttactacatcccagagatccaacacaacatctccacacaaccatctttt10800

agccttagttgcatagcccatggtcgaaaatcggtaaccgccaaaaacacccccacactt10860

cacgatgctatcaccaaagcccttgcccaaacaacacgctcagcttacaccaacgattta10920

acaatagaccacacacctgaacaacttcaggctgtccttgactttctgacaaaccctctg10980

aataaattaggccctaagacactccacgactacatggcaacatccatccaagttcaatct11040

accaccacagcccaatccgcccacattgacgtccacaaaccaattagacaagcagcaact11100

ctctactatctaatggttatcatttttgacatcatcgcattcttcttaacccccggttct11160

gatttctctaatcaacttgtatccatgactgcctacctagctgcctggttccttaataaa11220

acatgcttttacaacacccatgtcctttacacagtaaccacatgcttccaactctgcaaa11280

tacttcaacatcgtctatcttttcacaatcattcaatcctataaaccaattgaaatgtca11340

atgatggataaacaatatgatttcctttgcgccatcattgtagccctcttactctctcca11400

atcctggtcctcatctggaaacgcctctgcaacttcacctggcattatcttgtcgctcat11460

ctagttgttggttgtgtgctttgcatccacgtcttcttcagctacagatcctttacatct11520

tcaacaggcggtctattaacattttcagaattcgcctttaactcaccattaacagcagtc11580

ataacagctacagttgatgaaagtcctgtttctgttattgtctacccactcttgcagcat11640

gtcatcagcgcaaccctgatcttagcaatcgtgccatctcccctcctcgcagcaacagtc11700

tactctttctatctcattgaccaagatgtcctctgcctcctaatctttctcctgcttaca11760

tccaaactgacaccactcttcctccgcccactcacaacattcgtttcctacgatgttgtc11820

attctctcaccctctgcttacgctcaatggctcatggcaaaatctgaaggtaaagaatac11880

ggtctctttttcgctgtcattcaatcagtctttgattttacatctcaacacgaagttgaa11940

ttgacacttgaagcacaagagattacacagcaagtccgtgttgaaattcataacaccgaa12000

cctaaagataccaaggatgacacctgctacatcacacccactactattattaacccaatt12060

ttaattagaactgacaattacttctacaccaataccaagaaagtgatctgcgaagctccc12120

attgaattatcagacaaggctaaagaaatcgtcgctaaacaacttgacgctatcccacat12180

cctgatttagagacaattgacttagaagttgccacacttattgactgcacaactacaact12240

aagcaatcagaagttaaagaaatcgaagtagatgacttaacacacgcctatctactcgct12300

ctcatcaaagcaacttgtatagaatctggcctccccatcccagtgatgaactacatttca12360

tcccaaacccaaattgattcagtgatgatccattacttcgtcaaagccgctaataaacta12420

ttgcttaaagatcaggaactgcctctcattacagcccaatctgacacctccaccattcaa12480

gaaaccttggaagctctcaaattaaaggacaccaccctaatgaacccccaagaacttaaa12540

gctcaccgcaaacagattaacattctgaaagctgaacaagaacgacagctatccatggaa12600

cggaaactcaacgctttcctagacacaatgcaccaacgtgctgtggctgaaaagaataga12660

tcagaagttcacagcaaagtatcagctgctctacgcatgcacctttcaaaggttgcaaac12720

gctgcacattgtgacatggaaacaacagacggtgttatcacactatgctctgctttctct12780

attcgctcagtctgcattactcaaaacactgcagatgtctctatctactactcacaaccc12840

acagatacatactcaatcacaactaccaccacagtcttcacagcttacaaccctatgaac12900

gccaacggacaacccatcattccaaccactgacccttacaatcctatcatttcattcccg12960

gttatcttctcactaaaacaccgtgaggaaaaatcggagatagaacaacaagcaaacgtg13020

ggatactccgaacgtgccataaaaataacaacaactgaacacgccactggtacagttctc13080

atgattgacaacattacatctgtcatccccgccactaaaaccgatgctcgcttcaccgta13140

aacggtaaaggctacaagatcgtcgacaatgccgttgcccacaaagctcgtgctaacatg13200

tctacaattcttgctgtcttgcgcaaatccaccatcagcgcacaagcagcagtagttaga13260

attggcggtgctagataccaaacatctcaccaagctatctctttcacccccttccaaaca13320

ccaggctatgttacctacgcaggaatatgcgtctgccaacgctgcacactcagagaacaa13380

cacgagtgccactacgcaggtaactttgtccagatacccactaacatctcgacacaagga13440

cttaataaaatttatgaattaacatctatcggcccatgcaaacacaaccaatttgaatgt13500

accacatgtcaaccagatctaattacaaaagcccccggacaagtactggtttacttcaca13560

gcccacgcccaaacccactataaacaaatagttactcaaatctgcaagttttaccaagtt13620

aaacaatgcaactcccaaaagcatgcagatttcactatccacataattccacacggccac13680

tcaactgatacaactcatcctaacaccaccgttctagttgtacgaaaacacctagtcgat13740

ccagatcctgaacctccacacatcgggataagttccaccttaactggcgaagaactgatt13800

actcttgacagattactacaacctgctgtcgagcctcaaactaagtcgtttttaaacttc13860

tggagcgggtggtaggtgtatcgttaccatccgctagcgacccttatacatcagggagct13920

ataaaccgatacctcgtatcttttacattaacgttgcaacacgtaatgacacaaaattag13980

ataaagtctccaaactcaacacctggagcatggaaacaccaagcggaattatcatggtaa14040

aaaatcgtgacgcctctaaagaatttgatatagctaacaacctaccaaagtcactaccaa14100

ttttaacacataaactcatgacttacaaccgcgacaacctcctaatcagatactacacaa14160

caccttactcactaggagaccttgtctacgcttaccaactcggcgattttgaacaccttc14220

tactcgcggccggactttcaccaaatcctgcccaattgctcgaccctggtaattacaccc14280

aatatcaacaaacaaaagaacatctcagacaaattatctacagatctaatggaaaacctc14340

cataaaatcatttattacttcaccaccactgataaatatctgccgctaaccctggacaac14400

attgatcagaacggttatttgtatgatttcggtgactacccagctaaaagtcccgtcaat14460

aatcaccacgtactagaatcatggacacaattctgtgtattctgcgaagttaaccttgct14520

gaactaccaggttttaacctctacactcaaacccactcaactccacaaattataaagagc14580

cgacaagacctagtctctggctcctacatggataaactactagctcttaaccacctaata14640

gcagcaaatccagaagccccttccaccgcttccactcccttctttaacgcctccgcagcc14700

acaactgacatggtcggcctacactcaccactctttggctaccatgaagtcaacaatgat14760

ttgattcgctctaaactctcaccaacagaagttgacttcatcagatctcaagattctgca14820

aactatgctaaacccaacgtcatctccatcggcaacacaattagctactacggcaaaaga14880

ataacaactaaagctgcccaaagaaaacctcaatacgatctcgacatgctcaaaagatta14940

gaatcaattggcatcagcacactcgctacaacatcttaccactaccaagtagctgacgat15000

gaacaatgtgtgcaagattttaaatactacgattacaactcgcccaaaacctatgaccct15060

aacttcctcaaggccatctaccactacatgcaagacatcttttccatttacaaaactgat15120

gtttcccttaaccatgaaacaggacaaccacgcccctcttctatgggtcttggaatcaca15180

ggttttactcaaaaagctgtttggcagtctctaccacctgattttggcccacgcatgctt15240

gaagttgcaaaagaaactctactaccatttacaacaaaggtaattgcaaaatacgctcgc15300

acaaagaaagcccgtgcacgtacagtaggtgcttccagcttcgtcgcatcaacagttttc15360

agatttcttcacaaacctgtaaccatgcgcatggtcgaacaagcccaaaacaacattggc15420

ccactcctaattggcgtctctaaatttaacggcggttttgataaatacatccgtactcaa15480

catccaaacggtatagaacattacaacgtcatgggtgcagattacacaaaatgtgatcgt15540

agcttcccattgatcaaccgcgccttcgccgcagcccttttctatgatttaggaggttta15600

ccatctgacaacatgtggtttatcaacgaaatatccgccttcatgactgacttctgcaac15660

atctcaggtcacacatttaataaaccaggcggcacaacatcaggcgactcaacaactgcc15720

ttttccaactccatctacaactacttcgtacacctcactgtacaattcctcaccttcctc15780

tcagccgacgtgccagaaacatacaaacatcttcaaggttctgctcatcgcgcttactca15840

actggaactctcgaagattacaacacctacttcgaactcatccatgatttaaactgcact15900

gaatacttctttcactttctcagtgacgattcttttatcttctcaacccaagaagctttc15960

cccatcttcacaacatctaacttttcaaccaaacttcaatctatccttggctgcactgtt16020

gacgtaactaaagcctgggctgcatctggacacatcgaagaattctgcagttctcacatt16080

gaagaaatcgacggtgtctatcaatacattcctgatcctaacaacatgatcgcaggcttg16140

tacatgtccggtgacccagtaccagtagataagaccatctggaaactagttgctacactc16200

agtgaattggccatttttcaacacaaggacccatcactttttaacgccctttaccaactc16260

cttcaaaacatgcacagtgaatatgtcactcaacacaaccacgctctcctccctcttcaa16320

ttgcttaataagaaattctacactgatctacttcaaccaggatttgatactgaaacaatt16380

ttcctcactgacttgctaacatctgtcggtgtgaaactccaagcatctaatgattcacaa16440

tgctacttctgtgacaaccctacaatttcaacatgtgctgattgcgtagtgccatatcct16500

atgtgtgcactctgcgcctacactcactgggttcaaacagaccatgccccctcacaagta16560

ccaccatgtgtgtcctgtggctgtgtcaatcctggaaagctttaccactgtttcactggc16620

agcgttaaaatctgctgtcaagatcatgtctctggcctctccctacctctagtagaccac16680

gccaagaaagtaattagaatacccctctttcaaaactgcgaacgtcaacgatccctagtc16740

catgcaataacacacacggccttatttgatgacaatgatgaaccacttaacaccgcaaca16800

ttttccaaatatgatccagaacaaactaaagaagaaaacttcgtacgcatcttaaacgat16860

tgctatatgcttgaagcctaccaagctcaccaaaacccagcatatacctatgacgttact16920

gaacctggcacaatagtcgtatcacaacctccatcaacagcatatggtaactgtgtctac16980

gctgaaattctcgatgacaaaaatcgtgtcgtcttgaaagtcactcttgatacaaagtca17040

gtactaacacctactgtctaccatgtaacatcttgtcgtggtacactttacactcgctac17100

aataaaatccgcagagttcagcacaaaccttcaatagttcctagatcaaccctagcctac17160

tttaacaacgcacaattcataattggaccaccaggaacaggaaaaactactttcgtcatc17220

aagaactacattgacagagcagaaccaactaacaaaatagcctacattgccccaacacac17280

gcactcgtacaagctatggatcaagccatcttcgaagctcacggatatgcagctagtgtc17340

aacatcgttaaatcagaacttaacaacaagacctacaactacaaagcaaacatgcctgga17400

tgcgatatcatgctcgggacacccggagctgtatcagcgcacactggttgtaccatgatc17460

ttcgatgagatgtcacttgtacagttgaatactgctatgactgcaattgctcgagtaaaa17520

ccatctaaactcatccttctcggtgacccatttcaattaggcccagtagttcacttcaga17580

aactttcagtacaactacgaagacttcccctatcttcatttcgccccaacaataacatct17640

ctccgcgtatgcttccgatgcccaacccaaatctttaacgtatggagtcactactacacc17700

aaacatgacatcccactcaatgcctttaaagacggcggctcatttgaaatcattaaacac17760

cactcatgcgccagagtttcagaaacagctcaccctctggtcacaagactctcagaagaa17820

aatccagactccatgatcctttgtaactacaaagctccagtctcctgcctcgaaaacgct17880

ctaacaattgactcaagtcaaggcagaacctaccgagacgtcatagtcgtgttgctcgga17940

aacacaaatttcacccgtgtacccaaccgatttattgtcgctgcttcaagagctacacat18000

tctctcaaagtttacctttctgaagagatgtacgaccactactccacactattcaattgg18060

ccacacttagaaacaccacaaatccagccacaaaacgccttcacaacacctaacaactta18120

gaagaaacaaatctcacaatggccgctaataacatcagctctctcgtcatctgtgatata18180

gaattcttccatcaagttcgcagccttgaacccaaagtttgcacacttgaagtcggtgac18240

attaccatccatacatcaacaagcgccaaacagatcatcgttccacgcgtttcatcaaca18300

tctagtgaaatttttccaaaatactttgctcataacatgccaaccctcactctccccaaa18360

ccaacaccaaaaggagattgggactacatgaaacctcaccgtggaatttctcgccgcatc18420

aacatcgacagaactcacaaactcttctcccatatggcttgcacaacaactggaactccc18480

atctatgttctctacggtgcccgcaacgatatcctagccctttctaaattaaatatcgtt18540

ggtgactataaatgtttctgcaatctaccagctaactacttcaccctagatgcccaagat18600

aacatcaaatactactgcacccaacacgccaaaccagcagcacctctcgctggaaccatc18660

aatgctaaatacattgacatccaaacagaaaagatcactcttgccaaacgccatgctgaa18720

atttgtgatcaccaccatggtgcagcacacacatctgatgtcgacaccattatgaccgga18780

tgcatcttaggcaatgaattgacactagcaactcaacatctcagccagcttctcttcacg18840

gaacccttcagccactactcaagtgtaatttctccagatatgcaccttacagtttcaacc18900

cgcccttgcaggacactcggacaacttatcataactaacatcaatggtaagaactacaga18960

ttctcaatccaaccacacctggatcttaaaacacacttttttaacatcgttgctaaacaa19020

ggccactcctctgttttagtcaacgttccagaaacagttccgacctgtactaaaattcgc19080

ggtgaaacctgcgctacatgctacaacacctggcttatcctccaagaacttcatgctgaa19140

ctagctaacacaggtctcgccctggtcaacccactccaacgccaatacactcaacgagaa19200

acacaaattttaaccaaggtaatgtctgtcactccaacatctacaggcaaaatcatggtc19260

catctcgacaacacactctccttccccttcctactcgatttaccaacaagtatccaaaca19320

tactgtaacaagatcgataaaccaatccctaaccctgcaattttcacttcccttaaaatt19380

acacacacttacggattcggaacaccatttgtccctatgacaaacaacccactcattcca19440

tctatcctcagtaaccaaaaacttgctgacaacccagactactactacatcacacatcaa19500

ccatcaaacagtgaacttcctttcatgacttcttcaccaactgctggcttctattgctat19560

gacacccctttgattaacttctcggaacgtaccattaacaaaccaccctactatatcaca19620

cgaattgtccgtggccaactacaaaaacctgatattggcctcttctccactaatagactt19680

ttcaccaaccaatacgtacctttacctaatgaacaacaagcgtacgaagactttggtaaa19740

catgtctcacttggcgaaacaacatcaacatcctggacaatcggtggcatgcatctactc19800

ccagccttccaaaccacaaccaattggcagatcacatcagaacatacaccaattctctca19860

attaccatagctcgcgatcgcggggtcaaactaggaacaacagccctagatgtacctgct19920

gaccaactacttgaattaatcgactataaaaacatcacagtctcaaaagtaatagctatt19980

aagatcgacggccaaaaagtaaacatgatggttttcactcaaaacggtaaaatccaaaca20040

gcctacccagtacaacaagcaaagatgcacgatgtgacaaaacaccacgtcactcctgac20100

tacataatctggcctaaaattttcagcgactcacctgtcgataaatgggatcttcctaat20160

tacaaccaaccacctaaaggtctcacatccaacgtcaacatccataaatacgatcaaatg20220

tgtgcattctttgacaaacacctaaccattccaacaaatggccacgtacaccatcttggt20280

catgccggacaagtttacagccctggtgatatagttttaaaaagctatttcacaaaagct20340

cgtttaacatcatacgacttgcgtgattgcatatcaaccagcgaaacagctcaccctgat20400

gacaactggcgtgcacacttcatcctgtcagatgcatactgtcccaacaccgactttaca20460

tctctctgcaaagactacatgactaaacacctacgtcttggcggaagcatgctctggaag20520

atgacagaaacctgtaacatcgacgctgaatccattctaccatactttggatctttcact20580

ttcgtcaccttcgctgtcaactactcatcatctgaaacttacgctttccttaagggatac20640

atgggtgaacctaactacaacaccacacttccagctaacatcatgggtcaactcggcgcg20700

tacagacaaaacctattgtacgtcccctatgctagtgagtataccggtaccagagtttat20760

aaagattctggtgctgttaaagtcattccggccatgtatgcagatcgtctgaatacttcc20820

cactatgctctcggctgcatctacagcacttagacatggcaaacttgctatggctaactc20880

ttctcatcactctcagtctcgtgtccgctcaaattaacacgacacttccagactgtccta20940

ccccaacctgcacctacacaccaccaacaacgaccccatttgaccacacatcactacact21000

cttttttcacacatgacacaaactatgctttccttcttgctcttaagtataatggtactt21060

tcattcctgccactatggctatgcctgctaacaacctttcgcaaacatatacactcaact21120

ataaaaatgtctttgtcaacgtacctgattctcaactccctcctcctcaaagaagtaata21180

ctcagttggctgttgttgcaaccacagattcctgtcttactgcaacgtatcaagcgattc21240

ctggtactattcctggcctttcaactaatcacatgtattgtgtgaaatttactcagtcgt21300

ccaactttgtgtacttgtacgataccactgtgaaaacccctgttggcgtacttttaaaaa21360

acccaactgccccagtagttacaactatcctatccactatcatggttaaccgccctacaa21420

cagtttcaacctcacagctgctagctaatatctactcccttatgagaacgagaagcaacg21480

tgattcaacaacaattcacttgcacatcttgcctctttgccatcgacgcatctacaggaa21540

gagcagctacctcaccaactacttacctcctaaacaactggtccccatccttctttgaaa21600

ctaaaacagctatgttggaccacgtctctatgaacaccatctaccaaacagcacgtggtg21660

ttactcgtgaaaccttcactggttacatccttaacgcagctaaaaccgctgcctacgctc21720

gtggttctcccgcctattacatcttttcattcgcagccattgcacgctaccatcaagcaa21780

tggttactccttataactataacatcggaaaactttgtgaagcaacagctgcttgctgct21840

tatcaaatggcattgaacattttgacatctatacctggctatttcactactacggcttta21900

tgaaatccaaagtctacagtgaaacttttacaacaaacccagtactaacatcagttatta21960

acttagccacatcaattaaaggtaaacattccgtgtactgtgacctaacaccttacagtt22020

catttactgcctataatttgatcatgcttcaagacgttgtcgaacaataccaagggacac22080

gtacaacatccacatacgctaacaattttctcaacctcactgatattaacggatacctac22140

cctattccaccgatacccccctcccacaaaactaccaaaactacatgccttttgcaacct22200

acctacttgcaacattttactcttctttcactttacaacagaaatttgacttccacagat22260

tcctccaatctgtctgttattatgactctggtttcatttctcgtaaccaagcctaccatt22320

ctatctgtcacataatcactctgaaaacatcatcttcagtaccttaccccgcagaactcc22380

aatggccctttactgctctcccttcctctggttatgactcttatccagtttctacagatt22440

taggcacagtagctgttggcaacacaaatccacttgattaccctggaatttgttaccaat22500

cagtttgcttgactcatcctactattaacttcagacttttgttatcagaattaccaatta22560

aatgggaagtccgacctgaaggtatctatgtaacatctagaaacgatcctacatgcctga22620

atttcaaaacatcacagttgggaacagttttcattacactctacgattctaccactacat22680

gcacaattcaacagactacttactctcgctctgctgtcctgcgccaagtcaacacgttta22740

caccaaatgctactgatttagtcgtgccctacggcaaaacaccaatatacaatggagcct22800

ataatattaattccactgcatctggtgctgtctctctctctaccaacacacactacattc22860

cacgtctcctcacttcagttttaacaccgcaaagtgactacaagattacacctacaacca22920

ctaatcttgaaccattcgtggaaattaatggcacaaccttttactacgatgctaatcaag22980

cctacgttaatacatcggacgtttatcaagctaacgttgattttggactcccccaaacat23040

tttctcttgataccagcttccttaattgcacagctttcctctgcgcttctgactacaaat23100

gtatcgccgacttttcaccaatctgctcagctacacaaccactaatcgacgccctactcc23160

aaacctacacactgtacaatcaacaacttacactgtacaattcttccctgctcacaattc23220

aagccgctgcaaactacctctacgacacaagaacacgtactagacgatcactcctatcta23280

ctgtcaaccttggctacggtgacgtttttcaacaaccagcctgggtctacgaaataggtg23340

caacagctgcaattcctatgatcggccctgcagtctcagtcggtttgttagccagtagag23400

tagcatctattgaatcaaccctctatcaaattacccaaggagtgaaggagtctattatgg23460

ctatgaacaccaagcttgataagattgccaacattttacactcagacatcgaaagattag23520

gattaacagttaacacattagcctcttcattcaacacattcactaaacaagtaacagata23580

aatttgcctctgttgatgttgcatttaacgacttatcaacatcactgaacacactcacca23640

caacaacaactgttggtgcctcttatgcagctcaaattaacttcgcaacaaccacgctaa23700

ccaatttagaagttcaaatctctcaaacaacagatcacgctctatcttgcatcgctgcgc23760

ttaatgaacatgttctttctccacactgcatttccgtttcacaacttagcgcttacacac23820

ctaatgctctctctaacattggtgaaaaactagtactaactcactacatcaacggatcac23880

tcatcacattctaccatctcattgctagcaagggagtttacagacccctgccaaaaatgt23940

ataattctacacaccatttagttgcaacaactggcttctatgacggccattgtatcttct24000

gtggtgaacattattgtgatatcagcgtttctgtaccatgtgattatgcgtacgaaccac24060

ttaaatccactgtactagcagcttacccactaacaactggtgtagcccttctcactcttg24120

actctacagctactaacttcgttattaactataataatgcccctctcatttcatcaagcg24180

ttccaaaaccacctatcatcaataacaccgatggtacagttattacgctccaacaacaag24240

taatccagctccaaactcaattcgatcactttaacatctcgtcgaattttcacgtgtcag24300

aaatccaaccagtcatagactactacaatgcacaaatcaactcatctctaaaccagatag24360

ttgatttcggaaatggctcaacatctaatgtaggaacaatcatcctcattgtaactatag24420

ttgcccttgctcttgcatcagctatcgccatcatctgtggattaaagcactaaagaccaa24480

caagttgcaatggcttccaccggtaaaaacaccaccgcaggagatcccaaccttgggttt24540

cacttacaacttaatgatgtccttaacaccctggacatctccggcttcagcatctcaaat24600

tctcatttgatgagtgcgatgctgacccttaaccttctctggagcgctatctttctagtc24660

tccttctatctaatcttggacatggttatgtactacgttcccctgctcaataagattcca24720

ctgctgccaacaatcaaaaacctttgttggtttatctcgactctgcttgttgctgtttcc24780

atttacgcttcaggaactctgctgatcatcaaaatcttcggaggcgtagtcttgctcctt24840

gcttttctcggcatggtgaagactttctatatgctcattgcaatggcgctgtcctactac24900

cgacaccgtaacatcgcagtggcattgaacggccctaatgtcgttatggttaacggcaca24960

gcagtccactctgatttcatccccacgtctgtgacactggtgaagaaagatggtgaactc25020

tattttcaaggaacaaaggtccccggaaacaacttgattgatgcaaccgtgaagatcttc25080

actttcaacgaatcgtttgaatgcctccccatcgcactctcacgttacactaaaggttcc25140

tacgctagatttgagctcaagtcgaccaacacccactatgaactccaaactttctatcct25200

tcgcaaacagaaactaaatctgtttgaaacactagcgaaaacaaattacaatggcattct25260

acggacaaccaatgatgcctatgcctatgcctgcttcctttcctcctcgtcgccgtgccc25320

ctaaaaagcgcccgccacagaagaaacaagccaagccccaacctaaacctctcaatgacc25380

aacagaaaacagctgttgcgaaagaggctattgccaaaaccaatactgtgccaatgccac25440

ccatggccacagtagtgaagacaaacctgcgcgttcaggttgtaaaaagcaaacgcggtg25500

acctcctagatgctcgagggcgtcttacacaatcagagatcaaccagctgtatttccaaa25560

tcgccactgccctcaacaacggcctcggagaaattggaatacataatgcttcaacgcagg25620

acggcgttcgtctcatcgtgcgcctcaatttagcccctcctaatcctattgctgagaaac25680

tctacaaatctcacgcggcggctaatctcaactcagaaattctggtttctaaacaaaagg25740

aactggagcgagaccccatttttcatgtttcctcgactgagtaaactgacttcacctcaa25800

aactgaagaaagtatatataatcacatctctcacactatcctttataaactatatattgg25860

ggtggcattaggccattccaaagaattctctaagatcacactcctcgatacctgactagt25920

catcacgtttcctggggtctgctctttaacattctactatcctataagatctaaaactat25980

ccaaaaaaaaaaaaaaaaaa26000

<210>2

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>2

ctatggaatggaagaaacacgac23

<210>3

<211>24

<212>dna

<213>人工序列

<400>3

gagagttgatgtcatagctacaag24

<210>4

<211>26

<212>dna

<213>人工序列

<400>4

ctgggacaacaccaaaaccacctaag26

當(dāng)前第1頁1 2 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點(diǎn)贊!
1
怀化市| 耿马| 武定县| 阿坝| 青州市| 汤阴县| 平塘县| 新干县| 宣化县| 稷山县| 阳城县| 英吉沙县| 澜沧| 华宁县| 内江市| 宣武区| 凌海市| 望都县| 佛山市| 东海县| 从江县| 电白县| 故城县| 无棣县| 商城县| 玉龙| 若尔盖县| 福州市| 韶山市| 鄢陵县| 恩施市| 金门县| 额尔古纳市| 晋江市| 惠安县| 上饶县| 苍梧县| 乐东| 比如县| 阜南县| 西畴县|