【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種具有晶型a形式的甜菊醇晶體、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

甜菊糖是集天然、高甜度、非營(yíng)養(yǎng)于一身的甜味劑家族中的代表性化合物族，享有世界第三類(lèi)糖源的美稱，甜味成分為內(nèi)-貝殼杉烯酸/酯類(lèi)的四環(huán)二萜類(lèi)化合物，它們具有相同的四環(huán)二萜類(lèi)結(jié)構(gòu)苷元甜菊醇(steviol)，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)如下：

甜菊醇是一種高附加值的藥物合成中間體，同時(shí)它本身也具有一定的生物活性，如抑癌、通過(guò)抑制脂多糖lps-介導(dǎo)的tnf-α，il-1β和il-6的釋放，并通過(guò)經(jīng)由iκbα/nf-κb信號(hào)傳導(dǎo)途徑影響細(xì)胞因子基因表達(dá)，減弱lps-誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞因子的釋放，從而達(dá)到免疫調(diào)節(jié)的作用。在室溫下甜菊醇的水溶性極低，從而限制了其應(yīng)用。甜菊糖家族中不少成分、特別是甜菊糖a苷(reba)的多種晶型制備已被報(bào)道并且獲得專(zhuān)利授權(quán)；如專(zhuān)利us20070292582a1和wo2010118218a1中分別報(bào)道了甜菊糖晶型1、晶型2、晶型3；專(zhuān)利cn103739639a和專(zhuān)利cn103739640a分別報(bào)道了甜菊糖a苷的晶型7和晶型9，兩種晶型均具有結(jié)晶度高、溶解性好、穩(wěn)定性高的優(yōu)點(diǎn)晶型。

藥物多晶現(xiàn)象在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中廣泛存在，是有機(jī)小分子化合物固有的特性，是影響藥品質(zhì)量與臨床療效的重要因素之一，同一藥物的不同晶型在外觀、溶解度、熔點(diǎn)、溶出度、生物有效性等方面可能會(huì)有顯著不同，從而影響了藥物的穩(wěn)定性、生物利用度及療效。藥物多晶型現(xiàn)象的研究已經(jīng)成為制藥工藝及新藥制劑確定前必不可少的重要部分。目前還未見(jiàn)有報(bào)道對(duì)甜菊醇的晶型進(jìn)行研究。本領(lǐng)域迫切需要提供一種結(jié)晶度好、穩(wěn)定性高的晶型。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

[要解決的技術(shù)問(wèn)題]

本發(fā)明的目的是提供一種具有晶型a形式的甜菊醇晶體，具體地說(shuō)是一種工藝簡(jiǎn)單、易于操作、結(jié)晶度高、穩(wěn)定性高的具有晶型a形式的甜菊醇晶體的獲取。

[技術(shù)方案]

具有晶型a形式的甜菊醇晶體，所述晶型a使用cu-kα射線測(cè)得的x-射線粉末衍射分析，以度表示的2θ角至少7.76，12.12，14.18，15.66，16.04，16.62，19.2，20.78，24.00，27.08，31.72，35.32和35.70處有明顯的特征衍射峰。

更具體地，所述晶型a使用cu-kα射線測(cè)得的x-射線粉末衍射分析，以度表示的2θ值、誤差范圍為±1°，以表示的晶面間距d和以百分?jǐn)?shù)表示的衍射峰的相對(duì)強(qiáng)度具有如下特征：

更具體地，具有晶型a形式的甜菊醇晶體，其特征在于，所述具有晶型a形式的甜菊醇晶體具有分別與圖2和圖3所示相同的差式掃描熱分析圖以及熱失重分析圖中的主要吸收峰或特征曲線。

更具體地，所述晶型a有如圖5所示的形貌特征。

更具體地，具有晶型a形式的甜菊醇晶體的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)澄清液的分離干燥：稱取一定量的甜菊醇加入適量的溶劑，在4℃至低于溶劑沸點(diǎn)1-2℃下低速攪拌一定時(shí)間，得混懸的澄清溶液，冷卻至一定溫度，冷卻溫度在0℃-低于溶劑沸點(diǎn)5-20℃的范圍內(nèi)，將析出的白色固體干燥，即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體；或者將澄清溶液，置于10-60℃內(nèi)一定溫度下干燥或揮發(fā)，即可得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體；

(2)懸浮液的分離干燥：稱取一定量的甜菊醇加入適量的溶劑，在4℃至低于溶劑沸點(diǎn)1-2℃下攪拌一定時(shí)間，得混懸溶液。將上述懸浮液過(guò)濾或離心，所得固體經(jīng)干燥后即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

更具體地，步驟(1)中，所述甜菊醇的干物質(zhì)純度為50％-100％,所述攪拌速度不高于50rpm。

更具體地，所述溶劑為水、甲醇、乙醇、異丙醇、3-甲基-1-丁醇、乙腈、丙酮、乙酸甲酯、甲酸乙酯、或乙酸異丙酯中的一種或兩種以上。

所述的干燥方式包括自然干燥、常壓烘干和真空干燥等。

本發(fā)明提供了一種含有所述具有晶型a形式的甜菊醇晶體、制備方法及其在藥品的應(yīng)用。

[有益效果]

本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體的制備方法，其工藝簡(jiǎn)單、易于操作、結(jié)晶過(guò)程易于控制、可通過(guò)多種方法制得具有晶型a形式的甜菊醇晶體，且制得的產(chǎn)品，結(jié)晶度高而且穩(wěn)定性高。

[附圖說(shuō)明]

圖1是本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體的x-射線粉末衍射(xrd)圖；

圖2是本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體的差式掃描熱分析(dsc)圖；

圖3是本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體的熱失重分析(tg)圖；

圖4是本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體的紅外光譜(ir)圖；

圖5是本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體偏光顯微圖；

圖6圖是本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體在40℃、濕度75％的下儲(chǔ)存半年的高效液相(hplc)圖。

【具體實(shí)施方式】

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例一：

將25g純度為80％的甜菊醇與100ml水混合，10℃下在30rpm下攪拌24h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，所得固體于40℃下真空干燥，即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

將上述懸浮液過(guò)濾后得到的濾液冷卻至40℃，析出白色固體，將此固體于100℃烘干后即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例二：

將15g純度為99.5％的甜菊醇與100ml95％的甲醇水溶液混合，20℃下在10rpm下攪拌1h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液離心，所得固體于25℃下真空干燥后即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

將上述懸浮液離心后得到的濾液冷卻至4℃，析出白色固體，將此固體于25℃下真空干燥后即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例三：

將35g純度為55％的甜菊醇與100ml的97％異丙醇混合，40℃下在20rpm下攪拌0.5h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液離心，所得固體于45℃下真空干燥后即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

再將離心懸浮液得到的澄清溶液冷卻至10℃，析出白色固體，將過(guò)濾后所得固體于45℃下真空干燥，即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例四：

將3g純度為95％的甜菊醇與100ml95％的甲醇水混合，50℃下在50rpm下攪拌2h，得到甜菊醇澄清液。將上述澄清液冷卻至4℃，將析出的白色固體干燥，即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例五：

將3g純度為95％的甜菊醇與100ml95％的甲醇水混合，50℃下在50rpm下攪拌2h，得到甜菊醇澄清液。將上述澄清液，置于40℃下?lián)]發(fā)干燥，即可得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例六：

將20g純度為65％的甜菊醇與100ml90％的乙醇混合，15℃下在5rpm下攪拌5h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，所得固體于40℃下真空干燥后即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體；再將過(guò)濾后得到的澄清溶液置于40℃下?lián)]發(fā)掉溶劑，將所得固體于40℃下真空干燥,即得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例七：

將5g純度為90％的甜菊醇與100ml丙酮混合，0℃下在5rpm下攪拌4h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，所得固體于20℃下?lián)]發(fā)并于20℃下真空干燥，即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。再將過(guò)濾后得到的澄清溶液置于20℃下?lián)]發(fā)掉溶劑，將所得固體于20℃下真空干燥,即得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例八：

將15g純度為91.5％的甜菊醇與100ml65％的乙腈水溶液混合，20℃下在10rpm下攪拌10h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液離心，所得固體于35℃下真空干燥后即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

實(shí)施例九：

將8g純度為75％的甜菊醇與100ml等體積的異丙醇-乙酸異丙酯溶液混合，60℃下在30rpm下攪拌0.5h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，再將得到的澄清溶液冷卻至40℃，析出白色固體，將得到的固體于100℃烘干后即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例十：

將10g純度為65％的甜菊醇與100ml等體積的乙酸甲酯-乙醇溶液混合，5℃下在5rpm下攪拌18h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，再將過(guò)濾后得到的澄清溶液置于60℃下?lián)]發(fā)濃縮至原體積的10％，將過(guò)濾后得到的固體于35℃下真空干燥，即得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例十一：

將3g純度為90％的甜菊醇與100ml3-甲基-1-丁醇混合，50℃下在5rpm下攪拌20h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，所得固體于70℃下?lián)]發(fā)后再于45℃下真空干燥，即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

實(shí)施例十二：

將2g純度為90％的甜菊醇與100ml乙酸甲酯混合，0℃下在5rpm下攪拌20h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，所得固體于30℃下真空干燥，即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

實(shí)施例十三：

將25g純度為91.5％的甜菊醇與100ml65％的乙腈水溶液混合，20℃下在20rpm下攪拌10h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液離心，所得固體于40℃下真空干燥后即得具有晶型a形式的白色甜菊醇晶體。

實(shí)施例十四：

將10g純度為75％的甜菊醇與100ml等體積的異丙醇-乙酸異丙酯溶液混合，60℃下在10rpm下攪拌0.5h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液離心，再將得到的澄清溶液冷卻至40℃，析出白色固體，將此固體于100℃烘干后即得具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例十五：

將12g純度為85％的甜菊醇與100ml等體積的乙酸甲酯-乙醇溶液混合，5℃下在5rpm下攪拌18h，得到甜菊醇的懸浮液；將上述懸浮液過(guò)濾，再將過(guò)濾后得到的澄清溶液置于60℃下?lián)]發(fā)濃縮至原體積的10％，將過(guò)濾后所得固體于35℃下真空干燥，即得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

實(shí)施例十六：

將10g純度為55％的甜菊醇與100ml乙酸甲酯-乙醇溶液(1：8，v/v)混合，35℃下在10rpm下攪拌7h，得到甜菊醇的懸浮液，將過(guò)濾后所得固體于35℃下真空干燥，即得到具有晶型a形式的甜菊醇晶體。

對(duì)上述實(shí)施例制得的具有晶型a形式的甜菊醇晶體進(jìn)行x-射線粉末衍射分析(xrd)、差示掃描量熱分析(dsc)、熱失重分析(tg)等。

xrd分析其采用德國(guó)布魯克axs有限公司brukerd8advance型的衍射儀于室溫進(jìn)行檢測(cè),使用cu-kα射線2θ角掃描從3度到50度,掃描速度為4度/分。其分析結(jié)果見(jiàn)圖1,xrd譜圖顯示上述實(shí)施例制得的具有晶型a形式的甜菊醇晶體具有良好的結(jié)晶度。

在樣品粉末x射線粉末衍射圖譜中,由特定晶型得到的衍射譜圖往往是特征性的。因?yàn)榻Y(jié)晶條件、粒徑、混合物的相對(duì)含量和其它測(cè)試條件的差異,衍射譜圖可能會(huì)產(chǎn)生擇優(yōu)取向效果,從而導(dǎo)致譜圖中某些譜帶，尤其是在低角度的相對(duì)強(qiáng)度發(fā)生變化。因此,衍射峰的相對(duì)強(qiáng)度對(duì)所針對(duì)的晶體并非是特征性的,判斷是否與已知的晶型相同時(shí),更應(yīng)該注意的是峰的位置而不是它們的相對(duì)強(qiáng)度。另外,判斷晶型是否一樣時(shí)應(yīng)注意保持整體觀念,因?yàn)椴⒉皇且粭l衍射線代表一個(gè)物相,而是一套特定的“di/i1”數(shù)據(jù)才代表某一物相。還應(yīng)指出的是,在混合物的鑒定中,由于含量下降等因素會(huì)造成部分衍射線的缺失,此時(shí),無(wú)需依賴高純?cè)嚇又杏^察到的全部譜帶,甚至一條譜帶也可能對(duì)給定的晶體是特征性的。

dsc分析：其采用美國(guó)ta儀器公司的dscq2000型差示掃描量熱儀進(jìn)行檢測(cè),氣氛為氮?dú)?加熱速度為10攝氏度/分鐘。其分析結(jié)果見(jiàn)圖2。

tg分析：其采用瑞士梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易公司的tga-1100sf型熱重分析儀檢測(cè),溫度范圍50-500℃,掃描速率：10k/min,吹掃氣：25l/min。其分析結(jié)果見(jiàn)圖3。

偏光顯微鏡照片：其采用卡爾.蔡司公司的偏光顯微鏡進(jìn)行實(shí)驗(yàn),測(cè)試放大倍數(shù)倍。其分析結(jié)果見(jiàn)圖4。偏光照片顯示,上述實(shí)施例制得的具有晶型a形式的甜菊醇晶體為柱狀晶體,具有良好的形貌特征。

hplc分析：對(duì)上述實(shí)施例制得的具有晶型a形式的甜菊醇晶體,40℃、相對(duì)濕度75％存儲(chǔ)半年后進(jìn)行hplc分析,分析其采用美國(guó)waters有限公司的waters2695液相色譜儀測(cè)定。樣品溶液配制方法：精確稱量25-50毫克具有晶型a形式的甜菊醇晶體樣品,放入25毫升的容量瓶中,然后加入水—乙腈(7:3，v/v),溶液,進(jìn)行溶解并定容至刻度。磷酸鈉緩沖液(規(guī)格:10mmol/l,ph值2.6)的配置方法：將3.12克磷酸二氫鈉溶解到2升水中,加入磷酸,將ph值調(diào)至2.6。色譜柱：kromasil公司的c18型色譜柱。進(jìn)樣量10μl。流速1.0ml/min。柱溫40℃。檢測(cè)器：210nm紫外檢測(cè)。流動(dòng)相：乙腈和磷酸鈉緩沖液(規(guī)格：10mmol/l，ph2.6)的比例為32：68。其分析結(jié)果見(jiàn)圖6，上述實(shí)施例制得的具有晶型a形式的甜菊醇晶體經(jīng)hplc分析顯示在40℃、rh75％條件下儲(chǔ)存半年后,純度仍高達(dá)99.0％。其純度變化小于1.5％。

上述實(shí)施例制得的具有晶型a形式的甜菊醇晶體,具有很好的重現(xiàn)性,并且水溶性穩(wěn)定。

上述實(shí)施例中所用的甜菊醇原料由東臺(tái)納盛特生物科技有限公司提供，源自甜菊提取物以及甜菊糖苷中斯提夫苷的酶促水解產(chǎn)物。

本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體可作為藥物或輔助藥物應(yīng)用于降血糖、抗炎及抑癌中。

本發(fā)明提供的具有晶型a形式的甜菊醇晶體制備方法可應(yīng)用于藥品的制備工藝中。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已,并不用以限制本發(fā)明,凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等,均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。