本發(fā)明涉及藥物合成
技術領域：
，尤其涉及一種偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物及其制備方法和應用。
背景技術：
：combretastatina-4(ca-4)是由pettit等從南非灌木柳樹皮combretumcaffrum中分離得到的一種二苯乙烯類化合物，它能夠特異性地識別和破壞腫瘤血管，以致腫瘤細胞得不到足夠的養(yǎng)分而“餓死”。通過作用于秋水仙堿結合位點，ca-4能夠抑制微管蛋白的聚合從而阻止腫瘤血液流動。然而由于ca-4及其衍生物目前還存在許多缺陷，比如水溶性差、順式結構不穩(wěn)定、反式結構沒有活性等，使其在臨床試驗中受到很大阻礙。所以，長久以來圍繞ca-4類似物的結構改造做了大量的研究工作。多數(shù)情況下，在對ca-4結構改造中，往往只保留a環(huán)部分，對連接橋和b環(huán)進行改造。毛蘭素，化學名為3,4,5-三甲氧基-3’-羥基-4’-甲氧基二苯乙烷(代號：mls)，是一種從名貴中藥材石斛中提取出來的天然二苯乙烷類活性成分，在結構上與二苯乙烯類天然產物combretastatina-4(代號ca4，又稱風車子素)具有共同的結構特征，具有共同的ab環(huán)結構，毛蘭素相當于是乙烯基橋被氫化了的ca4。與ca4一樣，毛蘭素也是一種微管蛋白抑制劑且具有較強的腫瘤血管靶向破化作用，作用于秋水仙堿結合位點。此外有文獻報道毛蘭素的抗腫瘤作用還可能通過作用于端粒酶而誘導腫瘤細胞凋亡有關。此前我們發(fā)現(xiàn)將毛蘭素b環(huán)4-位的甲氧基替換為乙氧基后得到一種4-乙氧基毛蘭素(ebt)，其抗腫瘤活性與毛蘭素和ca4相比有顯著提高(吳范宏等，一種乙氧基二苯乙烷衍生物及其制備方法和用途，國際公布號us2012/0046492a1)，通過分子對接技術模擬確定其與微觀蛋白秋水堿結合位點作用更好。由于不存在順反式異構體的變化，相關理化性質比ca4更穩(wěn)定，化合物的制備工藝更加簡便，合成收率顯著提高，而原料損耗和單位合成成本大大降低(一種3,4,5-三甲氧基-3’-羥基-4’-烷氧基二苯乙烷的制備方法，中國專利cn103539642a)。近年來，含氟藥物在臨床治療藥物中占有很大的比重，在小分子藥物中引入氟原子或含氟基團，是改善藥物活性的重要策略之一。氟原子具有最大的元素電負性和與氫原子相近的原子半徑，在小分子藥物中引入氟原子或含氟基團后，對其分子體積幾乎沒有影響，但是對其理化性質包括電子效應和立體效應、生物活性、藥代動力學性質、代謝穩(wěn)定性和配體與靶標蛋白的相互作用力以及選擇性等可能產生顯著影響，而且還可以增強小分子的親脂性，使其更容易透過細胞膜，進而提高生物活性。之前研究的ca-4含氟化合物多為單氟取代和三氟甲基取代，對于偕二氟乙基取代的二苯乙烯及二苯乙烷衍生物未見報道。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物及其制備方法和應用。本發(fā)明的衍生物抗腫瘤活性高，對腫瘤具有血管靶向作用。本發(fā)明的技術方案具體介紹如下。本發(fā)明提供一種偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物，其具有通式(i)所示結構：其中：虛線---表示化學鍵或不存在；r為氫、羥基、硝基、氨基、磷酸鹽、硫酸鹽、磷酸膽堿、或氨基酸側鏈及其水溶性銨鹽；優(yōu)選的，r為氫、羥基、硝基、氨基、-opo3na2、-nhcochch2nh2、或是-nhcochnh2ch2oh；進一步優(yōu)選的，r為氫、羥基、硝基或氨基。本發(fā)明還提供一種上述的偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物的制備方法，其包括3,4,5-三甲氧基芐溴三苯基溴化磷和4-(1,1-二氟乙基)苯甲醛在堿作用下發(fā)生wittig反應生成烯烴化合物，或者3,4,5-三甲氧基芐溴三苯基溴化磷和4-(1,1-二氟乙基)-2或3-位r取代苯甲醛在堿作用下進行wittig反應生成烯烴化合物的步驟。其合成路線如式(ii)所示：當通式(i)中r官能團為氨基酸側鏈時，由相應的氨基物與氨基酸縮合得到，其合成方程式如式(iii)所示：本發(fā)明進一步提供一種上述的偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物在制備治療非正常新生血管引起的疾病的藥物中的應用；所述疾病主要包括有：風濕性關節(jié)炎、糖尿病視網膜病、早熟視網膜病、視網膜靜脈閉塞、牛皮癬、紅斑痤瘡、卡波濟肉瘤、特異性反應性角膜炎、流行性角膜結膜炎、新生血管性青光眼、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、單純性疤疹感染、帶狀疤疹感染、原生動物感染、分支桿菌感染、多動脈炎、肉樣瘤、鞏膜炎、潮紅、口干眼燥關節(jié)炎綜合癥、全身性紅斑狼瘡、艾滋病綜合癥、梅毒。本發(fā)明進一步提供一種偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物在制備微管蛋白聚集抑制劑中的應用。本發(fā)明進一步提供一種偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物在制備作為抗腫瘤血管破壞劑，對各種腫瘤具有血管靶向作用的藥物中的應用。所述各種腫瘤主要包括有：肺癌、非小細胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睪丸癌、結腸癌、卵巢癌、膀朧癌、子宮頸癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓狀癌、支氣管癌、骨細胞癌、上皮癌、膽管癌、絨毛膜癌、胚癌、精原細胞癌、維爾姆斯癌、膠質細胞癌、星形細胞瘤、成神經管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血細胞瘤、聲帶神經瘤、腦膜瘤、成神經細胞瘤、成視神經細胞瘤、成視網膜細胞瘤、神經纖維瘤、纖維肉瘤、成纖維細胞瘤、纖維瘤、纖維腺瘤、纖維軟骨瘤、纖維囊瘤、纖維粘液瘤、纖維骨瘤、纖維粘液肉瘤、纖維乳頭狀瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液軟骨瘤、粘液軟骨肉瘤、粘液軟骨纖維肉瘤、粘液腺瘤、成粘液細胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂細胞瘤、脂肪軟骨瘤、脂肪纖維瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、軟骨肉瘤、軟骨瘤、軟骨肌瘤、脊索瘤、絨毛膜腺瘤、絨毛上皮瘤、成絨毛膜細胞瘤、骨肉瘤、成骨細胞瘤、骨軟骨纖維瘤、骨軟骨肉瘤、骨軟骨瘤、骨囊瘤、骨牙質瘤、骨纖維瘤、骨纖維肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管軟骨瘤、成血管細胞瘤、血管角質瘤、血管神經膠質瘤、血管內皮瘤、血管纖維瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神經瘤、血管粘液瘤、血管網狀內皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纖維瘤、淋巴細胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴細胞瘤、內皮瘤、成內皮細胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、間皮瘤、結締組織瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纖維瘤、橫紋肌瘤、橫紋肌肉瘤、橫紋肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病細胞、紅細胞增多癥、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤；優(yōu)選的，所述腫瘤為宮頸癌、結腸癌、非小細胞肺癌、乳腺癌或胃癌。本發(fā)明的一種偕二氟乙基取代的二苯乙烯和二苯乙烷類衍生物的藥物制劑，選自包括以下劑型：靜脈注射形式給藥的凍干粉劑、粉劑、注射劑、脂質體、乳劑、微囊、懸浮液或溶液；口服形式給藥的顆粒劑、片劑、膠囊或糖漿；或是栓劑。和現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于：在二苯乙烷/烯的b芳環(huán)的4'位用偕二氟乙基進行化學結構修飾，同時將其2'位改造成硝基或氨基等取代基；該類偕二氟乙基取代的二苯乙烯及二苯乙烷類衍生物具有較強的體外抗腫瘤活性，氟原子的引入不僅改變了化合物本身的物理性質，同時增強了體外抗腫瘤活性，并對多種腫瘤細胞均有較好的抑制作用。具體實施方式下列實例僅僅為了說明方案的實施過程，包括但不限于其中的條件。本發(fā)明的化合物能根據以下所述的一般方案使用適當?shù)奈镔|作為原料來制備，并且通過后面的實施例來具體舉例說明。當然，實施例中的舉例化合物制備步驟的條件和方法的各種已知合理的變化也能用于制備這些化合物。所述的分析測試儀器和條件除非另有說明，否則：hrms高分辨質譜為瑞士布魯克公司的solanx-70ft-ms，h-nmr核磁氫譜volanceⅲ500m或agilent400nmr或brukeramx-400型核磁共振儀測定，測試溶劑為cdcl3。實施例14-(1,1-二氟)乙基苯甲醛的合成步驟一：4-(1,1-二氟乙基)苯甲酸甲酯的制備將4-乙?；郊姿峒柞?5.00g,28.06mmol)溶于40ml無水ch2cl2加入密封管中，n2保護，-40℃下緩慢滴加dast(二乙胺基三氟化硫)(12ml,3.4eq)，然后油浴加熱60℃反應24h，反應結束后降至0℃以下，用飽和nahco3水溶液淬滅反應，ch2cl2萃取，合并有機相，濃縮，柱層析分離ea:pe＝1:150，得到3.30g白色固體，產率59％。mp:35.2-35.7℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.92(t,3h,j＝18.0hz),3.93(s,3h),7.57(d,2h,j＝8.0hz),8.09(d,2h,j＝8.0hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ166.3,142.6142.4,142.2,131.4,129.8,124.7,123.8,121.4,119.5,52.27,26.1,25.9,25.6.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-88.70.ms(m/z):200(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc10h10f2o2(m+h)+:201.0727,found:201.6502.步驟二：4-(1,1-二氟乙基)芐醇的制備將lah(氫化鋁鋰)(1.00g，26.4mmol，3eq)溶于50mlthf中，60℃油浴攪拌3h，然后將反應體系冷卻至0℃以下，緩慢滴加4-(1,1-二氟乙基)苯甲酸甲酯(1.76g，8.8mmol)的8mlthf溶液至反應瓶中，滴加完畢后升至100℃回流反應2h。停止加熱，將反應體系冷卻至0℃以下，加入飽和nah2po4溶液淬滅反應，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮旋干得到1.50g4-(1,1-二氟乙基)芐醇黃色液體，產率99％。1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.90(t,3h,j＝18.0hz),2.40(s,1h),4.67(s,2h),7.37(d,2h,j＝8.0hz),7.48(d,2h,j＝8.5hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ142.5,137.7,137.4,137.2,126.9,124.9,123.7,121.8,119.9,64.6,26.1,25.9,25.7.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.22.ms(m/z):172(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc9h10f2o(m+h)+:173.0788,found:173.3046.步驟三：4-(1,1-二氟乙基)苯甲醛的制備將4-(1,1-二氟乙基)芐醇(1.93g,11.21mmol)溶于50ml無水ch2cl2中，加入pcc(氯鉻酸吡啶酯)(3.63g,16.82mmol,1.5eq)，n2保護，室溫攪拌1h，tlc跟蹤檢測至反應完全，加入飽和nacl水溶液，用飽和nahco3水溶液洗滌至無色，再用乙酸乙酯萃取，無水na2so4干燥，過濾，濃縮旋干得到白色固體1.55g，產率81％。mp:165.8-166.3℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.95(t,3h,j＝18.0hz),7.63(d,2h,j＝8.0hz),8.18(d,2h,j＝8.0hz),10.07(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ191.6,171.1,143.4,130.5,124.9,123.2,121.3,119.4,26.2,25.9,25.7.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-88.92.ms(m/z):170(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc9h8f2o(m+h)+:171.0621,found:171.2190.實施例2(z/e)-3,4,5-三甲氧基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯的制備n2保護下，將3,4,5-三甲氧基芐溴三苯基溴化磷(3.08g，5.88mmol)懸浮于50ml無水thf溶液中，-30℃下緩慢滴加正丁基鋰(4.5ml，7.06mmol，1.2eq)，然后反應1h，接著緩慢滴加4-(1,1-二氟乙基)苯甲醛(1.00g，5.88mmol)的thf溶液(5ml)至反應體系中，升至室溫過夜反應12h。反應結束后將體系冷卻至-5℃以下，加入飽和nacl水溶液，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮后柱層析分離ea:pe＝1:25，得到1.20g油狀物為順反混合物，產率64％(z:e＝4:1)。進一步柱層析分離得到純的順反異構體。(z)-3,4,5-三甲氧基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯白色油狀物z-isomer:1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.89(t,3h,j＝18.0hz),3.64(s,6h),3.83(s,3h),6.42(s,2h),6.56(d,1h,j＝12.0hz),6.59(d,1h,j＝12.0hz),7.33(d,2h,j＝8.0hz),7.40(d,2h,j＝8.0hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.0,139.1,137.5,137.0,136.9,136.6,132.1,131.3,129.0,124.6,123.6,121.7,119.8,106.2,60.9,55.8,26.0,25.8,25.5.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.37.ms(m/z):334(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h20f2o3(m+h)+:335.1459,found:335.1453.(e)-3,4,5-三甲氧基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯白色固體e-isomer:mp:142.4-143.1℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.94(t,3h,j＝18.0hz),3.88(s,3h),3.92(s,6h),6.75(s,2h),7.01(d,1h,j＝16.0hz),7.08(d,1h,j＝16.0hz),7.49(d,2h,j＝8.0hz),7.54(d,2h,j＝8.0hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.5,138.7,138.4,137.1,132.7,130.0,127.1,126.4,125.1,123.7,121.8,119.9,103.9,61.0,56.2,26.1,25.9,25.6.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.22.ms(m/z):334(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h20f2o3(m+h)+:335.1459,found:335.1453.實施例33,4,5-三甲氧基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烷的制備將(z/e)-3,4,5-三甲氧基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯(1.20g，3.6mmol)溶于30ml乙醇中，加入pd/c(0.10g,0.9mmol)，h2過量室溫攪拌過夜，反應結束后將pd/c過濾除去，將溶劑旋干得到白色固體1.10g，產率90％。mp:60.1-60.7℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.91(t,3h,j＝18.0hz),2.86(m,2h),2.94(m,2h),3.82(d,9h,j＝10.0hz),6.34(s,2h),7.22(d,2h,j＝7.5hz),7.42(d,2h,j＝7.5hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.1,143.3,137.1,136.3,136.2,135.9,135.7,128.6,124.7,124.6,124.6,123.8,121.9,120.0,105.5,60.9,56.1,38.1,37.7,26.1,25.9,25.6.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-86.84.ms(m/z):336(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h22f2o3(m+h)+:337.1615,found:337.1610.實施例44-(1,1-二氟)乙基-2-硝基苯甲醛的合成步驟一：4-(1,1-二氟)乙基-2-硝基甲苯的制備將4-甲基-3-硝基苯乙酮(5.00g,27.91mmol)溶于40ml無水ch2cl2加入密封管中，n2保護，-40℃下緩慢滴加dast(二乙胺基三氟化硫)(12ml,3.4eq)，然后油浴加熱60℃反應24h，反應結束后降至0℃以下，用飽和nahco3水溶液淬滅反應，ch2cl2萃取，合并有機相，濃縮，柱層析分離ea:pe＝1:150，得到5.20g淡黃色液體，產率93％。1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.95(t,3h,j＝18.0hz),2.63(s,3h),7.43(d,1h,j＝8.0hz),7.64(d,1h,j＝7.5hz),8.11(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ149.1,137.7,137.5,137.3,135.2,133.3,129.0,122.6,121.2,120.7,118.8,25.9,25.6,25.4,20.2.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.80.ms(m/z):201(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc9h9f2no2(m+k)+:240.0238,found:240.1427.步驟二：4-(1,1-二氟乙基)-2-硝基溴甲苯的制備將4-(1,1-二氟乙基)-2-硝基甲苯(5.20g，25.85mmol)，nbs(n-溴代丁二酰亞胺)(5.52g，31.02mmol，1.2eq)，bpo(過氧化苯甲酰)(1.00g)和100mlccl4混合至燒瓶中，攪拌回流反應12h。反應液冷卻至室溫后加入飽和nacl水溶液洗滌，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮后加入四倍于剩余液體的石油醚，放置冰箱內重結晶，過濾得到4.45g白色固體，產率61％。mp:81.0-81.7℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.97(t,3h,j＝18.0hz),4.84(s,2h),7.67(d,1h,j＝8.0hz),7.75(d,1h,j＝8.0hz),8.18(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ147.9,140.3,140.0,139.8,134.3,138.1,129.8,122.3,122.1,120.4,118.5,29.6,28.0,25.9,25.7,25.4.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-88.38.ms(m/z):280(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc9h8brf2no2(m+h)+:281.9764,found:281.0254.步驟三：4-(1,1-二氟乙基)-2-硝基芐醇的制備將4-(1,1-二氟乙基)-2-硝基溴甲苯(3.11g，11.11mmol)和caco3(5.56g，55.55mmol，5eq)懸浮于80ml混合溶劑1,4-二氧六環(huán)-h2o(1:1)中，加熱至90℃，反應12h。反應液冷卻至室溫后加入飽和nacl水溶液洗滌，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮后柱層析分離ea:pe＝1:10，得到1.30g紅色固體，產率54％。mp:51.8-52.4℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.99(t,3h,j＝18.0hz),5.07(s,2h),7.84(d,1h,j＝8.0hz),7.90(d,1h,j＝8.0hz),8.27(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ147.3,139.1,138.9,138.6,138.5,130.0,122.5,121.5,120.6,118.7,61.9,25.9,25.7,25.4.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-88.10.ms(m/z):217(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc9h9f2no3(m+k)+:256.0188,found:256.9813.步驟四：4-(1,1-二氟乙基)-2-硝基苯甲醛的制備將4-(1,1-二氟乙基)-2-硝基芐醇(1.00g,4.6mmol)溶于30ml無水ch2cl2中，加入pcc(氯鉻酸吡啶酯)(1.50g,6.9mmol,1.5eq)，n2保護，室溫攪拌12h，tlc跟蹤檢測至反應完全，加入飽和nacl水溶液，用飽和nahco3水溶液洗滌至無色，再用乙酸乙酯萃取，無水na2so4干燥，過濾，濃縮柱層析分離ea:pe＝1:70得到淡黃色固體0.78g，產率79％。1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.99(t,3h,j＝18.0hz),7.92(d,1h,j＝8.0hz),8.00(d,1h,j＝7.5hz),8.23(s,1h),10.40(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ187.5,149.4,143.9,143.6,143.4,132.2,130.3,122.3,121.1,120.3,118.4,25.5,25.3,25.1.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-88.93.ms(m/z):215(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc9h7f2no3(m+na)+:238.0292,found:238.0296.實施例5(z/e)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯的制備n2保護下，將3,4,5-三甲氧基芐溴三苯基溴化磷(1.90g，3.6mmol)懸浮于20ml無水thf溶液中，-30℃下緩慢滴加正丁基鋰(2.7ml，4.3mmol，1.2eq)，然后反應1h，接著緩慢滴加2-硝基-4-偕二氟苯甲醛(0.78g，3.6mmol)的thf溶液(10ml)至反應體系中，升至室溫過夜反應12h。反應結束后將體系冷卻至-5℃以下，加入飽和nacl水溶液，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮后柱層析分離ea:pe＝1:25，得到0.98g黃色油狀物為順反混合物，產率72％(z:e＝3:1)。進一步柱層析分離得到純的順反異構體。(z)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯黃色油狀物z-isomer:1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.96(t,3h,j＝18.0hz),3.61(s,6h),3.83(s,3h),6.24(s,2h),6.75(d,1h,j＝12.0hz),6.88(d,1h,j＝12.0hz),7.44(d,1h,j＝8.0hz),7.60(d,1h,j＝8.0hz),8.24(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.0,148.3,138.8,138.6,138.3,138.0,135.3,133.1,132.8,130.8,129.0,124.9,122.4,121.1,120.5,118.5,106.5,60.9,55.8,29.7,25.8,25.5,25.3.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.98.ms(m/z):379(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h19f2no5(m+h)+:380.1310,found:380.1309.(e)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯黃色固體e-isomer:mp:93.2-93.8℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.99(t,3h,j＝18.0hz),3.92(d,9h,j＝17.0hz),6.78(s,2h),7.08(d,1h,j＝16.0hz),7.50(d,1h,j＝16.0hz),7.74(d,1h,j＝8.0hz),7.84(d,1h,j＝8.0hz),8.11(s,1h).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.5,147.7,139.2,138.1,135.1,134.3,131.8,129.1,128.5,122.5,121.9,121.5,120.6,104.4,61.0,56.2,29.7,25.9,25.7,25.4.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.94.ms(m/z):379(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h19f2no5(m+h)+:380.1310,found:380.1309.實施例6(z)-3,4,5-三甲氧基-2'-氨基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯的制備將(z)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯(0.50g，1.32mmol)，鋅粉(0.95g，14.52mmol，11eq)，冰醋酸(20ml)混合至單口燒瓶中，室溫攪拌，反應2h后，tlc檢測反應完全，加入飽和nahco3水溶液，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮后柱層析分離ea:pe＝1:15，得到紅色油狀物0.20g，產率43％。1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.87(t,3h,j＝18.0hz),3.60(s,6h),3.81(s,3h),6.43(s,2h),6.47(d,1h,j＝12.0hz),6.60(d,1h,j＝12.0hz),6.85(d,2h,j＝7.5hz),7.15(d,1h,j＝8.0hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ152.8,143.9,138.6,138.4,138.2,137.7,132.5,131.7,129.8,125.1,124.6,123.6,121.7,119.8,114.4,111.3,106.0,60.8,55.7,26.0,25.8,25.5.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.63.ms(m/z):349(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h21f2no3(m+h)+:350.1568,found:350.1564.實施例7(e)-3,4,5-三甲氧基-2'-氨基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯的制備將(e)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯(0.50g，1.32mmol)，鋅粉(0.95g，14.52mmol，11eq)，冰醋酸(20ml)混合至單口燒瓶中，室溫攪拌，反應2h后，tlc檢測反應完全，加入飽和nahco3水溶液，ea萃取，合并有機相，無水na2so4干燥，過濾，濃縮后柱層析分離ea:pe＝1:10，得到紅色固體0.38g，產率82％。mp:96.3-96.9℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.90(t,3h,j＝18.0hz),3.87(s,3h),3.91(s,6h),6.73(s,2h),6.87(s,1h),6.92(d,1h,j＝7.0hz),6.94(d,1h,j＝16.0hz),7.03(d,1h,j＝16.0hz),7.41(d,1h,j＝8.0hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.5,143.8,138.4,133.0,131.5,127.4,125.1,123.6,122.9,121.7,119.8,115.4,112.4,103.8,61.0,56.2,26.1,25.9,25.6.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.65.ms(m/z):349(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h21f2no3(m+h)+:350.1568,found:350.1567.實施例83,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烷的制備將(z/e)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯(1.00g，2.64mmol)溶于30ml乙醇中，加入pd/c(0.10g，0.9mmol)，h2過量室溫攪拌過夜，反應結束后將pd/c過濾除去，將溶劑旋干得到紅色固體0.46g，產率46％。mp:87.9-88.5℃.1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.88(t,3h,j＝18.0hz),2.79(m,2h),2.87(m,2h),3.80(s,6h),3.83(s,3h),6.34(s,2h),6.81(s,1h),6.85(d,1h,j＝8.0hz),7.05(d,1h,j＝8.0hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.2,143.9,137.3,137.1,136.4,129.8,127.6,123.7,121.8,120.0115.3,112.0,105.4,60.9,56.1,35.6,33.1,26.1,25.9,25.6.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.21.ms(m/z):381(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h21f2no5(m+h)+:382.1466,found:382.1831.實施例93,4,5-三甲氧基-2'-氨基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烷的制備將(z/e)-3,4,5-三甲氧基-2'-硝基-4'-(1,1-二氟乙基)二苯乙烯(1.00g，2.64mmol)溶于30ml乙醇中，加入pd/c(0.10g，0.9mmol)，h2過量室溫攪拌過夜，反應結束后將pd/c過濾除去，將溶劑旋干得到紅色液體0.37g，產率40％。1hnmr(cdcl3,500mhz):δ1.90(t,3h,j＝18.0hz),2.76(t,2h,j＝6.5hz),2.87(t,2h,j＝6.5hz),3.08(dd,2h,j＝6.5hz,j＝7.0hz),3.81(d,9h,j＝19.0hz),6.31(s,2h),6.71(s,2h),6.81(d,1h,j＝7.5hz),7.06(d,1h,j＝6.5hz).13cnmr(cdcl3,125mhz):δ153.2,146.2,137.6,137.3,137.2,136.5,129.0,126.9,124.1,122.2,120.3,113.1,106.3,105.5,60.8,56.1,38.5,35.7,32.9,26.2,25.9,25.7.19fnmr(cdcl3,470mhz):δ-87.05.ms(m/z):351(m+).esi-hrms(m/z):calculatedforc19h23f2no3(m+na)+:374.1544,found:374.1960.實施例103,4,5-三甲氧基--2'-(鹽酸氨基乙酰基)氨基4'-(1,1-二氟)乙基-二苯乙烷的制備將(z,e)-3,4,5-三甲氧基-2'-氨基-4'-(1,1-二氟)乙基-二苯乙烯(0.50g,1.42mmol)和boc-甘氨酸(1.5mmol)溶于10ml無水二氯甲烷中，加入dcc(2.0mmol)，過量室溫攪拌過夜，加水淬滅，用硅藻土過濾除去不溶物，濾液旋干，重新溶解于乙醚中，再加入2n氯化氫乙醚溶液脫保護，有固體析出，室溫攪拌1h，tlc檢測反應完畢，過濾得白色固體0.57g，產率90％。實施例15mtt法測試化合物對多種腫瘤細胞的抗腫瘤活性1、試驗方法細胞以含200ml/l胎牛血清的rpmi1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，使細胞一直處于對數(shù)生長期，接種至96孔板，密度4～8×104/ml，37℃，預培養(yǎng)24小時加藥，藥物設6個濃度，每種藥物設3個復孔，連續(xù)作用48小時，甩去培養(yǎng)液風干，每孔加冰冷500g/l三氯醋酸50μl(終濃度為100g/l)固定60min后去離子水洗4～5次，干燥，每孔加4g/lsrb100μl作用30min,10ml/l醋酸輕洗4次,甩干，每孔加10mmoltrisbase200μl搖動混勻，在平板振蕩器上振蕩5min,在酶聯(lián)免疫檢測儀測定a值，用空白對照調零，所用波長為490nm，抑瘤率(％)＝(無藥細胞對照孔a值平均值-用藥孔a值平均值)/無藥細胞對照孔a值平均值×100％，陽性對照為(z)-3,4,5-三甲氧基-3'-羥基-4'-甲氧基二苯乙烯(ca-4)，根據不同濃度下藥物對細胞生長的抑制率，以logit方法計算ic50值。細胞株：hela細胞株、hct-116細胞株、a549細胞株、mcf-7細胞株、mkn45細胞株。2、試驗結果表1實施例化合物對多種腫瘤細胞株的體外抗腫瘤活性評價(mtt法)編號hela(μml)ca-40.27i-10.37i-20.24i-30.11i-4/i-50.34i-60.19i-70.0067i-80.13i-190.46i-100.05表2實施例化合物對多種腫瘤細胞株的體外抗腫瘤活性評價(mtt法)上述所述通式(i)上化合物抗腫瘤活性測試的陽性對照物為(z)-3,4,5-三甲氧基-3'-羥基-4'-甲氧基二苯乙烯(ca-4)，藥效評價結果綜述如下：：體外培養(yǎng)腫瘤細胞的抗腫瘤活性評價，結果表明ca-4含氟類似物對hela細胞具有廣泛的抑制活性，并且這些化合物的活性數(shù)值與對照藥ca-4的活性數(shù)值相差不大，尤其化合物7的ic50值分別為0.0067μm小于ca-4的ic50值(0.27μm)，說明在ca-4結構b環(huán)中引入兩個氟原子有效地改善了化合物的抗腫瘤活性。分析4-偕二氟取代的ca-4類似物活性可以發(fā)現(xiàn)，反式化合物也有較好活性，并且與順式結構的活性相差不大，如化合物1和2的ic50值分別為0.37和0.24μm，化合物6和7的ic50值分別為0.19和0.0067μm，甚至順式結構沒有檢測到ic50值，如化合物4。我們進一步評價了對hela細胞抑制活性最佳化合物7，實驗結果表明化合物7對人胃癌細胞mkn45、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mcf-7和人結腸癌細胞hct-116也具有較強的抑制活性，同等條件下比較對各腫瘤細胞株的抑制活性要顯著優(yōu)于ca4，顯示出廣譜的抗腫瘤活性，并對hela細胞和hct-116細胞具有一定的選擇性，其ic50值分別為0.0067μm和0.063μm。上述活性數(shù)據表明，偕二氟乙基取代的二苯乙烷及二苯乙烯類衍生物的體外抗腫瘤活性顯著優(yōu)于已知的陽性對照化合物ca4，具有良好的應用開發(fā)前景。需要說明的是，以上實施例已對本發(fā)明創(chuàng)造的部分化合物進行了說明，但并不局限于所述實施例，熟悉本領域的技術人員在不違背發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下，還可做出多種等同的改變和替換，這些等同的改變和替換應包括在本申請權利要求所限定的范圍內。當前第1頁12