欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜及其制備方法與流程

文檔序號:12883204閱讀:397來源:國知局
一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜及其制備方法與流程

本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料領(lǐng)域,具體涉及一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜及其制備方法。



背景技術(shù):

細胞外基質(zhì)是由細胞生長過程分泌的膠原、糖蛋白、蛋白聚糖以及多種生長因子等組成的復雜網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),可以為宿主細胞提供支持位點和生物學作用,對細胞的形狀、生長、遷移和分化,胚胎的發(fā)育以及受損組織或器官的修復等有至關(guān)重要的作用。有研究表明,材料表面的潤濕性影響不同功能蛋白在其表面的吸附,疏水性的表面更有利于白蛋白的吸附,而親水性表面則更有利于粘附蛋白的吸附。[arima,y.andh.iwata(2007)."effectofwettabilityandsurfacefunctionalgroupsonproteinadsorptionandcelladhesionusingwell-definedmixedself-assembledmonolayers."biomaterials28(20):3074-3082.]。光響應(yīng)材料能在光照前后有效調(diào)節(jié)材料表面的潤濕性,因此,如能在體外獲得光響應(yīng)細胞外基質(zhì)薄膜,有效調(diào)節(jié)復合薄膜的親疏水性,從而調(diào)節(jié)不同功能蛋白在其表面的吸附具有很強的實際應(yīng)用意義和研究價值。

細胞在體外培養(yǎng)過程中就可在與基板連接處分泌出一層細胞外基質(zhì)。如果進行胰酶處理,在細胞脫離培養(yǎng)表面之前細胞外基質(zhì)就會被消化掉,無法獲得所需的細胞外基質(zhì)層。而單純的機械剝離,則會使細胞外基質(zhì)超微結(jié)構(gòu)發(fā)生一定改變,影響其后續(xù)對其它細胞的功能性作用。

本發(fā)明在近年來報道的光致細胞薄層獲取技術(shù)基礎(chǔ)上,開發(fā)了一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。該方法利用光致細胞薄層脫附技術(shù)能夠獲得具有細胞外基質(zhì)含量高、活性功能良好的細胞薄層的特點[y.hong,m.f.yu,w.j.weng,k.cheng,h.m.wang,j.lin.light-inducedcelldetachmentforcellsheettechnology.biomaterials,2013,34(1):11-18],在細胞培養(yǎng)過程中加入光響應(yīng)顆粒,并經(jīng)過一系列的處理獲取了一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。該方法獲得的細胞外基質(zhì)薄膜保持了原有的超微結(jié)構(gòu)和組成成分,同時具有良好的機械性能,并且光響應(yīng)顆粒均勻分布于復合薄膜中,能有效調(diào)控復合薄膜的親疏水性,可應(yīng)用于生物醫(yī)用材料等領(lǐng)域。本發(fā)明的制備方法,工藝簡單,易于實現(xiàn),有利于進行推廣應(yīng)用,所得到的復合薄膜具有良好的光響應(yīng)性、生物相容性及組織修復特性。



技術(shù)實現(xiàn)要素:

本發(fā)明的目的在于提供一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜及其制備方法,所述的光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜可通過控制納米光響應(yīng)顆粒的濃度及添加時間去調(diào)控細胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及光響應(yīng)性能。

一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜,由細胞外基質(zhì)與光響應(yīng)納米顆粒組成,其中光響應(yīng)納米顆粒的含量為1~100μg/cm3,所述的復合薄膜具有均勻致密的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

其制備方法,包括如下步驟:

(1)對可光致細胞脫附的細胞培養(yǎng)表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以800~1300r/min離心2~6min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以1×105~1×106細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),2~4天后進行第一次換液,之后每1~3天換液一次,整個培養(yǎng)周期5~10天,在細胞脫附前1~3天加入1~100μg/ml光致響應(yīng)納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過波長365nm的紫外光光照5~30min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用固定劑對細胞片層進行固定,避光處理30~60min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍30~60min,取出后在25~37℃解凍20~45min,冷凍-解凍循環(huán)重復3~10次,之后用去離子水清洗,獲得光致響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

所述的可光致細胞脫附的細胞培養(yǎng)表面是指具有tio2納米點薄膜的表面。

所述的固定劑為甲醛、多聚甲醛、戊二醇、乙醇、丙醇或丁醇。

所述的光響應(yīng)納米顆粒為tio2納米顆粒、zno納米顆粒、zro2納米顆粒、sno2納米顆粒、fe2o3納米顆粒、mno2納米顆粒中的一種或多種。

所述的tio2納米顆粒的直徑為10~50nm、zno納米顆粒的直徑為10~50nm、zro2納米顆粒的直徑為10~100nm、sno2納米顆粒的直徑為10~100nm、fe2o3納米顆粒的直徑為10~50nm、mno2納米顆粒的直徑為10~100nm。

經(jīng)上述方法制備獲得的一種光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜,為典型的均勻且致密的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明的薄膜及制備方法具有如下特點:

1)采用光致細胞脫附的方法,使含有光響應(yīng)顆粒的細胞片層從基板上脫附下來,減少細胞片層的機械損傷,從而獲得完整的細胞片層。

2)光響應(yīng)顆粒不僅存在于細胞內(nèi)而且存在于細胞連接處,最終獲取的是光響應(yīng)顆粒均勻分布的光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

3)所獲取的光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜不僅保存了細胞外基質(zhì)的重要組成成分,而且具有良好的光響應(yīng)性。

本發(fā)明所涉及的光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜的制備過程,無論是細胞的體外培養(yǎng),光響應(yīng)納米顆粒與細胞的復合,還是細胞片層的脫附,都是比較簡潔易行的,對設(shè)備沒有過高的要求。

本發(fā)明的光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜,保持了細胞外基質(zhì)的原有結(jié)構(gòu)形貌,具有良好的生物相容性及光響應(yīng)性,為培養(yǎng)同種或異種細胞提供了有利的微環(huán)境,有利于細胞的粘附及增值,對細胞的分化也產(chǎn)生影響,光響應(yīng)納米顆粒的存在,可有效調(diào)細胞外基質(zhì)的親疏水性,進一步調(diào)節(jié)不同功能蛋白在材料表面吸附,可應(yīng)用于生物醫(yī)用工程等領(lǐng)域。此外本發(fā)明的制備方法,工藝簡單,易于實現(xiàn),有利于進行推廣應(yīng)用。

附圖說明

圖1是光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜的表面形貌圖。

圖2是光響應(yīng)細胞外基質(zhì)元素分布圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1

(1)對涂有tio2的納米點薄膜的表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以800r/min離心6min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以1×105細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),4天后進行第一次換液,之后每3天換液一次,整個培養(yǎng)周期10天,在細胞脫附前1天加入100μg/mltio2納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過波長為365nm的紫外光光照5min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用甲醛對細胞片層進行固定,避光處理30min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍30min,取出后在25℃解凍45min,冷凍-解凍循環(huán)重復3次,之后用去離子水清洗,獲得光致響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

本例制得的細胞外基質(zhì)薄膜的表面形貌圖如圖1所示,光響應(yīng)納米顆粒被包覆在細胞外基質(zhì)中,圖2顯示光響應(yīng)顆粒在復合薄膜中均勻分布。

實施例2

(1)對涂有tio2的納米點薄膜的表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以900r/min離心5min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以2×105細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),4天后進行第一次換液,之后每3天換液一次,整個培養(yǎng)周期9天,在細胞脫附前2天加入80μg/mlzno納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過波長為365nm的紫外光光照15min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用多聚甲醛對細胞片層進行固定,避光處理35min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍35min,取出后在25℃解凍45min,冷凍-解凍循環(huán)重復4次,之后用去離子水清洗,獲得光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

實施例3

(1)對涂有tio2的納米點薄膜的表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以1000r/min離心4min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以4×105細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),3天后進行第一次換液,之后每2天換液一次,整個培養(yǎng)周期8天,在細胞脫附前3天加入60μg/mlzro2納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過波長為365nm的紫外光光照20min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用戊二醛對細胞片層進行固定,避光處理40min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍40min,取出后在30℃解凍30min,冷凍-解凍循環(huán)重復5次,之后用去離子水清洗,獲得光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

實施例4

(1)對涂有tio2的納米點薄膜的表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以1100r/min離心3min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以6×105細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),3天后進行第一次換液,之后每2天換液一次,整個培養(yǎng)周期7天,在細胞脫附前3天加入40μg/mlsno2納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過波長為365nm的紫外光光照25min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用乙醇對細胞片層進行固定,避光處理45min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍45min,取出后在30℃解凍30min,冷凍-解凍循環(huán)重復6次,之后用去離子水清洗,獲得光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

實施例5

(1)對涂有tio2的納米點薄膜的表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以1200r/min離心3min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以8×105細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),2天后進行第一次換液,之后每1天換液一次,整個培養(yǎng)周期6天,在細胞脫附前2天加入20μg/mlfe2o3納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過波長為365nm的紫外光光照30min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用丙醇對細胞片層進行固定,避光處理50min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍50min,取出后在37℃解凍20min,冷凍-解凍循環(huán)重復7次,之后用去離子水清洗,獲得光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

實施例6

(1)對涂有tio2的納米點薄膜的表面進行滅菌處理;

(2)將事先培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中的細胞進行脫壁處理,以1300r/min離心2min后,用培養(yǎng)基混懸,并用計數(shù)板計數(shù),以1×106細胞密度將細胞接種于上述細胞培養(yǎng)表面上,置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行單層高密度培養(yǎng),2天后進行第一次換液,之后每1天換液一次,整個培養(yǎng)周期5天,在細胞脫附前2天加入10μg/mlmno2納米顆粒,最終在細胞培養(yǎng)表面上形成完整的細胞片層;

(3)將經(jīng)上述培養(yǎng)后的培養(yǎng)表面移入pbs中,通過可見光光照30min,使細胞片層從細胞培養(yǎng)表面上完整脫附,獲得一層完整的細胞片層,用pbs緩沖液以及去離子水對脫附后的細胞片層反復清洗,用丁醇對細胞片層進行固定,避光處理60min,再用pbs緩沖液以及去離子水對細胞片層反復清洗;

(4).將細胞片層浸泡于去離子水中,置于-80℃冷凍60min,取出后在37℃解凍20min,冷凍-解凍循環(huán)重復10次,之后用去離子水清洗,獲得光響應(yīng)細胞外基質(zhì)復合薄膜。

當前第1頁1 2 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
昌邑市| 沙湾县| 渝中区| 区。| 成都市| 绥德县| 北流市| 民权县| 平顶山市| 涞水县| 新晃| 焦作市| 昭平县| 巢湖市| 永吉县| 秦皇岛市| 读书| 华池县| 弋阳县| 湟源县| 黄梅县| 策勒县| 浮梁县| 神农架林区| 井冈山市| 铅山县| 宿迁市| 苍梧县| 隆昌县| 疏附县| 青铜峡市| 清水县| 桂林市| 马鞍山市| 阳信县| 广德县| 钟祥市| 施秉县| 环江| 衡阳市| 樟树市|