本發(fā)明提供了一種制備低分子量香菇多糖的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域范疇。

背景技術(shù)：

香菇又名花菇、香蕈、香信、香菌、冬菇、香菰，為側(cè)耳科植物香蕈的子實(shí)體。香菇是世界第二大食用菌，也是我國(guó)特產(chǎn)之一，在民間素有“山珍”之稱。它是一種生長(zhǎng)在木材上的真菌，人工種植的香菇也越來(lái)越多，其味道鮮美，香氣沁人，營(yíng)養(yǎng)豐富。中國(guó)歷代醫(yī)學(xué)家對(duì)香菇均有著名論述?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)不斷深入研究，香菇的藥用價(jià)值也不斷被發(fā)掘，在開(kāi)發(fā)具有抗腫瘤、抗病毒藥品及相關(guān)保健食品方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

香菇多糖是香菇中的一種有效活性成分，是一種以β-d(1→3)葡聚糖殘基為主鏈，側(cè)鏈為(1→6)葡聚糖殘基的葡聚糖，是一種宿主免疫增強(qiáng)劑，能增強(qiáng)細(xì)胞免疫能力，具有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能以及刺激干擾素形成等作用。

香菇多糖在醫(yī)藥、食品等行業(yè)都有著很廣泛的應(yīng)用，隨著人們對(duì)天然產(chǎn)物的追求越來(lái)越高，香菇多糖的的市場(chǎng)需求量也在日益增大。香菇多糖特定的結(jié)構(gòu)與免疫活性密切相關(guān)。據(jù)有關(guān)研究資料證明，增加香菇多糖溶解度有利于提高其生理活性，低分子量香菇多糖的溶解度高，其活性超過(guò)高分子量香菇多糖。因此，研究探索一種制備低分子量的香菇多糖制備工藝有著很強(qiáng)的現(xiàn)實(shí)意義。

本發(fā)明是根據(jù)香菇多糖的特殊理化性質(zhì)，先對(duì)香菇進(jìn)行預(yù)處理，選擇了稀堿提取的方法，再結(jié)合濃縮萃取、醇沉、過(guò)濾干燥的方法，制備出低分子量香菇多糖。本發(fā)明提供的工藝新穎，操作簡(jiǎn)便，具有很好的實(shí)用性，且本發(fā)明制備出的香菇多糖分子量低，水溶性好，活性明顯增高。

在現(xiàn)有的專利與文獻(xiàn)中，未見(jiàn)相關(guān)低分子量香菇多糖制備方法的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供了一種全新的制備低分子量香菇多糖的方法。

本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于按照本發(fā)明提供的工藝，制備出的香菇多糖分子量低，水溶性好，生物活性高。

根據(jù)本發(fā)明的比較優(yōu)選的實(shí)施方案，制備低分子量香菇多糖的方法包括如下步驟：

一種制備低分子量香菇多糖的方法，由以下步驟組成：

(1)取新鮮香菇，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉；

(2)將得到的香菇粉加入其質(zhì)量6～18倍的堿溶液，在70～90℃條件下提取2～6h，重復(fù)2～3次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至一定體積，加入2倍質(zhì)量的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液；

(4)將香菇多糖提取液中加入一定量濃度為95％的乙醇，醇沉，靜置24～48h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，干燥即得低分子量香菇多糖。

本發(fā)明步驟(2)中，所述的“堿溶液”可以為naoh，na2co3，nahco3水溶液的一種，質(zhì)量百分比為0.1％～0.5％，優(yōu)選0.3％的naoh水溶液。堿溶液濃度過(guò)高，香菇多糖成分極易被破壞；堿溶液濃度過(guò)低，香菇多糖成分提取不出來(lái)。

本發(fā)明步驟(3)中，所述的“濃縮液的體積”為原料質(zhì)量的1～2倍，減少水的含量，有利于步驟(4)中進(jìn)行醇沉，減少溶劑的浪費(fèi)。

本發(fā)明步驟(4)中，所述的“一定量濃度為95％的乙醇”的質(zhì)量為香菇多糖提取液的8～10倍，優(yōu)選10倍。95％乙醇相對(duì)無(wú)水乙醇成本低，利用香菇多糖在一定乙醇濃度下沉淀析出的原理，濃度過(guò)低不易析出。

本發(fā)明步驟(5)中，所述的“干燥方法”為冷凍干燥或減壓干燥，此干燥方式不易破壞活性成分，得到的低分子量香菇多糖的分子量在10000～50000。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的工藝新穎，操作簡(jiǎn)便，具有很好的實(shí)用性，且本發(fā)明制備出的香菇多糖分子量低，水溶性好，比一般的活性強(qiáng)。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施內(nèi)容是為了對(duì)權(quán)利要求的技術(shù)特征給予說(shuō)明，以便于提供對(duì)本發(fā)明的透徹理解。但是，本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)理解，即使沒(méi)有這些特定細(xì)節(jié)也可以實(shí)施本發(fā)明。

實(shí)施例一：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)取新鮮香菇500g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉492g；

(2)將得到的香菇粉400g，加入2400ml的0.3％的naoh水溶液，在80℃條件下提取6h，重復(fù)2次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至400ml，加入800ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液350ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入3500ml濃度為95％的乙醇，醇沉，靜置48h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，冷凍干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為12000。

實(shí)施例二：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)取新鮮香菇210g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉200g；

(2)將得到的香菇粉200g，加入3600ml的0.4％的na2co3水溶液，在70℃條件下提取4h，重復(fù)2次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至300ml，加入600ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液200ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入1600ml濃度為95％的乙醇，醇沉，靜置48h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，減壓干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為35000。

實(shí)施例三：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)原取新鮮香菇315g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉300g；

(2)將得到的香菇粉300g，加入3000ml的0.3％的naoh水溶液，在80℃條件下提取4h，重復(fù)2.5次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至600ml，加入1200ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液600ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入5400ml濃度為92％的乙醇，醇沉，靜置36h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，冷凍干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為48000。

實(shí)施例四：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)取新鮮香菇425g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉400g；

(2)將得到的香菇粉400g，加入2400ml的0.3％的na2co3水溶液，在80℃條件下提取6h，重復(fù)2次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至400ml，加入800ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液350ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入3500ml濃度為95％的乙醇，醇沉，靜置48h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，冷凍干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為26000。

實(shí)施例五：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)取新鮮香菇332g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉300g；

(2)將得到的香菇粉300g，加入3600ml的0.4％的na2co3水溶液，在70℃條件下提取3h，重復(fù)2次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至300ml，加入600ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液200ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入1600ml濃度為95％的乙醇，醇沉，靜置48h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，減壓干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為38000。

實(shí)施例六：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)取新鮮香菇542g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉500g；

(2)將得到的香菇粉500g，加入3000ml的0.3％的naoh水溶液，在70℃條件下提取4h，重復(fù)2次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至600ml，加入1200ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液600ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入5400ml濃度為92％的乙醇，醇沉，靜置36h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，冷凍干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為28000。

實(shí)施例七：一種制備低分子量香菇多糖的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟制得：

(1)取新鮮香菇280g，用清水洗凈，干燥，粉碎，過(guò)300目篩，得香菇粉200g；

(2)將得到的香菇粉200g，加入3600ml的0.4％的nahco3水溶液，在70℃條件下提取5h，重復(fù)2次，過(guò)濾，合并濾液得粗品提取液；

(3)將粗品提取液濃縮至300ml，加入600ml乙酸乙酯-正丁醇進(jìn)行萃取，分層，取上清液，得香菇多糖提取液200ml；

(4)將香菇多糖提取液中加入1600ml濃度為95％的乙醇，醇沉，靜置48h；

(5)將醇沉液過(guò)濾，得濕香菇多糖，減壓干燥即得低分子量香菇多糖。經(jīng)檢測(cè)，該香菇多糖分子量為42000。

由上述實(shí)施例可以看出，實(shí)施例3的一種制備低分子量香菇多糖的方法提取效果最佳，產(chǎn)品得率最高。熟練的技術(shù)人員可以針對(duì)每個(gè)特定應(yīng)用，以變通的方式實(shí)現(xiàn)所描述的功能，但是，這種實(shí)現(xiàn)決策不應(yīng)解釋為背離本公開(kāi)的保護(hù)范圍。