本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領域，具體為具體涉及一種枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術：

在我國畜牧、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)向著規(guī)?；l(fā)展，養(yǎng)殖密度增大，疾病的控制是養(yǎng)殖業(yè)重中之重，由于畜禽疾病的復雜以及監(jiān)管不到位，抗生素的應用越來越多，增加了食品安全隱患，研發(fā)和尋找新型抗菌物質成為當務之急?？莶菅挎邨U菌菌體菌生長過程中產(chǎn)生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短干菌肽、多粘菌等活性物質，這些活性物質對致病菌或內源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用；枯草芽孢桿菌在腸道生長中會消耗腸內游離氧，會促進厭氧菌的生產(chǎn)并產(chǎn)生乳酸等有機酸類，降低腸道ph值，間接抑制其它致病菌生長；枯草芽孢桿菌能合成維生素b1、b2、b6、煙酸等多種b族類維生素，提高動物體內干擾素和巨噬細胞的活性，枯草芽孢桿菌有這么多的優(yōu)點使得其成為抗生素的部分替代產(chǎn)品。然而現(xiàn)在生產(chǎn)枯草芽孢桿菌培養(yǎng)多使用酵母粉、蛋白胨等價格較高的原料，使得枯草芽孢桿菌的價格居高不下；而且枯草芽孢桿菌芽桿菌芽孢率較低，保存困難，后處理收率低，貨架周期短。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術所要解決的技術問題是培養(yǎng)基所用原料成本高，以及現(xiàn)有培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌芽孢率較低，保存困難，后處理收率低，貨架周期短等等問題，本發(fā)明采用原料花生餅粉、玉米粉和小麥次粉，其成本較低，其中小麥次粉主要是由小麥的種皮、果皮、糊粉層、胚以及部分胚乳組成，由于加工工藝不同，制粉程度不同，出麩率不同，它的胚乳含量低于標準粉而高于麩皮，富含蛋白質、膳食纖維、維生素、礦物質等，含有30%左右的淀粉，營養(yǎng)非常豐富，可促進枯草芽孢桿菌的生長。

本發(fā)明所采用的技術方案如下：

一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基，其特征在于，其組分包括水，花生餅粉，玉米粉，小麥次粉，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鉀，硫酸錳；所述培養(yǎng)基的各種組分以水的質量為基準的配比為：花生餅粉4.8%~5.3%，玉米粉3.6%~4.2%，小麥次粉1.0%~1.2%，氯化鈉0.18%~0.22%，葡萄糖0.5%~1%，磷酸氫二鉀0.1%~0.3%，硫酸錳0.01%~0.03%。

作為優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基的各種組分以水的質量為基準的配比為：花生餅粉4.9%~5.1%，玉米粉3.8%~4.0%，小麥次粉1.0%~1.1%，氯化鈉0.18%~0.22%，葡萄糖0.6%~0.8%，磷酸氫二鉀0.1%~0.3%，硫酸錳0.01%~0.03%。

進一步，所述花生餅粉質量要求：細度80%以上過80目，蛋白含量≥46%，油脂含量≥5%，酸價≤3mgkoh/g。

進一步，所述玉米粉質量要求：細度80%以上過80目，淀粉含量≥70%。

一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，按照如下步驟進行：

第一步，將花生餅粉加入反應器皿中，按比例加水攪拌溶解，水浴加熱至48℃，調節(jié)ph值至7.5，加入堿性蛋白酶后不停攪拌，酶解反應30min；

第二步，將剩余物料玉米粉、小麥次粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀和硫酸錳，按照配比加入花生餅粉的酶解溶液中，攪拌至完全溶解，調節(jié)ph值至7.5；

第三步，將混合好的物料入滅菌鍋中，在溫度121℃條件下，滅菌30min；

第四步，將葡萄糖加水溶解后，在滅菌鍋內116℃的條件下，滅菌20min；

第五步，將滅菌過后的葡萄糖溶液通過無菌操作加入滅菌過的混合物料中，混合均勻，即得一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基。

進一步，在第一步中，所述向花生餅粉中加水的比例為1:15。

進一步，在第一步中，所述堿性蛋白酶的酶用量為5000u/g。

進一步，在第一步和第二步中，所述調節(jié)ph值的方法均為以飽和氫氧化鈉溶液進行定容滴定。

進一步，在第四步中，所述葡萄糖加水的比例為1:5。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明涉及配方成本低，制作方法簡便，發(fā)酵周期短，菌量高，芽孢率高，后處理收率高，穩(wěn)定性好。因小麥次粉富含維生素、礦物元素以及其他營養(yǎng)物質，其添加可大大提高了枯草芽孢桿菌活菌數(shù)和芽孢率。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步地詳細說明，但本發(fā)明的實施方式不限于此。以下實施例中涉及花生餅粉質量要求均為細度80%以上過80目，蛋白含量≥46%，油脂含量≥5%，酸價≤3mgkoh/g；涉及玉米粉質量要求均為細度80%以上過80目，淀粉含量≥70%；涉及堿性蛋白酶的酶用量均為5000u/g。

實施例1

一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基，其組分包括水，花生餅粉，玉米粉，小麥次粉，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鉀，硫酸錳；所述培養(yǎng)基的各種組分以水的質量為基準的配比為：花生餅粉4.8%，玉米粉3.7%，小麥次粉1.0%，氯化鈉0.18%，葡萄糖0.8%，磷酸氫二鉀0.2%，硫酸錳0.02%。

上述一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的制備方法，按照如下步驟進行：

第一步，取花生餅粉4.8g放入擋板三角瓶中，加水72ml攪拌溶解，放水浴鍋中加熱至48℃，調節(jié)ph值至7.5，加堿性蛋白酶酶解30min；

第二步，稱取玉米粉3.7g,小麥次粉1.0g，氯化鈉0.18g,,磷酸氫二鉀0.2，硫酸錳0.02g，放入第一步中的擋板三角瓶中，加水28ml，用飽和氫氧化鈉調節(jié)ph值至7.5；

第三步，將第二步中擋板三角瓶，用八層紗布封口，外用報紙包裹瓶口，放入滅菌鍋中121℃滅菌30min；

第四步，稱取葡萄糖0.8g加入試管中加入4ml水，用棉塞塞住試管口，外用報紙包裹試管口，放入滅菌鍋中116℃，滅菌20min。

第五步，將滅菌過后的葡萄糖在超凈工作臺中的酒精燈旁邊加入到滅菌過后的培養(yǎng)基中。

通過上述步驟制得的培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌24h可使菌量達到185億cfu/ml，芽孢率98%。

實施例2

一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基，其組分包括水，花生餅粉，玉米粉，小麥次粉，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鉀，硫酸錳；所述培養(yǎng)基的各種組分以水的質量為基準的配比為：花生餅粉5%，玉米粉4.1%，小麥次粉1.1%，氯化鈉0.18%，葡萄糖0.8%，磷酸氫二鉀0.2%，硫酸錳0.02%。

上述一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的制備方法，按照如下步驟進行：

第一步，取花生餅粉5g放入擋板三角瓶中，加水75ml攪拌溶解，放水浴鍋中加熱至48℃，調節(jié)ph值至7.5，加堿性蛋白酶酶解30min；

第二步，稱取玉米粉4.1g,小麥次粉1.1g，氯化鈉0.18g,,磷酸氫二鉀0.2，硫酸錳0.02g，放入第一步中的擋板三角瓶中，加水25ml，用飽和氫氧化鈉調節(jié)ph值至7.5；

第三步，將第二步中擋板三角瓶，用八層紗布封口，外用報紙包裹瓶口，放入滅菌鍋中121℃滅菌30min；

第四步，稱取葡萄糖0.8g加入試管中加入4ml水，用棉塞塞住試管口，外用報紙包裹試管口，放入滅菌鍋中116℃，滅菌20min。

第五步，將滅菌過后的葡萄糖在超凈工作臺中的酒精燈旁邊加入到滅菌過后的培養(yǎng)基中。

通過上述步驟制得的培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌24h可使菌量達到192億cfu/ml，芽孢率99%。

實施例3

一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基，其組分包括水，花生餅粉，玉米粉，小麥次粉，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鉀，硫酸錳；所述培養(yǎng)基的各種組分以水的質量為基準的配比為：花生餅粉5.1%，玉米粉4.2%，小麥次粉1.0%，氯化鈉0.18%，葡萄糖0.8%，磷酸氫二鉀0.2%，硫酸錳0.02%。

上述一種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的制備方法，按照如下步驟進行：

第一步，取花生餅粉5.1g放入擋板三角瓶中，加水75ml攪拌溶解，放水浴鍋中加熱至48℃，調節(jié)ph值至7.5，加堿性蛋白酶酶解30min；

第二步，稱取玉米粉4.2g,小麥次粉1.0g，氯化鈉0.18g,,磷酸氫二鉀0.2，硫酸錳0.02g，放入第一步中的擋板三角瓶中，加水25ml，用飽和氫氧化鈉調節(jié)ph值至7.5；

第三步，將第二步中擋板三角瓶，用八層紗布封口，外用報紙包裹瓶口，放入滅菌鍋中121℃滅菌30min；

第四步，稱取葡萄糖0.8g加入試管中加入4ml水，用棉塞塞住試管口，外用報紙包裹試管口，放入滅菌鍋中116℃，滅菌20min。

第五步，將滅菌過后的葡萄糖在超凈工作臺中的酒精燈旁邊加入到滅菌過后的培養(yǎng)基中。

通過上述步驟制得的培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌24h可使菌量達到182億cfu/ml，芽孢率97%。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例，并非對本發(fā)明做任何形式上的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術人員，在不脫離本發(fā)明技術方案范圍內，當可利用上述揭示的技術內容作出更動或修飾等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術方案的內容，均仍屬于本發(fā)明技術方案的范圍內。