本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及血液系統(tǒng)白血病、急性髓系白血病基因的檢測(cè)、急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或臨床預(yù)后評(píng)估，特別是涉及成人急性髓系白血病基因的檢測(cè)、基因芯片和試劑盒。

背景技術(shù)：

白血病也稱作血癌，是常見的全球性惡性疾病，起源于髓系或淋巴系造血祖細(xì)胞的一組遺傳異質(zhì)性疾病，主要表現(xiàn)為喪失正常功能的白血病細(xì)胞的異常分化與增生，根據(jù)白血病細(xì)胞的成熟程度和自然病程可分為急性白血病(acuteleukemia,al)和慢性白血病(chronicleukemia,cl)兩大類。急性白血病分為急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,aml)和急性淋巴系白血病(acutemyeloidleukemia,all)。

急性髓系白血病是一種異質(zhì)性極強(qiáng)的惡性血液病，占成人急性白血病的80％左右，它包括許多具有不同遺傳異常狀況和臨床特征的實(shí)體，主要特征為骨髓與外周血中原始和幼稚髓性細(xì)胞異常增生。在美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(nationalcomprehensivecancernetwork，nccn)危險(xiǎn)度分層指南中，約有一半以上的急性髓系白血病被分在中危組(包括全部的正常核型急性髓系白血病cytogeneticallynormalaml,正常核型急性髓系白血病)。

美國(guó)食品與藥品監(jiān)督管理局(fda)已經(jīng)將生物標(biāo)志定義為分子特征，它被客觀測(cè)量和評(píng)價(jià)并且指示正常生物過程、致病過程或?qū)χ委煾深A(yù)的藥理學(xué)響應(yīng)。這樣的生物標(biāo)志可以由腫瘤自身或身體對(duì)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化成癌癥的惡性壓力作出響應(yīng)而產(chǎn)生。根據(jù)美國(guó)國(guó)立癌癥研究所(nci)，生物標(biāo)志可以用于癌癥篩查、風(fēng)險(xiǎn)度評(píng)估、疾病的早期診斷、監(jiān)測(cè)、預(yù)后評(píng)價(jià)、作出治療決定和預(yù)測(cè)對(duì)療法的響應(yīng)?，F(xiàn)有技術(shù)中缺乏用于危險(xiǎn)度分層和臨床預(yù)后評(píng)估的有效標(biāo)志物，所以，目前臨床上aml的分層診斷及個(gè)體化治療非常困難，亟待找到有效的預(yù)后標(biāo)志物來(lái)確定此類患者治療的強(qiáng)度，以實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的個(gè)體化治療。

雖然，現(xiàn)有技術(shù)中公開了急性髓系白血病的一些致病相關(guān)的基因突變，這些基因突變可能作為患者危險(xiǎn)度分層和臨床預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物，但仍需通過大量的計(jì)算機(jī)算法及生物學(xué)實(shí)驗(yàn)才能驗(yàn)證。

現(xiàn)有技術(shù)whitmansp,maharryk,radmachermd,etal.flt3internaltandemduplicationassociateswithadverseoutcomeandgene-andmicrorna-expressionsignaturesinpatients60yearsofageorolderwithprimarycytogeneticallynormalacutemyeloidleukemia:acancerandleukemiagroupbstudy[j].blood,2010,116(18):3622-6中將攜帶flt3-itd基因的正常核型急性髓系白血病患者定義為高危組；現(xiàn)有技術(shù)dohnerk,schlenkrf,habdankm,etal.mutantnucleophosmin(npm1)predictsfavorableprognosisinyoungeradultswithacutemyeloidleukemiaandnormalcytogenetics:interactionwithothergenemutation[j].blood,2005,106(12):3740-6將攜帶npm1基因突變的患者定義為相對(duì)較低的危險(xiǎn)度和較好預(yù)后；現(xiàn)有技術(shù)pastoref,klingd,hostere,etal.long-termfollow-upofcytogeneticallynormalcebpa-mutatedaml[j].journalofhematology&oncology,2014,7.將攜帶cebpa基因雙突變的患者定義為相對(duì)較低的危險(xiǎn)度和較好預(yù)后；現(xiàn)有技術(shù)cn104508143a公開了用于診斷、預(yù)測(cè)、治療和處理急性髓系白血病的方法，該方法分析從所述患者分離的遺傳樣品中是否存在細(xì)胞遺傳學(xué)異常，以及在基因flt3、npmi、dnmt3a、nras、cebpa、tet2、wti、idhi、idh2、kit、runxi、mll-ptd、asxli、phf6、kras、pten、p53、hras和ezh2中的至少一者中是否存在突變，以此來(lái)預(yù)測(cè)患有急性髓系白血病患者的生存率。

為了實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)化醫(yī)療的目的，臨床醫(yī)學(xué)上亟待找到有效的急性髓系白血病患者預(yù)后標(biāo)志物來(lái)對(duì)患者進(jìn)行精準(zhǔn)的治療，而這些標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證將為更加有效的治療急性髓系白血病及預(yù)后評(píng)估提供幫助。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種敏感性高，通用性好，特異性強(qiáng)的標(biāo)志物，來(lái)檢測(cè)成人(<60歲)急性髓系白血病細(xì)胞或組織樣品，來(lái)輔助判斷成人aml患者的危險(xiǎn)度分層或異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或臨床預(yù)后評(píng)估，是基于以下的考慮：(1)基因突變不能覆蓋所有的aml，而基因表達(dá)可以覆蓋所有的aml患者；(2)aml發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)理目前仍不清楚，尋求新的臨床預(yù)后標(biāo)志物有助于理解aml的發(fā)病機(jī)理，并且能為aml的精準(zhǔn)靶向治療奠定基礎(chǔ)。

本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)tsen34基因高表達(dá)的aml患者具有較高的危險(xiǎn)度分層和較差的臨床預(yù)后，tsen34基因低表達(dá)的aml患者具有較低的危險(xiǎn)度分層和較好的臨床預(yù)后。因此，本發(fā)明提供tsen34基因作為標(biāo)志物，用來(lái)診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估，其敏感性高，通用性好，特異性強(qiáng)，因此能用來(lái)制備用于診斷成人急性髓系白血病患病與否或成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或臨床預(yù)后評(píng)估的基因芯片或試劑盒，幫助診斷是否患有成人急性髓系白血病或成人急性髓系白血病患者的危險(xiǎn)度分層或異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或臨床預(yù)后評(píng)估。在本發(fā)明中“成人”指年齡小于60歲的成人。

一方面，本發(fā)明提供一種用于診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估或?yàn)榕R床治療提供決策支持的試劑盒。

進(jìn)一步的，所述試劑盒中包含tsen34基因的檢測(cè)物。

更進(jìn)一步的，所述的tsen34基因的檢測(cè)物為tsen34基因的引物對(duì)和/或探針，所述的引物對(duì)和/或探針的序列為以下任一項(xiàng)所示：(1)seqidno：2和seqidno：3；(2)seqidno：4和seqidno：5；(3)seqidno：6和seqidno：7；(4)seqidno：8和seqidno：9；(5)seqidno：10或其互補(bǔ)序列；(6)序列為seqidno：11或其互補(bǔ)序列；(7)序列為seqidno：12或其互補(bǔ)序列。

本發(fā)明所提供的試劑盒還包括實(shí)現(xiàn)如下功能的模塊：

(1)在成人急性髓系白血病患者的樣本組中檢測(cè)tsen34基因的表達(dá)量，取樣本組表達(dá)量中位值，將患者分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組；

(2)將tsen34基因低表達(dá)組定義為急性髓系白血病預(yù)后低風(fēng)險(xiǎn)組，將tsen34基因高表達(dá)組定義為急性髓系白血病預(yù)后中高風(fēng)險(xiǎn)組。

tsen34基因高表達(dá)的成人aml具有較高的危險(xiǎn)度分層和較差的臨床預(yù)后，有進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植的預(yù)期。tsen34基因低表達(dá)的成人aml具有較低的危險(xiǎn)度分層和較好的臨床預(yù)后，不需要進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植治療。

第二方面，本發(fā)明提供一種用于診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估或?yàn)榕R床治療提供決策支持的芯片。

進(jìn)一步的，所述芯片固定有tsen34基因的檢測(cè)物。

更進(jìn)一步的，所述的tsen34基因的檢測(cè)物為tsen34基因的引物對(duì)和/或探針，所述的引物對(duì)和/或探針的序列為以下任一項(xiàng)所示：(1)seqidno：2和seqidno：3；(2)seqidno：4和seqidno：5；(3)seqidno：6和seqidno：7；(4)seqidno：8和seqidno：9；(5)序列為seqidno：10或其互補(bǔ)序列；(6)序列為seqidno：11或其互補(bǔ)序列；(7)序列為seqidno：12或其互補(bǔ)序列。

本發(fā)明所提供的芯片還包括實(shí)現(xiàn)如下功能的模塊：

(1)在成人急性髓系白血病患者的樣本組中檢測(cè)tsen34基因的表達(dá)量，取樣本組表達(dá)量中位值，將患者分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組；

(2)將tsen34基因低表達(dá)組定義為急性髓系白血病預(yù)后低風(fēng)險(xiǎn)組，將tsen34基因高表達(dá)組定義為急性髓系白血病預(yù)后中高風(fēng)險(xiǎn)組。

tsen34基因高表達(dá)的成人aml具有較高的危險(xiǎn)度分層和較差的臨床預(yù)后，有進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植的預(yù)期。tsen34基因低表達(dá)的成人aml具有較低的危險(xiǎn)度分層和較好的臨床預(yù)后，不需要進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植治療。

第三方面，本發(fā)明還提供一種核酸或者核酸組合物，其包括：

(1)所述核酸或者核酸組合物為tsen34基因的檢測(cè)物，序列為以下任一項(xiàng)所示：1)seqidno：2和seqidno：3；2)seqidno：4和seqidno：5；3)seqidno：6和seqidno：7；4)seqidno：8和seqidno：9。

或，(2)所述核酸或者核酸組合物為tsen34基因的探針：1)序列為seqidno：10或其互補(bǔ)序列；2)序列為seqidno：11或其互補(bǔ)序列；3)序列為seqidno：12或其互補(bǔ)序列。

第四方面，本發(fā)明還提供一種組合物，所述組合物為map7、cpne3、cpt1a、nr1h3和/或tsen34基因的檢測(cè)物組成的組。

第五方面，本發(fā)明還提供tsen34基因的檢測(cè)物的用途，所述檢測(cè)物的用途是：

(1)制備用于診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估或?yàn)榕R床治療提供決策支持的產(chǎn)品；

或，(2)制備用于診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估或?yàn)榕R床治療提供決策支持的試劑盒；

或，(3)制備用于診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估或?yàn)榕R床治療提供決策支持的芯片；

或，(4)制備診斷成人急性髓系白血病患病與否或患病風(fēng)險(xiǎn)度或用于檢測(cè)成人急性髓系白血病危險(xiǎn)度分層或成人急性髓系白血病異基因造血干細(xì)胞移植前評(píng)估或成人急性髓系白血病預(yù)后評(píng)估或?yàn)榕R床治療提供決策支持的檢測(cè)物、制劑或藥物。

本發(fā)明所提供的tsen34基因的檢測(cè)物的用途，所述的tsen34基因檢測(cè)物包含如下所示核酸或者核酸組合物：

1)seqidno：2和seqidno：3；2)seqidno：4和seqidno：5；3)seqidno：6和seqidno：7；4)seqidno：8和seqidno：9；5)序列為seqidno：10或其互補(bǔ)序列；6)序列為seqidno：11或其互補(bǔ)序列；7)序列為seqidno：12或其互補(bǔ)序列。

在很多方面能利用成人aml細(xì)胞或組織中tsen34基因表達(dá)高低的檢測(cè)和鑒定信息。例如，可輔助評(píng)估特定的治療方案，例如，確定化療藥物是否改善特定患者的長(zhǎng)期預(yù)后，是否進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植等。此外，tsen34基因表達(dá)譜(或個(gè)體基因)允許篩選抑制成人aml表達(dá)譜或?qū)⒉涣碱A(yù)后譜轉(zhuǎn)變成更好的預(yù)后譜的藥物候選物。

在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，提供一種檢測(cè)成人急性髓系白血病細(xì)胞或組織中tsen34基因表達(dá)高低的方法，其使用tsen34基因的引物。

附圖說明

圖1所示是tsen34基因在aml和正常人的cd34+細(xì)胞中的差異表達(dá)。

圖2所示是tsen34基因在全部aml患者組織樣品中的預(yù)后分析。

其中，圖2a所示是在全部aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖2b所示是在全部aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖3所示是tsen34基因在全部aml患者nccn中危組中的預(yù)后分析。

其中，圖3a所示是在全部aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖3b所示是在全部aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖4所示是tsen34基因在全部cn-aml患者中的預(yù)后分析。

其中，圖4a所示是在全部cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖4b所示是在全部cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析。縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖5所示是tsen34基因在全部cn-aml患者eln中危-i組中的預(yù)后分析。

其中，圖5a所示是在全部cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖5b所示是在全部cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析。縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖6所示是tsen34基因在成人aml患者組織樣品中的預(yù)后分析。

其中，圖6a所示是在成人aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析。縱坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖6b所示是在成人aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析。縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖7所示是tsen34基因在成人aml患者nccn中危組組織樣品中的預(yù)后分析。

其中，圖7a所示是在成人aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖7b所示是在成人aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖8所示是tsen34基因在成人cn-aml患者中的預(yù)后分析。

其中，圖8a所示是在成人cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖8b所示是在成人cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖9所示是tsen34基因在成人cn-aml患者eln中危-i組中的預(yù)后分析。

其中，圖9a所示是在成人cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖9b所示是在成人cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析。縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

圖10所示是tsen34基因高表達(dá)的86例aml患者的化療與異基因移植兩種治療方案的預(yù)后分析。

其中，圖10a所示是tsen34基因高表達(dá)的aml患者采用異基因移植可獲得相比化療更好的總生存率?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

其中，圖10b所示是tsen34基因高表達(dá)的aml患者采用異基因移植可獲得相比化療更好的無(wú)事件發(fā)生生存率?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1tsen34基因在成人急性髓系白血病患者和正常人cd34+細(xì)胞中的差異表達(dá)

數(shù)據(jù)集：利用illuminabeadchiparrays(ht12v3)芯片的77例aml患者數(shù)據(jù)。

1、采集患者的骨髓組織，對(duì)每份組織樣本篩選cd34+細(xì)胞，共獲得46例成人急性髓系白血病患者cd34+細(xì)胞。

2、采集正常人的骨髓組織，對(duì)每份組織樣本篩選cd34+細(xì)胞，作為陰性對(duì)照，共獲得31例健康志愿者的cd34+細(xì)胞。

3、利用illuminabeadchiparrays(ht12v3)芯片檢測(cè)tsen34基因在46例成人急性髓系白血病患者和31例正常人的cd34+細(xì)胞中的表達(dá)水平，結(jié)果見圖1。

結(jié)果：tsen34基因在46例成人急性髓系白血病患者的cd34+細(xì)胞中的表達(dá)中位值為10.9，tsen34基因在31例正常人的cd34+細(xì)胞中的表達(dá)中位值為10.6，p＝0.019。上述結(jié)果顯示，tsen34基因在aml患者樣本中顯著高表達(dá)，可以用于aml的診斷和檢測(cè)。

實(shí)施例2篩選與成人急性髓系白血病診斷及預(yù)后評(píng)估相關(guān)的基因

數(shù)據(jù)集：利用affymetrixhumangenomeu133plus2.0array芯片獲得具有隨訪信息的344例急性髓系白血病(aml)的全基因組表達(dá)譜數(shù)據(jù)。

以affymetrixhumangenomeu133plus2.0array芯片作為篩選對(duì)象，該芯片中共有344例成人急性髓系白血病患者的基因的表達(dá)譜實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。通過r語(yǔ)言進(jìn)行分析整合，尋找與急性髓系白血病診斷及預(yù)后評(píng)估相關(guān)的基因。

以整個(gè)患者樣本群體的基因表達(dá)中位值為基礎(chǔ)，將成人急性髓系白血病患者樣本分成兩組，將高于中位值的患者定義為該基因高表達(dá)的群體，將低于中位值的患者定義為該基因低表達(dá)的群體，比較這兩組成人急性髓系白血病患者的總體生存率、無(wú)事件發(fā)生生存率。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，如果p值小于0.05，則認(rèn)為該基因與成人急性髓系白血病患者的預(yù)后相關(guān)。通過比較分析，得到如下與成人急性髓系白血病患者的預(yù)后相關(guān)的幾組基因，map7、cpne3、cpt1a、nr1h3及tsen34。

實(shí)施例3總rna的提取

1.采集患者骨髓5ml，置于乙二胺四乙酸(edta)抗凝管中抗凝，加入ficoii-hypaque淋巴細(xì)胞分離液，應(yīng)用密度梯度離心法提取單個(gè)核細(xì)胞。

2.裂解細(xì)胞：向收集的細(xì)胞沉淀中加入1ml的qiazol試劑，振蕩器震蕩混勻，室溫作用15分鐘以上使其充分裂解。若加入qiazol試劑后不能立刻提取rna，可將其放入-20℃保存，短期內(nèi)可用。

3.按照氯仿:qiazol體積比為1:4的比例，加入約300μl氯仿，上下顛倒混勻1分鐘，室溫靜置5-10分鐘，低溫離心：4℃，12600rpm離心10分鐘。

4.離心完畢后，ep管內(nèi)液體分三層，上層為含有rna的上清液，中下層為dna和蛋白質(zhì)。然后，將上清液轉(zhuǎn)移至新的ep管中，并加入等體積的異丙醇，上下顛倒混勻，低溫靜置10分鐘，離心：4℃，12600rpm離心15分鐘。

5.棄上清，白色沉淀即為rna，加入1ml的75％乙醇(depc水配制)，輕輕顛倒混勻，常溫離心：8000rpm離心5分鐘。

6.溶解rna：去上清，并將ep管倒扣于吸水紙上，吸干管口。再于離心機(jī)上空甩幾秒，用加樣槍將剩余的酒精全部吸出，風(fēng)干3-5分鐘。加入一定體積的無(wú)核酸酶的水溶解rna。

7.紫外分光光度計(jì)檢測(cè)rna濃度。提取得到的rna放-20℃保存，一個(gè)月內(nèi)可用；置于-80℃則可保存相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)間。

實(shí)施例4rna反轉(zhuǎn)錄

1、按照表1配制反轉(zhuǎn)錄體系，總反應(yīng)體積為25μl(總rna量為1μg)。以下操作均在冰上進(jìn)行：

表1反轉(zhuǎn)錄體系各組分體積表

2、將以上各反應(yīng)組分配制到0.2ml的pcr反應(yīng)管中后，放入pcr儀中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，程序?yàn)?7℃，2h；4℃，forever。反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物即為cdna，將反應(yīng)產(chǎn)物取出后放于-20℃保存待用。

為驗(yàn)證tsen34基因的表達(dá)，采用4對(duì)不同的pcr引物進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量pcr，分別為實(shí)施例5-8。

實(shí)施例5實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)-引物對(duì)1

1、按照表2配制實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系。

表2實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系各組分體積表

2、反應(yīng)管中先配制2倍體積的2×sybrgreenⅰ，無(wú)rna酶水，模板cdna以及roxⅱ混合物，混勻后分裝至兩個(gè)0.2ml的pcr反應(yīng)管中，再分別加入目的基因tsen34基因seqidno：1的引物對(duì)的上下游引物對(duì)：

引物對(duì)1：

5’-cccaagcaggaccctcaaat(seqidno：2)

3’-agaaagttgggcaaacccagg(seqidno：3)

與內(nèi)參gapdh(甘油醛-3-磷酸脫氫酶，glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)的引物，輕輕混勻。其中，tsen34引物委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。本發(fā)明的實(shí)時(shí)熒光定量pcr中主要采用sybrgreeni進(jìn)行檢測(cè)，sybrgreeni是一種熒光染料，可以和任意的雙鏈dna結(jié)合，通過熒光信號(hào)的收集，反映模板拷貝數(shù)的多少。

3、將反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀中進(jìn)行pcr擴(kuò)增，反應(yīng)程序?yàn)?5℃，1分鐘；95℃，5s；60℃，20s；共40個(gè)循環(huán)。然后95℃，1分鐘；60℃，1分鐘，95℃，30s。熒光收集點(diǎn)在60℃，反應(yīng)結(jié)束后pcr擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果與預(yù)期一致。

4、將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以gapdh作為內(nèi)參照。

實(shí)施例6實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)-引物對(duì)2

1、按照表3配制實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系。

表3實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系各組分體積表

2、反應(yīng)管中先配制2倍體積的2×sybrgreenⅰ，無(wú)rna酶水，模板cdna以及roxⅱ混合物，混勻后分裝至兩個(gè)0.2ml的pcr反應(yīng)管中，再分別加入目的基因tsen34基因seqidno：1的引物對(duì)的上下游引物對(duì)：

引物對(duì)2：

5’-ggaccctcaaatggggtagc(seqidno：4)

3’-aaagttgggcaaacccagg(seqidno：5)

與內(nèi)參gapdh(甘油醛-3-磷酸脫氫酶，glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)的引物，輕輕混勻。其中，tsen34基因引物委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。本發(fā)明的實(shí)時(shí)熒光定量pcr中主要采用sybrgreeni進(jìn)行檢測(cè)，sybrgreeni是一種熒光染料，可以和任意的雙鏈dna結(jié)合，通過熒光信號(hào)的收集，反映模板拷貝數(shù)的多少。

3、將反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀中進(jìn)行pcr擴(kuò)增，反應(yīng)程序?yàn)?5℃，1分鐘；95℃，5s；60℃，20s；共40個(gè)循環(huán)。然后95℃，1分鐘；60℃，1分鐘，95℃，30s。熒光收集點(diǎn)在60℃，反應(yīng)結(jié)束后pcr擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果與預(yù)期一致。

4、將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以gapdh作為內(nèi)參照。

實(shí)施例7實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)-引物對(duì)3

1、按照表4配制實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系。

表4實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系各組分體積表

2、反應(yīng)管中先配制2倍體積的2×sybrgreenⅰ，無(wú)rna酶水，模板cdna以及roxⅱ混合物，混勻后分裝至兩個(gè)0.2ml的pcr反應(yīng)管中，再分別加入目的基因tsen34基因seqidno：1的引物對(duì)的上下游引物對(duì)：

引物對(duì)3：

5’-ctagaacaggcttcaggggc(seqidno：6)

3’-tacaagaaagttgggcaaaccc(seqidno：7)

與內(nèi)參gapdh(甘油醛-3-磷酸脫氫酶，glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)的引物，輕輕混勻。其中，tsen34基因引物委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。本發(fā)明的實(shí)時(shí)熒光定量pcr中主要采用sybrgreeni進(jìn)行檢測(cè)，sybrgreeni是一種熒光染料，可以和任意的雙鏈dna結(jié)合，通過熒光信號(hào)的收集，反映模板拷貝數(shù)的多少。

3、將反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀中進(jìn)行pcr擴(kuò)增，反應(yīng)程序?yàn)?5℃，1分鐘；95℃，5s；60℃，20s；共40個(gè)循環(huán)。然后95℃，1分鐘；60℃，1分鐘，95℃，30s。熒光收集點(diǎn)在60℃，反應(yīng)結(jié)束后取出pcr產(chǎn)物，pcr擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果與預(yù)期一致。

4、將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以gapdh作為內(nèi)參照。

實(shí)施例8實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)-引物對(duì)4

1、按照表5配制實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系。

表5實(shí)時(shí)熒光定量pcr反應(yīng)體系各組分體積表

2、反應(yīng)管中先配制2倍體積的2×sybrgreenⅰ，無(wú)rna酶水，模板cdna以及roxⅱ混合物，混勻后分裝至兩個(gè)0.2ml的pcr反應(yīng)管中，再分別加入目的基因tsen34基因seqidno：1的引物對(duì)的上下游引物對(duì)：

引物對(duì)4：

5’-actaaaaagttggcatgctggt(seqidno：8)

3’-ccaggaagtcacctccgaac(seqidno：9)

與內(nèi)參gapdh(甘油醛-3-磷酸脫氫酶，glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)的引物，輕輕混勻。其中，tsen34引物委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。本發(fā)明的實(shí)時(shí)熒光定量pcr中主要采用sybrgreeni進(jìn)行檢測(cè)，sybrgreeni是一種熒光染料，可以和任意的雙鏈dna結(jié)合，通過熒光信號(hào)的收集，反映模板拷貝數(shù)的多少。

3、將反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀中進(jìn)行pcr擴(kuò)增，反應(yīng)程序?yàn)?5℃，1分鐘；95℃，5s；60℃，20s；共40個(gè)循環(huán)。然后95℃，1分鐘；60℃，1分鐘，95℃，30s。熒光收集點(diǎn)在60℃，反應(yīng)結(jié)束后取出pcr產(chǎn)物，pcr擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果與預(yù)期一致。

4、將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以gapdh作為內(nèi)參照。

實(shí)施例9tsen34基因表達(dá)水平與成人急性髓系白血病患者(剔除m3)和nccn中危組成人急性髓系白血病患者(剔除m3)的生存分析曲線

說明：m3為早幼粒細(xì)胞白血病，是一種特殊類型的急性髓系白血病。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集成人急性髓系白血病患者(剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得329例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為165例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為164例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖2a和2b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖2a是在全部aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析，縱坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖2b是在全部aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析，縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集nccn中危組成人急性髓系白血病患者(剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得173例骨髓組織樣本。

2、按照tsen34基因表達(dá)水平的中位值，將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為87例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為86例.

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖3a和3b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖3a所示是在全部aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析，縱坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖3b所示是在全部aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析，縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)施例10tsen34基因表達(dá)水平與成人正常核型急性髓系白血病(cn-aml)患者(剔除m3)和eln中危-i組成人正常核型急性髓系白血病患者(剔除m3)的生存分析曲線

說明：eln，即europeanleukmianet，歐洲白血病網(wǎng)；cn-aml，即正常核型急性髓系白血病。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集正常核型急性髓系白血病患者(剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得156例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為78例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為78例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖4a和4b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖4a是在全部cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖4b是在全部cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集eln中危-i組成人正常核型急性髓系白血病患者(剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得121例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為61例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為60例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖5a和5b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖5a是在全部cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖5b所示是在全部cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析。縱坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)施例11tsen34基因表達(dá)水平與成人急性髓系白血病患者(＜60歲)(剔除m3)和nccn中危組成人急性髓系白血病患者(＜60歲)(剔除m3)的生存分析曲線

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集成人急性髓系白血病患者(＜60歲，剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得272例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為136例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為136例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖6a和6b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，6a是在成人aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析。縱坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。6b是在成人aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集nccn中危組成人急性髓系白血病患者(＜60歲，剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得135例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為68例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為67例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖7a和7b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖7a所示是在成人aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖7b所示是在成人aml患者nccn中危組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)施例12tsen34基因表達(dá)水平與成人急性髓系白血病患者(＜60歲，剔除m3)和eln中危-i組成人急性髓系白血病患者的生存分析曲線

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集成人急性髓系白血病患者(＜60歲，剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得129例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為65例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為64例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖8a和8b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖8a是在成人cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖8b是在成人cn-aml患者中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集eln中危-i組成人急性髓系白血病患者(＜60歲，剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得99例骨髓組織樣本。

2、檢測(cè)tsen34基因表達(dá)水平，并按照tsen34基因表達(dá)中位值將其分為tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組，其中，tsen34基因低表達(dá)組數(shù)據(jù)為50例，tsen34基因高表達(dá)組數(shù)據(jù)為49例。

3、比較tsen34基因低表達(dá)組和tsen34基因高表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，結(jié)果如圖9a和9b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

其中，圖9a所示是在成人cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行總生存率分析?？v坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。圖9b所示是在成人cn-aml患者eln中危-i組中對(duì)tsen34基因表達(dá)水平進(jìn)行無(wú)事件發(fā)生生存率分析?？v坐標(biāo)是無(wú)事件發(fā)生生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，tsen34基因低表達(dá)組的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率均顯著高于tsen34基因高表達(dá)組。因此，tsen34基因的表達(dá)水平可以用于提示急性髓系白血病的預(yù)后水平。

實(shí)施例13tsen34基因高表達(dá)aml患者的化療與異基因移植兩種治療方案的預(yù)后分析

實(shí)驗(yàn)方法：

1、采集成人急性髓系白血病患者(剔除m3)骨髓組織樣本，共獲得tsen34基因高表達(dá)的86例骨髓組織樣本。

2、選擇其中36例采用異基因移植的治療方案，選擇其中50例采用化療的治療方案，比較兩者的總生存率差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：tsen34基因高表達(dá)的aml患者采用異基因移植可獲得相比化療更好的總生存率。縱坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)，具體參見圖10a。

3、選擇其中36例采用異基因移植的治療方案，選擇其中50例采用化療的治療方案，比較兩者的無(wú)事件生存率差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：tsen34基因高表達(dá)的aml患者采用異基因移植可獲得相比化療更好的無(wú)事件發(fā)生生存率。縱坐標(biāo)是總生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)，具體參見圖10b。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

1、tsen34基因高表達(dá)是急性髓系白血病患者的預(yù)后不良標(biāo)志物；

2、tsen34基因高表達(dá)在aml患者的nccn中危組、cn-aml及eln中危-ⅰ組中均是預(yù)后不良標(biāo)志物；

3、tsen34基因高表達(dá)是成人急性髓系白血病患者的預(yù)后不良標(biāo)志物；

4、tsen34基因高表達(dá)在成人nccn中危組、成人cn-aml及成人eln中危-ⅰ組中均是預(yù)后不良標(biāo)志物；

5、tsen34基因高表達(dá)患者選擇異基因移植可獲得相比化療更好的總生存率和無(wú)事件發(fā)生生存率，tsen34基因可用于急性髓系白血病的臨床治療決策支持。

因此tsen34基因高表達(dá)可以作為預(yù)后標(biāo)志物進(jìn)一步細(xì)化這三類患者危險(xiǎn)度分層和預(yù)后評(píng)估。tsen34基因高表達(dá)的成人aml樣品具有較高的危險(xiǎn)度分層和較差的臨床預(yù)后，有采用異基因造血干細(xì)胞移植治療的需要。tsen34基因低表達(dá)的成人aml樣品具有較低的危險(xiǎn)度分層和較好的臨床預(yù)后，不需要采用異基因造血干細(xì)胞移植治療，只需化療即可。

上述實(shí)施例只是為了詳細(xì)說明本發(fā)明，而不是在任何方面限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

序列表

<110>中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院

<120>用于急性髓系白血病精準(zhǔn)診療的檢測(cè)試劑盒及tsen34臨床應(yīng)用

<130>20170714

<160>12

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1302

<212>dna/rna

<213>human

<400>1

gttcgttgcaacaaattgatgagcaatgcttttttataatgccaactttgtactaaaaag60

ttggcatgctggtggtggaggtggcgaacggccgctccctggtgtggggagccgaggcgg120

tgcaggccctccgggagcgcctgggtgtggggggccgcacggtaggcgccctgccccgcg180

ggccccgccagaactcgcgcctgggcctcccgctgctgctgatgcccgaagaggcgcggc240

tcttggccgagatcggcgccgtgactctggtcagcgccccgcgtccagactctcggcacc300

acagcctggccctgacatccttcaagcgccagcaagaggagagcttccaggagcagagcg360

ccttggcagctgaggcccgggagacccgtcgtcaggaggtcctggagaagattacggagg420

gccaggctgctaagaagcagaaactagaacaggcttcaggggccagctcaagccaggagg480

ccggctcgagccaggctgccaaagaggatgagaccagtgatggccaggcttcgggagagc540

aggaggaagctggcccctcgtcttcccaagcaggaccctcaaatggggtagcccccttgc600

ccagatctgctctccttgtccagctggccactgccaggcctcgaccggtcaaggccaggc660

ccctggactggcgtgtccagtctaaagactggccccacgccggccgccctgcccacgagc720

tgcgctacagtatctacagagacctgtgggagcgaggcttcttcctcagtgcggctggca780

agttcggaggtgacttcctggtctatcctggtgaccccctccgcttccacgcccattata840

tcgctcagtgctgggcccctgaggacacctcccactccaagacctggttgctgctgggcg900

ccttggaaccagcgtcagaaagaccctgctcctctgttctccgcagcctgatggtaaggt960

ggtctacacctccctgcaatgggccagcctgcagtgaactccagagacctaggggatgtg1020

gctgtgtcggcagcaagagcctttctggatgttccccagctcttctctgggagtctagaa1080

catcctcctacctttctccgcggttagtttttgattccaggttttcgaacactacatctt1140

ttttatgttcttccttgtttcaaagcacttattggctgtgtttttgtagttacctatttt1200

cacactgtgagcttcccgagaatggggcctgggtttgcccaactttcttgtacaaagttg1260

gcattataagaaagcattgcttatcaatttgttgcaacgaac1302

<210>2

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>2

cccaagcaggaccctcaaat20

<210>3

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>3

agaaagttgggcaaacccagg21

<210>4

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>4

ggaccctcaaatggggtagc20

<210>5

<211>19

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>5

aaagttgggcaaacccagg19

<210>6

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>6

ctagaacaggcttcaggggc20

<210>7

<211>22

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>7

tacaagaaagttgggcaaaccc22

<210>8

<211>22

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>8

actaaaaagttggcatgctggt22

<210>9

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>9

ccaggaagtcacctccgaac20

<210>10

<211>30

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>10

aaggccaggcccctggactggcgtgtccag30

<210>11

<211>30

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>11

ggccccgccagaactcgcgcctgggcctcc30

<210>12

<211>30

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>12

tcagcgccccgcgtccagactctcggcacc30